Laporan praktikum BioKimia

1. Tes Kualitatif dan Tes Kuantitatif Protein
1. Latar Belakang
Protein adalah substansi yang tersusun atas asam-asam amino yang mengandung
nitrogen. Protein berperan sebagai struktur penyusun terbesar otot dan jaringan-jaringan
lainnya dalam tubuh. Agar dapat digunakan oleh tubuh, protein harus dipecah menjadi
strukturnya yang paling sederhana yakni asam-asam amino melalui proses metabolisme.
Sejauh ini telah diketahui 20 jenis asam amino yang penting bagi pertumbuhan dan
metabolisme manusia. 12 diantaranya (dimana 11 terdapat pada anak-anak) merupakan asam
amino non-esensial, yang berarti asam-asam amino ini dapat disintesis oleh tubuh. Sedangkan
sisanya merupakan asam amino esensial, yang berarti manusia membutuhkan asupan asam-
asam amino ini dari luar tubuh. Kekurangan satu jenis saja dari asam-asam amino ini dapat
mengganggu pertumbuhan jaringan (Hoffman dan Falvo, 2004). Isolasi protein perlu dilakukan
untuk dapat mempelajari protein lebih lanjut, melalui tes kualitatif dan tes kuantitatif
(Sattayasai, 2012). Analisis protein secara kuantitatif dan kualitatif dilakukan untuk mengukur
kadar protein dalam bahan makanan (Hermiastuti, 2013).
2. Tes Kualitatif Protein
a. Pengendapan Protein
Teknik pengendapan untuk protein tertentu bergantung pada agen
pengendapan yang digunakan serta proses pengendapan menggunakan agen tersebut
(Lovrien dan Matulis, 1997). Protein dapat mengendap dalam garam berkonsentrasi
tinggi, logam berat, serta alkohol (Girindra dan Aisjah, 1990 dalam Kurniati, 2009).
Pengendapan protein dapat dilakukan dengan pemanasan dan penambahan asam
agar mencapai pH tertentu atau disebut pH isoelektrik (Triyono, 2010).
3. Tes Kuantitatif Protein
a. Tes Lowry
Metode ini dikembangkan menggunakan reagen pendeteksi Folin-
Ciocalteauphenol yang berfungsi mendeteksi gugus-gugus fenolik (Bintang, 2010
dalam Dewi, 2013). Folin-Ciocalteauphenol dapat mendeteksi residu oksidasi dimana
gugus fenolik tirosin akan mereduksi fosfotungstat dan fosfomolibdat yang terdapat
pada reagen tersebut menjadi tungsten dan molibden yang berwarna biru (Dewi,
2013). Hasil reaksi berupa warna kebiruan dapat dibaca ketika menggunakan panjang
gelombang 500-750 nm (Soeharsono, 2006).
b. Tes Bradford
Metode ini berdasarkan pada pembentukan kompleks antara Coomasie
Brilliant Blue (CBB) dengan larutan protein yang diukur pada panjang gelombang 595
nm. Pembentukan komplek disebabkan oleh adanya ikatan antara pewarna CBB
dengan protein melalui interaksi ionik antara gugus asam sulfonat dengan gugus asam
amina protein. Umumnya berat molekul peptida atau protein harus lebih besar dari
3000 Da untuk menghasilkan warna biru dengan reagen Bradford. Banyaknya ligan
yang berikatan dengan molekul protein sebanding dengan muatan positif protein,
sehingga jumlah absorbansi sebanding dengan kadar protein dalam sampel (Pierce,
2005 dalam Hermiastuti, 2013).
4. Analisis Prosedur
a. Tes Kualitatif
i. Pengendapan Protein
Kemampuan protein mengendap berkaitan erat dengan kemampuan
protein itu sendiri untuk larut. Kelarutan protein dapat dipengaruhi oleh

2. faktor ekstrinsik, seperti pH, kuat lemahnya ion, suhu, dan keberadaan
berbagai macam jenis pelarut (Kramer et al., 2012). HgCl2 dan Pb(Ac)2
ditambahkan sebab ion positif Hg+
dan Pb2+
dapat mengendapkan protein. Hal
ini disebabkan adanya reaksi yang terjadi antara sisi positif logam berat
dengan sisi negatif protein (Tika, 2010). Asam pikrat digunakan sebab asam
pikrat merupakan salah satu jenis alkaloid reagensia yang dapat
mengendapkan protein. Ion negatif dari asam pikrat akan bergabung dengan
protein yang bermuatan positif sehingga terbentuk garam proteinat yang
mengendap (Saraswati, 2015). Garam (NH4)2SO4 digunakan sebab kelarutan
protein dalam suatu larutan garam sangat rendah (Redhana, 2004 dalam Tika,
2010). Air tidak bersifat mengendapkan melainkan melarutkan.
b. Tes Kuantitatif
i. Tes Lowry
Pereaksi biuret dikombinasikan dengan pereaksi Folin-Ciocalteu
Phenol dan akan bereaksi dengan residu tirosin dan triptofan dalam protein
untuk menghasilkan warna biru (Sudarmadji dkk., 1997 dalam Putri dkk.,
2013). Warna biru ini dapat diukur secara kuantitatif melalui spektrofotometri
(Blainski et al., 2013).
ii. Tes Bradford
Coomassie Brilliant Blue G-250 berikatan dengan protein melalui
ikatan ionik antara gugus sulfat negatif pereagen dan gugus amina positif
protein, ditambah dengan adanya ikatan Van der Waals antara pereagen dan
protein. Coomassie G-250 dapat menciptakan prosedur pewarnaan yang
cepat dan lebih nyaman. Pereagen ini memunculkan bentuk leuko (leuco
form) ketika pH berada dibawah 2. Leuco form akan memunculkan warna biru
ketika berikatan dengan protein yang memiliki pH lebih netral. Warna biru
yang ditimbulkan oleh Coomassie G-250 pada setiap sampel konsentrasi
protein memiliki intensitas jelas yang dapat dibedakan oleh mata serta dapat
diukur secara kuantitatif dengan spektrofotometer (Anonymous, 2014).
5. Hasil dan Pembahasan
c. Tes Kualitatif
i. Pengendapan Protein
Susu
Kelompok HgCl2 Pb(Ac)2 Asam pikrat (NH4)2SO4 H2O
1-5 (susu
greenfield)
Tidak ada endapan Terbentuk
endapan putih
di bawah
Tidak ada
endapan,
warnanya
menyatu
dengan warna
kuning
Terbentuk
endapan
putih di atas
Tidak ada
perubahan
Telur
Kelompok HgCl2 Pb(Ac)2 Asam pikrat (NH4)2SO4 H2O
1-5 Terbentuk
endapan di bawah
Terbentuk
endapan putih
di bawah
Warna kuning
tetap,
terbentuk
Terbentuk
endapan
putih
Terbentuk
endapan
putih di
bawah

3. endpan putih
di bawah
tersebar di
cairan
d. Tes Kuantitatif
i. Metode Lowry
ii. Metode Bradford
y = 0,2912x
R² = 0,7163
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
Larutan standar
Larutan standar
Linear (Larutan
standar)
y = 0,4638x
R² = 0,9926
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1
0 0,5 1 1,5 2 2,5
ABSORBANSI
KONSENTRASI BSA