VMA B1, hasil berdasarkan praktikum.

1. VALIDASI METODE ANALISIS VITAMIN B1 DENGAN
METODE SPEKTROFOTOMETRI VISIBEL
Surakarta, 28 Mei 2018
1

2. KELOMPOK O-1
ANGGOTA KELOMPOK
1. Tri Setyo Ningsih (K100160176)
2. Susi Indah Lestari (K100160177)
3. Rahmawati Zulaikho (K100160178)
4. Andika Permana (K100160179)
2

3. ABSTRAK
Vitamin B1 dibutuhkan oleh tubuh untuk menimbulkan nafsu makan dan membantu penggunaan
karbohidrat dan sangat berperan dalam sistem syaraf. Praktikum ini bertujuan untuk memvalidasi
metode analisis penetapan kadar tablet vitamin B1 secara spektrofotometri visibel menggunakan biru
bromtimol (BBT). Vitamin B1 direaksikan dengan BBT untuk membentuk kompleks asosiasi ion. Untuk
membentuk kompleks vitamin B1 dengan BBT perlu ditambahkan polivinyl alkohol (PVA) 1% sebagai
zat pensolubilisasi dan ditambahkan dapar ammonia sebagai penyanggah pH yang diukur dengan
panjang gelombang maksimum 535,5 nm. Kurva baku yang digunakan adalah y=0,311+8,066x
dengan koefisien korelatif linear (r) 0,979. Diperoleh Limit of Detection (LOD) sebesar 0,013 %b/v
dan Limit of Quantification (LOQ) sebesar 0,044 %b/v. Akurasi yang diperoleh antara (19,84-40,25)
sedangkan RSDnya antara (0,87-2,46) %. Uji keseragaman kandungan tablet vitamin B1 memenuhi
persyaratan yakni 85%-115% dari %klaim kadar yang tertera pada etiket. Metode analisis kadar
vitamin B1 ini tidak berhasil dilakukan karena tidak memenuhi beberapa syarat keberterimaan
parameter validasi.
3

4. PENDAHULUAN
Vitamin adalah molekul organik penting
yang berfungsi sebagai kofaktor untuk
reaksi enzimatik. Mereka umumnya tidak
dapat disintesis oleh sel mamalia dan, oleh
karena itu, harus disediakan dalam
makanan. Vitamin B1 juga dikenal sebagai
tiamin, thiamin, dan aneurin. Tiamin adalah
nama yang diterima saat ini untuk vitamin
B1 di Amerika Serikat. Nama kimia untuk
vitamin yang larut dalam air ini adalah 3 -
[(4-amino-2-methyl-5-pyrimidinyl) methyl]
5- (2-hydroxyethyl) -4-methylthiazolium.
Tiamin terdiri dari cincin pirimidin dan cincin
tiazol, yang digabungkan dengan jembatan
metilena. (Valevski, 2010)
Vitamin dapat dikelompokkan ke dalam dua
golongan utama yaitu vitamin yang larut
dalam lemak yaitu vitamin A, D, E, dan K.
vitamin yang larut dalam air yang terdiri
dari vitamin C dan vitamin B (Ayranci, et
al., 2007).
Sumber vitamin yang larut dalam air banyak
terdapat dalam daging ikan, minyak ikan,
biji - bijian, kacang tanah, kacang kedelai
dan sebagainya (Fauziah, 2016).
4

5. Pada penelitian yang sudah ada sebelumnya,
penetapan kadar vitamin B1 dengan metode
spektrofotometri visible, reagen pembentuk kompleks
yang digunakan diantaranya adalah NQS, procaine HCl
terdiazotasi, NBD-Cl, prussian blue (Hussin, 2010),
dan potaasium kromat. Pada praktikum ini, validasi
metode analisis penetapan kadar vitamin B1 dilakukan
dengan metode spektrofotometri visibel. Pengomplek
yang digunakan adalah biru bromtimol (BBT) yang
dapat membentuk kompleks asosiasi ion dengan
vitamin B1, menggunakan polivinyl alkohol (PVA)
sebagai zat pensolubilisasi yang menghasilkan
senyawa yang larut dalam air dan diukur dengan
spektrofotometeri visibel pada panjang gelombang
serapan maksimum 423 nm. (Rasyid, 2014)
5

6. MATERIAL
ALAT :
Alat yang digunakan adalah seperangkat alat
spektrofotometer UV-Visibel, timbangan analitik, bekker
glass, labu ukur, corong, pipet tetes, pipet volume,
propipet, makropipet, kuvet, mortir, stemper, kertas
saring, dan tissue.
BAHAN :
Bahan-bahan yang digunakan yaitu tablet vitamin B1,
dapar ammonia, biru bromtimol (BBT), polivinyl alkohol
1%, dan aquadest.
6

7. METODE
1. Pembuatan Larutan Stok Vitamin B1 0,1%
01
Ditimbang 100,0 mg
vitamin B1 dimasukkan
dalam labu ukur 100,0 mL
02
Kemudian ditambahkan
aquadest sampai tanda.
7

8. 2. Penentuan Operating Time (OT)
01
Diambil 1,0 mL larutan stok
Vitamin B1 dimasukkan
dalam labu ukur 10,0 mL.
02
Ditambahkan 1,5 mL dapar ammonia, 2,0 mL biru
bromtimol, dan 1 mL polivinyl alkohol 1%.
Kemudian tambahkan aquadest sampai tanda batas
03
Diukur absorbansinya tiap 1 menit
dengan spektrofotometer visibel
pada panjang gelombang 423 nm
8

9. 3. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Diambil 1,0 mL larutan stok
Vitamin B1 dimasukkan
dalam labu ukur 10,0 mL.
Ditambahkan 1,5 mL dapar ammonia, 2,0 mL biru
bromtimol, dan 1 mL polivinyl alkohol 1%. Kemudian
tambahkan aquadest sampai tanda batas.
Diukur absorbansi dengan
spektrofotometer visibel pada panjang
gelombang 400-800 nm.
9
01
02
03

10. 4. Pembuatan Kurva Kalibrasi
01
Dibuat 5 seri konsentrasi yaitu
0,05%; 0,025%; 0,0125%;
0,00625%; 0,003125%
02
Diambil larutan stok 0,1% masing-masing
sebanyak 5; 2,5; 1,25; 0,625; dan 0,3125
mL masukkan ke dalam labu ukur 10 mL.
03
Ditambahkan 1,5 mL dapar ammonia,
2,0 mL biru bromtimol, dan 1 mL
polivinyl alkohol 1%, ditambahkan
aquadest sampai tanda batas.
10
04
Diukur absorbansi dengan
spektrofotometer visibel pada
panjang gelombang 535,5 nm.

11. 5. Preparasi Sampel Vitamin B1
01
Ditimbang seksama tablet
vitamin B1 kemudian dihitung
berat rata-rata tablet.
02
Digerus tablet vitamin B1 di
dalam mortir sampai
homogen.
11

12. 6. Ripitabilitas
01
Ditimbang 100,0 mg vit. B1. Dimasukkan
dalam labu ukur 25,0 mL kemudian
ditambah akuadest sampai tanda batas.
02
Dilakukan pengenceran dengan di ambil
1,0 mL larutan vitamin B1. Ditambahkan
1,5 mL dapar ammonia, 2,0 mL biru
bromtimol, dan 1 mL polivinyl alkohol 1%.
Ditambahkan aquadest sampai tanda
batas.
03 Ditunggu operating time 1 jam.
12
04
Diukur absorbansi dengan
spektrofotometer visibel pada
panjang gelombang 535,5 nm.
Nilai keberterimaan jika RSD
kurang dari 2%.

13. 7. Linearitas
Ditimbang masing-masing sampel sesuai
konsentrasinya (70%-130%). Dimasukkan
dalam labu ukur 25,0 mL, ditambah
akuadest sampai tanda batas.
Dilakukan pengenceran dengan diambil
1,0 mL larutan vitamin B1. Ditambahkan
1,5 mL dapar ammonia, 2,0 mL biru
bromtimol, dan 1 mL polivinyl alkohol 1%.
Ditambahkan aquadest sampai tanda
batas.
Dilakukan operating time 1 jam.
Diukur absorbansi dengan
spektrofotometer visibel pada panjang
gelombang 535,5 nm. Nilai
keberterimaan jika r2 lebih dari 0,98.
13
01
02
03

14. 8. Akurasi
01
Dilakukan dengan membagi 4
kelompok, tanpa penambahan ZA, ZA
80%, ZA 100%, ZA 120%.
02
Dilakukan pengenceran dengan di ambil
1,0 mL larutan vitamin B1. Ditambahkan
zat aktif dari stok 2% sesuai volume
masing-masing, 1,5 mL dapar ammonia,
2,0 mL biru bromtimol, dan 1 mL polivinyl
alkohol 1%. kemudian ditambahkan
aquadest sampai tanda batas.
03 Ditunggu operating time 1 jam.
14
04
Diukur absorbansi dengan
spektrofotometer visibel pada
panjang gelombang 535,5 nm.
Nilai keberterimaan jika RSD
kurang dari 1%, dan %recovery
98-102

15. 9. LOD & LOQ
Pengukuran uji LOD dan LOQ dari
persamaan kurva baku.
LOD = 3SD/Slope
LOQ = 10SD/Slope
15
01
02
03

16. 10. Keseragaman Kandungan
01
Pengujian dilakukan pada 10
tablet vitamin B1 yang dipilih
secara acak.
02
Ditimbang 100,0 mg vitamin B1.
Dimasukkan dalam labu ukur 25,0
mL kemudian ditambah akuadest
sampai tanda batas.
03
Dilakukan pengenceran dengan di ambil 1,0 mL
larutan vitamin B1. Ditambahkan 1,5 mL dapar
ammonia, 2,0 mL biru bromtimol, dan 1 mL
polivinyl alkohol 1%. Kemudian ditambahkan
aquadest sampai tanda batas. Ditunggu operating
time 1 jam.
16
04
Diukur absorbansi dengan
spektrofotometer visibel pada
panjang gelombang 535,5 nm .
Keberterimaan kadar tablet pada
rentang ≥ 85% dan ≤115% dengan
RSD ≤6%.

17. HASIL PERCOBAAN
KURVA BAKU
17
Konsentrasi Absorbansi
0,05 % 0,694
0,025% 0,542
0,0125% 0,446
0,00625% 0,356
0,003125% 0,298

18. Ripitabilitas
18
Penimbangan Abs Kadar %b/v Kadar %b/b Mg/tablet
102,0 0,357 0,057 13,97 17,546
100,0 0,325 0,017 4,25 5,338
100,4 0,319 0,009 2,24 2,813
101,8 0,333 0,027 6,63 8,327
100,1 0,321 0,012 2,99 3,755
102,2 0,323 0,014 3,42 4,295
100,8 0,319 0,009 2,23 2,800

19. Linearitas
19
Rentang kadar
sampel
Absorbansi Kadar %b/V
70 % 0.384 0.09
80 % 0.522 0.26
90 % 0.694 0.47
100 % 0.774 0.57
110 % 0.791 0.59
120 % 0.99 0.84
130 % 2.062 2.17

20. Akurasi
20
Kelompok
penambahan
Volume stok
yang ditambah
(mL)
Kadar yang
ditambahkan
(%b/v)
Rata-rata kadar
sampel (%b/v)
%recovery
Penambahan zat
aktif 80%
0,5 mL 0,1 0,46125 59,750%
Penambahan zat
aktif 100%
1,0 mL 0,203 0,538 67,235%
Penambahan zat
aktif 120%
2,0 mL 0,401 0,723 80,160%

21. 21
LOD
LOD = 3 . SD/slope
= 3 . 0,036195878/8,066
= 0,013%b/v
LOQ
LOQ = 10 . SD/slope
= 10 . 0,036195878/8,066
= 0,044%b/v

22. Keseragaman Kandungan
22
Sampel Penimbangan
(mg)
Absorbansi Kadar Teoritis
(mg/Tablet)
Kadar
(% 𝐛
𝐯)
Kadar
(% 𝐛
𝐛)
Kadar
(Mg/Tablet)
% Klaim
1 106,0 0,450 50 0,172 40,56 50,94 101,88
2 96,5 0,447 50 0,168 43,52 54,66 109,32
3 109,8 0,456 50 0,179 40,75 51,18 102,36
4 107,1 0,451 50 0,173 40,38 50,71 101,42
5 107,5 0,453 50 0,176 40,93 51,40 102,80
6 109,7 0,455 50 0,178 40,56 50,94 101,88
7 107,0 0,461 50 0,185 43,22 54,28 108,56
8 106,0 0,448 50 0,169 39,85 50,05 100,10
9 106,5 0,453 50 0,176 41,31 51,88 103,76
10 102,8 0,449 50 0,171 41,58 52,22 104,44
Rata-rata 103,652
SD 3,039
RSD 2,9 %

23. 23
PEMBAHASAN
KURVA BAKU
Pada pembuatan kurva kalibrasi
didapatkan hasil linear antara
konsentrasi dengan serapan,
standar vitamin B1 dibuat
dengan konsentrasi 0,05%b/v,
0,025%b/v, 0,0125%b/v,
0,00625%b/v, dan
0,003125%b/v. Diperoleh kurva
kalibrasi dengan persamaan
regresi linear Y = 0,311 +
8,066x dengan harga koefisien
korelasi (r) adalah 0,979.
RIPITABILITAS
Pada parameter ini, dilakukan
dengan menimbang sejumlah
sampel (sesuai prosedur)
sebanyak tujuh kali. Dari data di
atas, dapat disimpulkan bahwa
keberterimaan parameter
ripitabilitas tidak diterima karena
RSD-nya sebesar 82,86%.
Seharusnya, nilai
keberterimaannya adalah nilai
RSD-nya kurang dari 2%.
LINEARITAS
Pada parameter ini dilakukan,
dengan membuat rentang kadar
70%-130%. Dari data yang
didapatkan, dapat disimpulkan
bahwa keberterimaan parameter
linearitas dapat diterima karena
r-nya didapat 1. Nilai
keberterimaannya, adalah nilai r-
nya adalah lebih dari 0,98.

24. 24
PEMBAHASAN
AKURASI
Pada parameter akurasi,
didapatkan %recovery :
1. ZA 80% : 59,750%
2. ZA 100% : 67,235%
3. ZA 120% : 80,160%
dan nilai RSD
1. ZA 80% : 0,81%
2. ZA 100% : 0,95%
3. ZA 120% : 0,87%
LOD & LOQ
LOD dan LOQ dicari dengan
menggunakan formula :
LOD = 3SD/slope; LOQ =
10SD/slope. SD didapatkan dari
persamaan kurva baku, begitu
juga dengan nilai slopenya.
Didapatkan LOD dan LOQ secara
berurutan adalah 0,013 dan
0,044.
KESERAGAMAN
KANDUNGAN
Dari data diatas, dapat
disimpulkan bahwa kadar
vitamin B1 dalam sediaan tablet
memenuhi persyaratan kadar,
yaitu tidak kurang dari 85,0%
dan tidak lebih dari 115,0% dari
klaim yang tertera pada etiket
dan nilai RSD ≤6, sehingga
memenuhi keberterimaan
parameter keseragaman
kandungan.

25. 25
KESIMPULAN
Validasi metode analisis penetapan kadar
vitamin B1 dengan formulasi ini (BBT 0,05%,
PVA 1%, dapar ammonia) menggunakan
parameter ripitabilitas, linearitas, akurasi, LOD &
LOQ tidak dapat diterima kecuali linearitas.
Sehingga formulasi yang digunakan untuk VMA
vitamin B1 dengan metode spektrofotometri
visibel tidak disarankan.
SARAN

26. DAFTAR PUSTAKA
Valevski, A. F. (2010). Thiamine (Vitamin B1). Journal of Evidence-Based Complementary & Alternative Medicine,
16(1) 12-20.
Ayranci, G., Sahin, M., & Ayranci, E. (2007). Volumetric properties of ascorbic acid (vitamin C) and thiamine
hydrochloride (vitamin B1) in dilute HCl and in aqueous NaCl solutions at (283.15, 293.15, 298.15,
303.15, 308.15, and 313.15) K.J. Chem. Therm 30,303.
Fauziah, F., Rasyid, R., & Akbar, A. P. (2016). Penetapan Kadar Vitamin B1 Pada Kacang Kedelai Dan Tempe Yang
Beredar Di Pasar Raya Padang Secara Spektrofotometri Visibel. Jurnal Farmasi Higea, 8(1).
Rasyid, R., Fitria, A. N., & Fadhilah, H. (2014). Pengaruh Lama Pencucian Terhadap Kadar Vitamin B1 Pada Beras
Putih Dan Beras Merah Secara Spektrofotometer Visibel. Jurnal Farmasi Higea, 6(2).
26