Dokumen tersebut merupakan bahan ajar tentang pewarnaan mikrobiologi yang memberikan penjelasan tentang tujuan, jenis, dan cara melakukan berbagai metode pewarnaan untuk membedakan jenis mikroba. Dokumen ini juga menjelaskan beberapa kesalahan yang sering terjadi dalam pewarnaan gram serta memberikan contoh soal tugas tentang jenis pewarnaan yang dibutuhkan untuk beberapa jenis bakteri.

1. SMK ANALIS KESEHATAN ASSA’ADAH
MIKROBIOLOGI DASAR
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 1

2. Kholis Amalia Nofianti
PEWARNAAN
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 2

3. Tujuan
• Siswa dapat menjelaskan fungsi pewarnaan
• Siswa dapat menjelaskan macam-macam
metode pewarnaan
• Siswa dapat menjelaskan cara melakukan
pewarnaan
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 3

4. 10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 4

5. 10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 5

6. CARA PEMERIKSAAN KUMAN
• Living state
– Kuman yang tidak bisa dicat
– Kuman yg sulit dikembangbiakkan
• Fixed state
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 6

7. Tujuan Fiksasi
• Melekatkan spesimen pada objek glas
• Membunuh kuman tanpa merubah morfologi
• Sebagai intensifier sehingga kuman mudah
dicat
• Menyimpan slide yang tak mudah dicat
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 7

8. 10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 8

9. • Memberi warna pada sel-sel atau bagian-
bagian lain, sehingga menambah daya
kontras dan tampak jelas
• Menunjukkan struktur sel
• Menunjukkan distribusi dan susunan kimia
sel
• Membedakan mikroba satu dengan lainnya
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 9

10. MACAM PEWARNAAN
Jumlah
pH pewarna
Pewarna
Pewarnaan Pewenn
Asam basa
simultan Suksedan
2 pewarna pewarna Gugus Gugus
atau lebih digunakan 1 kromofor kromofor
digunakan per 1 dan ada anion kation
bersamaan masa
pencucian Mis.eosin, Mis. biru
Fushin, acid metilen,
Fushin, congo safranin,
BAHAN AJAR PEWARNAAN red
10/25/2011
merah netral
10

11. MACAM-MACAM PEWARNAAN
Pengecatan
negatif
Pewarnaan
Sederhana
Pewarnaan • Pengecatam Gram
Difrential • Pengecatan Ziehl-Nelson
• Pengecatan spora
Pengecatan • Pengecatan Kapsula
Khusus • Pengecatan Granula
metakromatik
• Pengecatan Flagel
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 11

12. Pengecatan Negatif
Pengecatan
Pengecatan Bakteri tidak
pada latar
tidak langsung dicat
belakang bakteri
Menggunakan
Tanpa fiksasi negrosin dan
tinta cina
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 12

13. Pengecatan sederhana
Untuk melihat bentuk bakteri
Menggunakan satu macam cat
Dilakukan fiksasi lebih dahulu
cat : metilen blue, gentian
violet,basic fushin, safranin
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 13

14. Dikembangkan oleh ahli
Histologi Christian Gram
(1884)
PENGECATAN GRAM
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 14

15. Proses Pengecatan Gram
Pemberian cat utama
• Kristal violet (ungu)
Pengintensifan cat utama
• Lar.Mordan
Pencucian (Dekolorisasi)
• Lar. alkohol
Pemberiaan cat penutup (cat
lawan)
• Safranin
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 15

16. 10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 16

17. 10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 17

18. Bakteri Gram positif
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 18

19. Bakteri Gram Negatif
dapat dilunturkan mengikat cat tidak kuat, dan dapat
diwarnai oleh cat lawan
mengandung 3 polimers yang terletak di luar
peptidoglycan layer yaitu : lipo protein, outer membrane
yang terdiri atas phospholipids dan lipopolysacharida (LPS)
yang bertanggung jawab dalam produksi endotoksin
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 19

20. 10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 20

21. 10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 21

22. KESALAHAN-KESALAHAN DALAM
PEWARNAAN GRAM
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 22

23. ARTEFAK
Presipitasi kristal violet  disangka sebagai gram positif cocci
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 23

24. Presipitasi kristal violet  disangka sebagai gram positif cocci
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 24

25. OVERDECOLORIZATION
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 25

26. Pengecatan Ziehl-Nelson
(Pengecatan Tahan Asam)
Pemberian cat utama
• Fuchin (merah)
Pengintensifan cat utama
• Panaskan pada penangas air, suhu 90 º C, 4’
Pencucian (Dekolorisasi)
• Lar. Alkohol asam (alkohol 95 % + HCl 5-10 %)
Pemberiaan cat penutup (cat
lawan)
• Metilen blue atau berlian hijau
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 26

27. Pengecatan Ziehl-Nelson
(Pengecatan Tahan Asam)
• Bakteri dari genus Mycobacterium (M.
tubercolosis dan M. leprae) selnya dilapisi lilin
• Bersifat gram positif tapi sangat sukar di cat
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 27

28. PENGECATAN SPORA
• Spora sukar dicat
• Perlu dilakukan pengecatan khusus dan
pemanasan
• Metode : Schaefer Fulton dan modifikasi
tahan asam
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 28

29. PENGECATAN SPORA
• Fiksasi
• Tuangi malachite green
• Panaskan 5 ‘
• Bilas air
• Tuangi safranin
• Bilas air
• keringkan
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 29

30. PENGECATAN KAPSULA
• Kapsul tidak dapat dpwarnai
• Ada banyak metode, mis. pengecatan negatif
dan pengecatan sederhana
• Latar akan berwarna hitam, sedangkan badan
bakteri akan berwarna merah (fuchin)
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 30

31. 10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 31

32. FEED BACK
• JELASKAN FUNGSI PEWARNAAN
• SEBUTKAN MACAM-MACAM PEWARNAAN
• BAGAIMANA CARA MELAKUKAN PEWARNAAN
GRAM ?
• BAGAIMANA CARA MELAKUKAN PEWARNAAN
TAHAN ASAM
• BAGAIMANA CARA MELAKUKAN PEWARNAAN
SPORA ?
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 32

33. Tugas
• Kerjakan secara berklompok
• Tiap kelompok 2 orang, tidak boleh teman
sebangku
• Dikerjakan di lembar kertas
• Dikumpulkan minggu depan
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 33

34. Berdasarkan struktur tubuhnya, tentukan
pewarnaan apa saja yang dibutuhkan untuk
membuktikan adanya dugaan beberapa
bakteri berikut :
• Staphlococcus aureus,
• Klebsiela pneumonia,
• Staphilococus coagulase negatif,
Mycobacterium tubercolosis,
• E coli, Streptococus pneumonia,
• Salmonela, Shigela,
• Nisseria
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 34

35. terimakasih
SEMOGA BERMANFAAT
10/25/2011 BAHAN AJAR PEWARNAAN 35