Downloaded 119 times
![Order Registration Set-up and
Analysis
1.
Masukkan no. rak dan pilih
posisi pada rak untuk order
sampel.
2.
Tekan [Order Entry] untuk
register sampel rutin. Order
Entry dialog box muncul
3.
Pilih [Ordinary sample].
4.
Masukkan [sample ID #]
5.
Pilih parameter yang akan
diperiksa.
6.
Tekan [Ok].
7.
Tekan [Register]. Order akan
masuk ke Joblist screen.
8.
Tekan [Start] untuk start
running sampel.
04/12/2013
Tutor Hematologi
39](https://image.slidesharecdn.com/tutor2-131203185215-phpapp01/85/Tutor-2-39-320.jpg)
![A paraprotein is an immunoglobulin or
immunoglobulin light-chain that is produced in excess
by the clonal proliferation of plasma cells. Detection
of paraproteins in the urine or blood is most often
associated with benign MGUS (monoclonal
gammopathy of undetermined significance), where
they remain "silent",[1] and multiple myeloma. An
excess in the blood is known as paraproteinemia.
Paraproteins are also referred to as "M proteins,"
where the "M" stands for "monoclonal."
http://en.wikipedia.org/wiki/Paraprotein 250213 03:20
04/12/2013
Tutor Hematologi
41](https://image.slidesharecdn.com/tutor2-131203185215-phpapp01/85/Tutor-2-41-320.jpg)
More Related Content
Tutor 2
- 1. Tutor Hematologi PEMERIKSAAN FIBRINOGEN METODECLAUSS Arief Sukma H/ Arifoel Hajat 04/12/2013 Tutor Hematologi 1
- 2. PENDAHULUAN Fibrinogen : Terdiri dari3 pasang rantai polipeptida : - Aα (BM 66.500) → 610 asam amino - Bβ (BM 52.000) →461 asam amino - γ (BM 46.500) →411 asam amino Dihubungkan : - Ikatan disulfida → molekul yg simetris → 2 domain D → berbentuk helik. Tutor Hematologi 04/12/2013 2
- 3. Gambar 1. Gambaranmolekul fibrinogen secara skematis 04/12/2013 Tutor Hematologi 3
- 4. Fibrinogen Suatu glikoprotein yanglarut dalam plasma → BM 340.000 kilo dalton Terdapat : - Plasma dan trombosit Sintesa : - Di hati Konsentrasi : - 150-450 mg/dl 04/12/2013 Tutor Hematologi 4
- 5. Bagan proses fibrinolisis Plasminogen ↓ ←aktivator plasminogen Plasmin + antiplasmin →kompleks Plasmin +antiplasmin Fibrinogen fibrin ↓ ↓ fibrinogen fibrinogen degradation degradation product product (FDP) (FDP) 04/12/2013 Tutor Hematologi 5
- 6. Fibrinogen Fungsi : - prosestrombosis - meningkatkan viskositas darah →memacu terbentuknya plak ateromatosus dan trombosis. Peningkatan konsentrasi fibrinogen : - hipertensi - kehamilan - aterosklerosis - usia, wanita, pasca menopause, merokok, keganasan 04/12/2013 Tutor Hematologi 6
- 7. Fibrinogen Penurunan konsentrasi fibrinogen: - perdarahan - hepatitis virus - penyakit ginjal akut - DIC - penggunaan obat-obatan (mis: tiklopidin) 04/12/2013 Tutor Hematologi 7
- 8. Pemeriksaan konsentrasi fibrinogen Jenis pemeriksaan: - Konvensional : - Clauss assay - PT-Fg - Protein clottable - Immunologi assay 04/12/2013 Tutor Hematologi 8
- 9. Pemeriksaan konsentrasi fibrinogen - Otomatis : -Blood coagulation analyzer CS - 2100i 04/12/2013 Tutor Hematologi 9
- 10. Clauss assay Prinsip : -penambahan larutan trombin kuat pada plasma (yang diencerkan) menghasilkan bekuan darah (fibrin). Nilai rujukan : - 136-384 mg/dl 04/12/2013 Tutor Hematologi 10
- 11. Reagensia reagen trombin : -mengandung lyophilized bovine thrombin 100 NIH unit 2. Owren veronal buffer (OVB) 3. kalibrator fibrinogen (standar human plasma) 4. PPP plasma dan kontrol 1. 04/12/2013 Tutor Hematologi 11
- 12. Metode Pemeriksaan 1. Pemeriksaan kadarfibrinogen buat pengenceran PPP pasien 1:10 ↓ ambil 0,2 ml ↓ tambahkan 0,1 ml larutan trombin catat masa pembekuan 04/12/2013 Tutor Hematologi 12
- 13. Metode Pemeriksaan 2. Pembuatankurva standar fibrinogen ◦ buat pengenceran plasma kalibrasi dalam OVB (Owren’sVeronal Buffer) 1:5, 1:10, 1:20, 1:40 ◦ dari tiap pengenceran : ambil 0,2 ml untuk dihangatkan 37⁰ C ◦ tambahkan 0,1 ml larutan trombin ◦ ukur masa pembekuan ◦ buat grafik pada kertas double log : - sumbu X : konsentrasi fibrinogen (mg/dl ) - sumbu Y : masa pembekuan (detik) 04/12/2013 Tutor Hematologi 13
- 14.
- 15. Metode Pemeriksaan 3. Pemeriksaanplasma pasien - masukkan 200 µL PPP yang telah diencerkan 1 : 10 ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 100 µL reagen trombin (15-25ºC), tekan stopwatch. - setelah plasma membeku, stopwatch ditekan kembali lamanya plasma membeku dicatat. - dengan menggunakan kurva standar kadar fibrinogen dapat dibaca. 04/12/2013 Tutor Hematologi 15
- 16. Clauss assay PP P OV B Ambil 0,2 ml 0,1ml larutan trombin Sentrif. 3000 rpm, 5-10 mnt Catat masa pembekuan Inkubasi 37˚C 04/12/2013 Tutor Hematologi 16
- 17. Preanalytical error pemilihan tabungtidak tepat (seharusnya tabung bertutup biru volume darah kurang perbandingan darah dan sitrat tidak tepat darah hemolisis, beku, ikterik, lipemik tabung pengumpulan dan penyimpanan terkontaminasi (air, debu, deterjen) 04/12/2013 Tutor Hematologi 17
- 18. Analytical error Penyiapan larutantrombin tidak tepat : ◦ kontaminasi bufer atau reagen ◦ rekonstitusi dengan volume bufer tidak tepat ◦ larutan trombin langsung dipakai setelah kaluar dari freezer ◦ kerusakan reagen trombin komersial ◦ penyimpanan pada suhu ≥ 8⁰ C 04/12/2013 Tutor Hematologi 18
- 19. Analytical error lama inkubasitidak tepat suhu, pH, dan volume buffer tidak sesuai prosedur alat tidak diikuti terdapat paraprotein konsentrasi tinggi FDP konsentrasi tinggi heparin konsentrasi tinggi 04/12/2013 Tutor Hematologi 19
- 20. PT-Fg Prinsip pemeriksaan : -mengukur perubahan kerapatan optik dari berbagai pengenceran plasma dengan kadar fibrinogen yang diketahui. - perubahan optik untuk setiap tingkat fibrinogen yang berbeda diplot sebagai kurva kalibrasi. - pemeriksaan ini tidak direkomendasikan untuk pemeriksaan laboratorium rutin. 04/12/2013 Tutor Hematologi 20
- 21. Clottable protein Pemeriksaan inidisebut juga cara Gravimetri, prinsip kerja : - fibrinogen akan berubah menjadi bekuan fibrin dengan penambahan larutan trombin dan calcium chloride. - bekuan yang dihasilkan mempunyai berat yang dapat ditimbang setelah dicuci dan dikeringkan. Tidak direkomendasikan untuk penggunaan rutin : - sulit dilakukan secara teknis, - membutuhkan kemampuan tinggi, - waktu yang relatif lebih lama. 04/12/2013 Tutor Hematologi 21
- 22. Immunological assay Prinsip pemeriksaan: - sandwich Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) 04/12/2013 Tutor Hematologi 22
- 23. Immunological assay Sandwich Elisa 04/12/2013 TutorHematologi 23
- 24. Immunological assay Sandwich Elisa: 1. lempeng dilapisi dengan capture antibody 2. sampel ditambahkan, dan antigen mengikat capture antibody 3. pengenal antibodi ditambahkan, dan mengikat antigen 4. enzyme-linked antibodi kedua ditambahkan, sehingga berikatan untuk mendeteksi antibodi 5. substrat ditambahkan dan diubah oleh enzim ke bentuk yang dapat dideteksi pada panjang gelombang 450 nm 04/12/2013 Tutor Hematologi 24
- 25. Pemeriksaan fibrinogen dengan CS-2100i Prinsipkerja : → sama dengan teknik Clauss assay Bekuan fibrin yang terbentuk dideteksi dengan multi-wavelength detection system pada λ = 660 nm. 04/12/2013 Tutor Hematologi 25
- 26. Gambar kurva koagulasisecara skematik 04/12/2013 Tutor Hematologi 26
- 27. Increase of Scattered Light Scattered Light Coagulation Coagulation LightDetector Light Source Decrease of Transmitted Light Transmit ted Light Light Source Coagulation Coagulation Light Detector Gambar sistem deteksi secara optikal 04/12/2013 Tutor Hematologi 27
- 28. Multi-wavelength Filter 340nm 405nm 575nm 660nm Photo acceptanceunit 800nm Lamp Unit Multi-Wavelength Filter Optical Fiber 04/12/2013 Tutor Hematologi 28
- 29. Prosedur siapkan PPP dengansentrifugasi darah sitrat 3000 rpm selama 5 - 10 menit tabung diletakkan pada rak khusus tempatkan pada tempat sampler pada CS-2100i lakukan order entry pada komputer 04/12/2013 Tutor Hematologi 29
- 30. Order Registration Set-upand Analysis CS-2100i akan menjalankan proses pengukuran fibrinogen secara otomatis hasil dapat dibaca di layar komputer clotting: 405, 660, 800 nm 04/12/2013 Tutor Hematologi 30
- 31. Nilai rujukan CS-2100i Fibrinogen: 215,8 – 348,4 mg/dl 04/12/2013 Tutor Hematologi 31
- 32. Sample Quality CheckFunction HIL DETECTOR enables Sample Quality Check Function using the Multiwavelength Detection System. Check the presence of interfering substances* H : Hemolytic I : Icteric L : Lipemic Labs is alerted of a sample quality User definable setting Multi-Wavelength Detector Aliquot Lamp unit HIL Detector 04/12/2013 Tutor Hematologi 32
- 33. Multi-wavelength Filter Sampel yang: 1. hemolisis → kadar hemoglobin hingga 75 mg/dl tidak berdampak pada kadar fibrinogen 2. ikterik → kadar bilirubin hingga 1,93 mg/dl tidak berdampak pada kadar fibrinogen. 3. lipemik → kadar trigliserid hingga 501,0 mg/dl tidak berdampak pada kadar fibrinogen. 04/12/2013 Tutor Hematologi 33
- 34.
- 35. Natrium Sitrat Trisodium citrate= anti koagulan untuk hampir semua pemeriksaan faal hemostasis - Lar.0.109 M(3.2%) atau 0.129 M (3.8%) - - Keuntungan memakai sitrat : * stabilitas ‘faktor-labil’ V dan VIII * sensitif thdp efek heparin → dipakai utk monitoring terapi heparin * ion Ca lebih cepat dinetralkan 04/12/2013 Tutor Hematologi 35
- 36. Larutan sitrat 0,109M → pH > 8,0 bila dicampur darah → pelepasan CO dan ↑ pH darah → denaturasi FV dan F VIII. → dipakai antikoagulan sitrat : - Campuran na sitrat dan asam sitrat → pH 5,8 → camp terbaik jk pH 7,4 - Antikoagulan sitrat + HEPES ( N-2hydroxyethyi piperazine N-2-ethane sulphoric acid) 04/12/2013 Tutor Hematologi 36
- 37. OVB Owren’s Veronal Buffer Komposisi : 2.84 x 10² M sodium barbital dalam 1.25 x 10¯¹ M NaCl pH : 7.35 ± 0.1 04/12/2013 Tutor Hematologi 37
- 38. Oxalat : faktorV dan VIII tak stabil Heparin dan EDTA menghambat proses koagulasi secara langsung dan mengganggu penentuan endpoint Perbandingan sitrat dan darah = 1 : 9 04/12/2013 Tutor Hematologi 38
- 39. Order Registration Set-upand Analysis 1. Masukkan no. rak dan pilih posisi pada rak untuk order sampel. 2. Tekan [Order Entry] untuk register sampel rutin. Order Entry dialog box muncul 3. Pilih [Ordinary sample]. 4. Masukkan [sample ID #] 5. Pilih parameter yang akan diperiksa. 6. Tekan [Ok]. 7. Tekan [Register]. Order akan masuk ke Joblist screen. 8. Tekan [Start] untuk start running sampel. 04/12/2013 Tutor Hematologi 39
- 40. The relationship betweenrpm and RCF : RCF = 1.12 x 10⁻⁵ x r x (rpm)² RCF : relative centrifugal force (g =gravities) r : radius of centrifuge (cm) 1.12 x 10⁻⁵ is an empirical factor rpm : revolutions per minute (speed) (Kaplan LA, Clinical chemistry 5th ed : 21) 04/12/2013 Tutor Hematologi 40
- 41. A paraprotein isan immunoglobulin or immunoglobulin light-chain that is produced in excess by the clonal proliferation of plasma cells. Detection of paraproteins in the urine or blood is most often associated with benign MGUS (monoclonal gammopathy of undetermined significance), where they remain "silent",[1] and multiple myeloma. An excess in the blood is known as paraproteinemia. Paraproteins are also referred to as "M proteins," where the "M" stands for "monoclonal." http://en.wikipedia.org/wiki/Paraprotein 250213 03:20 04/12/2013 Tutor Hematologi 41
- 42. M-protein Also called monoclonalprotein, monoclonal immunoglobulin, myeloma protein, or M- spike. In myeloma, a single B- lymphocyte in the bone marrow undergoes a genetic mutation which causes it to over produce plasma cells in an uncontrolled manner. These clone plasma cells will continue to produce the same immunoglobulin proteins as the original cancerous cell in large quantities. As a result, an excessive amount of a single type of immunoglobulin is created. The accumulation of this single variety of immunoglobulin is called the M-protein. 04/12/2013 Tutor Hematologi 42
- 43. Measurement Principle Sample dispensing Reagentaddition Reaction curve Incubation Primary tube Cuvette Detection Mixing Light is shined onto the sample and reagent mixture. Changes in transmitted light are detected during the process of •Change in turbidity when fibrinogen is converted into fibrin (clotting assays) •Color emission by a chromogenic synthetic substrate (chromogenic assays) •Latex agglutination by antigen-antibody reaction (immunoassays) 04/12/2013 Tutor Hematologi 43
- 44. THROMBIN TIME (TT)= Masa Trombin PRINSIP : Terjadi pembekuan o.k.adanya perubahan langsung dari Fibrinogen menjadi Fibrin dengan pemberian langsung Trombin pada plasma. (trombin 1,5 IU/ml ) 04/12/2013 Tutor Hematologi 44
- 45. TT = TROMBINTIME : Memanjang pada : • Hipofibrinogemia • Kadar FDP >> • Adanya inhibitor : Heparin Memanjang jika kadar fibrinogen <100 mg/dl 04/12/2013 Tutor Hematologi 45
- 46. Interpretasi hasil padaClauss assay Inherited disfibrinogenemia : selalu rendah Terjadi interferensi jika : ◦ Heparin > 0,8 u/ml ◦ FDP > 190 µg/ml Pada dugaan gangguan fibrinogen herediter : clot weight assay (pada disfibrinogenemia :ada diskrepansi) Hipofibrinogenemia : < 80 mg/dl Afibrinogenemia : < 20 mg/dl (Williams manual of Hematology : 614) 04/12/2013 Tutor Hematologi 46
- 47. Dry clot weight Reagen: PPP CaCl2 0,025 mol/l bovine thrombin 50 u/ml rentang normal : 1,5 -4,0 g/l 04/12/2013 Tutor Hematologi 47
- 48. Metode dry clotweight Pipet 1 ml PPP, masukkan tabung 12 x 75 mm dan hangatkan 37° C. Masukkan aplikator kayu atau stik swab dalam tabung Tambahkan 0,1 ml CaCl2 dan 0,9 ml trombin Inkubasi 37° C selama 15 menit Bekuan fibrin pada stik ditiup lembut, dan ditekan untuk mengeluarkan serum. 04/12/2013 Tutor Hematologi 48
- 49. lanjutan Cuci bekuan dalamtabung berisi 9 g/l NaCl, lalu tabung berisi air. Pindahkan fibrin dari stik ke kertas filter Beri aceton,biarkan selama 5-10 menit Keringkan dalam oven atau lampu panas selama 30 menit Biarkan dingin, lalu ditimbang (Dacie 11th ed : 424) 04/12/2013 Tutor Hematologi 49
- 50. Factor Koagulasi terdiridari : I. Fibrinogen II. Prothrombin III.Tissue thromboplastin IV. Calcium V. Proaccelerin VI. VII. Proconvertin VIII. Anti Hemophillic Factor IX. Chrismast Factor X. Stuart Factor XI. Plasma Thromboplastin Antecedent (PTA) XII. Contact Factor XIII. Fibrin Stabilizing Factor Prekalikrein (Fletcher Factor) High Molecular Weight Kinin (HMWK) Protein S Protein C Protein Z 04/12/2013 Tutor Hematologi 50
- 51. FUNGSI FIBRINOLISIS : Pembatasanpembentukan fibrin pada daerah luka. Penghancuran fibrin dalam sumbat hemostasis. KOMPONEN SISTEM FIBRNOLISIS : Plasmin. Aktivator Plasminogen. Inhibitor Plasmin / Anti Plasmin. 04/12/2013 Tutor Hematologi 51
- 52. PROSES FIBRINOLISIS ENDOTEL /JARINGAN ↓ PLASMINOGEN AKTIVATOR (GLYCOPROTEIN) ↓ ANTIPLASMIN (α2 ANTIPLASMIN) ↓ PLASMINOGEN →PLASMIN → PLASMIN IN AKTIF ↓ FIBRIN → BAHAN2 YANG SOLUBLE / FDP ↓ RES 04/12/2013 Tutor Hematologi 52
- 53. PLASMINOGEN yang tidakaktif berubah menjadi PLASMIN karena adanya : Plasminogen Aktivator Faktor XII aktif Thrombin Kalikrein PLASMINOGEN ANTI PLASMIN AKTIVATOR (Plasminogen Aktivator Inhibitor) PLASMINOGEN → PLASMIN INAKTIF → PLASMIN → RES ↓ FIBRIN → FIBRIN ( FDP )FRAGMENTS OR SPLIT PRODUCTS ↓ SMALLER FRAGMENTS ↓ RES 04/12/2013 Tutor Hematologi 53
- 54. Plasmin akan memecahFibrin, Fibrinogen, Faktor V dan VIII. Fibrin/Fibrinogen akan dipecah menjadi FDP (Fibrin/Fibrinogen Degradation Products) atau FSP (Fibrin/Fibrinogen Split Products). Selanjutnya FDP/FSP akan : Menghambat agregasi trombosit Menghambat kerja thrombin pada fibrinogen Menghambat polimerisasi fibrin FDP mempunyai sifat : Anti thrombin Menghambat polimerisasi fibrin Menghambat fungsi trombosit 04/12/2013 Tutor Hematologi 54
- 55. PLASMINOGEN AKTIFATOR : 1.INTRINSIK : terdapat dalam darah yaitu F.XIIa, Kalikrein 2. EKSTRINSIK : terdapat pada endotel pembuluh darah & berbagai jaringan disebut : tissue plasminogen aktivator (t-PA) 3. EKSOGEN : * Urokinase (dibentuk ginjal) * Streptokinase (produk kuman Streptokokus Beta Hemolitikus). 04/12/2013 Tutor Hematologi 55
- 56. Plasminogen Activator Inhibitor( PAI) (International Committee on Thrombosis and Hemostasis) 1. PAI – 1 : disintesis oleh sel endotel pembuluh darah, sel otot polos, fibroblas paru, alfa granula trombosit. 2. PAI – 2 : disintesis oleh plasenta, granulosit, monosit, makrofag. 3. PAI – 3 : dalam air seni. 4. Protease Nexin – 1 : ditemukan dalam fibroblas, sel otot jantung & epitel ginjal . 04/12/2013 Tutor Hematologi 56
- 57. III. Produk dariproses Fibrinolisis 1. PLASMIN : memecah Fibrin, Fibrinogen, Faktor V dan VIII. 2. FDP (fibrin degradation product) : merupakan competitive inhibitor terhadap Trombin dan Fibrin Polimer IV. Inhibitor Plasmin/Anti Plasmin Alfa-2–Plasmin inhibitor/Alfa-2–Anti Plasmin 2. Alfa-2-Makroglobulin 3. Alfa-1-Antitripsin 4. Anti Trombin-3 (AT-III) 04/12/2013 Tutor Hematologi 57
- 58. KERUSAKAN JARINGAN /PEMBULUHDARAH : Reaksi pembuluh darah Vasokonstriksi factor Rangsangan terhadap : 1. Platelet : a.Adesi,Agregasi b. Platelet growth c. Platelet faktor-3 2. Sistema koagulasi 3. Sistema Fibrinolisis Plasminogen aktivator dikeluarkan dari sel endotel 04/12/2013 Tutor Hematologi 58
- 59.