1. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Современные взгляды на
функции иммунной системы
Киселева Е.П.
2013
2. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Эдвард Дженнер (1749- Луи Пастер(1822-1895) Эмиль Беринг НП 1901
1823 вакцина против оспы прививки от сибирской язвы, Серотерапия дифтерии
бешенства
Роберт Кох НП 1905 Пауль Эрлих НП 1908 Илья Мечников НП
исследования туберкулеза гуморальный иммунитет 1908 фагоцитарная теория
3. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Жюль Хоффман НП Брюс Бойтлер НП 2011 Ральф Стейнмен НП 2011
2011 механизм активации механизм активации врожденного открытие дендритных клеток
иммунитета
врожденного иммунитета
Иммунология = противоинфекционная защита
4. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Точка зрения
5. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Новые данные в иммунологии
Врожденный иммунитет
Реакция на
повреждение
Приобретенный иммунитет
Толерантность к Толерантность
нормальной при беременности
микробиоте
6. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Традиционные функции
иммунитета
Распознавание «своего» и «чужого»
«Чужое» «Свое»
Иммунный Нет
ответ ответа
Уничтожение
«чужого»
7. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
«Новые» функции иммунитета
Распознавание «своего» и «чужого»
«Чужое» «Свое»
Иммунный Иммунный Нет Иммунный
ответ ответ ответа ответ
Уничтожение Сожительство
«чужого» с «чужим»
8. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Репаративная функция
иммунитета
9. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Наиболее эволюционно древние функции
врожденного иммунитета:
• защита от инфекций (протективный
иммунитет) и
• защита от повреждений (репаративный
иммунитет)
10. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Первое представление о репаративном
иммунитете - знаменитый шип розы,
вставленный Мечниковым в прозрачное тело
личинки морской звезды –– ответ на
поврежденное «свое»
11. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Репаративная функция. Основной принцип:
распознавание «своего» живого и мертвого
Этапы восстановления Иммунный ответ
тканей
1. Удаление поврежденной Распознавание «своего»
ткани мертвого. Морфологам давно
известно: повреждение=воспале-
ние, но механизмы активации
иммунной системы до недавнего
времени были неизвестны.
2. Восстановление ткани
- Пролиферация тканевых Продукция ростовых
клеток факторов
- Образование стромы Участие клеток иммунной
(пролиферация клеток стромы, системы в ангиогенезе
рост сосудов и нервов)
12. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Типы клеточной смерти
• АПОПТОЗ – конденсация хроматина, фрагментация ядра,
образование апоптотических телец
• АУТОФАГИЯ – секвестрация клеточных органелл в
вакуоли и деградация лизосомальных гидролаз
• НЕКРОЗ – набухание цитоплазмы, нарушение мембраны и
выделение клеточного содержимого
• МИТОТИЧЕСКАЯ КАТАСТРОФА - остановка митоза,
образование микро- и макроядер
• Есть также некроптоз, пироптоз и др…
Апоптоз – первоначально - программируемая клеточная
смерть, неиммуногенная. Пересмотрено – иммуногенный
апоптоз
НЕКРОЗ – иммуногенная клеточная смерть, «стерильное
воспаление»
13. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Теория сигналов опасности
Полли Мацингер, 1947 –
Национальный Институт
Здоровья, США
14. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Рецепторы фагоцитов распознают
эндогенные молекулы
• Поврежденные или
погибающие клетки
выделяют молекулы
(«сигналы опасности»),
которые взаимодействуют с
рецепторами на клетках
врожденного иммунитета:
• Мкф
• ДК
• НК
• γδ T клетки (непептидные
тканевые антигены,
возникающие при
повреждении)
15. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Рецепторы DAMPs, вызывающие воспаление
TLR2, TLR4 Hsp60, Hsp70, gp60, gp96, фрагменты
гиалуроновой кислоты, компоненты
ВКМ
RAGE,TLR4, TLR9 HMGB1
TLR3 Эндогенная мРНК
TLR7, TLR8, TLR9 ДНК
DNGR-1 (CLEC9A) F-актин (компонент цитоскелета)
Scavenger-рецептор Коллаген I и IV типа, белок мембран
CD36 эритроцитов 1, апоптозные клетки
NOD, NALP3 Кристаллическая мочевая кислота
Mincle SAP130 (spliceosome-associated protein)
P2X7 Внеклеточная АТФ
16. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
IL-1 - основной медиатор «стерильного
воспаления», главная клетка - мкф (Russell,
Walsh 2012)
γδTкл
TLR4
Пассивное
выделение
17. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
DAMPs, подавляющие
воспаление
• Большие фрагменты гиалуроновой кислоты
(небольшие – стимулируют)
• HMGB1 (Izuchi K. et al., 2006)
• HSP – индукция противовоспалительного Т-
клеточного ответа (Т кл распознают через
TLR) индукция T regs (?) (Wieten L. et al.,
2007)
• HMGB1, HSP70, HSP90 через рецептор CD24
(Chen et al., 2009)
• Аденозин через A2 рецепторы (АТФ – стимулирует)
18. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Роль адаптивного иммунитета в
реакциях «стерильного воспаления»
(Manfredi, 2009)
Активация
макрофагов, NK, Th1
Повреждение ангиогенез
тканей
Аутоантитела Th2
Выделение
сигналов
опасности Толерантность ? nT regs
Ангиогенез Th17
Незрелая ДК→Зрелая ДК
Белки умирающих клеток подвергаются модификации вследствие
множественного протеолиза и параллельных пост-трансляционных
модификаций. В результате этого могут образовываться новые Т-клеточные
эпитопы. Внутриклеточная обработка и презентация антигенов в местах
повреждения.
19. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Акцептивная функция
иммунитета
20. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Адаптивный иммунитет нужен не для
борьбы, а для сожительства
Акцептивная функция иммунитета
(Климович В.Б., Ж. Эвол. Биох. Физиол. 2002;
Margaret McFall-Ngai, Nature 2007)
Климович Владимир Margaret McFall-Ngai
Борисович UW-Madison School of
ЦНИРРИ, Санкт-Петербург Medicine and Public Health
21. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Защитные механизмы врожденного
иммунитета появились в эволюции
значительно раньше, чем
TLR и дефенсины
приобретенного
C3 и фактор В
96% всех видов
МСБ
животных –
беспозвоночные
Приобретенный
иммунитет, MHС
4% - позвоночные
Тимус,
селезенка, DC,
Ig, TCR
Переключение
классов Ig, к/м
лимфоузлы
22. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Для чего возник адаптивный
иммунитет?
• Адаптивный иммунитет возник не столько для защиты от
патогенов, сколько для осуществления новых функций,
обеспечение которых было бы невозможным с помощью
одного врожденного иммунитета
• Этими новыми задачами иммунной системы,
сформировавшимися под огромным прессом эволюции,
были обеспечение симбионтных отношений с нормальной
микробиотой и сохранение аллогенного плода во время
беременности
• Симбиоз с микробиотой и внутриутробное развитие плода
обеспечили организмам значительные преимущества в
выживании и явились мощными факторами эволюции
• Основное «достижение» адаптивного иммунитета:
толерантность к чужеродным антигенам
• Главные клетки – Т регуляторные клетки
23. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Открытие толерантности
• Бернет предсказал, что
иммунологическую
толерантность можно выявить
в лабораторных условиях, если
подвергать животных
воздействию чужеродных
тканей на ранних стадиях
развития. Медавар (1953) ввел
эмбрионам и новорожденным
мышатам ткани неродственных
им взрослых мышей. Когда
реципиенты выросли, им
Френк Бернет и Питер Медавар пересадили кожи от
Нобелевская премия 1960 г. за первоначального донора, и
открытие искусственной операция прошла успешно.
(приобретенной) иммунологической
толерантности
24. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Открытие Foxp3 (2003)
Forkhead family transcription factor
Shimon Sakaguchi Александр Руденский
Osaka University Memorial Sloan-
Kettering Cancer
Center, New-York
1970-1980-е супрессорные клетки, выключение иммунного ответа, заканчивающие ответ
1986 – Mosmann Th1 Th2
1995 Sakaguchi показал наличие CD25 на Т клетках, поддерживающих развитие толерантности в организме к своим и чужим антигенам
2003 Foxp3 на Т рег (Sakaguchi; независимо Руденский)
25. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
CNS1 – маркер iTregs (Zheng et al., 2010;
Josefowicz et al., 2012; Samstein et al., 2012)
CD4+Foxp3+ T regs
nTregs, tTregs iTregs, pTregs
Толерантность к Толерантность к
собственным антигенам
антигенам н.микробиоты, пищи и
антигенам плода
CNS1
не CNS1 нужен
нужен интронный Foxp3 энхансор
(необходим в процессе образования
conserved noncoding Tregs для обеспечения проведениz
sequence
сигнала от TGFβ и ретиноевой
кислоты)
26. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
CNS1 присутствует только в генах
плацентарных млекопитающих (Samstein et
al., 2012)
27. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Высокоселективная блокада диф-ки iTregs
не вызывает мультиорганных аутоиммунных
заболеваний (Samstein et al., 2012)
• У мышей, дефицитных по CNS1, нарушена
дифференцировка Foxp3+iTregs :
- нет iTregs, специфичных к аллоантигенам
плода,
- наблюдается воспаление и ненормальное
образование спиральных артерий,
- усилена резорбция аллогенных плодов
• У нормальных мышей происходит
образование Foxp3+iTregs, специфичных к
аллоантигенам плода (MHCII пептид), и их
аккумуляция в плаценте
28. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
У мышей, дефицитных по CNS1,
усилена резорбция аллогенных плодов
(Samstein et al., 2012)
• Вывод: у плацентарных млекопитающих во время
эволюции развился CNS1-зависимый механизм
образования iTregs, отвечающих за создание
специфической толерантности в системе мать-
плод
29. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Зоны контактов плода и иммунной системой
при гемохориоидальном типе плаценты (Moffett,
Loke 2006)
1. Ворсинки трофо-
бласта омываются
кровью матери -
системный эффект -
растворимые моле-
кулы HLA, эмбрио-
нальные антигены,
дебрис поступают во
все л/у и селезенку.
Синтез аутоантител и
др. формы ответа
2. EVTинтерстициальный
трофобласт контакти-
рует с иммунными
клетками децидуаль-
ной оболочки
(локальный ответ в
зоне интерфейса)
30. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Антигены при беременности
• Антигены EVT интерстициального трофобласта
- Антигены МНС-I классические HLA-C (вызывают иммунный
ответ клеточный и гуморальный-АТ)
- Антигены МНС-I неклассические HLA-E, HLA-F, HLA-G
(иммуномодулирующее действие)
• MiHA минорные антигены гистосовместимости –
обусловлены полиморфизмом генов нормальных белков
(напр. мужской H-Y)
• Эмбриональные антигены (AFP, hCG, TPS, PSA, MCA,
CA125, SCC)
• Антигены спермы
Антигены присутствуют в свободной (растворимой) и
мембраносвязанной форме в виде микровезикул. В крови
микровезикулы, содержащие MiHA - иммуносупрессивное действие
31. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
DAMPs и иммуномодулирующие
молекулы
• Экзосомы 30-100 нм выделяются из эндосом многих
клеток в т.ч. синцитиотрофобласта (содержат белки
цитозоля, мРНК, микроРНК, MIC, ULBP (лиганды
NKG2D рец.),биоактивные липиды,
иммуномодулирующие молекулы: FASL, PD-L1)
• Микрочастицы синцитиотрофобласта 500 нм
(фрагменты мембран, везикулы, дебрис)
• Плацентарная ДНК
• АТФ
• Дебрис, апоптотические ядра синцитиотрофобласта
32. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Гуморальный и клеточный
иммунный ответ матери
• В сыворотке крови многорожавших
матерей антитела к MHC-I и антигенам
эритроцитов
• В децидуальной оболочке находят СD8
и CD4 клетки, специфичные к
антигенам плода
• Большое количество аутоантител
(антифосфолипидные, антиДНК,
антиp53, к эмбриональным антигенам)
33. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Особенности микроокружения
1. Система факторов, предотвращающих прямые контакты или активацию
клеток иммунной системы:
- трофобласт покрыт слоем синцитиотрофобласта, который не
экспрессирует аллоантигенов
- В децидуальной оболочке выключен синтез многих хемокинов
привлекающих воспалительные клетки
- В децидуальной оболочке мало лимфатических сосудов
- ДК мало и они не мигрируют в л/у
2. Создание микроокружения, необходимого для индукции толерантности,
дифференцировки iTregs:
- Эпителий матки и трофобласт синтезируют противовоспалительные
цитокины TGFβ и IL-10, 4, 13
- IDO индоламин 2,3 дезоксигеназа (трофобласт, мкф, ДК; NK-IFNγ-
мкф-IDO) – индукция Tregs
- Толерогенные дендритные клетки LILRB1 реагирует с HLA-G
- Ворсинчатый трофобласт синтезирует гормоны: прогестерон и
хорионический гонадотропин
34. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Роль децидуальных uNK
Ангиогенез Спос. образ. спиральных
артерий, имплантацию трофобласта
CD56highCD16–
KIR2DL4 и HLA-G VEGF, AngII, PGF, TNFα,
IL-1β, IL-8 INFγ (NO, рецепторы INFγ на
трофобласте, пролиферация)
KIR2DL2,3 и HLA-C1 – хорошо
КIR2DL1 и HLA-C2 – нежел., преэклампсия
Цитотоксичность Ограничение
На ранних сроках до 70% инвазивности трофобласта (опасно для
всех лейкоцитов жизни матери). Глубина инвазии
интерфейса трофобласта определяется
взаимодействием KIR-HLA-C
35. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Комбинация разных функций
иммунитета
1. Акцептивная функция:
iTregs поддерживают специфическую толерантность в отношении
аллоантигенов плода
2. Репаративная функция:
- Реакция на мертвую ткань. Удаление из организма большого
количества продуктов распада, аутоантигенов, метаболический стресс,
«стерильное воспаление» (DAMPs, микрочастицы, дебрис). Постоянно
поддерживаемое системное воспаление, активация врожденного
иммунитета, синтез аутоантител.
- Ангиогенез (на ранних этапах, инвазия трофобласта и формирование
кровоснабжения плаценты) участие NK и мкф в ангиогенезе.
Протективная функция в случае внутриутробной инфекции.
Разные функции иммунитета работают одновременно, не мешают и не
противоречат друг другу.
36. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
• У человека 1013 своих клеток и 1014 клеток различных
микроорганизмов = 100 триллионов (на одну клетку
приходится 10 микробов) более 1000 видов
• Суммарный геном нормальной микробиоты содержит в 100
раз больше генов, чем геном человека (Backhed et al., 2004)
• Масса нормальной микробиоты составляет от 2 до 8 кг
• 99,9% составляет микробиота толстого кишечника
37. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
• Н. микробиота представляет собой большое
количество чужеродных молекул (антигенов и
паттернов), которые способна распознавать
иммунная система.
• Почему же иммунная система не
осуществляет защитные функции в
отношении н. микробиоты и не
элиминирует ее?
• За 200 миллионов лет в ходе совместной
коэволюции макроорганизма и микроорганизмов
была выработана особая форма ответа.
Толерантность, индуцированная перорально или
через слизистые, лежит в основе симбиотических
отношений.
38. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Эпителий
разделяет
две армии –
иммунную и
микробную
Внутренние ткани кишечника ограничивает
всего один слой эпителия толщиной 20 микрон
39. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Функции эпителия
1. Разделительная (предотвращает контакт
фагоцитов и НМ)
2. Иммунорегуляторная:
- участие в создании микроокружения богатого
TGF-β, RA и TSLP (thymic stromal lymphopoietin) –
индукция Th2 и iTregs
3. Сигнальная:
- оповещает (DAMPs),
- привлекает (хемокины) и
- активирует (провоспалительные цитокины)
клетки врожденного иммунитета о появлении
патогенов
Эпителий является не только барьером, но и
активным участником врожденного иммунитета.
40. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Механизмы предотвращения
воспаления
• В составе нормальной микробиоты микроорганизмы,
утратившие гены вирулентности
• Состав микробиоты такой, что суммарное воздействие
противовоспалительное
• Нет прямого контакта фагоцитов и микробиоты (контакт
через эпителий и строго ограничен)
•Мембранные PRR рецепторы кишечного эпителия
«спрятаны» на базолатеральной поверхности или их
экспрессия подавлена
• Нет прямого контакта эпителия с микробиотой (стерильная
зона создается с помощью антимикробных пептидов)
41. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Транспорт антигенов через
эпителий кишечника. Поступление
микроорганизмов ограничено
Дендритные Трансцитоз
клетки антигенов через
М клетки
Транспорт
Мкф антигенов –
CX3CR1+ белков,
вирусов,
(рецептор бактерий,
к фрак- паразитов –
талкину) через М
клетки.
42. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
ДК синтезируют разные цитокины в
ответ на микробную стимуляцию
CD11b FAE IL-10 Th2
миелоидные ДК Пейеровы iTregs
бляшки
Lamina propria
СD8+ Пейеровы IL-12 Th1
лимфоидные ДК бляшки
DN ДК Пейеровы IL-12 Th1
бляшки
подслизистая
CD103+ Lamina propria RA iTregs
43. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
TGFβ– доминирующий цитокин в
слизистой кишечника. Его
продуцируют: эпителий,γδT кл.,
ДК, мкф, тучные клетки. Создание
микроокружения для
дифференцировки iTregs
• В lamina propria толерогенные ДК CD103+.
Экспрессируют фермент retinal dehydrogenase.
Продуцируют ретиноевую к-ту, метаболит
вит.А
• Мкф CD11bhigh – противовосп. цитокины IL-10,
TGF-β
• Мкф человека – особая форма ответа –
фагоцитоз без синтеза цитокинов (нет Fc-
рецепторов, CD14, TLR1,2, подавлена
экспрессия NF-kB и передача сигнала).
Влияние TGF- β (?) (Smythies LE et al., 2011)
44. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Присутствие микроорганизмов и их
продуктов влияет на диф-ку Т клеток
(Littman D., 2011; Chinen, Rudensky 2012; Scott C.L. 2011)
Th17 iTregs
SFB (segmented PSA+ Bacteroides fragilis
filamentous bacteria) Возможна прямая активация Tregs
через TLR2 (Round J 2010-2011).
β-гликаны грибов (через Clostridia (cluster IV, XIVa)
дектин-1 на ДК)
ДНК (через TLR9 на ДК) Prevotella
АТФ (через пуринергические Зимозан (компонент клеточной
рецепторы) стенки дрожжей)
Флагеллин (через TLR5) Bifidobacterium
E. coli, E. faecalis Lactobacillus
45. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Микробная специфичность TCR
Tregs (Lathrop s. et al., Nature 2011)
Изучали репертуар
специфичности TCR Tregs из
толстой кишки.
Более половины рецепторов
распознавали кишечное
содержимое или
бактериальные изоляты.
Считают, что это iTregs,
индуцированные в результате
взаимодействия со своей
микробиотой (специфичны в
отношении антигенов
микроорганизмов).
У безмикробных мышей
нормальное число Treg.
Считают, что это nTregs,
имеющие тимусное
происхождение
46. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Блокада образования iTregs у
мышей, дефицитных по CNS1
(Josefowicz et al., 2012)
• Нарушение толерантности к антигенам
нормальной микробиоты и пищи
• Развитие аллергического воспаления в
гастроинтестинальном тракте и легких
(усиление продукции Th2 цитокинов, IgЕ в
сыворотке крови)
• Изменения состава нормобиоты –
Firmicutes/bacteroides=2,6 в норме; 1,5 у
мышей с дефицитом
Вывод: iTregs играют важную роль в
поддержании толерантности к нормальной
микробиоте и пищевым антигенам
47. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Особенности акцептивного иммунного
ответа в слизистой кишечника
Эпителий
Активация фагоцитов
Th1
Th2 Синтез IgA
Th17 Активация эпителия,
синтез антимикроб-
ных пептидов
iTreg Развитие
Наивная толерантности к
АПК антигенам НМ и
Коммен- CD4+ клетка
салы пищевым антигенам
Комменсалы постоянно взаимодействуют с ДК, ДК активируются и
продуцируют цитокины, создают микроокружение для CD4+клеток Th1,
Th2, Th17 – иммунный ответ и элиминация патогенов
48. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Функции иммунитета
врожденного приобретенного
ПРОТЕКТИВНАЯ ПРОТЕКТИВНАЯ
(противоинфекционная (усиление врожденного
защита) иммунитета)
РЕПАРАТИВНАЯ РЕПАРАТИВНАЯ (?)
(реакция на мертвые клетки (аутоантитела, провосп. и
и участие в ангиогенезе) ангиогенные цитокины)
▬ АКЦЕПТИВНАЯ
(толерантность к н. микробиоте
и в системе мать-плод)
▬ ГОМЕОСТАТИЧЕСКАЯ(?)
(надзор за постоянством антигенного
состава тканей)
49. Киселева Е.П., IV Всероссийская школа по клинической иммунологии, 2013г.
Разные функции иммунитета
К.Малевич, 1928-1930 гг.