This document provides an overview of fluorimetry and fluorescence/phosphorescence. It defines fluorescence as the emission of light from a substance when it absorbs energy from an external light source. Phosphorescence is a type of delayed fluorescence that continues emitting light even after the external light source is removed. Fluorimetry is a type of electromagnetic spectroscopy that analyzes the fluorescence from a sample using an excitation light source, usually ultraviolet light, to produce lower energy light emission. Key concepts discussed include the Jablonski energy diagram, factors that influence fluorescence, and applications of extrinsic fluorophores.

1. FLUORIMETRY
PREPARED BY :- MISS ANAMIKA SINGH

2. FLUORESCENCE:-
W H E N A BEA M O F L I G H T PA S S ES T H R O U G H A S U B STAN CE , T H E
PA RT I CL E S W O U L D AB S O R B S S O M E F R O M O F E N E R G Y A ND
E M I T S T H E R A D I AT I O N .
I T I S P H E N O M E N O N I N W H I C H T H E E XC I T E D S I N G L E T
E L E CT R O N ( T H E E L E C T R O N A RE PA I RE D ) E M I T S E M I S S I O N
R A D I AT I O N W H E N B R O U G H T D O W N TO G R O U N D L E VE L AT T HE
C E RTA I N WAV E L E N G T H .
F L U O R E S C E N C E O C C U R AT ( 1 0 - 9 - 1 0 - 6 S E C )
DEFINITION

3. I T I S A T YP E O F E L E C T R O M A G N E T I C S P E CT R O S C O P Y T H AT
A N A LY S E S T H E F L U O R E S C E N C E F R O M T H E S A M P L E .
 I T I N VO LVE T H E U S E O F B E A M O F L I G H T, U S U AL LY ULT RA
V I O L E T L I G H T T H AT E XC I T E D T H E E L E C T R O N S I N T H E
M O L E C UL E O F C E RTA I N C O M P O U N D ( F L U O R E S CE N CE
S U B S TA N C E ) A N D T H AT P R O D U C E S A L I G H T O F L O W E R E N E R G Y.
P H O S P H O R E S C E N C E : -
W H E N L I G H T R A D I AT I O N I S I N C I D E N T O N CE RTA I N
S U B STAN CES T H E Y E M I T L I G H T C O N T I N U O U S LY E VE N AF T ER
T H E I N C I DE NT L I G H T I S C U T O F F. T H I S T Y P E O F D E L AY E D
F L U O R E S CE N C E I S CAL L E D P H O S P H O R E S C E NC E . S U B S TA N C E
S H O W I N G P H O S P H O R E S C E NC E A R E P H O S P H O R E SCE NT
S U B S TA N C E .
FLUORIMETRY

4.  M O L E C UL E C O N TA I N S Σ ( S I G M A ) E L E CT R O N  ( P I E ) A ND N O N
B O N D I N G ( N ) E L E C T R O N .
 T H E E L E CT R O N E M AY B E P RE S E NT I N B O N D I N G M O L E CU L AR
O R B I TAL . I T I S C AL L E D A S H I G H E ST O C C U PI E D M O L E CU L E R
O R B I TA L ( H O M O ) . I T H A S L E S T E N E R G Y A N D M O R E S TA B L E .
 W H E N T H E M O L E C UL E AB S O R B R A D I ANT E N E R G Y F RO M A
L I G H T S O U R C E ,T H E B O N D I N G E L E CT R O N M AY B E P R O M O T E D
TO A NT I B O N D I N G O R B I TAL ( L UM O ) . I T H A S M O R E E NE R G Y
A N D H E N C E L E S S S TA B L E .
PRINCIPLE

5.  A M O L E C U L A R E L E C T R O N I C S TAT E I N W H I C H A L L O F T H E
E L E C T R O N A R E PA I R E D A R E C A L L E D S I N G L E S TAT E .
 I N A S I N G L E T S TAT E M O L E C U L E A R E D I A M A G N E T I C .
 M O S T O F T H E M O L E C U L E I N T H E I R G R O U N D S TAT E A R E
PA I R E D .
 W H E N S U C H A M O L E C U L E A B S O R B U V / V I S I B L E R A D I AT I O N
, O N E O R M O R E O F T H E PA I R E D E L E C T R O N R A I S E D TO A N
E XC I T E D S I N G L E T S TAT E / E XC I T E D T R I P L E T S TAT E .
THEORY OF FLUORESCENCE
AND PHOSPHORESCENCE

6.  F L U O R E S C E N C E
 P H O S P H O R E S C E N C E
 R A D I AT I O N L E S S P R O C E S S
 V I B R AT I O N A L R E L A X AT I O N
 I N T E R N A L C O N V E R S I O N
 E XT E R N A L C O N V E R S I O N
 I N T E R S Y S T E M C R O S S I N G
FROM THE EXCITED SINGLET STATE
ONE OF THE FOLLOWING
PHENOMENON OCCURS

7. F L U O R E S C E N C E : - L I G H T E M I T I N G AT O N C E S O U R C E S TA RT &
S TO P S W H E N S O U R C E S TO P
F L U O R E S C E N C E & P H O S P H O R E S C E N C E : -

8. JABLONSKI ENERGY DIAGRAM

10.  F L U O R E S CE N C E I S M O S T C O M M O N LY O B S E RV E D I N
C O M P O U N D C O N TA I N I N G A R O M AT I C F U NC T I O N A L G R O U P S
W I T H L O W E N E R G Y .
 M O S T U N SU B ST I T U T E D A R O M AT I C H Y D R O C A RB O N S S H O W
F L U O R E S CEN C E – Q U A N T U M E F F I C I E NC Y I NC R EA S E WI T H
T H E N O . O F R I N G S A N D D E G R E E O F C O N D E N S AT I O N .
 S I M P L E H E T E R O C Y C L E D O N O T E X H I B I T F L U O R E S C E N C E .
 T H E N N -  * S I N G L E T Q U I C K LY C O N V E RT TO T H E N -
 * T R I P L E T A N D P R E V E N T F L U O R E S C E N C E
FLUORESCENCE AND
CHEMICAL STRUCTURE

11.  F U S I O N O F H E T E R O C Y C L I C N U C L E U S TO B E N ZE N E R I N G
I N C R E A S E F L U O R E S C E N C E
 S U B S T I T U T I O N O N T H E B E N ZE N E R I N G S H I F T S WAV E L E N G T H
O F A B S O R B A N C E M A XI M A A N D C O R R E S P O N D I N G C H A N G E S I N
F L U O R E S C E N C E I N P E A K S .
 F L U O R E S C E N C E D E C R E A S E W I T H I N C R E A S I N G ATO M I C N O .
O F T H E H A L O G E N .
 S U B S T I T U T I O N O F C A R B O XY L I C A C I D O R C A R B O XY L I C
G R O U P O N A R O M AT I C R I N G I N H I B I T F L U O R E S C E N C E .

12. I N TE R NAL C O N V E R SI O N I S A T RA N S I T I O N O C C U R R I N G
B E T W E E N STAT E S O F T H E S A M E M U LT I PL I C I T Y A ND I T TA K E
P L A CE AT T I M E S C AL E O F 1 0 - 1 2 S ( FA S T E R T H A N T H AT O F
F L U O R E S C E N C E P R O C E S S )
I N T E R SY S T E M C R O S S I N G : - I N T E R S Y ST E M CR O S S I N G R E F E R TO
N O N R A D I AT I VE T R A NS I T I O N B E T W E E N S TAT E S O F D I F F E RE NT
M U LT I PL I C I T Y . I T O C C U R S V I A I N V ER S I O N T H E S P I N O F T H E
E XC I T E D RE S ULT I N G I N T W O U N PA I R E D E L E C T R O N W I T H T H E
S A M E S P I N O R I E N TAT I O N R E S U LT I N G I N A S TAT E W I T H S P I N = 1
A N D M U LT I P L I C I T Y O F 3 ( T R I P L E T S TAT E )
INTERNAL CONVERSION VS
INTERSYSTEM CROSSING

13.  T H E D I F F E R E NC E B E T W E E N T H E M A XI M U M WAV E L E N G T H O F
T H E E XC I TAT I O N L I G H T A N D M AXI M U M WAV E L E N G T H O F T H E
E M I T T E D FL O R E S CE N CE L I G H T I S A C O N S TAN T R E FE R RE D TO
A S T H E S T R O K E S S H I F T.
 M E A SU RE O F E N E R G Y L O S T D U RI N G T H E L I F E T I M E O F T H E
E XC I T E D S TAT E ( R A D I AT I O N L E S S V I B R AT I O N A L
D E AC T I VAT I O N ) B E F O R E R E T U R N I N G TO T H E G R O U N D
S I N G L E T L E V E L ( F L O R E S C E N C E E M I S S I O N )
 T H E B E ST R E S ULT A R E O B TA I NE D FR O M C O M P O U N D
I N VO LV I N G L A R G E S H I F T S .

14.  AT L O W C O N C E NT R AT I O N O F F L U O R O P H O R E , T H E
F L U O R E S CE N C E I NT E NS I T Y O F A S A M P L E I S E S S E N T I AL LY
L I N E A R LY P R O P O RT I O N A L TO C O N C E N T R AT I O N .
 H O W E V E R ,A S T H E C O N C E N T R AT I O N I N C R E AS E , A P O I NT I S
R E AC H E D AT W H I C H T H E I N T E N S I T Y I N C RE A SE I S
P R O G R E S S I V E LY L E SS L I NE A R , A N D T H E I N T E N S I T Y
E VE NT U AL LY DE C RE AS E A S C O N C E N T R AT I O N I N C R E A SE
F U RT H E R .
Fluorescence intensity

15.  E XT E R N A L F L U O R O P H O R E C A N B E I N T R O D U C E D I N TO T H E
S Y S T E M B Y C H E M I C A L C O U P L I N G O R N O N – C O VA L E N T B I N D I N G .
 F I R S T LY I T M U S T N O T A F F E C T T H E M E C H A N I S T I C P R O P E RT I E S
O F T H E S Y S T E M U N D E R I N V E S T I G AT I O N .
 S E C O N D LY , I T S F L U O R E S C E N C E E M I S S I O N N E E D S TO B E
S E N S I T I V E TO E N V I R O N M E N TA L C O N D I T I O N I N O R D E R TO
E N A B L E M O N I TO R I N G O F T H E M O L E C U L A R E V E N T S .
 L A S T LY T H E F L U O R O P H O R E M U S T B E T I G H T LY B O U N D AT A
U N I Q U E L O C AT I O N .
E XA M P L E : - 1 A N I L I N O - 8 - N A P H T H A L E N E S U L P H O N AT E ( A N S )
, F L U O R E S C A M I N E O - P H T H A L D E H Y D E O R 6 - A M I N O Q U I N O LY- N -
H Y D R O XY S U C C I N I M I D Y L C A R B O N AT E .
EXTRINSIC FLUORESCENCE

16. S E N S I T I V I T Y : - I T I S M O R E S E N S I T I V E A S C O N C E N T R AT I O N I S L O W
A S u g / ml O R n g / ml .
P R E C I S I O N : - U P TO 1 %C A N B E A C H I V E D .
S P E C I F I C I T Y : - M O R E S P E C I F I C T H A N A B S O R B T I O N M E T H O D
W H E R E A B S O R P T I O N M A XI M A M AY B E S A M E F O R T W O C O M P O U N D .
R A N G E O F A P P L I C AT I O N : - E V E N N O N F L U O R S C E N T C O M P O U N D
C A N A L S O B E C O N V E RT E D TO F L U R O S E N C E N T C O M P O U N D B Y
C H E M I C A L C O M P O U N D .
ADVANTAGE OF FLUORESCENCE
SPECTROSCOPY

17.  N O T U S E F U L F O R I D E N T I F I C AT I O N .
 N O T A L L C O M P O U N D F L U O R E S C E N C E .
 C O N TA M I N AT I O N C A N Q U E N C H T H E F L U O R E S C E N C E A N D
H E N C E G I V E FA L S E / N O R E S U LT S .
DISADVANTAGE OF
FLUORESCENCE SPECTROSCOPY

18.  D E C R E A S E I N F L U O R E S C E N C E I N T N S I T Y D U E TO S P E C I F I C
E F F E C T O F C O N S T I T U E N T S O F T H E S O L U T I O N .
 D U E TO C O N C E N T R AT I O N , P H , P R E S S U R E , O F C H E M I C A L
S U B S TA N C E , T E M P E R AT U R E , V I S C O C I T Y , E T C .
T Y P E S O F Q U E N C H I N G
S E L F Q U E N C H I N G
C H E M I C A L Q U E N C H I N G
S TAT I C Q U E N C H I N G
C O L L I S I O N Q U E N C H I N G
QUENCHING

19. SELF QUENCHING

20.  H E R E D E C R E A S E I N F L O R E S C E N C E I N T E N S I T Y D U E TO T H E
FA C TO R L I K E C H A N G E I N P H , P R E S E N C E O F O XY G E N ,
H A L I D E S & H E AV Y M E TA L S .
 P H A N I L I N E AT P H 5 - 1 3 G I V E S F L U O R E S C E N C E B U T AT P H < 5 &
> 1 3 I T D O E S N O T E XH I B I T F L U O R E S C E N C E .
 H A L I D E S L I K E C H L O R I D E , B R O M I D E , I O D I D E & E L E C T R O N
W I T H D R AW I N G G R O U P L I K E N O 2 , C O O H , E T C . L E A D S TO
Q U E N C H I N G .
 H E AV Y M E TA L L E A D S TO Q U E N C H I N G , B E C A U S E O F T H E
C O L L I S I O N O F T R I P L E T G R O U N D S TAT E .
CHEMICAL QUENCHING

21. STATIC QUENCHING :-
T H I S O C C U R S D U E TO C O M P L E X F O R M AT I O N . E . G . C A F F E I N E
R E D U C E S T H E F L U O R E S C E N C E O F R I B O F L AV I N B Y C O M P L E X
F O R M AT I O N .
COLLISION QUENCHING :-
I T R E D U C E F L U O R E S C E N C E B Y C O L L I S I O N . W H E R E N O . O F
C O L L I S I O N I N C R E A S E D H E N C E Q U E N C H I N G TA K E P L A C E

22.  C O N C E N T R AT I O N
 Q U A N T U M Y I E L D O F F L U O R E S C E N C E
 I N T E N S I T Y O F I N C I D E N T L I G H T
 A D S O R P T I O N
 O XY G E N
 P H
 T E M P E R AT U RE & V I S C O S I T Y
 P H O TO D E C O M P O S I T I O N
 Q U E N C H E R S
 S C AT T E R
FACTOR EFFECTING
FLUORESCENCE INTENSITY

23. F L U O R E S C E N C E I N T E N S I T Y I S P R A P O RT N A L TO
C O N C E N T R AT I O N O F S U B S TA N C E O N LY W H E N T H E
A B S O R B A N C E I S L E S S T H E N 0 . 0 2
A = L O G l o / i t O R A = a b c
l o = I N T E N S I T Y O F I N C I D E N T L I G H T
a = A B S O R P T I V I T Y O F C O N S TA N T
b = PAT H L E N G T H
c = C O N C E N T R AT I O N
CONCENTRATION

24. (Ø)= NUMBER OF PHOTONS EMITTED NUMBER OF
PHOTON ABSORBED IT IS ALWAYS LEES THEN 1.0
SINCE SOME ENERGY IS LOST BY RADIATION LESS
PATHWAYS(COLLISIONAL ,INTERSYSTEM CROSSING,
VIBRATIONAL RELAXATION).
QUANTUM YIELD OF
FLURESCENCE (Ø)

25. INTENSITY OF INCIDENT LIGHT : -
INCREASE IN THE I NTENSITY
OF INCIDENT LIGHT ON THE SAMPLE FLURESCENCE
INTENCITY ALSO INCREASE .
ADSORPTION : -
ADSORPTION OF SAMPLE SOLUTION IN THE
CONTAINER MAY LEADS TO A SERIOUS PROBLEM .
OXYGEN :-
OXIDATION OF FLUORESCENT SPECIES TO A NON
FLUORESCENT SPECIES, QUENCHES FLUROSCENT
SUBSTANCE
PH :-
ALTERATION OF PH OF A SOLUTION WILL HAVE
SIGNIFICANT EFFECT ON FLUROSCENCE FOR A ANILINE IN
ALKALI MEDIUM GIVE VISIBLE FLURESCENCE BUT IN
ACIDIC CONDITION GIVE FLURESCENCE IN VISIBLE
REGION .

26. T E M P E R AT U RE A N D V I S C O S I T Y : -
T E M P E R AT U R E I N C R E A S E C A N
I N C R E A S E T H E C O L L I S I O N A L D E A C T I VAT I O N , A N D R E D U C E
F L U O R E S C E N T I N T E N S I T Y . I F V I S C O S I T Y O F S O L U T I O N I S M O R E
T H E F R E Q U E N C Y O F C O L L I S O N A R E R E D U C E D A N D I N C R E A S E I N
F L U O R S C E N T I N T E N S I T Y .
P H O TO C H E M I C A L D E C O M P O S I T I O N : -
A B S O R P T I O N O F I N T E N S E
R A D I AT I O N L E A D S TO P H O TO C H E M I C A L D E C O M P O S I T I O N O F A
F L U R O S C E N T S U B S TA N C E TO L E S S F L U O R S C E N T O R N O N
F L U O R S C E N T S U B S TA N C E .
Q U E N C H E R : -
Q U E N C H I N G I S T H E R E D U C T I O N O F F L U O R E S C E N C E
I N T E N S I T Y B Y T H E P R E S E N C E O F S U B S TA N C E I N T H E S A M P L E
O T H E R T H A N T H E F L U O R E S C E N T A N A L AY T E .
S C AT T E R : -
S C AT T E R I S M A I N LY D U E TO C O L L O I D A L PA RT I C L E S
I N S O L U T I O N . S C AT T I N G O F I N C I D E N T L I G H T A F T E R PA S S I N G
T H R O U G H T H E S A M P L E L E A D S TO D E C R E A S E I N F L U R E S E N C E
I N T E N S I T Y .

27. INSTRUMENTATION

28. M E R C U RY VA P O U R L A M P : -
M E R C U RY VA P O U R AT H I G H P R E S S U R E G I V E I N T E N S E L I N E S O N
C O N T I N O U S B A C K G R O U N D A B O V E 3 5 0 N M . L O W P R E S S U R E
M E R C U RY VA P O U R G I V E S A N A D D I T I O N A L L I N E AT 2 5 4 N M . I T
I S U S E D I N F I LT E R F L U O R I M E T E R .
SOURCE OF LIGHT
a) MERCURY VAPOUR LAMP

29. I T G I V E S M O R E I N T E N S E R A D I AT I O N T H E N M E R C U RY VA P O U R
L A M P . I T I S U S E D I N S P E C T R O F L U O R I M E T E R
b) XENON ARC LAMP

30. I F E XC I TAT I O N H A S TO B E D O N E I N V I S I B L E R E G I O N T H I S C A N
B E U S E D . I T I S U S E D I N L O W C O S T I N S T R U M E N T
C) TUNGSTEN LAMP

31. F I LT E R : - T H E S E AR E N O T H I N G B U T O P T I C AL F I LT E RS
W O R K S O N T H E P R I NC I PAL O F A B S O R P T I O N O F U N WA N T E D
L I G H T A N D T R A N S M I T T I N G T H E R E Q U I R E D WAV E L E N G T H O F
L I G H T . I N E XP E N S I VE I N ST RU M E NT FL U R I M E TE R P R I M A RY
F I LT E R A N D S E C O N D RY F I LT E R A R E P R E S E N T
P R I M A RY F I LT E R : -
A B S O R B S V I S I B L E R E G I O N A N D T R A NS M I T
U V R A D I AT I O N .
S E C O N D RY F I LT E R : -
A B S O R B S U V R A D I AT I O N A N D T RAN S M I T
V I S I B L E R A D I AT I O N
FILTER

32. T H E Y CO N V E RT P O LY C H R O M AT I C L I G H T I N TO
P O LY C H R O M AT I C L I G H T I N TO M O N O C H R O M AT I C L I G H T . T H E Y
C A N I S O L AT E A S P E CI F I C R A N G E O F A WAV E L E N G T H O R A
PA RT I C U L E R WAV E L E N G T H O F R A D I AT I O N F R O M A S O U R C E .
E XC I TAT I O N M O N O C H R O M ATO R S : - P R O V I D E S S UT I AB L E
R A D I AT I O N F O R E XC I TAT I O N O F M O L E C U L E .
E M I S S I O N M O N O C H R O M ATO R S : - I S O L AT E O NLY T H E
R A D I AT I O N E M I T T E D B Y T H E F L U R O S C E N T M O L E C U L E
MONOCHROMATORS

33. T H E S E A RE M E NT F O R H O L D I N G L I Q U I D S AM P L E . T H E S E A RE
M A D E U P Q U A RT Z A N D C A N H AV E VA RI O U S S H A P E E X .
C Y C L I N D R I C A L O R R A C TA N G U L E E T C .
SAMPLE CELL

34. P H O TO M E T R I C D E T E C TO R A R E U S E D T H E Y A R E : -
1 ) B A R R I E R L AY E R C E L L
2 ) P H O TO M U LT I O L AY R C E L L S
B A R R I E R L AY E R C E L L : -
 I T I S E M P L O Y E D I N I N E XP E N S I V E I N S T R U M E N T . F O R E X . F I LT E R
F L U O R I M E T E R
DETECTORS

35.  I T C O N S I S T O F A C O P P E R P L AT E C O AT E D W I T H A T H I N L AY E R
O F C U P R O U S O XI D E ( C U 2 O ) . A S E M I T R A N S PA R E N T F I L M O F
S I LV E R I S L A I D O N T H I S P L AT E TO P R O V I D E G O O D C O N TA C T .
 W H E N E XT E R N A L L I G H T FA L L S O N T H E O XI D E L AY E R T H E
E L E C T R O N S E M I T T E D F R O M T H E O XI D E L AY E R M O V E I N TO
C O P P E R P L AT E .
 T H E N O XI D E L AY E R B E C O M E S P O S I T I V E A N D C O P P E R P L AT E
B E C O M E S N E G AT I V E .
 H E N C E A N E M F D E V E L O P B E T W E E N T H E O XI D E L AY E R A N D
C O P P E R P L AT E A N D B E H AV E S L I K E A VO LTA I C C E L L . S O I T I S
C A L L E D P H O TO VO LTA I C C E L L .
 A G A LVA N O M E T E R I S C O N N E C T E D E XT R E M E LY B E T W E E N
S I LV E R F I L M A N D C O P P E R P L AT E A N D T H E D E F L E C T I O N I N
T H E G A LVA N O M E T E R S H O W S T H E C U R R E N T F L O W T H R O U G H
I T . T H E A M O U N T O F C U R R E N T I S F O U N D TO B E P R O P O RT I O N
TO T H E I N T E N S I T Y O F I N C I D E N T L I G H T

36.  T H E S E A R E I N C O R P O R AT E D I N E XP E N S I V E I N S T R U M E N T L I K E
S P E C T R O F L U O R O M E T E R . I T S S E N S I T I V I T Y I S H I G H D U E TO
M E A S U R I N G W E A K I N T E N S I T Y O F L I G H T .
 T H E P R I N C I P L E E M P L O Y E D I N T H I S D E T E C TO R I S T H AT
M U LT I P L I C AT I O N O F P H O TO E L E C T R O N S B Y S E C O N D A RY
E M I S S I O N O F E L E C T R O N .
 T H I S I S A C H I E V E D B Y U S I N G A P H O TO C AT H O D E A N D A S E R I E S
O F A N O D E S ( D Y N O D E S ) . U P TO 1 0 D Y N O D E S A R E U S E D . E A C H
D Y N O D E I S M A I N TA I N E D AT 7 5 - 1 0 0 H I G H E R T H AT T H E
P R O C E E D I N G O N E
 AT E A C H S TA G E T H E E L E C T R O N E M I S S I O N I S M U LT I P L I E D B Y A
FA C TO R O F 4 TO 5 D U E TO S E C O N D A RY E M I S S I O N O F
E L E C T R O N S A N D H E N C E A N O V E R A L L FA C TO R O F 1 0 6 I S
A C H I E V E D .
 P M T S H O U L D B E S H I E L D E D F R O M S T R AY L I G H T I N O R D E R TO
H AV E A C C U R AT E R E S U LT .
PHOTOMULTIPLIER TUBE

37.  P M T C AN D ET ECT V ERY W E A K S I G N A L S , EV E N 2 0 0 T I M E S
W E A K E R T H A N T H AT C O U L D B E D O N E U S I NG P H O TO VO LTA I C
C E L L . H E N C E I T I S U SE F UL I N F L U O R E S C E N CE M E A SU RE M E NT
.

38. GENERAL LAYOUT OF
FLUORIMETER

39. I T C O N TA I N T U N G S T E N L A M P A S A S O U R C E O F L I G H T A N D H A S
A N O P T I C A L S Y S T E M C O N S I S T O F P R I M A RY F I LT E R .
 T H E E M I T T E D RA D I AT I O N I S M E A S U RE D AT 9 0 ˚ B Y USI N G A
S E C O N D RY F I LT E R AN D D E TE CTO R . P R I M A RY F I LTE R A BS O R B
V I S I B L E R A D I AT I O N A N D T RA N SM I T U V R AD I AT I O N W H I C H
E XC I T E S T H E M O L E C U L E P R E S E N T I N S A M P L E C E L L .
 I N S T E A D O F 9 0 I F W E U S E 1 8 0 G E O M E T RY A S I N COL ORI M E T RY
S E C O N D RY F I LT E R H A S TO B E H I G H LY E F F I C I E NT O T H E R W I SE
B O T H T H E U N A B S O R B E D U V R ADI AT I O N A N D F L U O R E SC E NT
R A D I AT I O N W I LL P R O D U CE DE TEC TO R RE S PO N S E A N D G I V E
FA L S E R E S U LT .
INSTRUMENTS
SINGLE BEAM FILTER FLUORIMETER

40. S I N G L E B E A M I N S T R U M R N T A R E S I M P L E I N C O N S T R U C T I O N
C H E A P E R A N D E A S Y TO O P E R AT E
A D VA N TA G E : -
S I M P L E I N C O N S T R U C T I O N , E A S Y TO U S E , E C O N O M I C A L
D I S A D VA N TA G E : -
 I T I S N O T P O S S I B L E TO U S E R E F E R E N C E S O L U T I O N & S A M P L E
S O L U T I O N AT A T I M E .
 R A P I D S C A N N I N G TO O B TA I N E XC I TAT I O N & E M I S S I O N
S P E C T R U M O F T H E C O M P O U N D I S N O T P O S S I B L E .

41. I T I S S I M I L A R TO S I N G L E B E A M E X C E P T T H AT T H E T W O
I N C I D E N T B E A M S F O R M A S I N G L E L I G H T S O U R C E PA S S T H R O U G H
P R I M A RY F I LT E R S S E P E R AT E LY A N D FA L L O N T H E A N O T H E R
R E F E R E N C E S O L U T I O N . T H E N T H E E M I T T E D R A D I AT I O N F R O M
T H E S A M P L E O R R E F E R E N C E F R O M T H E S A M P L E O R R E F E R E N C E
S A M P L E PA S S S E PA R AT E LY T H R O U G H S E C O N D A RY F I LT E R A N D
P R O D U C E R E S P O N S E C O M B I N LY O N A D E T E C TO R
DOUBLE BEAM FLUORIMETER

42. ADVANTAGES:-
SAMPLE & REFERENCE SOLUTION CAN BE
ANALYSED SIMULTANEOUSLY ,
DISADVANTAGE :-
RAPID SCANNING IS NOT POSSIBLE DUE TO
USE OF FILTERS .

43. I N T H I S P R I M A RY F I LT E R I N D O U B L E B E A M F L U O R I M E T E R I S
R E P L A C E D B Y E X C I TAT I O N M O N O C H R O M ATO R A N D T H E
S S E C O N D RY F I LT E R I S R E P L A C E D B Y E M I S S I O N M O N O C H R O M ATO R
. I N C I D E N T B E A M I S S P L I T I N TO S A M P L E A N D R E F E R N C E B E A M B Y
U S I N G B E A M S P L I T E R .
IN SPECTROFLUORIMETER

44.  D E T E R M I N AT I O N O F I N O R G A N I C S U B S TA N C E A L 3 + L I + ZN 2 +
 D E T E R M I N AT I O N O F T H I A M I N E H C L .
 D E T E R M I N AT I O N O F P H E N Y TO I N .
 D E T E R M I N ATI O N O F I N D O L E S , P H E N O L S , & P H E N O T H I A ZI N E
 D E T E R M I N AT I O N O F N A P H T H O L ' S , P R O T E I N S , P L A N T
P I G M E N T A N D S T E R O I D S .
 F L U O R I M E T RY , N O W A D AY S C A N B E U S E D I N D E T E C T I O N O F
I M P U R I T I E S I N N A N O G R A M L E V E L B E T T E R T H A N
A B S O R B A N C E S P E C T R O P H O TO M E T E R W I T H S P E C I A L
E M P H A S I S I N D E T E R M I N I N G C O M P O N E N T S O F S A M P L E AT
T H E N D O F C H R O M ATO G R A P H I C O R C A P I L L A RY C O L U M N .
APPLICATIONS

45.  D E T E R M I N AT I O N O F R U T H E N I U M I O N S I N P R E S E N C E O F
O T H E R P L AT I N U M M E TA L S .
 D E T E R M I N AT I O N O F B O R O N I N S T E E L , A L U M I N I U M I N
A L L O Y S M A N G A N E S E I N S T E E L .
 D E T E R M I N AT I O N O F B O R O N I N S T E E L B Y C O M P L E X F O R M E D
W I T H B E N ZO I N .
 E S T I M AT I O N O F C A D M I U M W I T H 2 ( 2 H Y D R O X Y P H E N Y L
) B E N ZO X A ZO L E I N P R E S E N C E O F TA RT R AT E .
 R E S P I R ATO RY T R A C T I N F E C T I O N .
APPLICATIONS