Pgd (1)
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×
 

Pgd (1)

on

  • 1,761 views

 

Statistics

Views

Total Views
1,761
Views on SlideShare
1,023
Embed Views
738

Actions

Likes
0
Downloads
7
Comments
0

4 Embeds 738

http://www.muammerdogan.com 710
http://www.gothicmelancholy.com 15
http://muammerdogan.com 7
http://istanbul.pleksus.com.tr 6

Accessibility

Categories

Upload Details

Uploaded via as Microsoft PowerPoint

Usage Rights

© All Rights Reserved

Report content

Flagged as inappropriate Flag as inappropriate
Flag as inappropriate

Select your reason for flagging this presentation as inappropriate.

Cancel
  • Full Name Full Name Comment goes here.
    Are you sure you want to
    Your message goes here
    Processing…
Post Comment
Edit your comment

Pgd (1) Pgd (1) Presentation Transcript

  • PREİMPLANTASYON GENETİK TANI Doç. Dr. Muammer Doğan                                                                                                                                                                    
  • PGD
    • Asıl düşünce doğal gebelik ve prenatal tanı.
    • PGD- IVF sonrası oluşan embryo.
    • Oosit veya embryonal materyalin spesifik genetik anormallikler açısından invitro kültür ortamlarında test edilmesi.
    • Tanı sonrası etkilenmemiş embryoların selektif transferi.
  • PGD
    • Konjenital geçişli hastalık taşıyıcılarının hastalığı çocuklarına geçirmeleri konusunda klinik bilgi vererek yardım.
    • Kesin sensitif ve hızlı tanı
    • (12-48 saat)
  • PGD
    • Günümüzde PGD sıklıkla IVF başarısını yükseltmek için anöploidik embryoların saptanımında kullanılmaktadır.
  •  
  • PGD- Kimlere ?
    • Kromozomal anormalikleri olan infertil çiftler, CF taşıyıcıları veya Y kromozomal delesyonu olanlar
    • Kromozomal anomali nedenli tekrarlayan düşükler
    • Tekrarlayan IVF başarısızlığı
    • Terminasyona dini veya ahlaksal karşı olma?
  •  
  • BİOPSİ
    • Zona Drilling
      • Mekanik
      • Kimyasal ( asit tyrodes)
      • Lazer
    • Aspirasyon
  • MEKANİK
    • Cam mikroiğne
    • ZP’ da V veya ⊔ flap kaldırımı
    • Fazla zaman alır, ileri tecrübe gerektirir.
    • Verlisky Y, An atlas of PGD 2000.
  • KİMYASAL
    • 12 mm pipet
    • Asit Tyrode (Ph 2.35)
    • Bastomer 3 hizasına getirilir.
    • İlk kullanılan ve halen en sık tercih edilen yöntemdir.
    • ESHRE PGD Consortium Steering Committee Hum Reprod 2000;15:2673.
                                      
  • KONTAKT LAZER
    • Nontouch microdrilling.
    • Embryoyu kültür mediumundan almak gerekmez.
    • Germond M Hum Reprod 1996;11:1043 .
    • Hızlı en kesin ve güvenilir yöntemdir.
    • En sık kullanılan rutin yöntem olabilmesi için insan embryosundaki güvenirliği tam ispatlanmamıştır.
    • ESHRE PGD Consortium Steering Committee Hum Reprod 2000;15:2673.
  • KONTAKT LAZER
    • Alınacak blastomer 3 hizasına getirilir.
    • Hücreli blastomer seçilir.( DNA analizi)
    • Hücre görülemiyorsa blastomer büyüklüğü ve sitoplazma görüntüsüne göre seçim yapılır.
    • 30-40 μm cam pipet
    • Biopsi sonrası alınan hücre mikromaniplasyon dish’inde ve oda sıcaklığında bırakılabilir .
    • Embryoların implantasyon öncesi taraması yeni değildir. Tavşan blastokist biopsisi ile sex -spesifik kromatin örnekleri kullanımı.
    • Gardner RL, Edwards RG Nature 1968 ; 218:346.
    PGD .
  • PGD
    • PGD için PCR yapılan tüm olgularda ICSI önerilmektedir.
    • ( IVF sonrası zona pellücidada kalabilecek fazla spermler paternal DNA ile PCR reaksiyonunu kontamine ederek yanlış tanıya yol açabilir.)
      • Bazı PGD merkezlerinde istenmeyen FF den kaçınmak için rutin ICSI uygulanmaktadır.
    • Vandervorst M, Hum Reprod Update 2000;6:364.
  • BİOPSİ
    • Polar Body
    • Cleavage embryo
    • Blastocyst
  • PB BİYOPSİSİ
    • Sadece oositin mayoz sonrası oluşan yan ürünlerinin (PB) genetik analizini yapar. (oosit/zigot)
    • 1. ve 2. Polar body’e gereksinim vardır.
    • Çalışılan materyal extra-embryonik kökenlidir.
    • Sadece maternal genotip hakkında bilgi verir (Ör; yaşa bağımlı anöploidi). Paternal kökenli defektler saptanamaz.
    • Rechitsky S, J Assist Reprod Genet 1999;16:192.
    • .
  • PB BİYOPSİSİ
    • PGD yapılamadığında alternatif sunar.
    • Fertilizasyon veya embryonik bölünme sonrası gelişen problemler belirlenemez.
    • Rechitsky S, J Assist Reprod Genet 1999;16:192.
    • ABD’nde 2-3 grup kullanmaktadır
    • İşlemi zordur .
    • PB 1 – I. Mayoz bölünmenin yan ürünüdür. Oosit kromozomlarının kopyasını içerir. Diploidiktir.
    • PB 2 - Fertilizasyon sonrası oosit kromozom sayısı yarıya iner. Diğer yarı PB 2 ile atılır. Haploidiktir.
  • PB 1 Biopsisi
    • OPU sonrası ∼ 4. saatte oositten mikromaniplasyonla alınır. PB 1 genellikle oolemmadan ayrıktır.
    • 1 saat içinde ICSI uygulanır. ( Sperm DNA kontaminasyonu ve polispermiden kaçınma)
    • Fertilite ve klivajı etkilemez.
    • ♀ translokasyon olgularında avantajlıdır (FISH)
    • Munnes S, Fertil Steril 2000;73:1209.
  • PB 2 BİYOPSİSİ
    • PB 1 nin alındığı girişten alınır.
    • Biopsi sonrası oositler klivaj kontrolüne kadar inkübe edilir.
  • CLEAVAGE STAGE –BLASTOMER BİOPSİSİ
    • İnseminasyon sonrası 62-64 saat (Compaction)
    • ZP da 20-25 μm çaplı açıklık
    • 8-16 cell aşaması
    • 16 cell aşamada tight junction oluşumu başlar.
    • Çoğu merkezin tercihidir.
  • CLEAVAGE STAGE – BLASTOMER BİOPSİSİ
    • Blastomerler totipotenttir.
    • Compaction ve hücre lisisi problem yaratabilir.
    • Analiz için 1-2 hücre alınır.
    • Asıl dezavantajı analiz için alınan materyal miktarının kısıtlılığıdır.
  • CLEAVAGE STAGE – BLASTOMER BİOPSİSİ
    • Mg ve Ca içermeyen kültürlerde kısa süreli inkübasyon yapılarak sellüler bağlantılar zayıflatılır. Hücreler arası adezyon ve bağlantı bölgeleri serbestleştirilir ve işlem kolaylaşır.
    • De Vos & Van Steirteghem AC, Prenat Diagn 2001;21:767 .
  • CLEAVAGE STAGE –BLASTOMER BİOPSİSİ 1 v 2 cell Alınımı?
    • İki hücre alımı ile embryonik hücre kitlesi azalır ve gelişim kapasitesi azalabilir.
    • İki hücrenin tanısı da benzerse tanı etkinliği artar.
    • İki hücre tanısı arasındaki farklılık ET etkileyerek PR’ azaltır.
    • DeVos & Van Steirteghem AC, Prenat Diag 2001;21:767.
    • Lewis CM, Hum Reprod 2001;16:43.
    • Van de Velde H, Prenat Diag 2000;20:1030.
  • BLASTOKİST BİOPSİSİ
    • D5-D6 uygulanır. Kliniğe rutin girmemiştir.
    • Embryo 300’ den fazla hücre içerir. PB ve cleavage stage embryodan daha fazla hücre alınabilir. (Doğru ve yeterli tanı)
    • Tanı süresi kısalır.Ama her zaman yeterli embryo olmayabilir
    • Trophectoderm hücreler alınır. (Erken CVS)
    • ICM (fetal kısım) hasarı olmaz. (Etik sorunlar azalır.)
                                                               
  • BLASTOKİST BİOPSİSİ
            • ZP ‘da delik açılır .
            • Özel iğnelerle yumuşak ayırma hareketleri veya trophectodermal vesikülün herniasyonu sonrası hücreler alınabilir. ( 10 hücre. Erken gelişim etkilenmez
            • Viega A, Zygote 1997;5:351.
  • BLASTOKİST BİOPSİSİ
    • Sequential medium kullanımı , biopsi sonrası canlı doğumlar uygulanımı cesaretlendirip yaygınlaştırdı.
    • Gardner DK, Hum Reprod 1998;13:3434.
    • Blastokist biopsisi ve PGD analizi ile ilk canlı doğum.
    • De Boer K, Reprod Biomed Online 2002;4:35.
    • Biyopsi sonrası fötal gelişim etkilenimi açısından yeterli bilgi yoktur.
  • BİOPSİ SONRASI KRYOPREZERVASYON
    • ZP bütünlüğü bozulmuştur.
    • İntakt ZP da cryoprotectan’ ın yavaş difüzyonu.
    • Biopsi sonrası embryo viabilitesi, aynı aşama biopsi yapılmayan embryolara göre daha kötüdür.
    • Jaris H , Hum Reprod 1999;14:2933.
  • BİOPSİ SONRASI KRYOPREZERVASYON
    • PB Biopsisi
    • Lee M, Fertil Steril 2000;73:645.
    • Cleavage stage embryo biyopsisi Wilton LJ, N Engl J Med 2001;345:1537
    • sonrası frozen ET gebelikleri bildirilmiştir.
    • Genetik tanı sonrası fazla embryonun rutin freezing’ i ?
    • Cleavage stage emb. -> Blastokist -> freezing -> ET (IR %25)
    • Lalic I, Hum Reprod 2001;16:32.
  • PGD
    • İlk başarılı kullanım X’ e bağlı hastalık için PCR tekniği ile uygulandı.
      • Adrenoleukodystrophy , X- linked mental reterdasyon
        • Handyside AH, Nature 1990;344:768.
  • PGD
    • PGD sonrası ilk canlı doğum bir cystic fibrosis olgusunda gerçekleşti. ( ♀ )
      • Handyside AH, N Engl J Med 1992;327:905.
  • PGD-TANI
    • Polymerase chain reaction (PCR)
    • Spesifik mutasyon analizi
    • Tek gen defektleri (%90)
    • X’ e bağlı hastalıkta cinsiyet belirleme
    • Triplet repeat diseases (Frajil X, Myotonik distrofi, Huntington)
    • Saiki RK 1985,Li H 1988.
  • PGD-TANI
    • Fluorescent in situ hybridisation (FISH)
    • Kromozomların analizi
    • X’ e bağlı hastalıkta cinsiyet belirleme
    • Kromozom anormallikleri
    • Yaşa bağımlı anöploidi
  • PCR - TANI
    • Spesifik mutasyonu analize eder.
    • Tek gen defektleri
    • Otozomal resesif
    • Otozomal dominant
    • X’ e bağlı hastalıkta cinsiyet belirleme
    • Triplet repeat diseases (Frajil X, Myotonik distrofi, Huntington)
  • PGD-Otozomal resesif
    • Cystic fibrosis
    • Tay Sachs hastalığı
    • Rh tipi
    • Thalessemi
  • PGD-Otozomal dominant
    • Marfan sendromu
    • Huntington koresi
    • Genetik geçişli kanserler
    • Polyposis coli
  • PGD- X’e bağımlı spesifik tanı
    • Duchenne musküler distrofi
    • Becker musküler distrofi
    • Hemofili
    • Charcot Marie Tooth
  • KROMOZOM ANORMALLİKLERİ
    • Kromozomların yeniden düzenlenmesi
    • Reciprocal translokasyon
    • 1/500 canlı doğum
    • Robertsonian translokasyon 1/1000
    • İnsersiyonlar
    • İnversiyonlar
  • YAŞA BAĞIMLI ANÖPLOİDİ
    • Düşük gebelik oranları
    • Yüksek abortus oranları
    • IVF hastaları-ortalama yaş 35
    • FISH (kromozom 13,16,18,21,22,X,Y)
    • Problemler- Yaşlı hastalardan az oosit
    • Mozaisizm
    • Küçük kromozomlar
  •  
  •  
  •  
  • PGD
    • Embryonik hücre sitoplazmik enzim aktivitesi değerlendirimi ilk kez PGD ile başarıldı.
      • Severe combined immunodeficiency disorder Adenosine deaminase deficiency
        • Benson C;1988 , Monk M ; 1987.
        • Lesch-Nyhan Syndrome Hypoxanthinephosphoribosyl transferase deficiency
        • Tay-Sachs Disease
        • Hexosaminidase deficiency
        • Sermon K ; 1992.
  • PGD - YANLIŞ TANI
    • PCR
    • Allelic drop out (ADO- Allellerden birinin saptanabilecek düzeylere çoğaltımındaki yetersizlik) %10
    • Kontaminasyon – sperm /kümülüs/ DNA/ hücreler (operatör)
    • Mozaisizm
    • Total PCR yetersizliği
  • PGD - YANLIŞ TANI
    • FISH
    • Kontaminasyon – kümülüs
    • Mozaisizm
    • Arka planda boyanma
    • Zayıf sinyal
    • Nükleus kaybı
    • Cross hibridizasyon
                  
  • PGD - SINIRLAMALAR
    • Multistep bir işlem
    • Reprodüktif tıp ve genetik tecrübesini birlikte gerektirir.
    • Tek hücreden tanı zorluğu
    • Allelic drop out (PCR)
    • Mozaisizm
  • ESHRE PGD CONSORTİUM
    • 1999-2001
    • 1197 siklus
    • %22.4 klinik PR (/ET)
    • %97 biopsi başarısı
    • %86 tanı
    • 5 PCR yanlış tanı
    • 1 FISH yanlış tanı
    • Hum Reprod 2002;17:233.
  • PGD-Anöploidi Screening
    • İleri maternal yaş
    • Tekrarlayan IVF başarısızlığı
    • Anomalili fetus öyküsü
    • PGD-AS ile
    • Abortus oranı azalmıştır.
    • % 24.2 -> % 9.6
    • Devam eden gebelik oranı artmıştır.
    • %10.5 -> %16.1
    • Munne S, Hum Reprod 1999;14:2191.
  • PGD - ETİK
    • IVF ( Tüm hücrelerde N kromozom yapısı < %35 )
    • İnfertil olmayanlarda IVF gerekliliği ?
    • Embryo çalışmaları
    • Eugenic planlanan bebekler
    • Cinsiyet seçimi
    • İşlem sonrası erken fetal olumsuz etki görülmemiştir.
    • Bonduelle M, Eur J Hum Genet 1999; 7:38.
  • PGD - GELECEK
    • Floresan PCR
    • Findlay I J Assist Reprod Genet 1996;13:96.
    • Kromozomal anormallikler – Comparative genomic hybridisation (CGH) 2-3gün sürer. Embryo freezingini gerektirir.
    • Wilton L,Fertil Steril 2001;75:S6
    • İlk canlı doğum bildirilmiştir.
    • Wilton L, N Eng J Med 2001;345:1537.
  • PGD - GELECEK
    • Hastalık sınırlarını genişletme
    • Tüm genom amplifikasyonu
    • DNA fingerprinting
    • Kromozom değiştirme
  •  
  • PGD-SONUÇ
    • Reprodüktif tıpta 10 yıllık PGD tecrübesi
    • ~ 2500 siklus
    • PGD terapötik abortusa alternatif bir yöntemdir.Etkilenmiş fetusları belirlemede güvenilirdir.
    • PGD özellikle anoploidi taramasında etkin olup, seçilmiş patolojilerde eve sağlıklı bebek götürme oranlarını yükseltir.
    • Yine de PGD nin etkinliğine rağmen prenatal tanı ilk tercih olmalıdır.