Introduction Cronobacter sakazakii is an opportunistic pathogen, which has been linked to the contamination of powdered infant formula, and associated with outbreaks leading to fatalities in neonatal intensive care units. Few studies have explored the direct interaction between probiotics and C. sakazakii. In this study, the effect of a Lactiplantibacillus plantarum strain (M17) along with the standard strain Lactobacillus plantarum (ATCC 8014) and the well-characterized probiotic strain Lactobacillus rhamnosus GG on the adhesion of C. sakazakii to intestinal epithelial cells was analyzed. Materials and Methods Acid and bile tolerance of M17 was evaluated in the presence of pepsin and pancreatin. L-arginine hydrolysis was investigated using an arginine-including medium. Auto-aggregation and co-aggregation assays were performed by absorbance measurement. Minimum inhibitory concentrations of the antimicrobials recommended by the European Food Safety Authority were established. Total lactic acid and the ratio of D/L lactate isomers were determined with a Megazyme enzymatic kit. The ability of the isolate to produce biogenic amines was tested by qualitative and quantitative monitoring. Hemolysis was assessed phenotypically on MRS agar enriched with sheep blood. The strain was tested for its capability to adhere to mucin and Caco-2 cells. The antagonistic effects of the strain against C. sakazakii were further evaluated in vitro on mucin and cultured Caco-2 cells. The LAB strain was added simultaneously with, before, and after C. sakazakii to Caco-2 cells for competition, exclusion and displacement assays, respectively. Data analysis was performed in R using one-way analysis of variance, and the experimental groups were compared with the controls using Tukey’s test. P values <0.05 were considered statistically significant. Results and Discussion There was no significant difference in the survival rate of M17 and L. plantarum ATCC 8014 at pH = 4. After 2 h of incubation at pH = 2.5, the survival rate of L. plantarum ATCC 8014 was estimated to be higher than strain M17, but this difference was not significant. After 4 hours of incubation at pH = 8, M17 showed a higher survival rate than L. plantarum ATCC 8014, and this difference was significant after transfer from pH = 4. These results confirm the appropriate viability of M17 in the gastrointestinal tract. Both M17 and L. plantarum ATCC 8014 developed the color yellow in the L-arginine hydrolysis assay, which confirms the safety of these strains. The percentage of auto-aggregation for M17, L. plantarum ATCC 8014, and Lactobacillus rhamnosus LGG was estimated at 24.38, 25.28, and 32 after 6 hours, respectively, and no statistically significant difference between the two isolates were noticed. Given the auto-aggregation and co-aggregation parameters of M17, this strain may constitute a defense mechanism against C. sakazakii. Strain M17 showed resistance to kanamycin and clindamycin antibiotics. With

1. ،‫همکاران‬ ‫و‬ ‫زاده‬ ‫فاطمی‬
‫اثر‬
‫الکت‬
‫ی‬
‫پالنت‬
‫ی‬
‫باس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
‫پن‬
‫ی‬
‫ر‬
‫موتال‬
‫چسبندگ‬ ‫بر‬
‫ی‬
‫ساکازاک‬ ‫کرونوباکتر‬
‫ی‬
‫سلول‬ ‫به‬
‫ها‬
‫ی‬
‫روده‬
‫ا‬
‫ی‬
557
Research Article
Homepage: https://ifstrj.um.ac.ir
The Effect of Lactiplantibacillus plantarum from Motal Cheese on the Adhesion
of Cronobacter sakazakii to Epithelial Cells
S.S. Fatemizadeh1
, M.B. Habibi Najafi 2*
, D.S. Nielsen33
Received: 2022.07.31
Revised: 2022.10.02
Accepted: 2022.11.23
Available Online: 2022.11.27
Introduction
Cronobacter sakazakii is an opportunistic pathogen, which has been linked to the contamination of powdered infant
formula, and associated with outbreaks leading to fatalities in neonatal intensive care units. Few studies have explored
the direct interaction between probiotics and C. sakazakii. In this study, the effect of a Lactiplantibacillus plantarum
strain (M17) along with the standard strain Lactobacillus plantarum (ATCC 8014) and the well-characterized probiotic
strain Lactobacillus rhamnosus GG on the adhesion of C. sakazakii to intestinal epithelial cells was analyzed.
Materials and Methods
Acid and bile tolerance of M17 was evaluated in the presence of pepsin and pancreatin. L-arginine hydrolysis was
investigated using an arginine-including medium. Auto-aggregation and co-aggregation assays were performed by
absorbance measurement. Minimum inhibitory concentrations of the antimicrobials recommended by the European
Food Safety Authority were established. Total lactic acid and the ratio of D/L lactate isomers were determined with a
Megazyme enzymatic kit. The ability of the isolate to produce biogenic amines was tested by qualitative and
quantitative monitoring. Hemolysis was assessed phenotypically on MRS agar enriched with sheep blood. The strain
was tested for its capability to adhere to mucin and Caco-2 cells. The antagonistic effects of the strain against C.
sakazakii were further evaluated in vitro on mucin and cultured Caco-2 cells. The LAB strain was added simultaneously
with, before, and after C. sakazakii to Caco-2 cells for competition, exclusion and displacement assays, respectively.
Data analysis was performed in R using one-way analysis of variance, and the experimental groups were compared with
the controls using Tukey’s test. P values <0.05 were considered statistically significant.
Results and Discussion
There was no significant difference in the survival rate of M17 and L. plantarum ATCC 8014 at pH = 4. After 2 h of
incubation at pH = 2.5, the survival rate of L. plantarum ATCC 8014 was estimated to be higher than strain M17, but
this difference was not significant. After 4 hours of incubation at pH = 8, M17 showed a higher survival rate than L.
plantarum ATCC 8014, and this difference was significant after transfer from pH = 4. These results confirm the
appropriate viability of M17 in the gastrointestinal tract. Both M17 and L. plantarum ATCC 8014 developed the color
yellow in the L-arginine hydrolysis assay, which confirms the safety of these strains. The percentage of auto-
aggregation for M17, L. plantarum ATCC 8014, and Lactobacillus rhamnosus LGG was estimated at 24.38, 25.28, and
32 after 6 hours, respectively, and no statistically significant difference between the two isolates were noticed. Given
1 and 2– Ph.D. Graduate and Professor of Department of Food Science, Ferdowsi University of Mashhad, Iran
(*- Corresponding Author Email: habibi@um.ac.ir)
3- Professor of Department of Food Science, Copenhagen University, Denmark
DOI: 10.22067/ifstrj.2022.78002.1193
How to cite this article:
Fatemizadeh, S.S., Habibi Najafi, M.B., & Nielsen, D.S. (2023). The effect of Lactiplantibacillus plantarum from
Motal cheese on the adhesion of Cronobacter sakazakii to epithelial cells. Iranian Food Science and Technology
Research Journal, 19(4), 557-575. (In Persian with English abstract).
https://doi.org/10.22067/ifstrj.2022.78002.1193
‫ایران‬ ‫غذایی‬ ‫صنایع‬ ‫و‬ ‫علوم‬ ‫پژوهشهای‬ ‫نشریه‬
‫جلد‬
19
‫شماره‬ ،
4
،
‫مهر‬
-
‫آبان‬
1402
.‫ص‬
575
-
557
Iranian Food Science and Technology
Research Journal
Vol. 19, No. 4, Oct.-Nov. 2023, p. 557-575

2. 558
‫جلد‬ ،‫ایران‬ ‫غذایی‬ ‫صنایع‬ ‫و‬ ‫علوم‬ ‫پژوهشهای‬ ‫نشریه‬
19
‫شماره‬ ،
4
،
‫مهر‬
-
‫آبان‬
1402
the auto-aggregation and co-aggregation parameters of M17, this strain may constitute a defense mechanism against C.
sakazakii. Strain M17 showed resistance to kanamycin and clindamycin antibiotics. With intrinsic resistance, the risk of
transferring resistance genes is not only speculative, but practically impossible. Intrinsic resistance of lactic acid
bacteria may be considered desirable because it ensures their survival when the host is treated with antibiotics. Both D
and L isomers of lactic acid were produced by the studied strains. In humans, D(-)-lactic acidosis is a rare metabolic
complication that has only been reported in individuals with short bowel syndrome). Clinical studies have shown that
the consumption of probiotic bacteria producing D(-)-lactic acid is safe for children and does not cause a long-term
increase in blood D(-)-lactic acid. The reference L. plantarum strain and M17 did not produce biogenic amine
precursors, and had no ß-hemolytic activity. Mucin adhesion assay exhibited that M17 has less adhesion (12.10 ± 1.14
%) than L. plantarum ATCC 8014 (13.33 ± 2.30 %) and LGG (15.93 ± 2.06 %) although these differences were not
statistically significant. However, the amount of adhesion for the positive control sample Escherichia coli K12 (25.19 ±
4.40 %) was significantly higher than those of the other strains. Compared to the positive control, M17 had a
significantly lower adhesion rate (6.8 ± 1.41) to CaCo-2 cells. This value was estimated at 13.77 ± 3.53 % for the
reference strain and 21.6 ± 7.54 % for Lactobacillus fermentum PCC (positive control). In antagonistic assays, M17 was
able to reduce the adhesion of C. sakazakii to mucin and CaCo-2 cells in all three methods of exclusion/inhibition,
competition and displacement. Statistical analysis of the results does not show a significant difference between M17 and
LGG. Therefore, the performance of M17 is similar to that of the standard probiotic LGG.
Conclusion
Lactic acid bacteria with acceptable ability to adhere to epithelial cells can be suitable for colonization in the
intestine. They can act as a barrier to fight pathogens through various competitive mechanisms, such as co-aggregation
with pathogens and adhesion. The M17 strain has an acceptable immune profile and probiotic properties because it
shows an acceptable antagonistic activity against C. sakazakii invasion.
Acknowledgement
This study was supported by Ferdowsi University of Mashhad (Research affairs) [project No.:46718] and the
research infrastructure at the University of Copenhagen.
Keywords: Cronobacter sakazakii, In vitro properties, Lactiplantibacillus plantarum, Probiotic

3. ،‫همکاران‬ ‫و‬ ‫زاده‬ ‫فاطمی‬
‫اثر‬
‫الکت‬
‫ی‬
‫پالنت‬
‫ی‬
‫باس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
‫پن‬
‫ی‬
‫ر‬
‫موتال‬
‫چسبندگ‬ ‫بر‬
‫ی‬
‫ساکازاک‬ ‫کرونوباکتر‬
‫ی‬
‫سلول‬ ‫به‬
‫ها‬
‫ی‬
‫روده‬
‫ا‬
‫ی‬
559
‫مقاله‬
‫پژوهشی‬
‫اثر‬
‫الکت‬
‫ی‬
‫پالنت‬
‫ی‬
‫باس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
‫پن‬
‫ی‬
‫ر‬
‫موتال‬
‫چسبندگ‬ ‫بر‬
‫ی‬
‫ساکازاک‬ ‫کرونوباکتر‬
‫ی‬
‫به‬
‫سلول‬
‫ها‬
‫ی‬
‫روده‬
‫ا‬
‫ی‬
‫زاده‬ ‫فاطمی‬ ‫سادات‬ ‫سعیده‬
1
-
‫نجفی‬ ‫حبیبی‬ ‫بافر‬ ‫محمد‬
۲
*
-
‫نیلسن‬ ‫سندریس‬ ‫دنیس‬
3
2
3
:‫دریافت‬ ‫تاریخ‬
09
/
05
/
1401
:‫بازنگری‬ ‫تاریخ‬
10
/
07
/
1401
:‫پذیرش‬ ‫تاریخ‬
02
/
09
/
1401
‫چکیده‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫ایزوله‬ ‫مطالعه‬ ‫این‬ ‫در‬ .‫است‬ ‫نوزادان‬ ‫شیرخشک‬ ‫تولیدکنندگان‬ ‫نگرانی‬ ‫موجب‬
‫الکت‬
‫پالنتی‬ ‫ی‬
‫پالنتاروم‬ ‫باسیلوس‬
M17
‫سنتی‬ ‫پنیر‬ ‫از‬
‫موتال‬
‫دسترسی‬ ‫(شماره‬
KX572391
)
‫استاندارد‬ ‫سویه‬ ‫همراه‬ ‫به‬
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
(
۸۰۱۴
ATCC
)
‫کنترل‬ ‫جهت‬
‫کرونوباکتر‬
‫ساکازاک‬
‫ی‬
.‫گرفتند‬ ‫قرار‬ ‫بررسی‬ ‫مورد‬
‫آزمون‬ ،‫ایمنی‬ ‫و‬ ‫پروبیوتیکی‬ ‫خواص‬ ‫شناسایی‬ ‫منظور‬ ‫به‬
‫های‬
‫بررسی‬ ‫جهت‬ ‫ی‬
‫ال‬ ‫هیدرولیز‬ ،‫جدایه‬ ‫بقای‬
-
‫انبوهش‬ ‫خود‬ ،‫آرژنین‬
۴
‫تولید‬ ،‫بیوتیکی‬ ‫آنتی‬ ‫حساسیت‬ ،
‫ایزومرهای‬
‫آمین‬ ‫تولید‬ ،‫الکتیک‬ ‫اسید‬
‫چسبن‬ ‫و‬ ‫موسین‬ ‫به‬ ‫چسبندگی‬ ،‫همولیتیک‬ ‫فعالیت‬ ،‫بیوژنیک‬ ‫های‬
‫سلول‬ ‫به‬ ‫دگی‬
‫های‬
Caco‑2
‫منظور‬ ‫به‬ .‫پذیرفت‬ ‫صورت‬
‫ایزوله‬ ‫اثر‬ ‫بررسی‬
M17
‫بر‬
،‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫انبوهش‬ ‫هم‬ ‫پارامترهای‬
5
‫چسبندگی‬ ،
‫سلول‬ ‫به‬ ‫چسبندگی‬ ‫و‬ ‫موسین‬ ‫به‬
‫های‬
2
‑
Caco
‫استاندارد‬ ‫باکتری‬ ‫همراه‬ ‫به‬
‫پروبیوتیک‬
‫رامنوسوس‬ ‫الکتوباسیلوس‬
LGG
.‫پذیرفت‬ ‫صورت‬
‫سو‬
‫ی‬
‫ه‬
M17
۹۱
٪
‫در‬
‫شرای‬
‫ط‬
‫مشابه‬
‫اس‬
‫ی‬
‫د‬
‫و‬ ‫معده‬
۸۹
٪
‫در‬
‫غلظت‬
‫مشابه‬
‫نمک‬
‫ها‬
‫ی‬
‫صفراو‬
‫ی‬
‫زنده‬
‫و‬ ،‫ماند‬
‫توانا‬
‫یی‬
‫انبوهش‬ ‫خود‬
‫از‬ ‫بیش‬
۲۴
٪
‫داد‬ ‫نشان‬ ‫را‬
.
‫چسبندگی‬
‫ایزوله‬
M17
‫شرایط‬ ‫در‬
‫برون‬
‫تن‬
‫ی‬
‫سلول‬ ‫و‬ ‫موسین‬ ‫به‬
‫های‬
Caco‑2
‫مقادیر‬ ‫در‬ ‫ترتیب‬ ‫به‬
۱۲
‫و‬
۷
٪
.‫شد‬ ‫ثبت‬
‫ویژگی‬ ‫دارای‬ ‫مطالعه‬ ‫مورد‬ ‫ایزوله‬
‫پروبیوتیکی‬ ‫های‬
‫می‬ ‫و‬ ‫است‬ ‫استاندارد‬ ‫نمونه‬ ‫با‬ ‫مقایسه‬ ‫در‬ ‫مناسبی‬
‫عنوان‬ ‫به‬ ‫استفاده‬ ‫جهت‬ ‫مناسبی‬ ‫کاندید‬ ‫تواند‬
‫ایزوله‬ ،‫بیوتیکی‬ ‫آنتی‬ ‫حساسیت‬ ‫آزمون‬ ‫در‬ ،‫حال‬ ‫این‬ ‫با‬ .‫باشد‬ ‫نوزادان‬ ‫شیرخشک‬ ‫در‬ ‫پروبیوتیک‬
M17
‫کان‬ ‫برابر‬ ‫در‬
‫ا‬
‫این‬ ‫که‬ ،‫داد‬ ‫نشان‬ ‫مقاومت‬ ‫کلیندامایسین‬ ‫و‬ ‫مایسین‬
‫ا‬ ‫از‬ ‫استفاده‬ ‫امکان‬ ‫ویژگی‬
‫پروبیوتیکی‬ ‫اثر‬ ‫برآورد‬ ‫نتایج‬ .‫کرد‬ ‫خواهد‬ ‫محدود‬ ‫را‬ ‫ایزوله‬ ‫ین‬
M17
‫بر‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫از‬ ‫نشان‬
‫عملکرد‬
‫مشابه‬
‫استاندارد‬ ‫سویه‬ ‫با‬
LGG
.‫دارد‬
‫واژه‬
:‫کلیدی‬ ‫های‬
،‫پروبیوتیک‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
،
‫الکت‬
‫ی‬
‫پالنت‬
‫ی‬
‫باس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
‫ویژگی‬ ،
‫های‬
‫برون‬
‫تن‬
‫ی‬
۱
‫و‬
۲
-
‫به‬
‫ترتیب‬
‫د‬
‫انش‬
‫ایران‬ ،‫مشهد‬ ‫فردوسی‬ ‫دانشگاه‬ ،‫کشاورزی‬ ‫دانشکده‬ ،‫غذایی‬ ‫صنایع‬ ‫و‬ ‫علوم‬ ‫گروه‬ ،‫استاد‬ ‫و‬ ‫دکتری‬ ‫آموخته‬
(
*
-
:‫مسئول‬ ‫نویسنده‬
habibi@um.ac.ir
Email:
)
۳
-
‫دانمارک‬ ،‫کپنهاگ‬ ‫دانشگاه‬ ،‫علوم‬ ‫دانشکده‬ ،‫غذایی‬ ‫صنایع‬ ‫و‬ ‫علوم‬ ‫گروه‬ ،‫استاد‬
4- Auto-aggregation
5- Co-aggregation
‫ایران‬ ‫غذایی‬ ‫صنایع‬ ‫و‬ ‫علوم‬ ‫پژوهشهای‬ ‫نشریه‬
‫جلد‬
19
‫شماره‬ ،
4
،
‫مهر‬
-
‫آبان‬
1402
.‫ص‬
575
-
557
Iranian Food Science and Technology
Research Journal
Vol. 19, No. 3, Oct.-Nove. 2023, p. 557-575

4. 560
‫جلد‬ ،‫ایران‬ ‫غذایی‬ ‫صنایع‬ ‫و‬ ‫علوم‬ ‫پژوهشهای‬ ‫نشریه‬
19
‫شماره‬ ،
4
،
‫مهر‬
-
‫آبان‬
1402
‫مقدمه‬
‫کرونوباکتر‬
۱
‫ها‬
،
‫باکتری‬
‫غیر‬ ،‫متحرک‬ ،‫منفی‬ ‫گرم‬ ‫ای‬ ‫میله‬ ‫های‬
‫انتروباکتریاسه‬ ‫خانواده‬ ‫عضو‬ ‫دار‬ ‫تاژک‬ ‫و‬ ‫اسپورزا‬
۲
( ‫هستند‬
et
Farmer
al., 1980
; Food Safety Authority of Ireland, 2011
)
.
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
۳
‫یک‬
‫در‬ ‫مهم‬ ‫عامل‬ ‫و‬ ‫طلب‬ ‫فرصت‬ ‫پاتوژن‬
‫به‬ ،‫نوزادان‬ ‫در‬ ‫بیماری‬ ‫شیوع‬ ‫با‬ ‫که‬ ‫است‬ ‫خشک‬ ‫شیر‬ ‫پودر‬ ‫آلودگی‬
‫بخش‬ ‫در‬ ‫خصوص‬
‫مراقبت‬ ‫های‬
‫است‬ ‫مرتبط‬ ‫نوزادان‬ ‫ویژه‬ ‫های‬
(
Bowen and Braden, 2006
‫که‬ ‫داده‬ ‫نشان‬ ‫مطالعات‬ .)
pH
‫معده‬
‫بوده‬ ‫باالتر‬ ‫بزرگساالن‬ ‫به‬ ‫نسبت‬ ‫نوزادان‬
‫بین‬ ‫و‬ ‫تولد‬ ‫بدو‬ ‫در‬ ‫(خنثی‬
۳
/
۲
‫الی‬
۶
/
۳
‫تا‬
۳
)‫سالگی‬
(
Blackburn, 2016
‫؛‬
Erickson et al.,
2005
)
‫امر‬ ‫این‬ ‫و‬
‫می‬
‫تواند‬
( ‫کند‬ ‫تسهیل‬ ‫را‬ ‫کرونوباکتر‬ ‫بقای‬
, 2009
Pagotto and Farber
.)
‫چه‬ ‫اگر‬
‫توسط‬ ‫بیماری‬ ‫بروز‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫کلی‬ ‫طور‬ ‫به‬
‫این‬ ‫با‬ ‫درگیری‬ ‫علت‬ ‫به‬ ‫نوزادان‬ ‫میر‬ ‫و‬ ‫مرگ‬ ‫میزان‬ ‫اما‬ ،‫است‬ ‫ناچیز‬
‫باکتری‬
۳۳
-
۸۰
٪
( ‫است‬ ‫شده‬ ‫گزارش‬
Lai, 2001
‫؛‬
Drudy et al.,
2006
‫؛‬
Gurtler et al., 2005
‫؛‬
Nazarowec-White and
Farber, 1997
‫خطوط‬ ‫به‬ ‫باکتریایی‬ ‫تهاجم‬ ‫و‬ ‫چسبیدن‬ ‫نتیجه‬ ‫در‬ .)
‫نمو‬ ‫تأخیر‬ ‫به‬ ‫منجر‬ ‫اغلب‬ ‫بیماری‬ ،‫انسان‬ ‫مغز‬ ‫مویرگی‬ ‫اندوتلیال‬ ‫سلولی‬
‫می‬ ‫ادراکی‬ ‫عملکرد‬ ‫در‬ ‫اختالل‬ ‫و‬
‫داده‬ ‫نشان‬ ‫مطالعات‬ ‫از‬ ‫تعدادی‬ .‫شود‬
‫پروتئی‬ ‫که‬ ‫اند‬
‫ن‬
‫خارجی‬ ‫غشای‬ ‫های‬
A
‫و‬
X
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫در‬
‫سلول‬ ‫از‬ ‫عبور‬ ‫و‬ ‫حمله‬
‫خونی‬ ‫سد‬ ‫که‬ ،‫مغز‬ ‫مویرگی‬ ‫اندوتلیال‬ ‫های‬
-
‫مغزی‬
‫می‬ ‫تشکیل‬ ‫را‬
( ‫دارند‬ ‫نقش‬ ،‫دهند‬
Mohan Nair et al., 2009
.)
‫می‬ ‫خشک‬ ‫شیر‬ ‫در‬ ‫میکروبیولوژیکی‬ ‫محافظ‬ ‫حضور‬
‫نگه‬ ‫به‬ ‫تواند‬
‫ارگانیسم‬ ‫داشتن‬
‫و‬ ‫کند‬ ‫کمک‬ ‫بازسازی‬ ‫از‬ ‫پس‬ ‫کم‬ ‫مقادیر‬ ‫در‬ ‫زا‬ ‫بیماری‬
( ‫دهد‬ ‫کاهش‬ ‫را‬ ‫بار‬ ‫فاجعه‬ ‫بیماری‬ ‫به‬ ‫ابتال‬ ‫خطر‬
Kent et al., 2015
.)
‫پروبیوتیک‬
‫میکروارگانیسم‬ ‫عنوان‬ ‫به‬ ‫حاضر‬ ‫حال‬ ‫در‬ ‫ها‬
‫ای‬ ‫زنده‬ ‫های‬
‫می‬ ‫تعریف‬
‫سالمت‬ ‫بر‬ ،‫کافی‬ ‫مقادیر‬ ‫در‬ ‫استفاده‬ ‫هنگام‬ ‫به‬ ‫که‬ ‫شوند‬
‫می‬ ‫مثبتی‬ ‫تأثیر‬ ‫میزبان‬
( ‫گذارند‬
Guarner and Schaafsma, 1998
‫؛‬
CODEX Alimentarius Commission, 2008
‫علمی‬ ‫مطالعات‬ .)
‫میکروارگانیسم‬ ‫عملکرد‬ ‫و‬ ‫خواص‬ ‫مورد‬ ‫در‬ ‫اخیر‬
‫مواد‬ ‫در‬ ‫زنده‬ ‫های‬
‫می‬ ‫نشان‬ ‫غذایی‬
‫پروبیوتیک‬ ‫که‬ ‫دهد‬
‫نق‬ ‫ها‬
‫فعالیت‬ ‫در‬ ‫مهمی‬ ‫ش‬
‫های‬
‫می‬ ‫ایفا‬ ‫تنفسی‬ ‫و‬ ‫گوارشی‬ ،‫ایمونولوژیکی‬
‫می‬ ‫و‬ ‫کنند‬
‫قابل‬ ‫تأثیر‬ ‫توانند‬
‫بیماری‬ ‫کاهش‬ ‫در‬ ‫توجهی‬
‫باشند‬ ‫داشته‬ ‫کودکان‬ ‫در‬ ‫عفونی‬ ‫های‬
(
b
FAO/WHO, 2006
)
.
‫هانتر‬
‫همکاران‬ ‫و‬
(
., 2009
et al
Hunter
)
‫که‬ ‫دادند‬ ‫نشان‬
‫بولگاریکوس‬ ‫الکتوباسیلوس‬
‫سلول‬ ‫آسیب‬ ‫از‬
‫اپی‬ ‫های‬
1- Cronobacter
2- Enterobacteriaceae
3- Cronobacter sakazakii
‫حضور‬ ‫نتیجه‬ ‫در‬ ‫شده‬ ‫تولید‬ ‫نیتریک‬ ‫اکسید‬ ‫از‬ ‫ناشی‬ ‫ای‬ ‫روده‬ ‫تلیال‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫به‬ ‫مبتال‬ ‫موش‬ ‫نوزاد‬ ‫مدل‬ ‫یک‬ ‫در‬
‫انتروکولیت‬
‫نکروزان‬
‫جلوگیری‬
‫می‬
( ‫کند‬
., 2009
et al
Hunter
)
.
‫همکاران‬ ‫و‬ ‫کوالدو‬
(
Collado et al., 2008a
)
‫با‬ ‫مقابله‬ ‫برای‬
‫چسبندگی‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫سویه‬ ،‫انسان‬ ‫از‬ ‫شده‬ ‫جدا‬ ‫مخاط‬ ‫به‬
‫شامل‬ ‫مطالعه‬ ‫(این‬ ‫دادند‬ ‫قرار‬ ‫آزمایش‬ ‫مورد‬ ‫را‬ ‫پروبیوتیک‬ ‫های‬
LGG
۴
.‫نبود‬
‫فراسودم‬ ‫غذایی‬ ‫مواد‬ ‫کردن‬ ‫فراهم‬ ‫منظور‬ ‫به‬
‫جمعیت‬ ‫یک‬ ‫برای‬ ‫ند‬
‫اثبات‬ ‫با‬ ‫پروبیوتیک‬ ‫کاندیداهای‬ ‫بهترین‬ ‫منطقی‬ ‫انتخاب‬ ،‫هدف‬
‫می‬ ‫توصیه‬ ‫آنها‬ ‫بخش‬ ‫سالمتی‬ ‫ادعاهای‬
( ‫شود‬
Arboleya et al.,
2012
‫سویه‬ ‫ویژه‬ ‫خواص‬ ‫بنابراین‬ .)
‫تعیین‬ ‫دقت‬ ‫با‬ ‫باید‬ ‫پروبیوتیک‬ ‫های‬
‫به‬ ‫میزبان‬ ‫سالمت‬ ‫بر‬ ‫سویه‬ ‫هر‬ ‫تأثیر‬ ‫و‬
‫شود‬ ‫داده‬ ‫نشان‬ ‫موردی‬ ‫صورت‬
(
Campana et al., 2017
‫باکتری‬ .)
‫مختلفی‬ ‫پروبیوتیک‬ ‫های‬
‫شده‬ ‫شناسایی‬
‫پاتوژن‬ ‫مهار‬ ‫به‬ ‫قادر‬ ‫که‬ ‫اند‬
‫این‬ ‫با‬ .‫هستند‬ ‫بالقوه‬ ‫های‬
‫و‬ ‫پروبیوتیک‬ ‫بین‬ ‫مستقیم‬ ‫کنش‬ ‫هم‬ ‫بر‬ ‫به‬ ‫اندکی‬ ‫مطالعات‬ ،‫حال‬
‫باکتری‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫پرداخت‬
‫اولین‬ ‫برای‬ ،‫مطالعه‬ ‫این‬ ‫در‬ .‫اند‬ ‫ه‬
‫جدایه‬ ‫اثر‬ ‫بار‬
‫الکت‬
‫پالنتی‬ ‫ی‬
‫پالنتاروم‬ ‫باسیلوس‬
‫باکتری‬ ‫چسبندگی‬ ‫بر‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫سلول‬ ‫به‬
‫اپی‬ ‫های‬
.‫شد‬ ‫بررسی‬ ،‫ای‬ ‫روده‬ ‫تلیال‬
‫روش‬ ‫و‬ ‫مواد‬
‫ها‬
‫آماده‬
‫فعال‬ ‫و‬ ‫سازی‬
‫سازی‬
‫فرآورده‬ ‫الکتوباسیلوس‬ ‫جدایه‬
‫سنتی‬ ‫لبنی‬
‫باکتری‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫پژوهش‬ ‫در‬ ،‫مطالعه‬ ‫این‬ ‫در‬ ‫استفاده‬ ‫مورد‬
‫همکاران‬ ‫و‬ ‫عزیزی‬
(
Azizi et al., 2017
)
‫پنیر‬ ‫سنتی‬ ‫لبنی‬ ‫فرآورده‬ ‫از‬
‫فعال‬ ‫منظور‬ ‫به‬ .‫شد‬ ‫جداسازی‬ ‫موتال‬
‫از‬ ‫نمونه‬ ،‫دسترس‬ ‫در‬ ‫جدایه‬ ‫سازی‬
‫فریزر‬
۸۰
-
(
Holm & Halby
،
‫پرونپ‬
‫ی‬
،
‫دانمارک‬
)
‫بن‬ ‫در‬ ‫و‬ ‫خارج‬
‫دمای‬ ‫ماری‬
۳۰
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫تیوب‬ ‫محتویات‬ ‫سپس‬ .‫شد‬ ‫داده‬ ‫قرار‬ ‫گراد‬
‫کشت‬ ‫محیط‬ ‫روی‬ ‫بر‬
MRS
‫آگار‬
‫داده‬ ‫کشت‬ )‫آلمان‬ ،‫(مرک‬
‫به‬ ‫و‬ ‫شد‬
‫مدت‬
۴۸
‫در‬ ‫ساعت‬
‫و‬ ‫هوازی‬ ‫بی‬ ‫شرایط‬
‫دمای‬
۳۰
‫سانتیگراد‬ ‫درجه‬
‫شد‬ ‫گذاری‬ ‫گرمخانه‬
(
Holm & Halby
‫دانمارک‬ ،‫پرونپی‬ ،
)
.
‫آماده‬
‫کشت‬ ‫سازی‬
‫های‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫کرونوباک‬
‫ساکازاکی‬ ‫تر‬
‫گوتنبرگ‬ ‫دانشگاه‬ ‫باکتری‬ ‫کلکسیون‬ ‫مرکز‬ ‫از‬
‫دسترسی‬ ‫شماره‬ ‫با‬
CCUG 28860
‫فعال‬ ‫منظور‬ ‫به‬ .‫شد‬ ‫خریداری‬
،‫سازی‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫به‬
‫کشت‬ ‫صورت‬
‫شب‬
‫انه‬
‫کشت‬ ‫محیط‬ ‫در‬
BHI
‫کشت‬ ‫محیط‬ ‫روی‬ ‫سپس‬ ‫و‬ ‫براث‬
VRBG
‫آگار‬
(
oxoid
،
4- Lactobacillus rhamnosus (LGG)

5. ،‫همکاران‬ ‫و‬ ‫زاده‬ ‫فاطمی‬
‫اثر‬
‫الکت‬
‫ی‬
‫پالنت‬
‫ی‬
‫باس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
‫پن‬
‫ی‬
‫ر‬
‫موتال‬
‫چسبندگ‬ ‫بر‬
‫ی‬
‫ساکازاک‬ ‫کرونوباکتر‬
‫ی‬
‫سلول‬ ‫به‬
‫ها‬
‫ی‬
‫روده‬
‫ا‬
‫ی‬
561
)‫دانمارک‬ ،‫راسکیله‬
‫میکروآئروفیلیک‬ ‫شرایط‬ ‫در‬
‫بی‬ ‫جار‬ ‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬
‫گازپک‬ ‫و‬ ‫هوازی‬
‫دمای‬ ‫در‬
C
°
۳۷
( ‫شد‬ ‫داده‬ ‫کشت‬
Charchoghlyan
et al., 2016
.)
‫جدایه‬ ‫بقای‬ ‫ارزیابی‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫برون‬ ‫مدل‬ ‫در‬
‫نیمه‬ ‫تنی‬
‫دینامیک‬
‫روش‬ ‫از‬ ‫آزمایش‬ ‫این‬ ‫انجام‬ ‫برای‬
Kos et al., 2000
‫اصالحات‬ ‫با‬
‫باکتری‬ ‫از‬ .‫شد‬ ‫استفاده‬ ‫جزئی‬
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
۸۰۱۴
ATCC
‫پژوهش‬ ‫سازمان‬ ‫از‬ ‫شده‬ ‫(خریداری‬
)‫ایران‬ ‫صنعتی‬ ‫و‬ ‫علمی‬ ‫های‬
‫به‬
،‫مختصر‬ ‫شکل‬ ‫به‬ .‫گردید‬ ‫استفاده‬ ‫آزمایش‬ ‫این‬ ‫در‬ ‫شاهد‬ ‫نمونه‬ ‫عنوان‬
‫نمونه‬ ‫ابتدا‬
‫و‬ ‫شاهد‬ ‫های‬
‫الکت‬
‫پالنتی‬ ‫ی‬
‫باسیلوس‬
‫مدت‬ ‫به‬
۲۴
‫در‬ ‫ساعت‬
MRS
‫بر‬
‫دمای‬ ‫در‬ ‫کشت‬ ‫محیط‬ .‫شدند‬ ‫داده‬ ‫کشت‬ ‫اث‬
۴
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫دور‬ ‫و‬ ‫گراد‬
g
۲۸۱۰
‫مدت‬ ‫به‬
۱۰
‫سانتریفیوژ‬ ‫دقیقه‬
(
Sigma
3_30K
)‫آلمان‬ ،
‫استریل‬ ‫محلول‬ ‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬ ‫سپس‬ ‫و‬
NaCl
5
/
۰
٪
‫حجم‬ .‫شد‬ ‫داده‬ ‫شستشو‬ ‫بار‬ ‫سه‬
‫میلی‬ ‫دو‬ ‫های‬
‫سوسپانسیون‬ ‫از‬ ‫لیتری‬
‫سلول‬
‫فالسک‬ ‫به‬ ‫شده‬ ‫شسته‬ ‫های‬
‫استریل‬ ‫های‬
‫حاوی‬
۱۰
‫میلی‬
‫لیتر‬
‫استریل‬ ‫محلول‬ ‫از‬ ‫متشکل‬ ‫معده‬ ‫شیره‬
NaCl
5
/
۰
٪
‫در‬
pH
5
/
۲
‫و‬
۰
/
۴
‫کلریدریک‬ ‫اسید‬ ‫با‬ ‫شده‬ ‫تنظیم‬ ،
۱
‫پپسین‬ ‫و‬ ‫موالر‬
)‫آمریکا‬ ،‫(سیگما‬
( ‫شده‬ ‫اضافه‬
۳
‫در‬ ‫انکوباسیون‬ ‫از‬ ‫پس‬ .‫شدند‬ ‫منتقل‬ )‫لیتر‬ ‫در‬ ‫گرم‬
۳۷
‫سانتی‬ ‫درجه‬
( ‫چرخان‬ ‫شیکر‬ ‫یک‬ ‫در‬ ‫گراد‬
۱5۰
‫حجم‬ ،)‫دقیقه‬ ‫در‬ ‫دور‬
‫ها‬
‫ی‬
۱
‫میلی‬
‫زمان‬ ‫در‬ ‫فالسک‬ ‫هر‬ ‫از‬ ‫لیتری‬
‫های‬
۰
،
۳۰
،
۶۰
‫و‬
۱۲۰
‫دقیقه‬
‫سلول‬ ‫شمارش‬ ‫و‬ ‫شده‬ ‫خارج‬
‫محیط‬ ‫سپس‬ .‫گردید‬ ‫انجام‬ ‫زنده‬ ‫های‬
‫در‬ ‫شدن‬ ‫سانتریفوژ‬ ‫با‬ ‫معده‬ ‫شیره‬ ‫هر‬ ‫در‬ ‫موجود‬ ‫کشت‬
g
۲۸۱۰
‫به‬
‫مدت‬
۱۰
‫در‬ ،‫شده‬ ‫شسته‬ ‫دقیقه‬
5
‫میلی‬
‫محلول‬ ‫لیتر‬
NaCl
5
/
۰
٪
‫به‬
‫با‬ ‫و‬ ‫آمده‬ ‫در‬ ‫تعلیق‬
۱۰
‫میلی‬
‫شبیه‬ ‫مایعات‬ ‫از‬ ‫لیتر‬
‫روده‬ ‫شده‬ ‫سازی‬
‫استریل‬ ‫محلول‬ ‫از‬ ‫(متشکل‬
NaCl
5
/
۰
٪
‫در‬
۰
/
۸
pH
‫صفرا‬ ‫حاوی‬
(
g/l
۱۰
( ‫پانکراتین‬ ‫و‬ )
g/l
۱
‫در‬ ‫مخلوط‬ ‫این‬ .‫شدند‬ ‫مخلوط‬ ))
۳۷
‫درجه‬
‫سانتی‬
( ‫چرخان‬ ‫شیکر‬ ‫یک‬ ‫در‬ ‫گراد‬
۱5۰
‫و‬ ‫انکوباسیون‬ )‫دقیقه‬ ‫در‬ ‫دور‬
‫حجم‬ ‫سپس‬
‫های‬
۱
‫میلی‬
‫از‬ ‫بعد‬ ‫لیتری‬
۰
،
۶۰
،
۱۲۰
‫و‬
۲۴۰
‫خارج‬ ‫دقیقه‬
‫سلول‬ ‫شمارش‬ ‫و‬
‫و‬ ‫تکرار‬ ‫بار‬ ‫سه‬ ‫آزمایش‬ ‫هر‬ .‫گردید‬ ‫انجام‬ ‫زنده‬ ‫های‬
‫میانگین‬ ‫صورت‬ ‫به‬ ‫نتایج‬
CFU/ml
( ‫گردید‬ ‫اعالم‬
de Carvalho et
al., 2009
.)
‫ال‬ ‫هیدرولیز‬
-
‫جدایه‬ ‫آرژنین‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫ال‬ ‫هیدرولیز‬ ‫بررسی‬
-
‫جدایه‬ ‫توسط‬ ‫آرژینین‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫کشت‬ ‫با‬
‫بدین‬ .‫گردید‬ ‫انجام‬ ‫نسلر‬ ‫معرف‬ ‫رنگ‬ ‫تغییر‬ ‫و‬ ‫دار‬ ‫آرژنین‬ ‫محیط‬ ‫در‬
‫یا‬ ‫کلنی‬ ‫یک‬ ،‫منظور‬
۱۰۰
‫به‬ ‫میکروبی‬ ‫سوسپانسیون‬ ‫از‬ ‫میکرولیتر‬
‫حاوی‬ ‫مایع‬ ‫محیط‬
۳
/
۰
٪
‫ال‬ ‫آمینه‬ ‫اسید‬
-
‫مدت‬ ‫به‬ ‫و‬ ‫منتقل‬ ‫آرژینین‬
۲۴
‫دمای‬ ‫در‬ ‫ساعت‬
C
°
۳۷
‫گرمخانه‬
( ‫شد‬ ‫گذاری‬
Iranian National
Standard No. 19459. 2014
،‫گذاری‬ ‫گرمخانه‬ ‫مدت‬ ‫پایان‬ ‫از‬ ‫پس‬ .)
۱۰۰
‫نسلر‬ ‫معرف‬ ‫حاوی‬ ‫صافی‬ ‫کاغذ‬ ‫روی‬ ‫کشت‬ ‫محیط‬ ‫از‬ ‫میکرولیتر‬
‫قرمز‬ ‫به‬ ‫مایل‬ ‫نارنجی‬ ‫رنگ‬ ‫ایجاد‬ .‫گردید‬ ‫بررسی‬ ‫رنگ‬ ‫تغییر‬ ‫و‬ ‫داده‬ ‫قرار‬
‫شیرخواران‬ ‫محصوالت‬ ‫در‬ ‫استفاده‬ ‫برای‬ ‫و‬ ‫مثبت‬ ‫واکنش‬ ‫دهنده‬ ‫نشان‬
‫و‬
‫از‬ ‫آزمایش‬ ‫این‬ ‫در‬ .‫است‬ ‫قبول‬ ‫قابل‬ ‫غیر‬ ،‫کودک‬ ‫غذای‬
‫استافیلوکوکوس‬
‫اورئوس‬
(
۲5۹۲۳
ATCC
.‫شد‬ ‫استفاده‬ ‫مثبت‬ ‫کنترل‬ ‫عنوان‬ ‫به‬ )
‫آ‬
‫جدایه‬ ‫باکتریایی‬ ‫انبوهش‬ ‫نالیز‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫سویه‬
،‫انبوهش‬ ‫هم‬ ‫و‬ ‫انبوهش‬ ‫خود‬ ‫درصد‬ ‫باالترین‬ ‫دارای‬ ‫های‬
‫سویه‬
‫می‬ ‫محسوب‬ ‫برتر‬ ‫پروبیوتیکی‬ ‫های‬
( ‫شوند‬
Collado et al.,
2008b
‫روش‬ ‫براساس‬ ‫جدایه‬ ‫انبوهش‬ ‫خود‬ ‫آزمون‬ .)
‫و‬ ‫ری‬ ‫دل‬
‫همکاران‬
(
Del Re et al., 2000
)
‫و‬
‫همکاران‬ ‫و‬ ‫توماس‬
(
Tomás et
al., 2005
)
‫جد‬ .‫گردید‬ ‫انجام‬ ‫زیر‬ ‫شرح‬ ‫به‬ ‫جزئی‬ ‫تغییر‬ ‫از‬ ‫پس‬
‫ایه‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫مدت‬ ‫به‬
۲۴
‫دمای‬ ‫در‬ ‫ساعت‬
C
°
۲۸
‫در‬
MRS
‫در‬ ‫براث‬
‫میکروآئروفیلیک‬ ‫شرایط‬
‫گازپک‬ ‫و‬ ‫هوازی‬ ‫بی‬ ‫جار‬ ‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬
‫کشت‬
‫مدت‬ ‫به‬ ‫باکتریایی‬ ‫کشت‬ ‫محیط‬ ‫سپس‬ .‫شد‬ ‫داده‬
۱۰
‫سرعت‬ ‫با‬ ‫دقیقه‬
rpm
۳5۰۰
‫در‬ ‫سلولی‬ ‫سوسپانسیون‬ ‫و‬ ‫سانتریفوژ‬
ml
۱۰
‫بافر‬
PBS
‫تا‬
‫حدود‬
CFU/ml
۸
۱۰
(
۳
/
۰
-
۲
/
۰
55۰
OD
‫هر‬ .‫گردید‬ ‫حل‬ ‫مجددا‬ )
‫برای‬ ‫سوسپانسیون‬
۱۰
‫مدت‬ ‫به‬ ‫اتاق‬ ‫دمای‬ ‫در‬ ‫و‬ ‫شده‬ ‫ورتکس‬ ‫ثانیه‬
۶
،‫ساعت‬ ‫هر‬ ‫در‬ ‫سپس‬ .‫شد‬ ‫انکوباسیون‬ ‫ساعت‬
ml
۱
‫سوسپانسیون‬ ‫از‬
‫در‬ ‫جذب‬ ‫و‬ ‫شده‬ ‫برداشته‬ ‫باالیی‬
۶۰۰
‫اندازه‬ ‫نانومتر‬
‫شد‬ ‫گیری‬
(
Genesys 30
،
Thermo Fisher Scientific
)‫آمریکا‬ ،
‫درص‬ .
‫خود‬ ‫د‬
( ‫انبوهش‬
Auto-A%
‫فرمول‬ ‫طبق‬ )
۱
( ‫گردید‬ ‫محاسبه‬
Campana et
al., 2017
.)
Auto-A% = ۱ – (At/A0) × ۱۰۰ (۱)
‫آن‬ ‫در‬ ‫که‬
t
A
‫زمان‬ ‫در‬ ‫جذب‬
‫م‬ ‫های‬
‫خ‬
‫و‬ ‫تلف‬
0
A
‫زمان‬ ‫در‬ ‫جذب‬
.‫است‬ ‫صفر‬
‫خود‬ ‫نهایی‬ ‫نتیجه‬
‫جذب‬ ‫میزان‬ ‫آخرین‬ ‫مبنای‬ ‫بر‬ ‫انبوهش‬
‫(پس‬
‫از‬
۶
‫می‬ ‫ذکر‬ )‫انکوباسیون‬ ‫ساعت‬
.‫شود‬
‫مقادیر‬ ،‫انبوهش‬ ‫هم‬ ‫آزمون‬ ‫برای‬
۲
‫میلی‬
‫سوسپانسیون‬ ‫از‬ ‫لیتری‬
‫باکتریایی‬ ‫های‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫و‬
‫کرونوباکتر‬
‫سلولی‬ ‫استاندارد‬ ‫غلظت‬ ‫با‬
(
۰5
/
۰
±
۲5
/
۰
=
nm
600
A
،
cells/ml
۸
۱۰
،
5
/
۰
‫فارلند‬ ‫مک‬
‫به‬ )
‫مدت‬
۱۰
‫مدت‬ ‫به‬ ‫و‬ ‫شده‬ ‫ورتکس‬ ‫ثانیه‬
۶
‫دمای‬ ‫در‬ ‫ساعت‬
‫بدون‬ ‫اتاق‬
‫نمونه‬ .‫گرفت‬ ‫قرار‬ ‫دادن‬ ‫تکان‬
‫مقادیر‬ ‫حاوی‬ ‫های‬
۴
‫میلی‬
‫از‬ ‫لیتری‬
‫باکتری‬ ‫سوسپانسیون‬
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
(
۸۰۱۴
ATCC
‫به‬ )
،‫ساعت‬ ‫هر‬ ‫در‬ .‫گرفت‬ ‫قرار‬ ‫استفاده‬ ‫مورد‬ ‫شاهد‬ ‫عنوان‬
ml
۱
‫از‬
( ‫ها‬ ‫مخلوط‬ ‫جذب‬ ‫و‬ ‫شده‬ ‫برداشته‬ ‫باالیی‬ ‫سوسپانسیون‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫و‬
‫ساک‬ ‫کرونوباکتر‬
‫ازاکی‬
‫طی‬ )
۴
.‫شد‬ ‫بررسی‬ ‫انکوباسیون‬ ‫ساعت‬
‫نتیجه‬
‫از‬ ‫(پس‬ ‫جذب‬ ‫میزان‬ ‫آخرین‬ ‫مبنای‬ ‫بر‬ ‫انبوهش‬ ‫هم‬ ‫نهایی‬
۶
‫ساعت‬
‫می‬ ‫ذکر‬ )‫انکوباسیون‬
.‫شود‬
‫سوسپانسیون‬ ‫برای‬ ‫و‬ ‫مخلوط‬ ‫برای‬ ‫جذب‬

6. 562
‫جلد‬ ،‫ایران‬ ‫غذایی‬ ‫صنایع‬ ‫و‬ ‫علوم‬ ‫پژوهشهای‬ ‫نشریه‬
19
‫شماره‬ ،
4
،
‫مهر‬
-
‫آبان‬
1402
‫زیر‬ ‫معادله‬ ‫طبق‬ ‫انبوهش‬ ‫هم‬ ‫درصد‬ ‫و‬ ،‫تعیین‬ ‫تنهایی‬ ‫به‬ ‫باکتری‬ ‫های‬
‫آن‬ ‫در‬ ‫که‬ ،‫شد‬ ‫محاسبه‬
x
A
‫و‬
y
A
‫ترتیب‬ ‫به‬
‫نشا‬
‫ن‬
‫خواص‬ ‫دهنده‬
‫جدایه‬ ‫انبوهش‬
‫های‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫و‬
‫کرونوباکتر‬
‫و‬ ‫تنهایی‬ ‫به‬
A(x +
y)
‫جدایه‬ ‫ترکیبی‬ ‫انبوهش‬
‫های‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫و‬
‫کرونوباکتر‬
.‫است‬
‫در‬ ‫ها‬ ‫آزمایش‬ ‫همه‬
۳
( ‫شدند‬ ‫انجام‬ ‫تکرار‬
Campana et al., 2017
.)
(
۲
)
‫آنتی‬ ‫حساسیت‬
‫جدایه‬ ‫بیوتیکی‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫جدا‬
‫ی‬
‫ه‬
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫ژن‬ ‫انتقال‬ ‫لحاظ‬ ‫از‬
‫ها‬
‫ی‬
‫آنت‬ ‫به‬ ‫مقاومت‬
‫ی‬
‫ب‬
‫ی‬
‫وت‬
‫ی‬
‫ک‬
‫ها‬
‫ی‬
‫را‬
‫ی‬
‫ج‬
‫انسان‬
‫ی‬
‫بررس‬ ‫مورد‬ ،‫هستند‬ ‫انتقال‬ ‫قابل‬ ‫که‬
‫ی‬
‫قرار‬
‫حساس‬/‫مقاومت‬ ‫تست‬ ‫شامل‬ ‫روش‬ ‫اساس‬ .‫گرفت‬
‫ی‬
‫ت‬
‫آزمون‬ ‫اساس‬ ‫بر‬
‫م‬
‫ی‬
‫کرود‬
‫ی‬
( ‫است‬ ‫لوشن‬
Połka et al., 2016
‫بد‬ .)
‫ی‬
‫ن‬
‫جدا‬ ،‫منظور‬
‫ی‬
‫ه‬
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫مدت‬ ‫به‬
۴۸
‫مح‬ ‫در‬ ‫ساعت‬
‫ی‬
‫ط‬
‫کشت‬
MRS
‫در‬ ‫و‬ ‫آگار‬
‫دما‬
‫ی‬
۳۰
‫سانت‬ ‫درجه‬
‫ی‬
‫گراد‬
‫گرمخانه‬
‫گذار‬
‫ی‬
‫گرد‬
‫ی‬
‫د‬
‫آنت‬ .
‫ی‬
‫ب‬
‫ی‬
‫وت‬
‫ی‬
‫ک‬
‫ها‬
‫ی‬
‫ا‬ ‫در‬ ‫استفاده‬ ‫مورد‬
‫ی‬
‫ن‬
‫آزما‬
‫ی‬
‫ش‬
‫پ‬ ‫اساس‬ ‫بر‬
‫ی‬
‫شنهادات‬
‫ادار‬
‫ۀ‬
‫ا‬
‫ی‬
‫من‬
‫ی‬
‫مواد‬
‫غذا‬
‫یی‬
‫جنتاما‬ ،‫اروپا‬
‫ی‬
‫س‬
‫ی‬
‫ن‬
(
mg/L
۱۲۸
)
‫کاناما‬ ،
‫ی‬
‫س‬
‫ی‬
‫ن‬
(
mg/L
۱۰۲۴
)
،
‫استرپتوما‬
‫ی‬
‫س‬
‫ی‬
‫ن‬
(
mg/L
۲5۶
)
‫تتراسا‬ ،
‫ی‬
‫کل‬
‫ی‬
‫ن‬
(
mg/L
۶۴
)
،
‫ار‬
‫ی‬
‫تروما‬
‫ی‬
‫س‬
‫ی‬
‫ن‬
(
mg/L
۱۶
)
‫کل‬ ،
‫ی‬
‫نداما‬
‫ی‬
‫س‬
‫ی‬
‫ن‬
(
mg/L
۳۲
)
‫آمپ‬ ،
‫ی‬
‫س‬
‫ی‬
‫ل‬
‫ی‬
‫ن‬
(
mg/L
۱۶
)
‫ونکوماس‬ ،
‫ی‬
‫ن‬
(
mg/L
۱۶
)
‫کلرامفن‬ ‫و‬
‫ی‬
‫کول‬
(
mg/L
۶۴
)
‫آزمون‬ ‫تمام‬ .‫بود‬
‫پل‬ ‫در‬ ‫ها‬
‫ی‬
‫ت‬
‫ها‬
‫ی‬
‫م‬
‫ی‬
‫کروت‬
‫ی‬
‫تر‬
۹۶
‫چاهک‬
‫ی‬
‫استر‬
‫ی‬
‫ل‬
‫(پل‬
‫ی‬
‫استا‬
‫ی‬
‫رن‬
‫حاو‬ )
‫ی‬
‫غلظت‬
‫ها‬
‫ی‬
‫آنت‬ ‫مناسب‬
‫ی‬
‫ب‬
‫ی‬
‫وت‬
‫ی‬
‫ک‬
‫پروتکل‬ ‫با‬ ‫مطابق‬ ‫ها‬
ISO/IDF
‫پل‬ .‫شد‬ ‫انجام‬
‫ی‬
‫ت‬
‫مدت‬ ‫به‬ ‫ها‬
۴۸
‫دما‬ ‫در‬ ‫ساعت‬
‫ی‬
C
°
۳۷
‫در‬
‫شرا‬
‫ی‬
‫ط‬
‫ب‬
‫ی‬
‫هواز‬
‫ی‬
‫گرمخانه‬
‫گذار‬
‫ی‬
‫پا‬ ‫در‬ .‫شدند‬
‫ی‬
‫ان‬
،‫انکوباسیون‬ ‫دوره‬
‫م‬
‫ی‬
‫زان‬
‫تکث‬ ‫و‬ ‫رشد‬
‫ی‬
‫ر‬
‫با‬ ‫نمونه‬
‫چشمی‬ ‫مشاهده‬
( ‫شد‬ ‫خوانده‬
Połka et
al., 2016
‫ا‬ ‫در‬ .)
‫ی‬
‫ن‬
‫آزما‬
‫ی‬
‫ش‬
‫باکتر‬ ‫از‬
‫ی‬
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
(
۸۰۱۴
ATCC
‫گرد‬ ‫استفاده‬ ‫شاهد‬ ‫عنوان‬ ‫به‬ )
‫ی‬
‫د‬
.
‫اسید‬ ‫الکتیک‬ ‫ایزومرهای‬ ‫تولید‬ ‫ارزیابی‬
‫سوپرناتانت‬ ‫در‬ ‫الکتیک‬ ‫اسید‬ ‫تولید‬
‫از‬ ‫یک‬ ‫هر‬ ‫کشت‬ ‫از‬ ‫حاصل‬ ‫های‬
‫جدایه‬
‫الکتوباسیلوس‬
( ‫شاهد‬ ‫نمونه‬ ‫و‬
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
۸۰۱۴
ATCC
‫کرده‬ ‫رشد‬ )
( ‫تجاری‬ ‫کیت‬ ‫با‬ ‫خود‬ ‫مطلوب‬ ‫شرایط‬ ‫در‬
D
-
/‫اسید‬ ‫الکتیک‬
L
-
‫تعیین‬ ‫مستقل‬ ‫تکرار‬ ‫سه‬ ‫در‬ )‫مگازایم‬ ،‫اسید‬ ‫الکتیک‬
( ‫گردید‬
Muñoz-Quezada et al., 2013
.)
‫آمین‬ ‫تولید‬ ‫ارزیابی‬
‫بیوژنیک‬ ‫های‬
‫سویه‬ ‫از‬ ‫برخی‬ ‫توانایی‬
‫های‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫آمین‬ ‫تولید‬ ‫در‬
‫های‬
.‫است‬ ‫مرتبط‬ ‫دکربوکسیالز‬ ‫اسید‬ ‫آمینو‬ ‫فعالیت‬ ‫وجود‬ ‫به‬ ‫سمی‬ ‫بیوژنیک‬
‫می‬ ،‫رو‬ ‫این‬ ‫از‬
‫شاخص‬ ‫رنگ‬ ‫تغییر‬ ‫اساس‬ ‫بر‬ ‫کیفی‬ ‫روش‬ ‫یک‬ ‫از‬ ‫توان‬
‫بنفش‬ ‫بروموکروزول‬
(
‫آلدریچ‬ ‫سیگما‬
،
‫دانمارک‬ ،‫کپنهاگ‬
)
‫زرد‬ ‫از‬
‫به‬
‫به‬ ‫شده‬ ‫اضافه‬ ‫تیروزین‬ ‫و‬ ‫اورنیتین‬ ،‫لیزین‬ ،‫هیستیدین‬ ‫حضور‬ ‫در‬ ‫بنفش‬
‫کشت‬ ‫محیط‬ ‫یک‬
‫م‬
‫حدود‬
( ‫غربالگری‬
Bover-Cid and Holzapfel,
1999
)
( ‫تریپتون‬ ‫حاوی‬
٪
5
/
۰
( ‫مخمر‬ ‫عصاره‬ ،)
٪
5
/
۰
‫سدیم‬ ‫کلرید‬ ،)
(
٪
5
/
۰
‫توئین‬ ،)
۸۰
(
٪
۰5
/
۰
( ‫منیزیم‬ ‫سولفات‬ ،)
٪
۰۲
/
۰
‫سولفات‬ ،)
( ‫منگنز‬
٪
۰۰5
/
۰
‫آهن‬ ‫سولفات‬ ،)
(
II
)
(
٪
۰۰5
/
۰
‫کلسیم‬ ‫کربنات‬ ‫و‬ )
(
٪
۰۱
/
۰
)
‫در‬
۰
/
5
pH
،
‫با‬
‫بنفش‬ ‫بروموکرزول‬ ‫نشانگر‬
‫و‬
‫افزودن‬ ‫بدون‬
( ‫گلوکز‬
Møller et al., 2020
‫شاخص‬ ‫رنگ‬ ‫تغییر‬ .‫کرد‬ ‫استفاده‬ )
‫بنفش‬ ‫بروموکروزول‬
‫زرد‬ ‫از‬
‫آمینو‬ ‫دار‬ ‫معنی‬ ‫فعالیت‬ ‫عنوان‬ ‫به‬ ‫بنفش‬ ‫به‬
‫می‬ ‫حساب‬ ‫به‬ ‫دکربوکسیالز‬ ‫اسید‬
‫حداقل‬ ‫به‬ ‫مربوط‬ ‫که‬ ‫آید‬
۳5۰
‫میلی‬
‫آمین‬ ‫یک‬ ‫از‬ ‫گرم‬
( ‫است‬ ‫لیتر‬ /‫خاص‬ ‫بیوژنیک‬
Olasupo et al.,
2001
‫سویه‬ ‫از‬ ‫آزمایش‬ ‫این‬ ‫انجام‬ ‫برای‬ .)
‫برویس‬ ‫الکتوباسیلوس‬
۴۱۲۱
CECT
‫سویه‬ ‫و‬ ‫تیرامین‬ ‫تولید‬ ‫برای‬ ‫مثبت‬ ‫کنترل‬ ‫عنوان‬ ‫به‬
‫پارابوچنری‬ ‫الکتوباسیلوس‬
KUH8
‫تولید‬ ‫برای‬ ‫مثبت‬ ‫کنترل‬ ‫عنوان‬ ‫به‬
،‫هیستامین‬
‫الکتوباسی‬
‫پالنتاروم‬ ‫لوس‬
(
۸۰۱۴
ATCC
‫نمونه‬ ‫عنوان‬ ‫به‬ )
‫جدایه‬ ‫و‬ ‫شاهد‬
M17
‫سویه‬ .‫شد‬ ‫استفاده‬
‫در‬ ً‫ال‬‫قب‬ ‫که‬ ‫هایی‬
MRS
‫براث‬
‫در‬ ،‫بودند‬ ‫شده‬ ‫کشت‬
۱۰۰
‫محیط‬ ‫به‬ ‫میکرولیتر‬
‫حاوی‬ ‫محدود‬ ‫های‬
.‫شدند‬ ‫تلقیح‬ ‫بنفش‬ ‫بروموکرزول‬ ‫و‬ ‫آمینه‬ ‫اسیدهای‬
‫لوله‬
‫شده‬ ‫تلقیح‬ ‫های‬
‫لوله‬ ‫همراه‬ ‫به‬
‫(محیط‬ ‫منفی‬ ‫کنترل‬ ‫های‬
‫مدت‬ ‫به‬ )‫نشده‬ ‫تلقیح‬ ‫محدود‬
5
‫دمای‬ ‫در‬ ‫روز‬
۳۷
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫هر‬ ‫و‬ ‫شدند‬ ‫انکوبه‬ ‫گراد‬
۲۴
‫تغییر‬ ‫ساعت‬
‫آزمایش‬ .‫شد‬ ‫مشاهده‬ ‫رنگ‬
( ‫شدند‬ ‫انجام‬ ‫مستقل‬ ‫تکرار‬ ‫سه‬ ‫در‬ ‫ها‬
Pérez
Martínez et al., 2012
.)
‫منظور‬ ‫به‬
‫تأ‬
‫یی‬
‫د‬
‫تول‬
‫ی‬
‫د‬
‫آم‬
‫ی‬
‫ن‬
‫ها‬
‫ی‬
‫ب‬
‫ی‬
‫وژن‬
‫ی‬
‫ک‬
،
‫از‬ ‫پس‬
5
،‫روز‬
۲
/
۱
‫میلی‬
‫جمع‬ ‫قبل‬ ‫مرحله‬ ‫محیط‬ ‫از‬ ‫لیتر‬
‫به‬ ‫و‬ ،‫آوری‬
‫مدت‬
۳۰
‫در‬ ‫دقیقه‬
g
×
۹۶۰۰
‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬ ‫رویی‬ ‫مایع‬ .‫شد‬ ‫سانتریفیوژ‬
‫فیلترهای‬
۲۲
/
۰
‫لوله‬ ‫در‬ ‫میکرومتر‬
‫و‬ ،‫فیلتر‬ ‫جدید‬ ‫استریل‬ ‫اپندورف‬ ‫های‬
‫مشتق‬ ‫زمان‬ ‫تا‬
‫دمای‬ ‫در‬ ‫سازی‬
۲۰
-
‫سانتی‬ ‫درجه‬
.‫شد‬ ‫نگهداری‬ ‫گراد‬
‫آمین‬ ‫غلظت‬
‫بیوژنیک‬ ‫های‬
‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬ ‫رویی‬ ‫مواد‬
UPLC
‫بر‬
‫أساس‬
‫همکاران‬ ‫و‬ ‫ردروئلو‬ ‫روش‬
(
Redruello et al., 2013
)
‫اندازه‬
‫گیری‬
( ‫فیلتر‬ ‫رویی‬ ‫مایع‬ .‫شد‬
μm
۴5
/
۰
،‫سلولز‬ ‫استات‬ ‫غشای‬
VWR
،
‫و‬ ،)‫دانمارک‬ ،‫سوبورگ‬
۱۰
‫اسید‬ ‫هیدروکلریک‬ ‫در‬ ‫برابر‬
۱
/
۰
‫رقیق‬ ‫موالر‬
‫به‬ ‫سپس‬ .‫شد‬
۱۷5
‫م‬
‫بورات‬ ‫بافر‬ ‫از‬ ‫یکرولیتر‬
۱
( ‫موالر‬
۰
/
۹
pH
،)
۷5
‫و‬ ‫متانول‬ ‫میکرولیتر‬
۲
‫میکرولیتر‬
L
-
( ‫اسید‬ ‫آدیپیک‬ ‫آمینو‬
۰۷
/
۰
‫میلی‬
،‫آن‬ ‫از‬ ‫پس‬ .‫شد‬ ‫اضافه‬ )‫موالر‬
۳
‫متیلن‬ ‫اتوکسی‬ ‫اتیل‬ ‫دی‬ ‫میکرولیتر‬
( ‫مالونات‬
DEEMM
‫در‬ ‫و‬ ،‫شد‬ ‫ورتکس‬ ‫مخلوط‬ ،‫اضافه‬ )
۳۰
‫درجه‬
‫سانتی‬
‫مدت‬ ‫به‬ ‫اولتراسوند‬ ‫حمام‬ ‫در‬ ‫گراد‬
۴5
‫سپس‬ .‫شد‬ ‫انکوبه‬ ‫دقیقه‬
‫نمونه‬
‫دمای‬ ‫در‬ ‫ها‬
۷۰
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫مدت‬ ‫به‬ ‫گراد‬
۲
‫شدند‬ ‫انکوبه‬ ‫ساعت‬
‫تا‬
DEEMM
‫نمونه‬ .‫شود‬ ‫غیرفعال‬
( ‫شدند‬ ‫سانتریفیوژ‬ ‫سپس‬ ‫ها‬
۱۰
‫در‬ ‫دقیقه‬
g
×
۹۶۰۰
‫دمای‬ ‫و‬
۴
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫یک‬ ‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬ ‫و‬ )‫گراد‬
‫غشای‬
PTFE
(
۲۲
/
۰
،‫میکرومتر‬
VWR
‫مخروطی‬ ‫ویال‬ ‫در‬ )

7. ،‫همکاران‬ ‫و‬ ‫زاده‬ ‫فاطمی‬
‫اثر‬
‫الکت‬
‫ی‬
‫پالنت‬
‫ی‬
‫باس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
‫پن‬
‫ی‬
‫ر‬
‫موتال‬
‫چسبندگ‬ ‫بر‬
‫ی‬
‫ساکازاک‬ ‫کرونوباکتر‬
‫ی‬
‫سلول‬ ‫به‬
‫ها‬
‫ی‬
‫روده‬
‫ا‬
‫ی‬
563
(
VWR
)
‫مقدار‬ .‫شدند‬ ‫فیلتر‬
۱
( ‫شده‬ ‫مشتق‬ ‫نمونه‬ ‫از‬ ‫میکرولیتر‬
۱۶
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫ابزار‬ ‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬ )‫گراد‬
UPLC
‫(سیستم‬
H-Class
Acquity UPLCTM
،
Waters
‫یک‬ ‫به‬ ‫متصل‬ )‫دانمارک‬ ،‫تاستروپ‬ ،
‫در‬ ‫فوتودیود‬ ‫آرایه‬ ‫حسگر‬
۲۸۰
( ‫ستون‬ ‫یک‬ ‫با‬ ،‫نانومتر‬
Acquity BEH
C18
،
μm
۷
/
۱
،
mm
۱۰۰
×
۱
/
۲
‫د‬ )‫واترز‬ ،
‫ر‬
۳5
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫طبق‬ ،‫گراد‬
‫توسط‬ ‫شده‬ ‫گزارش‬ ‫روش‬
(
Redruello et al., 2013
)
‫تحلیل‬ ‫مورد‬
‫معرف‬ .‫گرفت‬ ‫قرار‬
‫درجه‬ ‫ها‬
HPLC
،‫(کپنهاگ‬ ‫آلدریچ‬ ‫سیگما‬ ‫از‬ ‫و‬ ‫بودند‬
‫با‬ ‫استاندارد‬ .‫شدند‬ ‫تهیه‬ )‫دانمارک‬
۱۸
‫فیشر‬ ‫ترمو‬ ‫از‬ ‫آمینو‬ ‫ترکیب‬
‫کروماتوگرام‬ .‫شد‬ ‫خریداری‬ )‫دانمارک‬ ،‫(راسکیله‬
‫پیک‬ ‫تمام‬ ‫با‬ ‫ها‬
‫های‬
‫به‬ ‫مربوط‬
۳۰
‫(شامل‬ ‫بررسی‬ ‫مورد‬ ‫آمینه‬ ‫ترکیب‬
۲۲
‫یون‬ ،‫آمینه‬ ‫اسید‬
‫و‬ ‫آمونیوم‬
۷
‫مدت‬ ‫در‬ )‫بیوژنیک‬ ‫آمین‬
۱۰
‫دقی‬
‫پروفایل‬ ‫و‬ ‫شدند‬ ‫جدا‬ ‫قه‬
‫نرم‬ ‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬ ‫آمده‬ ‫دست‬ ‫به‬ ‫های‬
‫افزار‬
Empower
‫(نسخه‬
۳
)‫واترز‬ ،
( ‫شدند‬ ‫آنالیز‬
Møller et al., 2020
.)
‫همولیتیک‬ ‫فعالیت‬ ‫ارزیابی‬
،‫مطالعه‬ ‫مورد‬ ‫پروبیوتیک‬ ‫جدایه‬ ‫همولتیک‬ ‫فعالیت‬ ‫برآورد‬ ‫منظور‬ ‫به‬
‫استاندارد‬ ‫مطابق‬ ‫آزمایش‬
۱۹۴5۹
‫پذیرفت‬ ‫صورت‬
(
Iranian
National Standard No. 19459. 2014
)
‫جدایه‬ ‫منظور‬ ‫بدین‬ .
‫الکتوباسیلوس‬
،
‫اورئوس‬ ‫استافیلوکوکوس‬
(
۲5۹۲۳
ATCC
‫و‬ )
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
(
۸۰۱۴
ATCC
‫آگار‬ ‫کشت‬ ‫محیط‬ ‫روی‬ ‫بر‬ )
( ‫گوسفند‬ ‫خون‬ ‫حاوی‬
۷
٪
‫ای‬ ‫نقطه‬ ‫روش‬ ‫به‬ )‫دفیبرینه‬ ‫گوسفندی‬ ‫خون‬
‫پلیت‬ .‫شدند‬ ‫داده‬ ‫کشت‬
‫مناسب‬ ‫شرایط‬ ‫و‬ ‫دما‬ ‫در‬ ‫وارونه‬ ‫صورت‬ ‫به‬ ‫ها‬
‫گرمخانه‬
‫گرمخانه‬ ‫مدت‬ ‫پایان‬ ‫از‬ ‫پس‬ ‫و‬ ‫گذاری‬
‫پلیت‬ ،‫گذاری‬
‫نظر‬ ‫از‬ ‫ها‬
‫شفاف‬ ‫هاله‬ ‫وجود‬
‫سلول‬ ‫هیدرولیز‬ ‫از‬ ‫حاصل‬
‫خونی‬ ‫های‬
‫کلنی‬ ‫اطراف‬ ‫در‬
‫هاله‬ ‫وجود‬ .‫گرفتند‬ ‫قرار‬ ‫بررسی‬ ‫مورد‬ ‫ها‬
‫واکنش‬ ‫دهنده‬ ‫نشان‬ ‫شفاف‬
‫که‬ ‫است‬ ‫بتا‬ ‫نوع‬ ‫همولیز‬ ‫و‬ ‫مثبت‬
‫است‬ ‫نامطلوب‬ ‫ایمنی‬ ‫نظر‬ ‫از‬
.
‫موسین‬ ‫به‬ ‫چسبندگی‬
‫روش‬ ‫از‬ ‫موسین‬ ‫به‬ ‫باکتری‬ ‫اتصال‬ ‫چگونگی‬ ‫بررسی‬ ‫منظور‬ ‫به‬
(
Bengoa et al., 2018
)
‫موسین‬ ،‫مختصر‬ ‫شکل‬ ‫به‬ .‫شد‬ ‫استفاده‬
‫غلظت‬ ‫با‬ )‫آمریکا‬ ،‫(سیگما‬
۳
‫گرم‬
‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬ ‫لیتر‬ ‫در‬
PBS
‫و‬ ‫حل‬
( ‫فیلتراسیون‬
µm
۲۲
/
۰
‫چاهک‬ ‫به‬ ‫اتصال‬ ‫برای‬ ‫سپس‬ ‫و‬ ‫گردید‬ )
‫های‬
‫پلیت‬
۹۶
( ‫استریل‬ ‫استایرن‬ ‫پلی‬ ‫خانه‬
Maxisorp Nunc
،‫راسکیله‬ ،
‫ساعت‬ ‫یک‬ ‫مدت‬ ‫به‬ ‫پلیت‬ ،‫منظور‬ ‫بدین‬ .‫گردید‬ ‫وارد‬ ‫آن‬ ‫در‬ )‫دانمارک‬
‫دمای‬ ‫در‬
۳۷
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫سپس‬ ‫و‬ ‫انکوبه‬ ‫گراد‬
۱۶
‫د‬ ‫در‬ ‫ساعت‬
‫مای‬
۴
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫مدت‬ ‫به‬ ‫مجدد‬ ‫انکوباسیون‬ .‫شد‬ ‫داده‬ ‫قرار‬ ‫گراد‬
۲
‫در‬ ‫ساعت‬
‫دمای‬
۳۷
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫محل‬ ‫تا‬ ‫شد‬ ‫انجام‬ ‫گراد‬
‫در‬ ‫خالی‬ ‫اتصال‬ ‫های‬
‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬ ‫پلیت‬ ،‫نهایت‬ ‫در‬ .‫برسد‬ ‫حداقل‬ ‫به‬ ‫استایرن‬ ‫پلی‬ ‫پلیت‬
۲۰۰
‫میکرولیتر‬
PBS
‫نمونه‬ ‫از‬ ‫لیتر‬ ‫میلی‬ ‫یک‬ .‫شد‬ ‫داده‬ ‫شستشو‬ ‫بار‬ ‫دو‬
‫های‬
‫در‬ ‫شده‬ ‫داده‬ ‫کشت‬ ‫باکتری‬
g
۱۰۰۰
‫در‬ ‫و‬
۱۰
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫به‬ ‫گراد‬
‫مدت‬
5
‫محلول‬ ‫با‬ ‫بار‬ ‫دو‬ ‫شده‬ ‫تشکیل‬ ‫پلت‬ ‫و‬ ،‫سانتریفیوژ‬ ‫دقیقه‬
PBS
‫در‬ ‫باکتری‬ ‫پلت‬ .‫شد‬ ‫داده‬ ‫شستشو‬
۱
‫محلول‬ ‫لیتر‬ ‫میلی‬
PBS
‫حل‬
‫در‬ ‫و‬ ‫اسپکتوفتومتری‬ ‫روش‬ ‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬ ‫سپس‬ ‫و‬ ‫گردید‬
nm
55۰
OD
=
‫باکتری‬ ‫غلظت‬
‫در‬ ‫ها‬
۹
۰
۱
.‫گردید‬ ‫تنظیم‬ ‫کلنی‬ ‫دهنده‬ ‫تشکیل‬ ‫واحد‬
‫سپس‬
۱۰۰
‫چاهک‬ ‫به‬ ‫باکتری‬ ‫هر‬ ‫محلول‬ ‫از‬ ‫میکرولیتر‬
.‫گردید‬ ‫منتقل‬ ‫ها‬
‫مدت‬ ‫به‬ ‫محیط‬
۲
‫دمای‬ ‫در‬ ‫ساعت‬
۳۷
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫گذاری‬ ‫انکوبه‬ ‫گراد‬
‫چاهک‬ .‫شد‬
‫ها‬
۶
‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬ ‫بار‬
۲۰۰
‫محلول‬ ‫میکرولیتر‬
PBS
‫شستشو‬
‫باکتری‬ ‫تا‬ ‫شد‬ ‫داده‬
‫ها‬
‫ی‬
‫پیدا‬ ‫اتصال‬ ‫که‬ ‫ی‬
.‫شوند‬ ‫حذف‬ ‫پلیت‬ ‫از‬ ‫اند‬ ‫نکرده‬
‫ترایتون‬ ‫محلول‬ ‫از‬ ‫میکرولیتر‬ ‫دویست‬
X100
‫غلظت‬ ‫با‬
5
‫میلی‬
‫چاهک‬ ‫در‬ ‫لیتر‬/‫لیتر‬
‫مدت‬ ‫به‬ ‫و‬ ‫شد‬ ‫ریخته‬ ‫ها‬
۳۰
‫در‬ ‫دقیقه‬
۳۷
‫درجه‬
‫سانتی‬
‫باکتری‬ ‫تا‬ ‫گردید‬ ‫انکوبه‬ ‫گراد‬
‫صد‬ .‫شوند‬ ‫آزاد‬ ‫شده‬ ‫متصل‬ ‫های‬
‫در‬ ‫و‬ ‫خارج‬ ‫چاهک‬ ‫هر‬ ‫از‬ ‫میکرولیتر‬
PBS
‫پ‬ ‫روی‬ ‫بر‬ ‫و‬ ‫شد‬ ‫رقیق‬
‫لیت‬
MRS
‫سویه‬ ‫از‬ .‫شد‬ ‫داده‬ ‫کشت‬ ‫آگار‬
‫کلی‬ ‫اشرشیا‬
K12
‫عنوان‬ ‫به‬
‫محیط‬ .‫شد‬ ‫استفاده‬ ‫مثبت‬ ‫کنترل‬
‫مدت‬ ‫به‬ ‫کشت‬ ‫های‬
۴۸
‫در‬ ‫ساعت‬
۳۰
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫صورت‬ ‫کلنی‬ ‫شمارش‬ ‫سپس‬ ‫و‬ ‫شدند‬ ‫داده‬ ‫کشت‬ ‫گراد‬
.‫گرفت‬
‫سلول‬ ‫به‬ ‫چسبندگی‬
‫های‬
Caco‑2
‫جدایه‬ ‫چسبندگی‬ ‫میزان‬
M17
‫سلول‬ ‫به‬
‫اپی‬ ‫های‬
‫مطابق‬ ‫تلیال‬
‫استاندارد‬
۱۹۴5۹
‫شد‬ ‫انجام‬ ‫ایران‬ ‫صنعتی‬ ‫تحقیقات‬ ‫و‬ ‫استانداد‬ ‫مؤسسه‬
(
Iranian National Standard No. 19459. 2014
)
‫سلول‬ .
‫ها‬
‫ی‬
2
-
Caco
‫غلظت‬ ‫با‬
5
۱۰
‫کشت‬ ‫صفحات‬ ‫در‬ ‫چاهک‬ ‫در‬ ‫سلول‬
۱۲
‫چاه‬
‫کی‬
(
Corning® Costar®
،
‫دانمارک‬ ،‫مرک‬
‫به‬ ‫و‬ ‫شدند‬ ‫کاشته‬ )
‫مدت‬
۱5
‫رو‬
‫برا‬ ‫مرطوب‬ ‫اتمسفر‬ ‫در‬ ‫ز‬
‫ی‬
‫رسیدن‬
‫تما‬ ‫به‬
‫ی‬
‫ز‬
‫سلول‬
‫ی‬
‫انکوبه‬
( ‫شدند‬
Briske- Anderson, et al., 1997
‫سلول‬ .)
‫ها‬
‫ی‬
Caco-2
‫به‬
‫مدت‬
۱
‫معرض‬ ‫در‬ ‫ساعت‬
‫تیمار‬
‫سوسپانس‬ ‫با‬
‫ی‬
‫ون‬
‫الکت‬
‫پالنتی‬ ‫ی‬
‫باس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
‫در‬
DMEM
‫آنت‬ ‫بدون‬
‫ی‬
‫ب‬
‫ی‬
‫وت‬
‫ی‬
‫ک‬
(
۸
۱۰
×
5
CFU
/
‫چاه‬
‫ک‬
‫قرار‬ )
‫نها‬ ‫(غلظت‬ ‫فسفات‬ ‫بافر‬ .‫گرفتند‬
‫یی‬
۱۰
‫م‬
‫ی‬
‫ل‬
‫ی‬
‫به‬ )‫موالر‬
‫مخلوط‬
‫ها‬
‫ی‬
‫ت‬
‫ی‬
‫مار‬
‫تا‬ ‫شد‬ ‫اضافه‬
۲
/
۰
±
۳
/
۷
pH
.‫شود‬ ‫حفظ‬
‫تک‬
‫ال‬
‫ی‬
‫ه‬
‫ها‬
‫ی‬
Caco-2
‫با‬
‫محلول‬
‫نمک‬
‫ی‬
‫فسفات‬ ‫بافر‬
Dulbecco
(
DPBS
‫سلول‬ ‫تا‬ ‫شدند‬ ‫شسته‬ )
‫ها‬
‫ی‬
‫باکتر‬
‫ی‬
‫ا‬
‫یی‬
‫غ‬
‫ی‬
‫ر‬
‫متصل‬
‫حذف‬ ،
.‫شوند‬
‫سپس‬
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫های‬
‫چسب‬
‫ی‬
‫ده‬
‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬
۱
‫م‬
‫ی‬
‫ل‬
‫ی‬
‫ل‬
‫ی‬
‫تر‬
DPBS
‫محلول‬ ‫با‬
۱
%
v/v)
‫تریتون‬ )
X-100
‫شد‬ ‫جدا‬
‫ند‬
‫تعداد‬ .
‫باکتر‬
‫ی‬
‫ها‬
‫ی‬
‫پل‬ ‫شمارش‬ ‫روش‬ ‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬ ‫چسبنده‬
‫ی‬
‫ت‬
‫رو‬ ‫بر‬
‫ی‬
‫آگار‬
MRS
‫تع‬
‫یی‬
‫ن‬
‫باکتری‬ ‫درصد‬ ‫صورت‬ ‫به‬ ‫نتایج‬ ‫و‬
‫به‬ ‫نسبت‬ ‫چسبیده‬ ‫های‬
‫باکتری‬ ‫مقدار‬
‫(درصد‬ ‫شده‬ ‫اضافه‬ ‫های‬
CFU
‫باکتری‬
/ ‫چسبیده‬ ‫های‬
CFU
‫باکتری‬
‫های‬
‫شد‬ ‫بیان‬ )‫شده‬ ‫اضافه‬
(
Campana et al., 2017
.)

8. 564
‫جلد‬ ،‫ایران‬ ‫غذایی‬ ‫صنایع‬ ‫و‬ ‫علوم‬ ‫پژوهشهای‬ ‫نشریه‬
19
‫شماره‬ ،
4
،
‫مهر‬
-
‫آبان‬
1402
‫سویه‬ ‫از‬
‫فرمنتوم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
PCC
‫استفاده‬ ‫مثبت‬ ‫کنترل‬ ‫عنوان‬ ‫به‬
‫شد‬
(
Srimahaeak et al., 2021
.)
‫چسبندگی‬ ‫از‬ ‫جلوگیری‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫سلول‬ ‫به‬
‫های‬
CaCo-2
‫آزمون‬
‫با‬ ‫جابجایی‬ ‫و‬ ‫رقابت‬ ،‫حذف‬ ‫شامل‬ ‫کنندگی‬ ‫مهار‬ ‫های‬
‫سویه‬ ‫از‬ ‫استفاده‬
M17
‫سوسپانسیون‬ .‫شد‬ ‫انجام‬
‫سویه‬ ‫باکتریایی‬ ‫های‬
M17
‫و‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫همان‬
،‫شد‬ ‫داده‬ ‫توضیح‬ ‫باال‬ ‫در‬ ‫که‬ ‫طور‬
‫الیه‬ ‫تک‬ ،‫حذف‬ ‫آزمون‬ ‫برای‬ .‫شدند‬ ‫تهیه‬
‫های‬
Caco-2
‫با‬
۱
‫لیتر‬ ‫میلی‬
‫سوسپانسیون‬ ‫از‬
M17
‫مدت‬ ‫به‬
۱
‫با‬ ‫سپس‬ ‫و‬ ‫تیمار‬ ‫ساعت‬
PBS
‫شسته‬
‫باکتری‬ ‫تا‬ ‫شدند‬
،‫مرحله‬ ‫این‬ ‫در‬ .‫شوند‬ ‫حذف‬ ‫چسبنده‬ ‫غیر‬ ‫های‬
۱
‫میلی‬
‫از‬ ‫لیتر‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫تک‬ ‫به‬
‫الیه‬
‫برای‬ ‫سلولی‬ ‫های‬
۳
‫دمای‬ ‫در‬ ‫ساعت‬
۳۷
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫با‬ ‫گراد‬
5
٪
CO2
‫پایان‬ ‫در‬ .‫شد‬ ‫اضافه‬
‫سلول‬ ،‫انکوباسیون‬
‫ها‬
۳
‫الی‬
5
‫با‬ ‫بار‬
PBS
‫تریتون‬ ‫با‬ ‫و‬ ،‫شسته‬
۱۰۰
-
X
(
5
/
۰
٪
‫در‬
PBS
‫سلول‬ ،‫نهایت‬ ‫در‬ .‫شدند‬ ‫لیز‬ )
‫صورت‬ ‫به‬ ‫شده‬ ‫لیز‬ ‫های‬
‫کشت‬ ‫محیط‬ ‫به‬ ،‫شدند‬ ‫رقیق‬ ‫فیزیولوژیکی‬ ‫نمکی‬ ‫محلول‬ ‫در‬ ‫سریالی‬
‫شمارش‬ ‫برای‬ ‫مناسب‬ ‫کشت‬ ‫شرایط‬ ‫در‬ ‫و‬ ‫منتقل‬ ‫آگار‬ ‫حاوی‬
CFU/ml
‫سلول‬ ،‫رقابت‬ ‫آزمون‬ ‫برای‬ .‫شدند‬ ‫انکوبه‬
‫سوسپانسیون‬ ‫معرض‬ ‫در‬ ‫ها‬
‫مخل‬
( ‫وط‬
۱:۱
‫از‬ )
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫و‬
M17
‫از‬ ‫پس‬ .‫گرفتند‬ ‫قرار‬
۳
‫دمای‬ ‫در‬ ‫انکوباسیون‬ ‫ساعت‬
۳۷
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫با‬ ‫گراد‬
5
٪
CO2
‫تک‬ ،
‫الیه‬
‫ها‬
۳
‫الی‬
5
‫با‬ ‫بار‬
PBS
‫تریتون‬ ‫با‬ ‫و‬ ،‫شسته‬
۱۰۰
-
X
(
5
/
۰
٪
‫در‬
PBS
‫سلول‬ ‫سپس‬ .‫شدند‬ ‫لیز‬ )
‫در‬ ‫سریالی‬ ‫صورت‬ ‫به‬ ‫شده‬ ‫لیز‬ ‫های‬
‫ک‬ ‫محیط‬ ‫به‬ ،‫شدند‬ ‫رقیق‬ ‫سالین‬
‫شرایط‬ ‫در‬ ‫و‬ ‫منتقل‬ ‫آگار‬ ‫حاوی‬ ‫شت‬
‫شمارش‬ ‫برای‬ ‫مناسب‬ ‫کشت‬
CFU/ml
‫ارزیابی‬ ‫برای‬ .‫شدند‬ ‫انکوبه‬
‫سویه‬ ‫توانایی‬
M17
‫با‬ ‫جابجایی‬ ‫در‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫باکتری‬ ‫این‬ ،
‫سلول‬ ‫به‬
‫های‬
Caco-2
‫مدت‬ ‫به‬ ‫و‬ ،‫اضافه‬
۳
‫دمای‬ ‫در‬ ‫ساعت‬
۳۷
‫درجه‬
‫سانتی‬
‫پاتوژن‬ ‫حذف‬ ‫و‬ ‫شستشو‬ ‫از‬ ‫پس‬ .‫شد‬ ‫انکوبه‬ ‫گراد‬
،‫متصل‬ ‫غیر‬ ‫های‬
M17
‫چاهک‬ ‫به‬
‫مدت‬ ‫به‬ ‫و‬ ،‫افزوده‬ ‫ها‬
۱
‫دمای‬ ‫در‬ ‫ساعت‬
۳۷
‫درجه‬
‫سانتی‬
‫چاهک‬ ،‫سپس‬ .‫شدند‬ ‫انکوبه‬ ‫گراد‬
‫سلول‬ ‫و‬ ،‫شسته‬ ‫ها‬
‫شدند‬ ‫لیز‬ ‫ها‬
‫باکتری‬ ‫شمارش‬ ‫و‬
‫مهار‬ .‫شد‬ ‫انجام‬ ‫ها‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫عنوان‬ ‫به‬
‫سویه‬ ‫افزودن‬ ‫از‬ ‫بعد‬ ‫و‬ ‫قبل‬ ‫کرونوباکتر‬ ‫چسبندگی‬ ‫بین‬ ‫تفاوت‬
M17
‫محاسب‬
‫شد‬ ‫انجام‬ ‫تکرار‬ ‫چهار‬ ‫در‬ ‫سنجش‬ ‫هر‬ ‫و‬ ‫مستقل‬ ‫آزمون‬ ‫سه‬ .‫شد‬ ‫ه‬
(
Campana et al., 2017
.)
‫چسبندگی‬ ‫از‬ ‫جلوگیری‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫موسین‬ ‫به‬
‫سویه‬ ‫توانایی‬ ‫ارزیابی‬ ‫منظور‬ ‫به‬
M17
،‫رقابت‬ ‫و‬ ‫جابجایی‬ ،‫مهار‬ ‫در‬
‫روش‬
(
Collado et al., 2008b
)
.‫شد‬ ‫استفاده‬ ‫تغییرات‬ ‫برخی‬ ‫با‬
‫چاهک‬
‫همان‬ ‫استایرن‬ ‫پلی‬ ‫های‬
‫طور‬
‫که‬
‫آماده‬ ،‫شد‬ ‫داده‬ ‫توضیح‬ ‫قبال‬
،‫شستشو‬ ‫و‬ ‫انکوباسیون‬ ‫از‬ ‫پس‬ ،‫مهار‬ ‫آزمون‬ ‫برای‬ .‫شدند‬
۱۰۰
‫سلولی‬ ‫سوسپانسیون‬ ‫از‬ ‫میکرولیتر‬
M17
(
CFU/ml
۹
۱۰
-
۸
۱۰
‫به‬ )
‫چاهک‬
‫دمای‬ ‫در‬ ‫و‬ ‫شد‬ ‫اضافه‬ ‫ها‬
۳۷
‫سانتی‬ ‫درجه‬
‫مدت‬ ‫به‬ ‫گراد‬
۱
‫ساعت‬
‫چاهک‬ .‫شد‬ ‫انکوبه‬
‫با‬ ‫بار‬ ‫دو‬ ‫ها‬
PBS
‫حاصل‬ ‫اطمینان‬ ‫و‬ ‫شدند‬ ‫شسته‬
‫چاهک‬ ‫در‬ ‫بافر‬ ‫که‬ ‫شد‬
‫مجموع‬ ‫در‬ .‫است‬ ‫نمانده‬ ‫باقی‬ ‫ها‬
۱۰۰
‫میکرولیتر‬
‫سوسپانسیون‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
(
CFU/ml
۸
۱۰
‫مدت‬ ‫به‬ ‫و‬ ،‫اضافه‬ )
۱
‫روش‬ ،‫جابجایی‬ ‫سنجش‬ ‫برای‬ .‫شد‬ ‫انکوبه‬ ‫ساعت‬
‫انجام‬ ‫الذکر‬ ‫فوق‬
‫اما‬ ،‫شد‬
۱۰۰
‫سوسپانسیون‬ ‫میکرولیتر‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫مدت‬ ‫به‬
۱
‫چاهک‬ ‫به‬ ‫ساعت‬
‫سوسپانسیون‬ ‫با‬ ‫انکوباسیون‬ ‫از‬ ‫قبل‬ ‫و‬ ،‫اضافه‬ ‫ها‬
M17
‫چاهک‬ ،‫رقابت‬ ‫آزمون‬ ‫برای‬ .‫شد‬ ‫شسته‬
‫سوسپانسیون‬ ‫معرض‬ ‫در‬ ‫ها‬
( ‫مخلوط‬
۱:۱
‫از‬ )
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫و‬
M17
‫تمامی‬ ‫در‬ .‫گرفتند‬ ‫قرار‬
‫چاهک‬ ،‫موارد‬
‫ها‬
‫بافر‬ ‫با‬
PBS
‫باکتری‬ ‫و‬ ‫شده‬ ‫شسته‬
‫از‬ ‫پس‬ ‫متصل‬ ‫های‬
‫تریتون‬ ‫افزودن‬
۱۰۰
-
X
(
5
/
۰
٪
‫و‬ ‫مستقل‬ ‫آزمون‬ ‫سه‬ .‫شدند‬ ‫شمارش‬ )
‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬ ‫پاتوژن‬ ‫مهار‬ ‫درصد‬ ‫و‬ ‫انجام‬ ‫تکرار‬ ‫سه‬ ‫در‬ ‫سنجش‬ ‫هر‬
‫فرمول‬
۲
( ‫شد‬ ‫محاسبه‬
Collado et al., 2008b
:)
(۲)
‫و‬ ‫تجزیه‬
‫تحل‬
‫ی‬
‫ل‬
‫آمار‬
‫ی‬
‫آنال‬
‫ی‬
‫زها‬
‫ی‬
‫آمار‬
‫ی‬
‫بسته‬ ‫با‬
R
.‫شد‬ ‫انجام‬
‫آنالیز‬
‫واریانس‬
‫ی‬
‫ک‬
‫و‬ ‫طرفه‬
‫آزمون‬ ‫آن‬ ‫دنبال‬ ‫به‬
( ‫توکی‬
۰5
/
۰
>
P
)
‫برا‬
‫ی‬
‫بررس‬
‫ی‬
‫تفاوت‬
‫ها‬
‫ی‬
‫معن‬
‫ی‬
‫دار‬
‫ب‬
‫ی‬
‫ن‬
‫ت‬
‫ی‬
‫مارها‬
‫چسبندگ‬ ‫سنجش‬ ‫در‬
‫ی‬
.‫گرفت‬ ‫قرار‬ ‫استفاده‬ ‫مورد‬
‫تجز‬
‫ی‬
‫ه‬
‫تحل‬ ‫و‬
‫ی‬
‫ل‬
‫داده‬
‫ها‬
‫دستگاه‬ ‫مشابه‬ ‫شرایط‬ ‫در‬ ‫سویه‬ ‫بقای‬ ‫به‬ ‫مربوط‬ ‫ی‬
‫گوارش‬
‫نرم‬ ‫از‬ ‫استفاده‬ ‫با‬
‫افزار‬
GraphPad Prism 6
.‫شد‬ ‫انجام‬
‫نتایج‬
‫پروبیوتیکی‬ ‫خواص‬ ‫شناسایی‬
‫جدایه‬ ‫بقای‬ ‫میزان‬
M17
‫و‬
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
۸۰۱۴
ATCC
‫زمانی‬ ‫فاصله‬ ‫در‬
۶
‫گوارش‬ ‫دستگاه‬ ‫مشابه‬ ‫شرایط‬ ‫تحت‬ ‫ساعته‬
‫گرفت‬ ‫قرار‬ ‫ارزیابی‬ ‫مورد‬
‫؛‬
‫غذا‬ ‫توده‬ ‫حرکت‬
‫گوارش‬ ‫دستگاه‬ ‫در‬
‫حداقل‬
‫به‬
۶
‫ن‬ ‫زمان‬ ‫ساعت‬
‫ی‬
‫از‬
‫دارد‬
(
Grodner et al., 2021
.)
‫آزمون‬ ‫این‬
‫برابر‬ ‫در‬ ‫مقاومت‬ ‫شامل‬
pH
‫نمک‬ ،‫پپسین‬ ،‫محیط‬ ‫پایین‬
‫صفراوی‬ ‫های‬
‫باکتری‬ ‫انکوباسیون‬ ‫اثر‬ ‫سازی‬ ‫شبیه‬ .‫بود‬ ‫پانکراتین‬ ‫و‬
‫جدایه‬ ‫های‬
M17
‫و‬
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
۸۰۱۴
ATCC
‫در‬ ‫روده‬ ‫و‬ ‫معده‬ ‫شیره‬ ‫با‬
‫شکل‬
۱
.‫است‬ ‫شده‬ ‫آورده‬

9. ،‫همکاران‬ ‫و‬ ‫زاده‬ ‫فاطمی‬
‫اثر‬
‫الکت‬
‫ی‬
‫پالنت‬
‫ی‬
‫باس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
‫پن‬
‫ی‬
‫ر‬
‫موتال‬
‫چسبندگ‬ ‫بر‬
‫ی‬
‫ساکازاک‬ ‫کرونوباکتر‬
‫ی‬
‫سلول‬ ‫به‬
‫ها‬
‫ی‬
‫روده‬
‫ا‬
‫ی‬
565
‫شکل‬
۱
-
‫شب‬
‫ی‬
‫ه‬
‫ساز‬
‫ی‬
‫انکوباس‬ ‫اثر‬
‫ی‬
‫ون‬
‫جدا‬
‫ی‬
‫ه‬
M17
‫و‬
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
۸۰۱۴
ATCC
‫ش‬ ‫در‬
‫ی‬
‫ره‬
‫زمان‬ ‫فاصله‬ ‫در‬ ‫روده‬ ‫و‬ ‫معده‬
‫ی‬
۶
‫ساعته‬
Fig. 1- Effect of incubation of isolate M17 and L. plantarum ATCC 8014 in simulated gastric and intestinal juice for 6 hours
‫جدول‬
۱
-
‫درصد‬
‫زنده‬
‫مان‬
‫ی‬
‫جدا‬
‫ی‬
‫ه‬
‫ها‬
‫ی‬
M17
‫و‬
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
۸۰۱۴
ATCC
‫ش‬ ‫در‬
‫ی‬
‫ره‬
‫زمان‬ ‫فاصله‬ ‫در‬ ‫روده‬ ‫و‬ ‫معده‬
‫ی‬
۶
‫ساعته‬
Table 1- Survival percentage of M17 and L. plantarum ATCC 8014 in simulated gastric and intestinal juice for 6 hours
‫سویه‬
Strain
‫الکت‬
‫پالنتی‬ ‫ی‬
‫پالنتاروم‬ ‫باسیلوس‬
M17
L. plantarum M17
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
۸۰۱۴
ATCC
L. plantarum ATCC 8014
pH 2.5
5
/
۲
4
۴
8 with
initial pH
2.5
۸
‫با‬
pH
‫اولیه‬
5
/
۲
8 with
initial pH 4
۸
‫با‬
pH
‫اولیه‬
۴
2.5
5
/
۲
4
۴
8 with
initial pH
2.5
۸
‫با‬
pH
‫اولیه‬
5
/
۲
8 with
initial pH
4
۸
‫با‬
pH
‫اولیه‬
۴
)‫(ساعت‬ ‫زمان‬
Time (h)
2 2 6 6 2 2 6 6
‫زنده‬ ‫ضریب‬
‫مانی‬
(
٪
)
Survival
rate
1.71

90.55
abcd
5.22

101.76
a
6.43

89.01
bcd
4.86

100.91
ab
2.67

95.79
abcd
2.60

100.52
abc
5.92

87.86
d
2.32

88.63
cd
‫مقاد‬
‫ی‬
،‫ر‬
‫م‬
‫ی‬
‫انگ‬
‫ی‬
‫ن‬
‫سنجش‬
‫سه‬ ‫با‬ ‫ها‬
‫تکرار‬
±
‫انحراف‬
‫معی‬
‫ار‬
.‫هستند‬
a,b,c,d
‫داده‬
‫ها‬
‫ی‬
‫در‬ ‫موجود‬
‫هر‬
‫رد‬
‫ی‬
‫ف‬
‫با‬
‫رو‬
‫نوشت‬
‫ها‬
‫ی‬
‫متفاوت‬
‫اختالف‬
‫معن‬
‫ی‬
‫دار‬
‫دارند‬
(
۰5
/
۰
P <
.)
The data are represented as the mean ± standard deviation with three replicates. a,b,c,d, the data in each row indicate significant
differences with different transcripts (P<0.05)
‫بهترین‬
‫در‬ ‫تیمار‬ ‫و‬ ‫شاهد‬ ‫گونه‬ ‫دو‬ ‫هر‬ ‫برای‬ ‫مانی‬ ‫زنده‬ ‫درصد‬
۴
=
pH
‫در‬ ‫مطالعه‬ ‫مورد‬ ‫گونه‬ ‫دو‬ ‫بین‬ ‫داری‬ ‫معنی‬ ‫تفاوت‬ .‫گردید‬ ‫برآورد‬
۴
pH =
( ‫نداشت‬ ‫وجود‬
۰5
/
۰
P >
)
‫این‬ ‫در‬ ‫نیز‬ ‫جزئی‬ ‫تکثیر‬ ‫حتی‬ ‫و‬
pH
‫از‬ ‫پس‬ .‫پذیرفت‬ ‫صورت‬
۱۲۰
‫در‬ ‫حضور‬ ‫دقیقه‬
5
/
۲
=
pH
‫زنده‬ ‫درصد‬ ،
‫مانی‬
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
۸۰۱۴
ATCC
‫سویه‬ ‫از‬ ‫بیشتر‬
M17
‫معنی‬ ‫تفاوت‬ ‫این‬ ‫ولی‬ ‫گردید‬ ‫برآورد‬
‫نبود‬ ‫دار‬
(
۰5
/
۰
P >
.)
‫طبق‬
‫ایران‬ ‫ملی‬ ‫استاندارد‬
۱۹۴5۹
،‫معده‬ ‫شیره‬ ‫به‬ ‫مقاومت‬ ‫آزمون‬ ‫از‬ ‫پس‬ ،
‫از‬ ‫کمتر‬ ‫نباید‬ ‫شده‬ ‫شمارش‬ ‫تعداد‬
۶
۱۰
( ‫باشد‬
Iranian National
Standard No. 19459. 2014
.)
‫از‬ ‫پس‬
۴
‫باکتری‬ ‫حضور‬ ‫ساعت‬
‫ها‬
‫در‬
۸
pH =
‫جدایه‬ ،
M17
‫زنده‬ ‫درصد‬
‫از‬ ‫باالتری‬ ‫مانی‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫پالنتاروم‬
۸۰۱۴
ATCC
‫از‬ ‫انتقال‬ ‫از‬ ‫پس‬ ‫اختالف‬ ‫این‬ ‫که‬ ‫داد‬ ‫نشان‬ ‫را‬
۴
pH =
‫معنی‬
‫بود‬ ‫دار‬
(
۰5
/
۰
P <
)
(
‫جدول‬
۱
)
‫بر‬ ‫تأییدی‬ ‫نتایج‬ ‫این‬ .
‫جدا‬ ‫مناسب‬ ‫مقاومت‬
‫یه‬
M17
.‫است‬ ‫گوارش‬ ‫دستگاه‬ ‫شرایط‬ ‫به‬ ‫نسبت‬
‫ال‬ ‫هیدرولیز‬ ‫آزمایش‬
-
‫جدایه‬ ‫ایمنی‬ ‫بررسی‬ ‫منظور‬ ‫به‬ ‫آرژنین‬
M17
‫تا‬ ‫زرد‬ ‫از‬ ‫رنگ‬ ‫تغییر‬ ‫با‬ ‫کیفی‬ ‫آزمایش‬ ‫این‬ .‫شد‬ ‫انجام‬ ‫نوزادان‬ ‫برای‬
‫باکتری‬ ‫قرمز‬ ‫به‬ ‫متمایل‬ ‫نارنجی‬
‫می‬ ‫تفکیک‬ ‫ایمن‬ ‫غیر‬ ‫از‬ ‫را‬ ‫ایمن‬ ‫های‬
‫نمونه‬ ‫دو‬ ‫هر‬ ‫که‬ ‫داد‬ ‫نشان‬ ‫مطالعه‬ ‫این‬ ‫در‬ ‫آمده‬ ‫بدست‬ ‫نتایج‬ .‫نماید‬
‫جدایه‬
M17
‫و‬
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
۸۰۱۴
ATCC
‫را‬ ‫زرد‬ ‫رنگ‬
‫باکتری‬ ‫این‬ ‫بودن‬ ‫ایمن‬ ‫بر‬ ‫تأییدی‬ ‫که‬ ‫دادند‬ ‫نشان‬
‫می‬ ‫ها‬
‫این‬ ‫در‬ .‫باشد‬
‫(باکتری‬ ‫مثبت‬ ‫کنترل‬ ‫نمونه‬ ‫به‬ ‫مربوط‬ ‫رنگ‬ ‫آزمایش‬
‫استافیلوکوکوس‬
‫اورئوس‬
۲5۹۲۳
ATCC
.‫شد‬ ‫گزارش‬ ‫قرمز‬ ‫به‬ ‫متمایل‬ ‫نارنجی‬ )
‫و‬ ‫مطالعه‬ ‫مورد‬ ‫جدایه‬ ‫برای‬ ‫انبوهش‬ ‫خود‬ ‫درصد‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫پالنتاروم‬
‫به‬
‫ترتیب‬
۳۸
/
۲۴
‫و‬
۲۸
/
۲5
‫از‬ ‫بعد‬
۶
‫ساعت‬
‫که‬ ‫گردید‬ ‫برآورد‬

10. 566
‫جلد‬ ،‫ایران‬ ‫غذایی‬ ‫صنایع‬ ‫و‬ ‫علوم‬ ‫پژوهشهای‬ ‫نشریه‬
19
‫شماره‬ ،
4
،
‫مهر‬
-
‫آبان‬
1402
‫جدایه‬ ‫و‬ ‫شاهد‬ ‫نمونه‬ ‫بین‬ ‫داری‬ ‫معنی‬ ‫تفاوت‬ ‫آماری‬ ‫لحاظ‬ ‫از‬
M17
( ‫نداشت‬ ‫وجود‬
۰5
/
۰
<
P
‫انبو‬ ‫خود‬ ‫پارامترهای‬ ‫بررسی‬ .)
‫هم‬ ‫و‬ ‫هش‬
‫سویه‬ ‫مناسب‬ ‫توانایی‬ ‫از‬ ‫نشان‬ ‫انبوهش‬
M17
‫مهار‬ ‫در‬
‫کرونوباکتر‬
‫ساکازاکی‬
( ‫داشت‬
‫جدول‬
۲
‫از‬ ‫ما‬ .)
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫رامنوسوس‬
LGG
‫به‬
‫انبوهش‬ ‫خود‬ ‫توانایی‬ ‫باالترین‬ ‫که‬ ‫کردیم‬ ‫استفاده‬ ‫مثبت‬ ‫کنترل‬ ‫عنوان‬
( ‫داد‬ ‫نشان‬ ‫را‬
٪
۳۲
.)
‫آنالیز‬
‫آماری‬
‫بین‬
‫دو‬
‫سویه‬
M17
‫و‬
LGG
‫از‬ ‫نشان‬
‫معنی‬ ‫تفاوت‬
( ‫ندارد‬ ‫آماری‬ ‫دار‬
۰5
/
۰
P >
‫سویه‬ ‫بنابراین‬ .)
M17
‫دارای‬
‫ویژگی‬
‫استاندارد‬ ‫سویه‬ ‫با‬ ‫مشابه‬ ‫انبوهش‬ ‫هم‬ ‫و‬ ‫خودانبوهش‬ ‫های‬
LGG
.‫است‬
‫جدول‬
۲
-
‫سو‬ ‫انبوهش‬ ‫هم‬ ‫و‬ ‫انبوهش‬ ‫خود‬ ‫درصد‬
‫ی‬
‫ه‬
‫ها‬
‫ی‬
M17
‫و‬
LGG
‫با‬
‫کرونوباکتر‬
‫ساکازاک‬
‫ی‬
Table 2- Percentage of auto-aggregation and co-aggregation of M17 and LGG strains with C. sakazakii
‫با‬ ‫انبوهش‬ ‫هم‬
‫ساکازاک‬ ‫کرونوباکتر‬
‫ی‬
‫از‬ ‫پس‬
۶
‫ساعت‬
Co-aggregation after 6 h (%)
‫از‬ ‫پس‬ ‫انبوهش‬ ‫خود‬
۶
‫ساعت‬
Auto-aggregation after 6 h (%)
‫سو‬
‫یه‬
Strain
a
1.96

18.09
a
4.56

24.38
M17
b
1.92

13.22
a
4.06

25.28
‫الکتوباس‬
‫یلوس‬
‫پالنتاروم‬
ATCC 8014
L. plantarum ATCC 8014
a
1.72

21.71
a
1.40

32.00
LGG
‫مقاد‬
‫ی‬
،‫ر‬
‫م‬
‫ی‬
‫انگ‬
‫ی‬
‫ن‬
‫سنجش‬
‫سه‬ ‫با‬ ‫ها‬
‫تکرار‬
±
‫انحراف‬
‫معی‬
‫ار‬
.‫هستند‬
a,b
‫داده‬
‫ها‬
‫ی‬
‫در‬ ‫موجود‬
‫هر‬
‫با‬ ‫ستون‬
‫رو‬
‫نوشت‬
‫ها‬
‫ی‬
‫متفاوت‬
‫اختالف‬
‫معن‬
‫ی‬
‫دار‬
‫دارند‬
(
۰5
/
۰
P <
.)
The data are represented as the mean ± standard deviation with three replicates. a,b, the data in each row indicate significant
differences with different transcripts (P<0.05).
‫آنتی‬ ‫برابر‬ ‫در‬ ‫باکتریایی‬ ‫مقاومت‬ ‫ارزیابی‬ ‫معیارهای‬ ‫روزرسانی‬ ‫به‬
‫بیوتیک‬
‫پانل‬ ،‫رو‬ ‫این‬ ‫از‬ .‫است‬ ‫اهمیت‬ ‫حائز‬ ‫بسیار‬ ‫حیوانات‬ ‫و‬ ‫انسان‬ ‫در‬ ‫ها‬
‫آنتی‬
( ‫بیوتیکی‬
EFSA J 732:1–15
‫افزودنی‬ ‫برای‬ )
‫غذایی‬ ‫مواد‬ ‫یا‬ ‫و‬ ‫ها‬
‫است‬ ‫شده‬ ‫ایجاد‬ ‫دام‬ ‫در‬ ‫استفاده‬ ‫مورد‬
(
European Food Safety
Authority
،
2008
.)
‫آنتی‬ ،‫آزمون‬ ‫برای‬
‫بیوتیک‬
،‫سیلین‬ ‫آمپی‬ ‫های‬
،‫اریترومایسین‬ ،‫استرپتومایسین‬ ،‫کانامایسین‬ ،‫جنتامایسین‬
‫می‬ ‫استفاده‬ ‫کلرامفنیکل‬ ‫و‬ ،‫تتراسایکلین‬ ،‫کلیندامایسین‬
‫نتایج‬ .‫شود‬
‫آزمون‬ ‫مقادیر‬
MIC
‫آنتی‬ ‫حساسیت‬ ‫برای‬
‫سویه‬ ‫بیوتیکی‬
‫های‬
‫برابر‬ ‫در‬ ‫الکتوباسیلوس‬
۱۰
‫آنتی‬
‫در‬ ‫شده‬ ‫آزمایش‬ ‫بیوتیک‬
‫جدول‬
۳
‫مقادیر‬ ‫مرجع‬ ‫سویه‬ .‫است‬ ‫شده‬ ‫آورده‬
MIC
‫مقدار‬ ‫به‬ ‫نسبت‬ ‫کمتری‬
‫رهنمود‬ ‫توسط‬ ‫پیشنهادی‬
EFSA
(
2008
)
‫سویه‬ ‫حال‬ ‫این‬ ‫با‬ .‫داد‬ ‫نشان‬
M17
‫آنت‬ ‫برابر‬ ‫در‬
‫ی‬
‫بیوتیک‬
‫خود‬ ‫از‬ ‫کلیندامایسین‬ ‫و‬ ‫کانامایسین‬ ‫های‬
.‫داد‬ ‫نشان‬ ‫مقاومت‬
‫برای‬ ‫شده‬ ‫تولید‬ ‫الکتیک‬ ‫اسید‬ ‫مقدار‬
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
۸۰۱۴
ATCC
۳۱
/
۰

۹۷
/
۱
‫سویه‬ ‫برای‬ ،
LGG
5۱
/
۰

۹۹
/
۱۳
‫و‬
‫نمونه‬ ‫برای‬
M17
‫برابر‬
۹۷
/
۰

5۴
/
۱۴
‫می‬ ‫لیتر‬ ‫در‬ ‫گرم‬
‫دو‬ ‫هر‬ .‫باشد‬
‫الکتیک‬ ‫اسید‬ ‫نوع‬
D
‫و‬
L
‫نمونه‬ ‫در‬
‫گردید‬ ‫تولید‬ ‫بررسی‬ ‫مورد‬ ‫های‬
(
‫جدول‬
۴
.)
‫جدول‬
۳
-
‫تع‬
‫یی‬
‫ن‬
‫م‬
‫ی‬
‫زان‬
‫حساس‬
‫ی‬
‫ت‬
‫باکتر‬
‫ی‬
‫ها‬
‫ی‬
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
‫و‬ ‫مرجع‬
M17
‫آنت‬ ‫برابر‬ ‫در‬
‫ی‬
‫ب‬
‫ی‬
‫وت‬
‫ی‬
‫ک‬
Table 3- Antibiotic sensitivity of reference strain L. plantarum and M17
ANTIBIOTIC [MIC (𝜇G/ML)]
‫سویه‬
Strain
‫سیلی‬ ‫آمپی‬
‫ن‬
AMP
‫جنتامایسین‬
GEN
‫کانامایسین‬
CAN
‫اریترومایسین‬
ERY
‫کلیندامایسین‬
CLI
‫تتراسایک‬
‫لین‬
TET
‫کلرامفنی‬
‫کول‬
CHL
‫انفصال‬ ‫نقطه‬
*breakpoint
2 16 64 1 2 32 8
‫الکتوباسیلو‬
‫س‬
‫پالنتاروم‬ L.
plantarum
ATCC
14917
0.25 <4 64 0.25 1 16 8
M17 0.5 16 128 0.5 4 16 8
‫مقاد‬ *
‫ی‬
‫ر‬
‫توص‬
‫ی‬
‫ه‬
‫شده‬
EFSA
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
‫هتروفرمانت‬
‫ی‬
‫و‬
.‫است‬ ‫شده‬ ‫ارائه‬ ‫استاندارد‬
*Values are according to EFSA recommendations for heterofermentative L. plantarum strains

11. ،‫همکاران‬ ‫و‬ ‫زاده‬ ‫فاطمی‬
‫اثر‬
‫الکت‬
‫ی‬
‫پالنت‬
‫ی‬
‫باس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
‫پن‬
‫ی‬
‫ر‬
‫موتال‬
‫چسبندگ‬ ‫بر‬
‫ی‬
‫ساکازاک‬ ‫کرونوباکتر‬
‫ی‬
‫سلول‬ ‫به‬
‫ها‬
‫ی‬
‫روده‬
‫ا‬
‫ی‬
567
‫جدول‬
۴
-
‫اس‬ ‫مقدار‬
‫ی‬
‫د‬
‫ها‬
‫ی‬
‫الکت‬
‫ی‬
‫ک‬
‫تول‬
‫ی‬
‫د‬
‫تفک‬ ‫به‬ ‫شده‬
‫ی‬
‫ک‬
‫برا‬
‫ی‬
‫نمونه‬
‫ها‬
‫ی‬
‫و‬ ‫مرجع‬
M17
Table 4- Lactic acid isomers produced by reference strain and M17
‫کل‬ ‫اسید‬ ‫الکتیک‬
Total lactic acid
L
-
‫اسید‬ ‫الکتیک‬
L-lactic acid
D
-
‫اسید‬ ‫الکتیک‬
D-lactic acid
‫سویه‬
Strain
‫لیتر‬ ‫در‬ ‫گرم‬
g/L
‫لیتر‬ ‫در‬ ‫گرم‬
g/L
٪
‫لیتر‬ ‫در‬ ‫گرم‬
g/L
٪
0.99

14.54
0.34

6.73
46.30
0.64

7.80
53.70
M17
0.31

1.97
0.29

1.64
83.11
0.02

0.33
16.89
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
۸۰۱۴
ATCC
L. plantarum ATCC 8014
0.51

13.99
0.44

12.30
87.93
1.06

1.67
12.07
LGG
‫آمین‬ ‫تولید‬
‫باکتری‬ ‫توسط‬ ‫بیوژنیک‬ ‫های‬
‫الکتیک‬ ‫اسید‬ ‫های‬
‫ایزوله‬ ‫تنها‬ ‫و‬ ‫نیست‬ ‫مطلوبی‬ ‫خاصیت‬
‫پروبیوتیک‬ ‫عنوان‬ ‫به‬ ‫منفی‬ ‫های‬
‫شدن‬ ‫مثبت‬ ‫رغم‬ ‫علی‬ ‫که‬ ‫داد‬ ‫نشان‬ ‫بخش‬ ‫این‬ ‫نتایج‬ .‫هستند‬ ‫مناسب‬
‫باکتری‬ ‫آزمون‬ ‫نتایج‬
‫های‬
‫پارابوچنری‬ ‫الکتوباسیلوس‬
KUH8
‫(تولی‬
‫د‬
‫و‬ )‫هیستامین‬ ‫کننده‬
‫برویس‬ ‫الکتوباسیلوس‬
۴۱۲۱
CECT
‫(تولید‬
‫استفاده‬ ‫مثبت‬ ‫کنترل‬ ‫عنوان‬ ‫به‬ ‫مطالعه‬ ‫این‬ ‫در‬ ‫که‬ )‫تیرامین‬ ‫کننده‬
‫نمونه‬ ،‫شدند‬
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
‫ایزوله‬ ‫و‬ ‫مرجع‬
M17
‫محیط‬ ‫در‬
‫پیش‬ ،‫کشت‬
( ‫نکردند‬ ‫تولید‬ ‫را‬ ‫بیوژنیک‬ ‫آمین‬ ‫سازهای‬
‫شکل‬
۲
.)
‫م‬
‫ایمنی‬ ‫الزامات‬ ‫طابق‬
EFSA
‫نمونه‬ ،
M17
‫فعالیت‬ ‫فاقد‬ ‫مرجع‬ ‫و‬
‫مثبت‬ ‫کنترل‬ ‫نمونه‬ ‫که‬ ‫حالی‬ ‫در‬ ،‫بودند‬ ‫بتاهمولتیک‬
‫استافیلوکوکوس‬
‫اورئوس‬
۲5۹۲۳
ATCC
.‫داد‬ ‫نشان‬ ‫را‬ ‫همولتیکی‬ ‫فعالیت‬
‫سویه‬ ‫که‬ ‫کرد‬ ‫تایید‬ ‫نیز‬ ‫موسین‬ ‫به‬ ‫اتصال‬ ‫چگونگی‬ ‫بررسی‬
M17
( ‫کمتری‬ ‫چسبندگی‬
a
۱۴
/
۱
±
۱۰
/
۱۲
٪
)
‫به‬ ‫نسبت‬
‫الکتوباسیلوس‬
‫پالنتاروم‬
۸۰۱۴
ATCC
(
a
۳۰
/
۲
±
۳۳
/
۱۳
٪
‫و‬ )
LGG
(
a
۰۶
/
۲
±
۹۳
/
۱5
٪
‫اختالف‬ ‫این‬ ‫آماری‬ ‫لحاظ‬ ‫از‬ ‫که‬ ‫هرچند‬ ،‫دارد‬ )
‫معنی‬ ‫ها‬
‫دار‬
( ‫نبودند‬
۰5
/
۰
P >
‫کنترل‬ ‫نمونه‬ ‫در‬ ‫چسبندگی‬ ‫میزان‬ ،‫حال‬ ‫این‬ ‫با‬ .)
( ‫مثبت‬
b
۴۰
/
۴
±
۱۹
/
۲5
‫اختالف‬ ‫آماری‬ ‫لحاظ‬ ‫از‬ ‫که‬ ‫گردید‬ ‫برآورد‬ )
‫معنی‬
‫داری‬
‫سویه‬ ‫سایر‬ ‫با‬
‫دارد‬ ‫ها‬
(
۰5
/
۰
P <
)
(
‫جدول‬
5
)
.
‫ایمنی‬ ‫الزامات‬ ‫از‬ ‫دیگر‬ ‫یکی‬
EFSA
‫به‬ ‫باکتری‬ ‫چسبندگی‬ ‫بررسی‬ ،
‫سلول‬
‫های‬
CaCo-2
‫داد‬ ‫نشان‬ ‫آزمون‬ ‫این‬ ‫از‬ ‫آمده‬ ‫دست‬ ‫به‬ ‫نتایج‬ .‫است‬
‫به‬ ،‫مثبت‬ ‫کنترل‬ ‫با‬ ‫مقایسه‬ ‫در‬ ،‫مطالعه‬ ‫این‬ ‫در‬ ‫شده‬ ‫بررسی‬ ‫ایزوله‬ ‫که‬
‫معنی‬ ‫شکل‬
( ‫کمتری‬ ‫چسبندگی‬ ‫درصد‬ ‫داری‬
b
۴۱
/
۱
±
۸
/
۶
)
‫سلول‬ ‫با‬
‫های‬
CaCo-2
‫داشت‬
(
۰5
/
۰
P <
‫نمونه‬ ‫برای‬ ‫مقدار‬ ‫این‬ .)
‫پالنتاروم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
( ‫مرجع‬
ab
5۳
/
۳

۷۷
/
۱۳
‫نمونه‬ ‫و‬ )
‫فرمنتوم‬ ‫الکتوباسیلوس‬
PCC
(
a
5۴
/
۷

۶
/
۲۱
‫گردید‬ ‫برآورد‬ )
(
‫جدول‬
۶
)
.
‫بررسی‬
‫سویه‬ ‫چسبندگی‬ ‫بازدارندگی‬
‫پروبیوتیک‬ ‫های‬
M17
‫و‬
LGG
‫سویه‬ ‫توان‬ ‫از‬ ‫نشان‬ ‫جایی‬ ‫جابه‬ ‫و‬ ‫رقابت‬ ،‫حذف‬ ‫روش‬ ‫سه‬ ‫در‬
‫چسبندگی‬ ‫کاهش‬ ‫در‬ ‫مطالعه‬ ‫مورد‬ ‫های‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫سلول‬ ‫به‬
‫های‬
CaCo-2
( ‫بود‬
‫جدول‬
۷
‫سویه‬ .)
LGG
‫باالتری‬ ‫بازدارندگی‬ ‫درصد‬
‫حذف‬ ‫روش‬ ‫با‬ ‫را‬
‫سویه‬ ‫و‬ ،‫داد‬ ‫نشان‬
M17
‫کمترین‬ ‫جابجایی‬ ‫روش‬ ‫با‬
‫تفاوت‬ ،‫نتایج‬ ‫آماری‬ ‫آنالیز‬ ،‫حال‬ ‫این‬ ‫با‬ .‫داشت‬ ‫را‬ ‫بازدارندگی‬ ‫درصد‬
‫نمی‬ ‫نشان‬ ‫یکسان‬ ‫بازدارندگی‬ ‫روش‬ ‫با‬ ‫سویه‬ ‫دو‬ ‫بین‬ ‫داری‬ ‫معنی‬
‫دهد‬
(
۰5
/
۰
P >
‫عملکرد‬ ،‫رو‬ ‫این‬ ‫از‬ .)
M17
‫استاندارد‬ ‫پروبیوتیک‬ ‫با‬ ‫مشابه‬
LGG
‫می‬
.‫باشد‬
‫بررسی‬
‫سویه‬ ‫چسبندگی‬ ‫بازدارندگی‬
‫پروبیوتیک‬ ‫های‬
M17
‫و‬
LGG
‫سویه‬ ‫توانایی‬ ‫جایی‬ ‫جابه‬ ‫و‬ ‫رقابت‬ ،‫مهار‬ ‫روش‬ ‫سه‬ ‫در‬
‫مورد‬ ‫های‬
‫چسبندگی‬ ‫کاهش‬ ‫در‬ ‫مطالعه‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫را‬ ‫موسین‬ ‫به‬
( ‫داد‬ ‫نمایش‬
‫جدول‬
۸
‫معنی‬ ‫تفاوت‬ ‫نتایج‬ ‫آماری‬ ‫آنالیز‬ .)
‫سویه‬ ‫بین‬ ‫داری‬
M17
‫س‬ ‫و‬
‫استاندارد‬ ‫ویه‬
LGG
‫نمی‬ ‫نشان‬
( ‫دهد‬
۰5
/
۰
P >
‫این‬ ‫از‬ .)
،‫رو‬
‫عملکرد‬
M17
‫استاندارد‬ ‫پروبیوتیک‬ ‫با‬ ‫مشابه‬
LGG
‫می‬
.‫باشد‬
‫جدول‬
۵
-
‫درصد‬
‫چسبندگ‬
‫ی‬
‫سو‬
‫ی‬
‫ه‬
M17
‫سویه‬ ‫و‬
‫مرجع‬ ‫های‬
‫موس‬ ‫به‬
‫ی‬
‫ن‬
of M17 and reference strains
Table 5- Mucin adhesion
‫اشرش‬
‫ی‬
‫ا‬
‫کل‬
‫ی‬
E. coli
K12
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
ATCC
8014
L. plantarum ATCC 8014
M17
‫سو‬
‫ی‬
‫ه‬
Strain
25.19 ±
4.40 a
b
2.30
±
13.33
b
1.14
±
12.10
‫چسبندگ‬
‫ی‬
‫به‬
‫موس‬
‫ی‬
‫ن‬
(
٪
)
Mucin adhesion
‫جدول‬
۶
-
‫درصد‬
‫چسبندگ‬
‫ی‬
‫سو‬
‫ی‬
‫ه‬
M17
‫مرجع‬ ‫های‬ ‫سویه‬ ‫و‬
‫سلول‬ ‫به‬
‫ها‬
‫ی‬
CaCo-2
of M17 and reference strains
Table 6- Caco-2 adhesion
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫فرمنتوم‬
L. fermentum PCC
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پالنتاروم‬
ATCC 8014
L. plantarum ATCC 8014
M17
‫سو‬
‫ی‬
‫ه‬
Strain
21.6 ± 7.54 a
13.77 ± 3.53 ab
6.8 ± 1.41 b
‫چسبندگ‬
‫ی‬
‫به‬
‫سلول‬
‫ها‬
‫ی‬
adhesion
CaCo-2
(
٪
)

12. 568
‫جلد‬ ،‫ایران‬ ‫غذایی‬ ‫صنایع‬ ‫و‬ ‫علوم‬ ‫پژوهشهای‬ ‫نشریه‬
19
‫شماره‬ ،
4
،
‫مهر‬
-
‫آبان‬
1402
‫جدول‬
۷
-
‫چسبندگ‬ ‫کاهش‬ ‫درصد‬
‫ی‬
‫ساکازاک‬ ‫کرونوباکتر‬
‫ی‬
‫سلول‬ ‫به‬
‫ها‬
‫ی‬
CaCo-2
‫تأث‬ ‫تحت‬
‫ی‬
‫ر‬
‫سو‬
‫ی‬
‫ه‬
‫ها‬
‫ی‬
M17
‫و‬
LGG
Table 7- Reduction of C. sakazakii adhesion to CaCo-2 cells under the influence of M17 and LGG strains
‫جابجا‬
‫یی‬
Displacement
‫رقابت‬
Competition
‫حذف‬
Exclusion
‫روش‬
‫بازدارندگ‬
‫ی‬
Antagonism
method
b
5.22

9.86
ab
4.60

17.21
ab
4.55

19.10
M17
‫سو‬
‫ی‬
‫ه‬
Strain
ab
5.70

15.71
a
7.41

23.42
a
5.45

25.61
LGG
‫جدول‬
۸
-
‫چسبندگی‬ ‫کاهش‬ ‫درصد‬
‫ساکازاکی‬ ‫کرونوباکتر‬
‫سویه‬ ‫تأثیر‬ ‫تحت‬ ‫موسین‬ ‫به‬
‫های‬
M17
‫و‬
LGG
Table 8- Reduction of C. sakazakii adhesion to mucin under the influence of M17 and LGG strains
‫جابجایی‬
DISPLACEMENT
‫رقابت‬
COMPETITION
‫مهار‬
INHIBITION
‫بازدارندگی‬ ‫روش‬
Antagonism method
b
4.81

12.44
b
3.90

17.31
b
7.06

14.72
M17
Strain ‫سویه‬ b
4.32

17.53
a
6.23

35.65
ab
2.81

24.47
LGG
‫شکل‬
۲
-
‫بررس‬
‫ی‬
‫تول‬
‫ی‬
‫د‬
‫آم‬
‫ی‬
‫ن‬
‫ها‬
‫ی‬
‫ب‬
‫ی‬
‫وژن‬
‫ی‬
‫ک‬
‫گونه‬ ‫در‬
‫ها‬
‫ی‬
‫مطالعه‬ ‫مورد‬
‫باکتر‬
‫ی‬
‫ها‬
‫ی‬
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫پارابوچنر‬
‫ی‬
KUH8
‫(تول‬
‫ی‬
‫د‬
‫ه‬ ‫کننده‬
‫ی‬
‫ستام‬
‫ی‬
‫ن‬
‫و‬ )
‫الکتوباس‬
‫ی‬
‫لوس‬
‫برو‬
‫ی‬
‫س‬
۴۱۲۱
CECT
‫(تول‬
‫ی‬
‫د‬
‫ت‬ ‫کننده‬
‫ی‬
‫رام‬
‫ی‬
‫ن‬
‫نظر‬ ‫در‬ ‫مثبت‬ ‫کنترل‬ ‫عنوان‬ ‫به‬ )
‫شده‬ ‫گرفته‬
.‫اند‬
Fig. 2- Production of biogenic amines in the studied species
Lactobacillus parabucheneri KUH8 (histamine producer) and L. brevis CECT 4121 (tyramine producer) were used as positive
controls
‫بحث‬
‫پروبیوتیک‬
‫که‬ ‫جایی‬ ،‫باشند‬ ‫معده‬ ‫از‬ ‫عبور‬ ‫به‬ ‫قادر‬ ‫باید‬ ‫ها‬
pH
‫می‬
‫تا‬ ‫تواند‬
۰
/
۳

‫مدت‬ ‫به‬ ‫و‬ ‫باشد‬ ‫پایین‬
۲
‫الی‬
۴
‫بمانند‬ ‫زنده‬ ‫ساعت‬
(
Liong, 2005
and
Shah
)
‫عبور‬ ‫به‬ ‫قادر‬ ‫باید‬ ‫آنها‬ ،‫ترتیب‬ ‫همین‬ ‫به‬ .
‫نمک‬ ‫مقادیر‬ ‫آن‬ ‫در‬ ‫که‬ ،‫دوازدهه‬ ‫از‬
‫می‬ ‫صفراوی‬ ‫های‬
‫تا‬ ‫تواند‬
۷
/
۰
٪
‫باال‬
‫باشد‬
( ‫بمانند‬ ‫زنده‬ ،
Barrett et al., 2009
‫شرایط‬ ‫این‬ ‫در‬ ‫ماندن‬ ‫زنده‬ .)
‫پروبیوتیک‬ ،‫گوارشی‬ ‫سخت‬
‫می‬ ‫قادر‬ ‫را‬ ‫ها‬
‫روده‬ ‫به‬ ‫زنده‬ ‫تا‬ ‫سازد‬
‫باریک‬
‫به‬ ‫مقاومت‬ .‫سازند‬ ‫آشکار‬ ‫را‬ ‫خود‬ ‫فواید‬ ‫و‬ ‫شوند‬ ‫مستقر‬ ‫آن‬ ‫در‬ ،‫برسند‬
‫ف‬ ‫و‬ ‫استقرار‬ ‫برای‬ ‫نیاز‬ ‫پیش‬ ‫یک‬ ‫صفرا‬
‫پروبیوتیک‬ ‫متابولیکی‬ ‫عالیت‬
‫در‬ ‫ها‬
‫روده‬
‫باریک‬
( ‫است‬
Singhal et al., 2010
‫نمک‬ .)
‫صفراوی‬ ‫های‬
‫میکروارگانیسم‬ ‫از‬ ‫برخی‬ ‫علیه‬ ‫میکروبی‬ ‫ضد‬ ‫اثرات‬ ‫دارای‬
‫هستند‬ ‫ها‬
(
Fontana et al., 2013
)
‫دهند‬ ‫کاهش‬ ‫را‬ ‫رشد‬ ‫سرعت‬ ‫است‬ ‫ممکن‬ ‫و‬
‫ﻻ‬
‫ﮐ‬
‫ﺗ‬
‫و‬
‫ﺑ‬
‫ﺎ‬
‫ﺳ‬
‫ﯾ‬
‫ﻠ‬
‫و‬
‫س‬
‫ﭘ‬
‫ﺎ‬
‫ر‬
‫ا‬
‫ﺑ‬
‫و‬
‫ﭼ‬
‫ﻧ‬
‫ر‬
‫ی‬
KUH8
‫ﻻ‬
‫ﮐ‬
‫ﺗ‬
‫و‬
‫ﺑ‬
‫ﺎ‬
‫ﺳ‬
‫ﯾ‬
‫ﻠ‬
‫و‬
‫س‬
‫ﺑ‬
‫ر‬
‫و‬
‫ﯾ‬
‫س‬
۴١٢١
CECT
‫ﻻ‬
‫ﮐ‬
‫ﺗ‬
‫و‬
‫ﺑ‬
‫ﺎ‬
‫ﺳ‬
‫ﯾ‬
‫ﻠ‬
‫و‬
‫س‬
‫ﭘ‬
‫ﻼ‬
‫ﻧ‬
‫ﺗ‬
‫ﺎ‬
‫ر‬
‫و‬
‫م‬
٨٠١۴
ATCC
M17