changes of proteasomal proteolysis, NETosis and some pathology

1. Протеасомний протеоліз та
пастки смерті:
Участь протеасом у формуванні та
реалізації імунної відповіді і NET
Д.О. Пашевін, к.м.н., науковий співробітник
відділу ЗМПФ інституту фізіології НАНУ
ім.О.О.Богомольця

2. Відкриття убіквітин-залежного
протеасомного протеолізу

3. Протеасомний протеоліз-основний
механізм утилізації
внутрішньоклітинних білків
• Білки з коротким періодом напівжиття
• Білки з порушеною структурою (missfolding,
порушення через зовнішні впливи)
• Білки систем передачі позаклітинних сигналів, і т.д…

4. Структура конституційної протеасоми
caspase-like, trypsin-like, and
chymotrypsin-like activity
for cleavage after acidic, basic, and
hydrophobic amino acids.
And PA700 to rule them all…

5. Механізм руйнування протеїнів

6. Специфічність
розпізнавання субстрату

7. АТФ-залежність

8. Стрес ендоплазматичного ретикулума

9. Аутофагія

11. Зменшення активності конституційної
протеасоми

12. Збільшення активності конституційної
протеасоми

13. Імунопротеасома
iProteasome

14. Заміщення активних субодиниць на
індуцибельні (основна причина-вплив на
клітину γ – IFN)

20. Зміни експресії генів PSM у щурів із
спонтанною гіпертензією

21. CANCER

22. Nakajo syndrome, also
called nodular erythema
with digital changes

24. • age-related macular degeneration
• Huntington’s disease
• aged and Alzheimer’s disease brains
• traumatic brain injury
• enterovirus myocarditis
• human type 1 diabetes
• multiple myeloma cell growth
• lipodystrophy syndrome
• multiple sclerosis

26. Тимопротеасома

30. Нейтрофільні екстрацелюлярні
пастки

31. Що таке НЕТ?

32. Фактори, що здатні викликати формування
нейтрофільних екстрацеллюлярних пасток

33. Внутрішньоклітинний каскад реалізації NET

35. Антимікробні та цитотоксичні речовини, що наявні в
нейтрофільних екстрацеллюлярних пастках

36. Види формування нейтрофільних екстрацелюлярних
пасток

37. NET і тромбоутворення

38. ANCA

40. NFkappaB – транскрипційна відповідь на
запалення

41. Нейтрофільні гранулоцити кроля
(культивування в середовищі RPMI, подвійне забарвлення
Hoehst 3334, propidium iodide)
Збільшення х 20 Збільшення х 40

42. Нейтрофільні гранулоцити кроля, вплив PMA
(рhorbol 12-myristate 13-acetate), середовище RPMI, подвійне забарвлення
Hoehst 3334, propidium iodide
Збільшення х 20 Збільшення х 100

43. Нейтрофільні гранулоцити кроля, вплив CL
(clasto-Lactacystin β-lactone),
середовище RPMI, подвійне забарвлення
Hoehst 3334, propidium iodide
Збільшення х 20 Збільшення х 40

44. Нейтрофільні гранулоцити кроля, вплив CL і PMA
(clasto-Lactacystin β-lactone),
середовище RPMI, подвійне забарвлення
Hoehst 3334, propidium iodide

45. Співвідношення кількості нейтрофілів з різними варіантами формування
NETs
CL
0
250
500
750
1000
клітини без ознак NETs клітини з
порушеннями
реалізації NETs
клітини з ознаками
NETs
PMA
0
250
500
750
1000
клітини без ознак NETs клітини з
порушеннями
реалізації NETs
клітини з ознаками
NETs
PMA+CL
0
50
100
150
200
клітини без ознак NETs клітини з порушеннями
реалізації NETs
клітини з ознаками
NETs
контроль
0
250
500
750
1000
клітини без ознак NETs клітини з ознаками NETs

46. Кокультивування нейтрофілів з неонатальними кардіоміоцитами щура,
середовище DMEM, подвійне забарвлення
Hoehst 3334, propidium iodide
Збільшення х 40

47. Кокультура нейтрофілів з неонатальними кардіоміоцитами щура,
вплив PMA,
середовище DMEM, подвійне забарвлення
Hoehst 3334, propidium iodide
Збільшення х 40 Збільшення х 40

48. Кокультура нейтрофілів з неонатальними кардіоміоцитами щура,
вплив PMA і протеасомного інгібітору CL,
середовище DMEM, подвійне забарвлення
Hoehst 3334, propidium iodide
Збільшення х 40 Збільшення х 40

49. Кількість кардіоміоцитів з ознаками некрозу в кокультурі з
нейтрофільними гранулоцитами при різних варіантах формування
NETs (відсотки)
0
5
10
15
20
25
30
35
контроль PMA лактацистин PMA+лактацистин

50. Кількість кардіоміоцитів з ознаками некрозу в кокультурі з
нейтрофільними гранулоцитами при різних варіантах формування
NETs за умов аноксії
0
10
20
30
40
50
60
контроль PMA лактацистин PMA+лактацистин

51. Дякую за увагу

52. Цитокіни, що синтезуються в нейтрофілах

53. •
reduced response to virus
reduced MHC class I expression
chymotrypsin-like activity of the immune subunit provides a larger pool of
precursors
LPS stimulation of LMP2-deficient cells was less able to activate NF-κB due
to reduced IκB degradation