Teknik kromatografi melibatkan pemisahan campuran menjadi komponen-komponennya berdasarkan perbedaan afinitas komponen terhadap dua fase, yaitu fase diam dan fase gerak. Kromatografi gas menggunakan gas sebagai fase gerak dan dapat digunakan untuk campuran yang dapat menguap. Analisis asam lemak pada sampel kacang tanah menggunakan kromatografi gas untuk mengidentifikasi dan menghitung persentase tu

1. KROMATOGRAFI

2. I. DEFINISI KROMATOGRAFI
Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran
didasarkan atas perbedaan distribusi dari komponen-komponen
campuran tersebut diantara dua fase, yaitu fase diam (padat
atau cair) dan fase gerak (cair atau gas).
Pemisahan terjadi karena molekul sampel tertahan oleh
fase diam atau dibawa oleh fase gerak, tergantung dari afinitas
senyawa tersebut terhadap kedua fase ini.
Bila fase diam berupa zat padat yang aktif, maka dikenal
istilah kromatografi penyerapan (adsorption chromatography).
Bila fase diam berupa zat cair, maka teknik ini disebut
kromatografi pembagian (partition chromatography).

3. II. JENIS – JENIS KROMATOGRAFI

4. III. KROMATOGRAFI GAS
Kromatografi Gas merupakan metode pemisahan campuran menjadi
komponen-komponennya dengan menggunakan gas sebagai fase bergerak
yang melewati suatu lapisan serapan (sorben) yang diam.
Kromatografi gas dapat dipakai untuk setiap campuran dimana semua
komponennya mempunyai tekanan uap yang berarti, suhu tekanan uap yang
dipakai untuk proses pemisahan. Tekanan uap memungkinkan komponen
menguap dan bergerak bersama-sama dengan fase gerak yang berupa gas.
Kromatografi gas mempunyai prinsip yang sama dengan kromatografi
lainnya, tapi memiliki beberapa perbedaan misalnya proses pemisahan
campuran dilakukan antara stasionary fase cair dan gas fase gerak dan pada
oven temperur gas dapat dikontrol sedangkan pada kromatografi kolom
hanya pada tahap fase cair dan temperatur tidak dimiliki.
Secara rinci prinsip kromatografi adalah udara dilewatkan melalui nyala
hydrogen (hydrogen flame) selanjutnya uap organik tersebut akan terionisasi
dan menginduksi terjadinya aliran listrik pada detektor, kuantitas aliran listrik
sebanding dengan ion.

5. III. A. GSC ( GAS SOLID CHROMATOGRAPHY )
Kromatografi Gas Padat (KGP)
Fase diam adalah butiran-butiran adsorben padat dan
fase geraknya adalah gas yang stabil.
Mekanisme pemisahan komponen sample adalah
perbedaan fisik adsorpsi oleh fase diam.
Beberapa kelemahan yaitu : adsorpsi fase diam terhadap
komponen-komponen sample bersifat semipermanen
terutama terhadap molekul yang aktif atau molekul yang polar.
Di samping itu, sering kali memberikan bentuk kromatogram
yang berekor. Kelemahan yang lain adalah efektivitas
pemisahan komponen sangat dipengaruhi oleh bobot molekul.
Metode ini lebih efektif untuk pemisahan komponen-
komponen dengan massa relative (Mr) rendah.

6. III.B. GLC (GAS LIQUID CHROMATOGRAPHY)
Fase diam berupa cairan dengan titik didih tinggi
(tidak mudah menguap) yang terikat pada zat padat
penunjangnya
Fase gerak adalah gas dan zat terlarut terpisah
sebagai uap.
Mekanisme pemisahannya adalah perbedaaan
partisi komponen-komponen sample diantara fase diam
dan fase geraknya.
Partisi Gas - Cair
Sample akan memisah karena perbedaan dalam
kemampuan distribusi analit diantara fase gerak dan fase
diam di dalam kolom pada kecepatan dan waktu yang
berbeda.

8. MACAM – MACAM DETEKTOR
1. Thermal Conductivity Detector (TCD)
2. Flame Izonization Detector (FID)
3. Electron Capture Detector (ECD)

9. QUANTIFICATION
1. NORMALISASI
2. INTERNAL STANDAR
3. EKSTERNAL STANDAR

10. ANALISA ASAM LEMAK PADA SAMPEL
KACANG TANAH
Bahan : Sampel kacang tanah seberat 10 gram
REAGENSIA :
1. Metanolat – NaOH 2N
2. BF3
3. Heksan ( ekstraksi lemak )
4. Heptane ( ekstraksi derivat lemak )

11. CARA KERJA
I. Preparasi Sampel
1. Uji Kadar Lemak dengan Metode Sochlet ( heksan ),
didapat lemak dengan kadar 20%
2.Lemak yang diperoleh + 10 mL Me – NaOH + BF3 ,
dipanaskan 15 menit ( Metilasi ) + 10 mL Hepthane
II. Conditioning
- Nyalakan gas He dan gas Hidrogen
- Nyalakan FID dengan pemantik api
- Nyalakan komputer
- Buka software chemstation host, chemstation data.
- Tunggu hingga sinyal background turun dan stabil
- Atur kondisi GC sesuai kebutuhan
- Tunggu hingga GC ready

12. KONDISI OPERASI KROMATOGRAFI
1. Kromatography Agilent HP
2. Detektor FID , suhu 300 C (default)
3. Kolom yang digunakan J&W DBwax berukuran panjang 30 m
dengan diameter 250 m suhu maksimum 250C. Tebal fase
stationary state 0,25 m. Komposisi : 100 % Polyethylenglicol
(PEG ). Cocok untuk analisa : Aromatics, glicols, esential oils,
fragances,volatile fatty acids.
4. Gas pembawa Helium diatur dengan kecepatan 1 ml/menit
(konstan), pressure 7psi, average velocity 37 cm/sec
5. Suhu injektor 250C ( default )
6. Sampel yang diinjeksikan 3 µL ( splitless )
7. Oven Program
initial 50 C hold 2min rate 3 C/min
final 250 C hold 5min
8. Waktu total 73,667 menit

13. III. Injection standar FAME 32 peaks C4-C24
- Ambil 3 µL standar FAME(Fatty Acid Methyl Ester)
C8-C31
- Proses
- Interpretasi data

15. IV. Injection sampel
- Ambil 3 µL sampel yang telah dipresentasi dengan
microsirtnge
- Inject pada GC lalu tekan “start”
- Tunggu sampai proses
- Data diperoleh
- Buka software Chemstation Data Analysis
- Integrasi data
- Hitung persentase peak terhadap luas total

18. Hasil Percobaan
1. Myristic = 12.983% x 20 = 2.596 %
2. Palmitic = 20.364% x 20 = 4.072 %
3. Oleic = 17.366% x 20 = 3.473%
4. Arachidic = 16.082% x 20 = 3.216%
5. EPA = 16.389% x 20 = 3.277%
6. DHA = 16.816% x 20 = 3.363%
7. Lignoceric = 0.008% x 20 = 0.0016%