Dokumen tersebut membahas parameter standarisasi kimia untuk ekstrak tumbuhan obat tradisional yang meliputi aspek kandungan senyawa kimia, profil kromatografi cair, penentuan kadar senyawa marker, total golongan metabolit sekunder, dan kadar ekstrak larut pelarut.

1. Parameter
spesifik
Endang Diyah Ikasari

2.  Aspek kandungan kimia kualitatif dan aspek
kuantitatif kadar senyawa kimia yang
bertanggung jawab langsung thd aktivitas
farmakologis
 Contoh: ginkolida, dlm Ginko biloba
 Menaikkan sirkulasi darah ke otak
 Ada sinergisme dg flavonoid ttt
 Maka 2 senyawa tsb hrs dpt ditentukan kadar

3.  Bgm menentukan:
 Lempuyang gajah (Z. zarumbet)
 Lempuyang wangi (Z. aromaticum)
 Lempuyang pahit (Z. littorale)
 Dilihat profil KLT curcumin, gingerol,
zerumbon

4. Marker compound
1. Senyawa aktif, co: saponin ginsenosida
2. Senyawa utama, co: kurkuminoid
3. Senyawa identitas, co: lunamarin, lunakrin,
lunasin  daun sanrego (Lunasia amara)
4. Senyawa aktual

5. Cukup sulit,......
 Sambang darah  ??? Stigmasterol/ triterpen
 Pare (Momordica charantia)  ??? Charantin
/ momordisin
 Daun belimbing wuluh  apigenin

6. Sehingga perlu...
 Penelitian aktivitas lanjutan
 Yg menargetkan senyawa/kelompok senyawa
yg berefek biologis ttt
 Penelusuran kandungan kimia
 Cari pustaka yang relevan

7. Standardisasi aspek spesifik
 Profil KLT
 PK marker
 PK total gologan metabolit
 Kelarutan ekstrak dalam pelarut ttt (etanol
dan air)

8. Aspek profil KLT
 Untuk menunjukkan adanya marker betul ada
di dalam ekstrak  otentik secara kimiawi
 Parameter  marker muncul sbg spot yg
terpisah
 Masalah:
 Marker tdk muncul sbg spot tunggal
 Tidak ada marker yg otentik

9.  Mrpk pilihan pertama  metode yg mudah
dan murah
 Dipengaruhi:
 Sistem tepat
 Jenis pelarut ekst
 Jml penimbangan sampel
 Metode visualisasi

10. Sistem kromatografi
 Masalah FD
 Fase normal  silica gel GF254
 Fase terbalik  C18 yg terikat silica
 Masalah FG

11.  Fase normal
 Kloroform:metanol
 Heksana:etil asetat
 Aseton:benzena
 Heksana/kloroform/metanol+dietilamin
 +air
 +asam lemah
 Fase terbalik
 Metanol:asetonitril
 +air

12. Jenis pelarut ekstrak
 Kelarutan marker
 Prediksi kelarutan marker shg kadar yg
terambil cukup utk terdeteksi
 Kerja semi kuantitatif

13. Jumlah penimbangan sampel
 Kadar marker rendah
 Galangin  Languas galanga
 Apigenin  Averrhoa bilimbi
 Luteolin  Coleus amboinicus, Soncus
arvensus
 Kuersetin  Psidium guajava
 Totolkan dg mikropipet/pipa kapiler  semi
kuantitatif

14. Metode visualisasi
 Sbg dasar untuk PK  densito, spektro,
HPLC, GC
 General :
 UV 254nm
 UV 366nm
 Derivatisasi  Anisaldehid/vanilin + asam sulfat
 Khusus  dragendorff, FeCl3, KOH, sitroborat

15. Aspek PK marker
 Untuk menunjukkan secara kuantitatif kadar
marker yang ada di dlm ekstrak shg dpt
ditentukan jml senyawa yg bertanggung
jawab thd aktivitas farmakologi ekstrak
 Parameter  terbaca kadar ttt marker

17. Keberhasilan analisis, dipengaruhi:
• Ketelitian volume larutan yg ditotolkan
• Besar titik totolan
• Jarak antar totolan
• Jarak elusi
Sumber kesalahan: penggunaan
mikrokapiler ukur dan mikrosyringe
dalam penotolan  teknik
penyemprotan sampel secara otomatis,
scr elektronik

18. • Sinar (λ) datang pada adsorban tanpa noda
 dipantulkan kembali seluruhnya
• Sinar ((λ) datang pada adsorban yg tdp noda
 sebagian sinar diserap, sebagian
dipantulkan
• Perbedaan intensitas sinar diubah mjd sinyal
listrik (oleh detektor)  dicatat sbg puncak

19. Contoh penggunaan dalam standardisasi
ekstrak (2)

20. Sampel
Harga Rf
Luas Area
%
kandungan
254 nm 366 nm
Kendal 0,39 0,38 87343,2 0,60
Magelang 0,39 0,38 81312,6 0,56
Temanggung 0,39 0,38 69006,8 0,40
Baku
(konsentrasi 1%)
0,40 0,40 145309,5
Perhitungan:
%kadar =
𝑙𝑢𝑎𝑠 𝑎𝑟𝑒𝑎 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
𝑙𝑢𝑎𝑠 𝑎𝑟𝑒𝑎 𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟
𝑥 %𝑘𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟

21.  Masalah:
1. Marker tidak berwarna
2. Marker ada dlm jumlah terbatas
3. Bentuk peak pada pembacaan densito/HPLC
tidak simetris
4. Linearitas dan reprodusibilitas rendah

22. y = 1488.7x + 8204.8
R² = 0.983
0
5000
10000
15000
20000
25000
30000
35000
0 5 10 15 20
Contoh dalam standardisasi ekstrak

23. Sampel
Penimb
angan
(mg)
Penimba
ngan
(µg)
Volume
(µL)
Volume
uji (µL)
Faktor
pengenceran
Luas
Area
Konsentra
si regresi
(µg)
Kadar
rutin
(%)
Magelang 103.6 103600 1000 10 100 12741 3.0471 0.29
Semarang 103.1 103100 1000 10 100 11657.5 2.3193 0.22
Wonosobo 105.6 105600 1000 10 100 13017.1 3.2326 0.31

24. Bagaimana viualisasinya?
Analisis instrumen apa?

26. Aspek PK total gol. metabolit
 Untuk menetapkan kadar total golongan
metabolit sekunder ttt.
 Co/: fenolat, flavonoid, alkaloid, saponin,
minyak atsiri, tannin, steroid
 Apakah semua harus ditetapkan kadarnya
untuk standardisasi suatu ekstrak?

27. PK fenolat total
 PK berdasarkan angka kesetaran asam galat
dg menggunakan spektrofotometer visibel
setelah direaksikan dg reagen Folin Ciocalteu
 Rx pendahuluan  pereaksi FeCl3

28. Metode PK fenolat total
 Seri baku asam galat (0,04% dlm aquabidest)  2,4,6,8,10
μg/ml
 ditambah 0,2 ml Folin Ciocalteu (sdh diencerkan dg aquabidest
1:1)
 Dicampur homogen 10”
 Didiamkan 5’
 Ditambah 2 ml Na2CO3 7% b/v (dlm aquabidest)
 Dicampur homogen 30”
 Ditambah aquabidest hingga 5,0 ml
 Didiamkan 95’
 Diukur absorbansi pada 749,5 nm
 Ekstrak  dibuat 1%, perlakuan = baku

29. PK flavonoid total
 Ada bbrp metode PK
 Rx pendahuluan  pereaksi sitroborat
 Metode dg hidrolisis+partisi  SD besar
 Digunakan metode Chang atau Zhou
 Dicampur dg NaOH dan NaNO3 kmd dikopling
dg AlCl3
 Perlu skrinning λmax dan OT
 Baku : quersetin/rutin

30. Metode Chang
 Seri baku quersetin (dalam etanol 80%)  2,6; 3,2; 4,4;
6,8; 11,6μg/ml
 Ditambah etanol 95% hingga 1 ml
 Ditambah 0,1 ml alumunium klorida 10%
 Ditambah 0,1 ml kalium asetat 1M
 Ditambahkan dg aquabidest ad 5,0 ml
 Diamkan 25’
 Diukur absorbansi pada λmax 437nm
 Ekstrak etanol 1%, perlakuan = baku

31. Metode Zhou
 Seri baku rutin (0,1% dalam metanol)  20, 30, 45, 65, 90
μg/ml
 Ditambah aquabidest hingga 2 ml
 Ditambah 0,15 ml NaNO2 5%
 Didiamkan 6’
 Ditambahkan 0,15 ml AlCl3 10%
 Diamkan 6’
 Ditambahkan 2 ml NaOH 4%
 Ditambahkan aquabidest ad 5,0 ml
 Dicampur dan didiamkan 15’
 Diukur absorbansi pada λmax 510,5 nm
 Ekstrak etanol 1%, perlakuan = baku

32. PK alkaloid
 PK dg cara gravimetri setelah pengendapan
 Rx pendahuluan  pereaksi Meyer atau
Dragendorff

33. Metode PK alkaloid total
 Sampel 5 g dilarutkan dg 50 ml asam asetat (10% dlm
etanol)
 Diaduk (magnetic stirrer) 4 jam
 Disaring
 Dievaporasi
 Ditetesi dg ammonium hidroksida ad tjd pengendapan
 Disaring, dicuci dg ammonium hidroksida 1%
 Dikeringkan oven 60°C selama 30’
 Stl dingin, endapan timbang hingga bobot konstan

34. Aspek kadar ekstrak larut
pelarut air dan etanol
 Untuk menghitung persentase senyawa polar,
semi polar-non polar yg berkaitan dg aktivitas
farmakologi
 perkiraan:
 Senyawa polar  larut air
 Senyawa semi polar-non polar  larut etanol

35. Metode PK sari larut air
 Sampel 1,0 g dimaserasi dg 25,0 ml air-
kloroform LP
 Sambil sesekali dikocok selama 6 jam
pertama
 Didiamkan selama 18 jam, disaring
 Filtrat air 5,0 ml diuapkan dalam cawan
 Dipanaskan 105°C hingga bobot tetap
 Dihitung kadar sari thd ekstrak awal

36. Metode PK sari larut etanol
 Sampel 1,0 g dimaserasi dg 25,0 ml etanol
96%
 Sambil sesekali dikocok selama 6 jam
pertama
 Didiamkan selama 18 jam, disaring
 Filtrat air 5,0 ml diuapkan dalam cawan
 Dipanaskan 105°C hingga bobot tetap
 Dihitung kadar sari thd ekstrak awal