1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 28484
(51) G01N 33/48 (2006.01)
КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2012/0755.1
(22) 26.06.2012
(45) 15.05.2014, бюл. №5
(72) Казымбет Полат Казымбетович; Бахтин Мират
Мухамедкаримович; Ельтокова Маншук
Хайлуллиновна; Каирова Мархабат Жайлауовна;
Чернышева Анна Васильевна
(73) Ельтокова Маншук Хайлуллиновна
(56) Т. А. Бирич, Л. Н. Марченко, А. Ю. Чекина/
Офтальмология, Вышэйшая школа, 2007, ISBN: 978-
985-06-1298-4№
(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
СПЕЦИФИЧНОСТИ РЕАКЦИИ
СТИМУЛИРОВАННОЙ ЛЕЙКЕРГИИ В
ПРИСУТСТВИИ ХРУСТАЛИКОВОГО
АНТИГЕНА IN VITRO ПРИ
ПРОГНОЗИРОВАНИИ КАТАРАКТЫ
РАДИАЦИОННОГО ГЕНЕЗА, У ЛИЦ
ПОДВЕРГШИХСЯ ВЛИЯНИЮ МАЛЫХ ДОЗ
ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ.
(57) Область изобретения - относится к медицине, а
именно к офтальмологии, радиобиологии и
иммунологии и может быть использовано в
уточнении лучевого катарактогенеза в отдаленном
периоде у лиц, получивших малые дозы
ионизирующего излучения (техногенная авария).
Реакция стимулированной лейкергии основана на
феномене агломерации лейкоцитов под
воздействием специфического аллергена в
нитратной крови по Флеку. В окрашенной толстой
капле периферической крови, в присутствии
аллергена в определенной пропорции,
подсчитывают число агломерированных лейкоцитов
и сравнивают с таковым в контроле. Реакция
считается положительной, если в опыте показатель
агломерации в присутствии стимулятора, антигена
хрусталика на 1
/3 выше, чем в контроле (показатель
нормы индекса лейкергии - 1,0±0,2%).
Цель исследования: методология
дифференцированной диагностики катаракты
радиационного генеза в присутствии
стимулированной лейкергии с использованием
антигена хрусталика in vitro.
Сущность изобретения - определение
специфичности, т.е. наличия
аутосенсибилизационного процесса реакции
стимулированной лейкергии в присутствии
хрусталикового антигена для расширения
возможностей дифференциальной диагностики
катаракты радиационного генеза, при воздействии
малых доз ионизирующего излучения.
Предлагаемое исследование с положительным
результатом апробировано на 62 пациентах,
мужского пола, в возрасте от 40-60 лет,
подвергшихся воздействию малых доз
ионизирующего излучения, в 1986-1989 гг. и может
быть использовано в офтальмологии,
радиобиологии и иммунологии.
Исследование расширяет возможности
дифференциальной диагностики катаракты
радиационного генеза.
(19)KZ(13)A4(11)28484

2. 28484
2
Область изобретения - относится к медицине, а
именно к офтальмологии, радиобиологии и
иммунологии и может быть использовано в
уточнении лучевого катарактогенеза в отдаленном
периоде у лиц, при воздействии малых доз
ионизирующего излучения (техногенная авария).
Реакция стимулированной лейкергии основана на
феномене агломерации лейкоцитов под
воздействием специфического аллергена в
нитратной крови по Флеку. В окрашенной толстой
капле периферической крови, смешанной с
аллергеном в определенной пропорции,
подсчитывают число агломерированных лейкоцитов
и сравнивают с таковым в контроле. Реакция
считается положительной, если в опыте показатель
агломерации в присутствии стимулятора, антигена
хрусталика на 1
/3 выше, чем в контроле (показатель
нормы индекса лейкергии - 1,0±0,2%).
Уровень изобретения - известен способ изучения
явления спонтанной лейкергии в патогенезе
гемодинамических расстройств при
профинтоксикациях, в частности, при токсическом
действии ксенобиотиков (Л.А. Могиленкова,
В.Р. Рембовский 2006, Токсический вестник №5,
с.8-13). Известен способ постановки реакции
стимулированной лейкергии при диагностике
черепно-мозговой травмы, в котором в качестве
антигена взят экстракт мозга. Наиболее выраженная
стимуляция обнаружена после ушиба мозга тяжелой
степени. (И.Э. Детлав. 1980, Ортопедия,
травматология и протезирование №3, с.44-47.).
Впервые реакцию стимуляцию лейкергии органным
антигеном используя в этих целях ткань печени
провел Х.М. Векслер (Векслер Х.М. - Вопросы
общей реактивности организма. Сб. науч. работ.
Вып.6. Таллин. 1967. с.277-285.).Реакция нашла
более широкое применение в эксперименте, чем в
клинической практике.
Все выше перечисленные аналоги
иммунологических исследований не являются
специфичными для уточнения лучевого
катарактогенеза, В доступной литературе не
выявлены прототипы заявляемого изобретения,
сообщающие о постановке реакции агломерации
лейкоцитов в периферической крови, после
стимуляции антигенами хрусталика у лиц, с
катарактой получивших малые дозы радиации.
Цель изобретения: методология
дифференцированной диагностики катаракты
радиационного генеза в присутствии
стимулированной лейкергии с использованием
антигена хрусталика in vitro
Сущность изобретения - определение
специфичности, т.е. наличия
аутосенсибилизационного процесса реакции
стимулированной лейкергии в присутствии
хрусталикового антигена для расширения
возможностей дифференциальной диагностики
катаракты радиационного генеза, при воздействии
малых доз ионизирующего излучения.
Технический результат предлагаемого нами
способа достигается следующим образом: в две
преципитационные пробирки с 0,05мл 3,8%
раствора лимоннокислого натрия вносится по 0,2мл
крови, взятой из пальца пациента с катарактой
неясного генеза, в одну из них (опытную)
добавляют 0,1 грамм экстракта хрусталика,
перемешивают и ставят на 2 часа в термостат при
температуре 37°С. После этого из содержимого
пробирки готовят препарат «толстой капли»,
высушивают и окрашивают метиленовым синим
(0,01% раствор). В каждой пробе крови под
микроскопом подсчитывают 1000 лейкоцитов,
помечая склеенные в конгломераты по 3 и более
клеток. Далее высчитывают процент лейкоцитов,
склеенных в конгломераты (норма
индексалейкергии - 1,0±0,2%, см.далее). Разница
полученных величин из пробирки с антигеном и без
него указывала на стимуляцию агломерации
хрусталиковым антигеном.
В качестве антигена используется экстракт из
ткани хрусталика, полученный по стандартной
технологии: хирургическому методу
экстракапсулярная экстракция катаракты
[Остерман Л.А. Хроматография белков и
нуклеиновых кислот. - М., 1985. с.536; Методы
практической биохимии / под ред. Б. Уильямса,
К. Уилсона. - М.: Мир, 1978. с.273; Т.А. Бирич,
Л.Н. Марченко, А.Ю. Чекина/ Офтальмология,
Вышэйшая школа, 2007, ISBN: 978-985-06-1298-4]
.Полученный экстракт хранится в холодильнике при
температуре - 4°С и может бытьиспользован в
течение 6 месяцев.
Предлагаемый способ определения
специфичности реакции стимулированной
лейкергии в присутствии хрусталикового антигена
при диагностике катаракты радиационного генеза,
может быть применен в практическом
здравоохранении, т.к. информативен и ресурсно
целесообразен в диагностическом аспекте.
Существующие методы определения адгезивных
свойств клеток, основаны на дорогостоящих и
сложных процедурах выделения адгезивных
структур определенных видов клеток крови,
требуют специальной аппаратуры, химреактивов,
оборудования и специально подготовленного
персонала. Во многих случаях такая громоздкая
процедура определения адгезивных свойств
лейкоцитов является излишней и при отсутствии
необходимости изучения тонких механизмов
межклеточных взаимодействий. Предлагаемый нами
метод является достаточно информативным для
суждения об адгезивных свойствах различных видов
лейкоцитов в уточнении лучевого катарактогенеза у
лиц, получивших малые доза радиации, т.к.
дифференциальная диагностика инволюционной
катаракты и катаракты радиационного генеза
представляет определенные трудности.
Результат - авторами проведено когортное
клиническое исследование (182 обследованных):
специфичность аутосенсибилизационного процесса
лейкоцитов периферической крови к антигенам
хрусталика. Продолжительность пребывания в зоне
воздействия малых доз ионизирующего излучения
составила 5-30 суток. Группу сравнения - 60
пациентов, идентичного пола и возраста, с

3. 28484
3
катарактой, не имевших контакт с ионизирующим
излучением в анамнезе. Изучены факторы риска
развития катаракты в каждой из вышеуказанных
групп. Время наблюдения основной и контрольной
групп составило около 10 лет. Контрольную группу
составили 60 пациентов, мужского пола, в возрасте
от 45 до 58 лет, без патологии хрусталика. В
анамнезе отсутствовала связь с ионизирующим
излучением. Диагностическое исследование
хрусталика пациентов проводилось при
медикаментозноммидриазе, биомикроскопическим
методом, с помощью прямого фокального
освещения щелевой лампой с узким углом
микроскопа (10-20 градусов) и максимально узкой
осветительной щелью. Материал оценивался в
реакции стимулированной лейкергии с
хрусталиковым антигеном in vitro. Для оценки
влияния радиационного фактора в развитии
изменений иммунологических показателей у
исследованной категории лиц, представлялось
необходимым исключить влияние соматической
патологии на изучаемые характеристики
лейкоцитарной формулы. В связи с этим, была
основная группа - 62 пациента, мужского пола,
подвергшихся влиянию малых доз ионизирующего
излучения, в возрасте от 40 до 60 лет, с начальной и
незрелой стадией заднекапсулярнной катаракты
(PSC) на момент обследования. В зависимости от
временного ценза, внешнего радиационного фона и
полученной средней лучевой нагрузке пациенты
были разделены на 3 подруппы:1 - 1986 год - 32
человек, средний возраст на момент облучения
составил 34 года полученная доза излучения -
18,2±0,6сГр., 2 - 1987 год.- 18 человек, средний
возраст 37-45 лет полученная доза излучения -
8,4±0,6сГр и 3 -1988 - 1989 годы, средний возраст на
момент облучения 40-52 лет, полученная доза
излучения - 12 человек - 3,3±0,3сГр.
При изучении лейкергии в условиях стимуляции
экстрактом хрусталика было установлено, что
референтный индекс агломерация лейкоцитов в
периферической крови практически здоровых
людей, составляет - 1,0 ± 0,2%. У пациентов с
катарактой нерадиационного генеза отмечено
увеличение индекса агломерации лейкоцитов до
3,2±0,3%, что превышало контрольные величины на
68%. Аналогичная динамика наблюдалась при
исследовании во времени, когда степень
интенсивности агломерации лимфоцитов при
катаракте составила 3,3±0,2%, превышая уровень
контроля на 64%. В тоже время, у пациентов с
катарактой, подвергшихся ионизирующему
излучения при дозе 18,2±0,58сГр (1 подгруппа)
наблюдались максимальные значения уровня
агломерации лейкоцитов -5,8±0,7%. Исследования
проведенные в 2012-2013г.г. показали дальнейший
рост данного индекса до 8,2±0,7, что превышало как
результаты контроля на 87%, так и значения 1
подгруппы на 63%. Во 2 подгруппе, где доза
ионизирующего излучения составила 8,43±0,60сГр,
чувствительность лейкоцитов периферической
крови к радиомодифицирующему агенту - антигену
хрусталика превышала установленные референтные
величины на 79%, а количество агломератов
составило 4,6±0,5%. Спустя 10 лет после
проведенного исследования динамика степени
интенсивности агломерации лейкоцитов оставалась
на прежнем уровне - 4,5±0,5%.
Аналогичная динамика наблюдалась у
пациентов, подвергшихся ионизирующему
излучению в дозе 3,27±0,31 сГр, когда в условиях
стимуляции лейкоцитов антигеном хрусталика,
результаты агломерции в 2013 году оставались на
одном уровне с показателями 2006 года и составили
4,0 ±0,5% и 4,0 ±0,4% соответственно.
Выводы: При стимуляции лейкоцитов
экстрактом хрусталика у лиц контрольной группы,
индекс 1,03±0,2% является референтным. Феномен
стимулированной лейкергии проявляется у лиц,
подвергшихся воздействию ионизирующего
излучения в дозе 18,2±0,58сГр., и составляет от
5,7% до 8,05% (р<0.001), что говорит о
сохраняющейся высокой аутоагрессии к антигенам
хрусталика и напряженности клеточного
иммунитета. Предлагаемый метод лейкергии в
присутствии хрусталикового антигена in vitro
является достаточно информативным и ресурсно
целесообразным для расширения возможностей
дифференциальной диагностики катаракты
радиационного генеза.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ определения специфичности реакции
стимулированной лейкергии в присутствии
хрусталикового антигена in vitro при
прогнозировании катаракты радиационного генеза у
лиц подвергшихся влиянию малых доз
ионизирующего излучения, отличающийся тем,
что к цитратной крови пациента, добавляют
хрусталиковый антиген в соотношении 10:1 в одной
пробе и без хрусталикового антигена в другой, в
каждой пробе крови под микроскопом
подсчитывают 1000 лейкоцитов, отмечая склеенные
в группы по 3 лейкоцитов и более, далее
высчитывают процент лейкоцитов, склеенных в
группы, а разница полученных величин из проб с
антигеном и без него (индекс лейкергии) указывает
на стимуляцию агломерации хрусталиковыми
антигенами и при индексе лейкергии 4,0 ± 0,5% до
± 100% определяют катаракту радиационного
генеза.

4. 28484
4
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор Е. Барч