1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН
(19) KZ (13) A4 (11) 28540
(51) A61B 10/00 (2006.01)
G01N 33/53 (2006.01)
КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ
(21) 2013/1243.1
(22) 20.09.2013
(45) 16.06.2014, бюл. №6
(72) Сарбаканова Шолпан Таупиковна (KZ);
Минаев Михаил Юрьевич (RU); Даугалиева Сауле
Тлековна (KZ); Аубекерова Лаура Сатаевна (KZ)
(73) Товарищество с ограниченной
ответственностью "Казахский научно-
исследовательский ветеринарный институт"
(56) СТ РК ГОСТ Р 52723-2010. Продукты пищевые
и корма. Экспресс-метод определения сырьевого
состава (молекулярный) IDT, Издание официальное.
Астана, Госстандарт, с.30
(54) ПРАЙМЕР ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ
ВИДОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ МЯСНОЙ
ПРОДУКЦИИ НА ОСНОВЕ ПОЛИМЕРАЗНОЙ
ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
(57) Изобретение относится к области
молекулярной биологии, в частности
идентификации видовой принадлежности мясной
продукции и может быть использовано при
молякулярно-генетических исследованиях методом
полимеразно-цепной реакции.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в разработке
эффективного праймера для определения ДНК
свиньи, заключающийся в сокращении
материальных затрат.
Праймер для идентификации видовой
принадлежности мясной продукции на основе
полимеразиой цепной реакции, включающий
геном свиньи в следующей
нуклеотидной последовательности F 5
GACCTCCCAGCTCCATCAAACATCTCATCATGATGAAA 3'
R 5' GCTGATAGTAGATTTGTGATGACCGTA 3', в качестве
фрагмента ДНК используется праймер со
следующей нуклеотидной последовательностью
F 5' GGGCTTTTCCGTCGACAAAGC 3',
R 5' GCTGCGAGGGCGGTAATGAT3'.
(19)KZ(13)A4(11)28540

2. 28540
2
Изобретение относится к области молекулярной
биологии, в частности идентификации видовой
принадлежности мясной продукции и может быть
использовано при молекулярно-генетических
исследованиях методом полимеразно-цепной реакции.
Известен праймер, включающий, геном свиньи в
следующей нуклеотидной последовательности F 5'
GACCTCCCAGCTCCATCAAACATCTCATCATGATGAAA 3' R 5'
GCTGATAGTAGATTTGTGATGACCGTA 3' [СТ РК ГОСТ Р
52723-2010. Продукты пищевые и корма. Экспресс-
метод определения сырьевого состава (молекулярный)
IDT, Издание официальное. СТ РК ГОСТ 52723-2010.
Введен впервые. Астана: Комитет технического
регулирования и метрологии Министерства индустрии
и новых технологий Республики Казахстан
(Госстандарт), с.30].
Недостатком указанного способа является
использование электрофореза, что увеличивает риск
контаминации, предполагает значительные затраты
времени и невозможность количественной оценки.
Задачей изобретения является разработка
экономически эффективного праймера для
идентификации видовой принадлежности мясной
продукции.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в разработке эффективного
праймера для определения ДНК свиньи,
заключающийся в сокращении материальных затрат.
Праймер для идентификации видовой
принадлежности мясной продукции на основе
полимеразной цепной реакции, включающий
геном свиньи в следующей
нуклеотидной последовательности F 5'
GACCTCCCAGCTCCATCAAACATCTCATCATGATGAAA 3' R 5'
GCTGATAGTAGATTTGTGATGACCGTA 3', в качестве
фрагмента ДНК используется праймер со следующей
нуклеотидной последовательностью F 5'
GGGCTTTTCCGTCGACAAAGC 3', R 5'
GCTGCGAGGGCGGTAATGAT3'. Изобретение
осуществляется следующим образом.
Базовой программой при проведении подбора
служит компьютерная программа Primer Express 2
(Applied Biosystems). Посредством которой
осуществляют анализ выбранных участков ДНК для
дизайна праймеров и зонда несущего флуорофор и
гаситель, который необходим для модификации ПЦР в
реальном времени. Основными критериями при
выборе праймеров являются следующие параметры:
размеры ПЦР-продукта около 50 п.н.; температура
плавления 58-60°С; длина праймера 20-30 п.н.; GC
состава 20-80%; отсутствие вторичных структур;
минимум G/C на 3' конце праймеров (не более трех из
пяти последних нуклеотидов). Зонд подбирают, также
руководствуясь общепринятыми параметрами: GC
состава 20-80%; температура плавления 68-70°С;
минимум одинаковых нуклеотидов подряд, особенно
G: не более 4-х подряд. Выбирают ту цепь ДНК, на
которой в пробе будет чаще встречаться С, чем G; на
5'-конце не должно было быть G; Флуоресцентная
метка - FAM, гаситель - Black Hole.
В результате анализа из приведенных программой
вариантов выбирают праймеры, включая зонд,
отвечающие всем вышеуказанным требованиям и
наиболее оптимальные для целей идентификации
видовой принадлежности мяса, мясных и
растительных ингредиентов в составе пищевых
продуктов.
Участок митохондриалыюй ДНК свиньи (цитохром
Б):
tacggtcatcacaaatctactatcagctatcccttatatcggaacagacctcgta
gaatgaatctgagggggcttttccgt
cgacaaagcaaccctcacacgattcttcgccttccactttatcctgccattcatcatta
ccgccctcgcagccgtacatct
cctattcctgcacgaaaccggatccaacaaccctaccggaatctcatcagacatag
acaaaattccatttcacccatact
acactattaaagacattctaggagccttatttataatactaatcctactaatccttgtact
attctcaccagacctactaggag
acccagacaactacaccccagcaaacccactaaacaccccaccccatattaaacc
agaatgatatttcttatt
Name: Sus scrofa (pork)_TEST-2.-1979F - финальная
концентрация -200nM
Sequence: GGGCTTTTCCGTCGAC AAAGC
Name: Sus scrofa (pork)_TEST-2.-2062R - финальная
концентрация -200nM
Sequence: GCTGCGAGGGCGGTAATGAT
Температура отжига праймеров - 60°С,
концентрация одновалентных солей - 55-57mМ,
магния - 2,5-3,0 mМ.
Внутривидовая дивергенция выбранного участка -
1%.
Использование разработанного праймера позволит
существенно сократить материальные затраты.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Праймер для идентификации видовой
принадлежности мясной продукции на основе
полимеразной цепной реакции, включающий
геном свиньи в следующей
нуклеотидной последовательности F 5'
GACCTCCCAGCTCCATCAAACATCTCATCATGATGAAA3' R 5'
GCTGATAGTAGТTTGTGATGACCGTA3', отличающийся
тем, что в качестве фрагмента ДНК используют
праймер со следующей нуклеотидной
последовательностью F 5' GGGCTTTTCCGTCGACAAAGC3',
R 5' GCTGCGAGGGCGGTAATGAT3'.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор Е. Барч