2. Тема 2Тема 2.. Визначення активностіВизначення активності
антибіотиківантибіотиків
Одиниці біологічної активностіОдиниці біологічної активності
антибіотиківантибіотиків33
Визначення антибіотичної активностіВизначення антибіотичної активності
мікроорганізмівмікроорганізмів99
Визначення антивірусної діїВизначення антивірусної дії
антибіотиківантибіотиків1414
Визначення протипухлинної діїВизначення протипухлинної дії
антибіотиківантибіотиків1919
Методи кількісного визначенняМетоди кількісного визначення
антибіотиківантибіотиків
22
3. ВИЗНАЧЕННЯ АКТИВНОСТІ АНТИБІОТИКІВВИЗНАЧЕННЯ АКТИВНОСТІ АНТИБІОТИКІВ
Одиниці біологічної активності антибіотиківОдиниці біологічної активності антибіотиків
ВеличинуВеличину біологічної активності антибіотиківбіологічної активності антибіотиків
(протибактеріальної, антифунгальної і т.ін.)(протибактеріальної, антифунгальної і т.ін.)
зазвичай виражають в умовних одиницях, щозазвичай виражають в умовних одиницях, що
містяться вмістяться в 1 мл розчину (од/мл) чи в 1мг1 мл розчину (од/мл) чи в 1мг
препарату (од/мг).препарату (од/мг). ЗаЗа одиницю антибіотичноїодиницю антибіотичної
активностіактивності приймаютьприймають мінімальну кількістьмінімальну кількість
антибіотика, здатну пригнічувати розвиток чиантибіотика, здатну пригнічувати розвиток чи
затримувати ріст певної кількості клітинзатримувати ріст певної кількості клітин
стандартного штаму тест-мікроба в одиницістандартного штаму тест-мікроба в одиниці
об’єму поживного середовища.об’єму поживного середовища.
33
4. За одиницюЗа одиницю антибіотичноїантибіотичної
активності бензилпеніцилінуактивності бензилпеніциліну прийнятоприйнято
мінімальну кількість препарату, здатнумінімальну кількість препарату, здатну
затримувати ріст золотистогозатримувати ріст золотистого
стафілококастафілокока Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus
(штам 209) в 50 мл(штам 209) в 50 мл поживного бульйону.поживного бульйону.
ДляДля стрептоміцинустрептоміцину одиницяодиниця
активності буде іншою: мінімальнаактивності буде іншою: мінімальна
кількість антибіотика, що затримує рісткількість антибіотика, що затримує ріст
E. coliE. coli в 1 мл поживного бульйону.в 1 мл поживного бульйону.
44
5. При наявності антибіотикав в хімічноПри наявності антибіотикав в хімічно
чистому вигляді умовні одиницічистому вигляді умовні одиниці
біологічної активності виражають вбіологічної активності виражають в
одиницях маси. Так 1 мг чистогоодиницях маси. Так 1 мг чистого
стрептоміцину еквівалентний 1000 одстрептоміцину еквівалентний 1000 од
біологічної активності. Відповідно 1 одбіологічної активності. Відповідно 1 од
активності даного антибіотикаактивності даного антибіотика
еквівалентна 1мкг чистого стрептоміцину.еквівалентна 1мкг чистого стрептоміцину.
Нині випадків кількість стрептоміцинуНині випадків кількість стрептоміцину
виражають в мкг/мл чи мкг/мг.виражають в мкг/мл чи мкг/мг.
55
6. Відповідність одиниць біологічної діїВідповідність одиниць біологічної дії
ваговим одиницям для деяких антибіотиківваговим одиницям для деяких антибіотиків
66
Назва антибіотика
Маса 1 од.,
мкг
Бензилпеніциліну натрієва сіль 0,6
Оксацилін (кислота) 1,0
Стрептоміцин (основа) 1,0
Стрептоміцин (сульфат) 1,25
Хлортетрациклін (гідрохлорид) 1,0
Поліміксин В 0,1
Тетрациклін (гідрохлорид) 1,0
7. При вивченні умов утворенняПри вивченні умов утворення
антибіотиків і дослідженні впливу різнихантибіотиків і дослідженні впливу різних
факторів на біосинтез антибіотиківфакторів на біосинтез антибіотиків
важливим критерієм оцінки активності єважливим критерієм оцінки активності є
характеристикахарактеристика антибіотичноїантибіотичної
продуктивності організмів.продуктивності організмів.
77
8. Антибіотичною продуктивністюАнтибіотичною продуктивністю
організмуорганізму називають кількістьназивають кількість
антибіотику (в мкг або одиницях), щоантибіотику (в мкг або одиницях), що
утворюється 1 мг сухих клітин (абоутворюється 1 мг сухих клітин (або
міцелію) досліджуваного організму заміцелію) досліджуваного організму за
певний проміжок часу (1 год).певний проміжок часу (1 год).
Антибіотична продуктивністьАнтибіотична продуктивність
організмуорганізму виражається в мкг/(мг*год) абовиражається в мкг/(мг*год) або
в од./(мг*год).в од./(мг*год).
88
9. Визначення антибіотичноїВизначення антибіотичної
активності мікроорганізмівактивності мікроорганізмів
Антибіотичні властивостіАнтибіотичні властивості
мікроорганізмів вивчають замікроорганізмів вивчають за
культивування їх на твердихкультивування їх на твердих
(агаризованих) чи в рідких середовищах.(агаризованих) чи в рідких середовищах.
Визначення антибіотичної активностіВизначення антибіотичної активності
мікрорганізмів на твердих середовищахмікрорганізмів на твердих середовищах
здійснюєтьсяздійснюється методом перпендикуляр-методом перпендикуляр-
них штрихів або методом агаровихних штрихів або методом агарових
блоківблоків, на рідких поживних середовищах, на рідких поживних середовищах
–– методом паперових дисківметодом паперових дисків.. 99
10. Визначення антибіотичної активностіВизначення антибіотичної активності
мікроорганізмів методом перпендикулярнихмікроорганізмів методом перпендикулярних
штрихів (Егоров, 2004).штрихів (Егоров, 2004).
Час культивуваня тест-культур– 20-24 годиниЧас культивуваня тест-культур– 20-24 години
Нечутливі культуриНечутливі культури
ростуть рядомростуть рядом
1010
11. Метод паперових дисківМетод паперових дисків
Диски з фільтрувального паперу діаметромДиски з фільтрувального паперу діаметром
8 мм стерилізують в автоклаві.Стерильний8 мм стерилізують в автоклаві.Стерильний
диск беруть пінцетом і змочують вдиск беруть пінцетом і змочують в
досліджуваній культуральній рідині (абодосліджуваній культуральній рідині (або
екстракті). Після цього диски накладають наекстракті). Після цього диски накладають на
поверхню пожив-ного агару, попередньоповерхню пожив-ного агару, попередньо
засіяного культурою тест-організму. Чашку ззасіяного культурою тест-організму. Чашку з
тест-організмом і паперовими дискамитест-організмом і паперовими дисками
культивують за оптимальної температури 20-культивують за оптимальної температури 20-
24 год.24 год.
За присутностіЗа присутності антибіотичноїантибіотичної
речовиниречовини в культуральній рідині навколо дискав культуральній рідині навколо диска
утворюєть-ся зона затримки росту тест-утворюєть-ся зона затримки росту тест-
1111
12. Недолік методуНедолік методу::
використання одного поживноговикористання одного поживного
середовища для досліджуваного організму ісередовища для досліджуваного організму і
тест-організмів. Іноді для утвореннятест-організмів. Іноді для утворення
антибіотика і росту продуцента необхіднеантибіотика і росту продуцента необхідне
середовище, що відрізняється відсередовище, що відрізняється від
оптимального для росту тест-організмівоптимального для росту тест-організмів
1212
13. Метод агарових блоківМетод агарових блоків
Досліджуваний організм висівають суцільнимДосліджуваний організм висівають суцільним
газоном на поверхню агаризованого середови-газоном на поверхню агаризованого середови-
ща. Середовище оптимальне для росту іща. Середовище оптимальне для росту і
утворення антибіотика . Вирізають 3-5 цилінд-утворення антибіотика . Вирізають 3-5 цилінд-
рів і перенося-рів і перенося-
ть на тестовуть на тестову
культуру.культуру.
Наявність відсут-Наявність відсут-
ності зон ростуності зон росту
характеризуєхарактеризує
антибіотичнуантибіотичну
активністьактивність 1313
14. Визначення антивірусної діїВизначення антивірусної дії
антибіотиківантибіотиків
ВірусиВіруси – внутрішньоклітинні паразити і тому– внутрішньоклітинні паразити і тому
не можуть розвиватися у вигляді чистоїне можуть розвиватися у вигляді чистої
культури поза клітинами хазяїна. Це змушуєкультури поза клітинами хазяїна. Це змушує
використовувати для пошуку противіруснихвикористовувати для пошуку противірусних
речовин методи, що відповідають їхречовин методи, що відповідають їх
особливостям.особливостям.
Метод тканевих культурМетод тканевих культур
Найбільш зручним є метод використанняНайбільш зручним є метод використання
шматочків хориоаллантоїдної тканини курячогошматочків хориоаллантоїдної тканини курячого
ембріону.ембріону.
1414
16. Метод з використання листківМетод з використання листків
рослинрослин
Для визначення антивірусноїДля визначення антивірусної
активностіактивності використовують також відносновикористовують також відносно
простий метод з’ясування антивірусної діїпростий метод з’ясування антивірусної дії
антибіотиків стосовноантибіотиків стосовно вірусу тютюновоївірусу тютюнової
мозаїки.мозаїки.
1. Вирощують м/о на агарі; 8 мм1. Вирощують м/о на агарі; 8 мм
2.2. Вирізають агарові циліндриВирізають агарові циліндри ;;
3. На лист дурману прикріплюють желатиной3. На лист дурману прикріплюють желатиной
циліндри.циліндри.
4.Лист дурману інокулюють вірусом табачной4.Лист дурману інокулюють вірусом табачной
мозаїки.мозаїки.
1616
18. У разі культивування м/о на рідкому
середовищі - його змішують з вірусом і
інокулюють на поверхню листа
бб
аа
1818
Листки тютюну, інокульовані вірусом тютюнової
мозаїки: а – половина листка, інокульована сумішшю
віруса і культуральної рідини, антивірусна активність
якої вивчається; б – половина листка, інокульована
вірусом.
19. Визначення протипухлинної діїВизначення протипухлинної дії
антибіотиківантибіотиків
Використовують безпосередньоВикористовують безпосередньо
пухлинні клітини. З цією метою використовуютьпухлинні клітини. З цією метою використовують
методи, що базуються на використанніметоди, що базуються на використанні
експериментальних тварин, культури тканин чиекспериментальних тварин, культури тканин чи
вільноживучих в окремих полостях організмувільноживучих в окремих полостях організму
пухлинних клітин (асцитні клітини), алепухлинних клітин (асцитні клітини), але
кінцевий висновок про антипухлинну діюкінцевий висновок про антипухлинну дію
антибіотика надають лише після дослідів наантибіотика надають лише після дослідів на
тваринах.тваринах.
1919
20. • ВикористанняВикористання
експериментальних тваринекспериментальних тварин
• В якості тест-об’єкта використовуютьВ якості тест-об’єкта використовують
клітини асцитного раку Ерліха у мишей.клітини асцитного раку Ерліха у мишей.
Суспензію асцитних ракових клітинСуспензію асцитних ракових клітин
змішують з рівним об’ємомзмішують з рівним об’ємом
досліджуваного антибіотичногодосліджуваного антибіотичного
препарата і суміш поміщують впрепарата і суміш поміщують в
рефрижератор при 4рефрижератор при 4°°С на 4 год, післяС на 4 год, після
чого її перевивають мишам підшкірно.чого її перевивають мишам підшкірно.
2020
21. Для контрольних тварин замістьДля контрольних тварин замість
досліджуваного препаратудосліджуваного препарату
використовують фізіологічний розчин.використовують фізіологічний розчин.
Через 10 днів мишей забивають іЧерез 10 днів мишей забивають і
визначають наявність пухлини і їївизначають наявність пухлини і її
розміри. Якщо досліджувана речовинарозміри. Якщо досліджувана речовина
вбиває асцитні ракові клітини, то вонивбиває асцитні ракові клітини, то вони
відповідно не утворюють пухлин.відповідно не утворюють пухлин.
Тест-об’єктом можуть бутиТест-об’єктом можуть бути
також інші пухлинні клітини.також інші пухлинні клітини.
2121
22. Використання мікроорганізмів дляВикористання мікроорганізмів для
пошуку протипухлинних антибіотиківпошуку протипухлинних антибіотиків
Обмін речовин в пухлиннихОбмін речовин в пухлинних
клітинах відрізняється від обміну нормальнихклітинах відрізняється від обміну нормальних
клітин. Зокрема, різниця визначаєтьсяклітин. Зокрема, різниця визначається
інтенсивністю дихання, в пухлинних клітинахінтенсивністю дихання, в пухлинних клітинах
воно значно знижене. Виходячи з цього буловоно значно знижене. Виходячи з цього було
висунуто припущення про можливістьвисунуто припущення про можливість
використання в якості тест-об’єктів для пошукувикористання в якості тест-об’єктів для пошуку
протиракових антибіотиків мутантнихпротиракових антибіотиків мутантних
мікроорганізмів зі зниженим коефіцієнтоммікроорганізмів зі зниженим коефіцієнтом
дихання.дихання.
2222
23. Після оброблення клітин стафілококів,Після оброблення клітин стафілококів,
кишкової палички та дріжджів було отриманокишкової палички та дріжджів було отримано
мікроорганізми, коефіцієнт дихання якихмікроорганізми, коефіцієнт дихання яких
становивстановив 20-80%20-80% порівняно з вихіднимипорівняно з вихідними
культурами.культурами.
Використання рослинноїВикористання рослинної
тест-системитест-системи
Бактеріальний ракБактеріальний рак – одне з найбільш– одне з найбільш
поширених і шкідливих захворювань рослин впоширених і шкідливих захворювань рослин в
багатьох країнах світу. Широке розповсюджен-багатьох країнах світу. Широке розповсюджен-
ня бактеріального раку та його великаня бактеріального раку та його велика
шкідливість вимагає пошуку нових ефективнихшкідливість вимагає пошуку нових ефективних
методів боротьби з ним.методів боротьби з ним. 2323
24. Серед усіх пухлин рослин тількиСеред усіх пухлин рослин тільки
корончасті гали, зумовлені вірулентнимикорончасті гали, зумовлені вірулентними
штамамиштамами Agrobacterium tumefaciensAgrobacterium tumefaciens,,
мають характерні біологічні особливостімають характерні біологічні особливості
злоякісних пухлин, а саме:злоякісних пухлин, а саме: метаболітнуметаболітну
автономію, гормононезалежний ріст іавтономію, гормононезалежний ріст і
трансплантабельність.трансплантабельність. Тому їх можнаТому їх можна
вважати справжніми злоякіснимивважати справжніми злоякісними
пухлинами рослин – фітобластомами.пухлинами рослин – фітобластомами.
2424
25. Для скринінгу протипухлиннихДля скринінгу протипухлинних
речовин використовують індукціюречовин використовують індукцію
пухлиноутво-рення за допомогоюпухлиноутво-рення за допомогою A.A.
tumefacienstumefaciens на різних тест-рослинах:на різних тест-рослинах:
експлантатах запасаючих органівексплантатах запасаючих органів
моркви, картоплі та топінамбуру .моркви, картоплі та топінамбуру .
Перевагами використання такої моделіПеревагами використання такої моделі
пухлиноутворення єпухлиноутворення є високависока
специфічність, незначна, порівняно зспецифічність, незначна, порівняно з
тваринними системами, тривалістьтваринними системами, тривалість
проведення дослідупроведення досліду
2525
26. Використання моделі індукціїВикористання моделі індукції
пухлиноутворення за допомогоюпухлиноутворення за допомогою
AgrobacteriumAgrobacterium tumefacienstumefaciens даєдає
можливість здійснювати пошук сполук ізможливість здійснювати пошук сполук із
протипухлинною активністю зпротипухлинною активністю з
мінімальними витратами та зменшитимінімальними витратами та зменшити
потребу у тваринних системах, якіпотребу у тваринних системах, які
вимагають значних витрат коштіввимагають значних витрат коштів
2626
27. ..
2727
Розвиток пухлин на експлантатах картоплі:
1 – експлантати, оброблені протипухлинною
речовиною, 2 – не оброблені експлантати.
28. Методи кількісного визначенняМетоди кількісного визначення
антибіотиківантибіотиків
Для визначення антибіотичної активностіДля визначення антибіотичної активності
використовують хімічні, фізичні та біологічнівикористовують хімічні, фізичні та біологічні
методи.методи.
Найбільше значення маютьНайбільше значення мають біологічнібіологічні
методиметоди, оскільки лише прямий вплив, оскільки лише прямий вплив
антибіотиків на мікроорганізми дозволяєантибіотиків на мікроорганізми дозволяє
виявити антимікробну активність.виявити антимікробну активність.
Недоліками біологічних методів єНедоліками біологічних методів є
тривалість проведення аналізів, залежністьтривалість проведення аналізів, залежність
точності від багатьох зовнішніх факторів.точності від багатьох зовнішніх факторів.
2828
29. Метод послідовних розведеньМетод послідовних розведень
використовується для визначеннявикористовується для визначення
кількості антибіотика в культуральній рідині,кількості антибіотика в культуральній рідині,
розчинах чи екстрактах.розчинах чи екстрактах.
Суть метода:Суть метода:
1. Готують стерильне прозоре поживне1. Готують стерильне прозоре поживне
середовище та розливають у пробірки.середовище та розливають у пробірки.
2. Вносять антибіотик у певній концентрації.2. Вносять антибіотик у певній концентрації.
3. Готують тест-культуру м/о и вносять до3. Готують тест-культуру м/о и вносять до
пробірок.пробірок.
4. Інкубують пробірки в термостаті.4. Інкубують пробірки в термостаті.
5. Визначають наявність чи відсутність росту5. Визначають наявність чи відсутність росту
тест-організма.тест-організма.
2929
30. ..
3030
Методом послідовних розведень отримують
достовірні результати у разі:
• дотримання умов стерильності проведення
дослідів;
• використання постійних середовищ;
• внесення однакової кількості клітин тест-
організму.
31. Для визначення активностіДля визначення активності
антибіотиків на твердих поживнихантибіотиків на твердих поживних
середовищахсередовищах найбільш популярний методнайбільш популярний метод
радіальної дифузії антибіотику в агаррадіальної дифузії антибіотику в агар, який, який
попередньо був засіяний тест-культурою .попередньо був засіяний тест-культурою . ВінВін
заснований на явищі дифузії антибіотику взаснований на явищі дифузії антибіотику в
поживне агаризоване середовище, внаслідокпоживне агаризоване середовище, внаслідок
чого створюються несприятливі умови длячого створюються несприятливі умови для
розвитку відповідної тест-культури.розвитку відповідної тест-культури.
Методи засновані на цьому явищі є доситьМетоди засновані на цьому явищі є досить
простими і добре демонструють випадокпростими і добре демонструють випадок
антагоністичних взаємовідносин в світіантагоністичних взаємовідносин в світі
мікроорганізмів.мікроорганізмів.
3131
32. Суть методаСуть метода::
1.1. В чашки Петрі заливають 2 шариВ чашки Петрі заливають 2 шари
агаризованого середовиша – нижній без тест-агаризованого середовиша – нижній без тест-
культури, верхній – із суспензією тест-культури, верхній – із суспензією тест-
культурою в засівній дозі в 1мл агару.культурою в засівній дозі в 1мл агару.
2.2. Тест-культури: для хлортетрацикліну –Тест-культури: для хлортетрацикліну – BBacillusacillus
subtilis var.subtilis var. L2.L2.
3.3. За допомогою трафарету під кутом 60ºЗа допомогою трафарету під кутом 60º
встановлюють 6 стерильних циліндрів ізвстановлюють 6 стерильних циліндрів із
нержавіючої сталі або алюмінію (циліндринержавіючої сталі або алюмінію (циліндри
також стандартні – однакова маса, розмір - 10також стандартні – однакова маса, розмір - 10
мм заввишки і внутрішній діаметр 6 мм).мм заввишки і внутрішній діаметр 6 мм).
3232
33. Метод з використанням металевихМетод з використанням металевих
циліндрівциліндрів Активність антибіотиків визначаютьАктивність антибіотиків визначають
шляхом порівняння ступеню пригнічення ростушляхом порівняння ступеню пригнічення росту
чутливих мікроорганізмів в результаті діїчутливих мікроорганізмів в результаті дії
випробовуваного антибіотика і стандартноговипробовуваного антибіотика і стандартного
зразка у відомих концентраціях. Робочимизразка у відомих концентраціях. Робочими
стандартами при дослідженні антибіотикустандартами при дослідженні антибіотику
служать спеціальні чисті зразки препаратів,служать спеціальні чисті зразки препаратів,
активність яких встановлюється заактивність яких встановлюється за
міжнародними стандартними препаратами.міжнародними стандартними препаратами.
Робочі стандарти випускають іРобочі стандарти випускають і
зберігають в запаяних ампулах з нейтральногозберігають в запаяних ампулах з нейтрального
скла і зберігають при температурі не вищій заскла і зберігають при температурі не вищій за
0ºС.0ºС. 3333
34. 4.4. В циліндри кожної чашки вносять поВ циліндри кожної чашки вносять по 0,1 мл0,1 мл
стандартного розчинустандартного розчину і розчину, щоі розчину, що
досліджується на антибіотичну активність.досліджується на антибіотичну активність.
5. Чашки закривають і протягом 2 год5. Чашки закривають і протягом 2 год
витримують при кімнатній температурі. За цейвитримують при кімнатній температурі. За цей
час відбувається дифузія антибіотику в агар.час відбувається дифузія антибіотику в агар.
6. Чашки встановлюють на інкубацію6. Чашки встановлюють на інкубацію
(температура 36-38ºС протягом 18 год).(температура 36-38ºС протягом 18 год).
7. Вимірють діаметри зон пригнічення росту у7. Вимірють діаметри зон пригнічення росту у
випадку стандартного і досліджуваноговипадку стандартного і досліджуваного
препарату.препарату.
8. За допомогою спеціальних програм роблять8. За допомогою спеціальних програм роблять
необхідні підрахунки антибіотичної активності.необхідні підрахунки антибіотичної активності.3434
35. 3535
Зони пригнічення росту тест-культури
Металеві циліндри
Нижній незасіяний
агаризований шар
Верхній засіяний тест-культурой
агаризований шар
Метод з використанням металевих циліндрів
36. Метод з використанням лунок вМетод з використанням лунок в
агаріагарі
Суть метода:Суть метода:
1. В1. В агаровій пластинці засіяною тест-агаровій пластинці засіяною тест-
культурою роблять лунки діаметром 8 мм,культурою роблять лунки діаметром 8 мм,
використовуючи пробкове свердло. Блокивикористовуючи пробкове свердло. Блоки
видаляють за допомогою стерильноговидаляють за допомогою стерильного
скальпеля чи спеціального крючка. В одніскальпеля чи спеціального крючка. В одні
лунки вносять розчин досліджуваноголунки вносять розчин досліджуваного
антибіотика, в інші – стандартні розчиниантибіотика, в інші – стандартні розчини
антибіотика.антибіотика.
Перевагою цього методу є відсутністьПеревагою цього методу є відсутність
необхідності стерилізації металевих циліндрів.необхідності стерилізації металевих циліндрів. 3636
37. 3737
Метод з використанням лунок в агарі
8 мм
Лунки із стандартним
розчином антибіотика
Лунки із
досліджуваним
розчином антибіотика
Зони пригнічення росту тест-культури
Агаровий шар із
тест-культурою
38. Метод з використанням дисківМетод з використанням дисків
фільтрувального паперуфільтрувального паперу
На поверхню поживногоНа поверхню поживного
середовища засіяного тест-культуроюсередовища засіяного тест-культурою
розкладають диски фільтрувальногорозкладають диски фільтрувального
паперу змочені досліджуваним розчиномпаперу змочені досліджуваним розчином
антибіотика та його стандартнимиантибіотика та його стандартними
розчинами.розчинами.
Промисловістю випускаються готовіПромисловістю випускаються готові
диски з антибіотиками.диски з антибіотиками.
3838
39. Схема методаСхема метода
3939
8 мм
Диски із стандартним
розчином антибіотика
Диски із
досліджуваним
розчином антибіотика
Зони пригнічення росту тест-культури
Агаризований шар
із тест-культурою
40. Турбідиметричні методиТурбідиметричні методи
Методи, що базуються на реєстраціїМетоди, що базуються на реєстрації
відповідних продуктів метаболізмувідповідних продуктів метаболізму
тест-організмутест-організму
Методи, які базуються на виділенніМетоди, які базуються на виділенні
тепла або СОтепла або СО22 в довкілля.в довкілля.
Вплив антибіотика на біолюмінесценцію.Вплив антибіотика на біолюмінесценцію.
Хімічні та фізико-хімічні методиХімічні та фізико-хімічні методи
визначення антибіотиківвизначення антибіотиків
Опрацювати самостійно !!!Опрацювати самостійно !!!
4040
