1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 29969
(51) C12N 1/20 (2006.01)
C12R 1/225 (2006.01)
C12R 1/245 (2006.01)
МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2014/0552.1
(22) 21.04.2014
(45) 15.06.2015, бюл. №6
(72) Воробьев Александр Львович; Дудикова
Галина Николаевна; Чижаева Анна Викторовна;
Титова Ираида Владимировна; Амангелді Алма
Аманқос қызы; Велямов Масимжан Турсунович
(73) Республиканское государственное предприятие
на праве хозяйственного ведения "Восточно-
Казахстанский государственный технический
университет им. Д. Серикбаева" Министерства
образования и науки Республики Казахстан
(56) Инновационный патент РК №26077,
14.09.2012
(54) КОНСОРЦИУМ МИКРООРГАНИЗМОВ
LACTOBACILLUS CASEI LЦ 114 И
LACTOBACILLUS FERMENTUM LS 129,
ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ
ПРЕПАРАТА ПРОБИОТИЧЕСКОГО
ДЕЙСТВИЯ, ПРЕДНАЗНАЧЕННОГО ДЛЯ
ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕЧЕБНО-
ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРОДУКТОВ И
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК
(57) Изобретение относится к биотехнологии, в
частности микробиологии, и представляет собой
консорциум штаммов лактобактерий для
приготовления кисломолочных лечебно-
профилактических продуктов, биологически
активных добавок и пробиотических препаратов.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в создании консорциума
лактобактерий, обладающего повышенным сроком
хранения, более высоким начальным содержанием
живых микробных клеток и эффективными лечебно-
профилактическими свойствами при желудочно-
кишечных заболеваниях животных и птиц.
Штаммы консорциума Lactobacillus casei Lц 114
(КазНИИППП, №В-311) и Lactobacillus fermentum
Ls 129 (КазНИИППП, №В-302), выделены из
зерновых субстратов и депонированы в коллекцию
микроорганизмов Казахского НИИ
перерабатывающей и пищевой промышленности
(КазНИИППП).
В результате экспериментов по
конструированию комбинированного пробиотика
был создан консорциум, обладающий
пробиотическим действием и депонирован в
коллекцию микроорганизмов КазНИИ
перерабатывающей и пищевой промышленности за
№В-485.
(19)KZ(13)A4(11)29969

2. 29969
2
Изобретение относится к биотехнологии, в
частности микробиологии, и представляет собой
консорциум штаммов лактобактерий для
приготовления кисломолочных лечебно-
профилактических продуктов, биологически
активных добавок и пробиотических препаратов.
Консорциум состоит из следующих штаммов:
Lactobacillus casei Lц 114 и Lactobacillus fermentum
Ls 129, содержащихся в соотношении 1:1, и
предназначен для получения кисломолочных
лечебно-профилактических продуктов,
биологически активных добавок и пробиотических
препаратов, которые могут быть использованы в
пищевой промышленности и ветеринарии для
профилактики и лечения желудочно-кишечных
заболеваний человека, сельскохозяйственных
животных и птиц.
Известен консорциум штаммов молочнокислых и
бифидобактерий Lactobacillus acidophilus КМ-2,
Lactobacillus acidophilus КН-1, Bifidobacterium
bifidum-1, используемый для приготовления
биологически активных добавок и заквасок для
производства кисломолочных продуктов
(Инновационный патент РК №25088, опубл.
14.04.2011г.).
Основным недостатком кисломолочных
продуктов, изготовленных на основе консорциума
штаммов бифидо- и лактобактерий, является
недостаточный срок их хранения (не более 1 месяца)
вследствие того, что лактобактерии в процессе
хранения продукта способствуют быстрому его
закислению. Титр бифидобактерий в закисленном
продукте быстро падает, что снижает лечебно-
профилактические свойства этого продукта.
Наиболее близким техническим решением
(прототип) является консорциум микроорганизмов
Lactobacillus acidophilus В-400, Lactobacillus
fermentum В-401, Lactococcus cremoris В-402,
используемый для производства кисломолочных
напитков (Инновационный патент РК №26077,
опубл. 14.09.2012 г.).
Однако срок хранения такого консорциума
штаммов лактобактерий в кисломолочных
продуктах составляет 30 дней, что недостаточно при
приготовлении биологически активных добавок в
жидкой форме.
Задачей изобретения является создание
консорциума микроорганизмов пробиотического
действия, используемого для приготовления
бактериальных препаратов и биологически
активных добавок для животных и птицы.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в создании консорциума
лактобактерий, обладающего повышенным сроком
хранения, более высоким начальным содержанием
живых микробных клеток и эффективными лечебно-
профилактическими свойствами при желудочно-
кишечных заболеваниях животных и птиц.
Штаммы консорциума Lactobacillus casei Lц 114
(КазНИИППП, №В-311) и Lactobacillus fermentum
Ls 129 (КазНИИППП, №В-302), выделены из
зерновых субстратов и депонированы в коллекцию
микроорганизмов Казахского НИИ
перерабатывающей и пищевой промышленности
(КазНИИППП).
В результате экспериментов по
конструированию комбинированного пробиотика
был создан консорциум, обладающий
пробиотическим действием и депонирован в
коллекцию микроорганизмов КазНИИ
перерабатывающей и пищевой промышленности за
№В-485.
Штаммы микроорганизмов, входящие в состав
консорциума, не являются антагонистистами в
отношении друг друга, что позволяет их совместно
культивировать.
Изобретение позволяет получить консорциум с
устойчивым соотношением гомоферментативных и
гетероферментативных культур, высоким
содержанием живых микробных клеток, титруемой
кислотностью, антагонистической активностью,
широким спектром продуцируемых органических
кислот в получаемом препарате.
Предлагаемый консорциум обладает высокой
активностью в отношении патогенов и
устойчивостью к антибиотикам, что позволяет
использовать его для приготовления пробиотиков и
биологически активных добавок. Установлено, что
при совместном культивировании указанных выше
микроорганизмов проявляется синергический
эффект.
Штаммы Lactobacillus casei Lц 114 и Lactobacillus
fermentum Ls 129, входящие в состав консорциума,
обладают высокой кислотообразующей
активностью, биохимической и антагонической
активностью, т.е. способностью влиять на
возбудителей кишечных заболеваний, что
гарантирует подавление в кишечнике патогенных
микроорганизмов и нормализацию его микрофлоры.
Устойчивость к антибиотикам характеризует
способность выживать и развиваться в кишечнике
животных на фоне антибиотикотерапии.
Данные штаммы отбирались путем скрининга
культур молочнокислых бактерий по параметрам
культивирования на среде МРС - таких как
антагонистическая активность, энергия
кислотообразования, титр клеток, устойчивость к
антибиотикам.
В процессе селекционной работы был получен
консорциум микроорганизмов, обладающий
следующими микробиологическими и
биохимическими показателями:
1. При росте на среде МРС консорциум имеет
высокий суммарный титр (не менее 1012
КОЕ/г).
2. При пересевах на питательной среде МРС
консорциум способен сохранять свои свойства не
менее 10 пассажей.
3. Консорциум обладает высокими
антагонистическими свойствами - диаметр зоны
угнетения роста В. subtilis 23 мм.

3. 29969
3
Таблица 1
Физиолого-биохимическая характеристика консорциума
Показатели культивирования Характеристика консорциума
Титруемая кислотность, Н 38,7±1,55
Активная кислотность, pH 4,6±0,1
Антагонистическая активность, диаметр зоны подавления
роста В. subtilis, мм
23±0,9
Культурально-морфологические и физиолого-
биохимические признаки микроорганизмов,
входящих в состав консорциума:
Штамм Lactobacillus casei Lц 114 выделен из
пшеничной муки. Клетки в виде палочек средних
размеров 3-8×0,7-1,0 мкм, расположенные одиночно
или в виде коротких цепочек, зерен волютина не
образуют. Колонии средней величины,
куполообразные, белые. При неблагоприятных
условиях форма клеток более вытянутая. Продукт,
синтезируемый штаммом D, L - молочная кислота.
Среда для культивирования - МРС, молочный
гидролизат агаризованный.
Дополнительная информация: аэро-
толерантный анаэроб, штамм обладает высокой
кислотообразующей способностью (титруемая
кислотность 23,6±1,8 град на среде №10) и
антагонистической активностью по отношению к
спорообразующей микрофлоре муки (диаметр зоны
подавления роста В. subtillus -26±1,6 мм). Устойчив
к фуразолидону, канамицину, олеандомицину,
линкомицину, эритромицину, 6% NaCl.
Штамм Lactobacillus fermentum Ls 129 выделен
из зерна пшеницы. Палочки размером 3-5 мкм,
расположены попарно, короткими цепочками,
неподвижные, спор не образуют. На поверхности
агара с гидролизованным молоком образует гладкие
беловатые колонии S-формы диаметром 2-3 мм. При
глубинном выращивании образует лодочкообразные
колонии. Продукт, синтезируемый штаммом - D, L -
молочная кислота, бактериоцины. Среда для
культивирования - среда МРС, среда №10,
молочный гидролизат агаризованный, обезжиренное
молоко, температура культивирования 35-37°С.
Титруемая кислотность 34,8±1,8 град, зона
протеолиза на молочном агаре 1±0,5 мм; зона
подавления роста В. subtilis составляет 21,5±0,7.
Устойчив к канамицину, ампициллину,
эритромицину.
Культуры консорциума сохраняют в
лиофилизированном виде в ампулах при минус
30±2°С или под вазелиновым маслом в пробирках со
средой МРС-агар.
Пример использования консорциума для
приготовления препарата пробиотического
действия:
Получение консорциума осуществляют в два
этапа:
1. Приготовление жидкой биомассы
консорциума.
Чистые культуры Lactobacillus casei Lц 114 и
Lactobacillus fermentum Ls 129 в соотношении 1:1
вносят в питательную среду МРС. Термостатируют
при температуре 35±2°С в течение 24 часов до
титруемой кислотности 20 град Неймана.
Полученный консорциум используют для
приготовления пробиотического препарата.
2. Приготовление пробиотического препарата.
Пробиотический препарат готовят путем
смешивания 25 мл жидкой биомассы консорциума с
500 мл зерновой питательной среды, помещают в
термостат для заквашивания при температуре
35±2°С на 24 часа и получают готовый продукт.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Консорциум микроорганизмов (КазНИИППП,
№В-485), состоящий из штаммов Lactobacillus casei
Lц 114 (КазНИИППП, №В-311) и Lactobacillus
fermentum и Ls 129 (КазНИИППП, №В-302),
содержащихся в соотношении 1:1, используемый
для приготовления препаратов пробиотического
действия.
Верстка Н.Киселева
Корректор К.Нгметжанова