コスモバイオニュース No.133 (2017年9月)
- 4. 60,000
50,000
40,000
30,000
20,000
10,000
0
RFU(Ex/Em=490/525nm)
未処理 処理済
1mM H2O2
0.1mM
H2O2
Control
RFU(Ex/Em=540/570nm)
40,000
30,000
20,000
10,000
0
未処理 処理済
1mM
H2O2
100µM TBHP
Control
A B
RFU(Ex/Em=540/570nm)
40,000
30,000
20,000
10,000
0
未処理 処理済
1mM
H2O2
100µM TBHP
Control
A B
- 6. Control pyocyanin, 0.1 mM Pyo/NAC
ROS
Superoxide
Bright
Field
Green
Filter
Orange
Filter
Control Pyo TBHP AMA
R1
R2
80
70
60
50
40
30
20
10
0
ROS positive cell %
superoxide
positive cell %
®
®
- 9. Colorimetric Assay Colorimetric Assay
MDA ( µM ) MDA ( µM )
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
OD540nm
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
OD540nm
0 10 20 30 400 100 200 300
0 20 40 60 80 0 2 4 6 8 10
200
150
100
50
0
30
20
10
0
RFU
MDA ( µM )
0 20 40 60 80 0 2 4 6 8 10
200
150
100
50
0
30
20
10
0
RFU
RFU
MDA ( µM )
MDA ( µM )MDA ( µM )
Fluorometric AssayFluorometric Assay
Colorimetric Assay Colorimetric Assay
MDA ( µM ) MDA ( µM )
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
OD540nm
0 10 20 30 400 100 200 300
0 20 40 60 80 0 2 4 6 8 10
30
20
10
0
RFU
MDA ( µM )
0 20 40 60 80 0 2 4 6 8 10
200
150
100
50
0
30
20
10
0
RFU
MDA ( µM )
Fluorometric Assay
MDA ( µM )MDA ( µM )
Fluorometric Assay
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
OD405nm
0 200 400 600 800 1000
Aldehyde ( µM )
- 11. 3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
OD450nm
625 313 156 0 625 313 156 0
Treated Raw Lysate
[ ng / ㎖ ]
Untreated Raw Lysate
[ ng / ㎖ ]
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
O.D.490nm
0.01 0.1 1 10 102
conc. ( µ mol / L )
NO2-Guanine
NO2-cGMP
NO2-Xanthine
NO2-Guanosine
Br-cGMP
Br-Guanosine
Guanosine
Xanthine
cGMP
Control
NO2-Guanine
NO2-Guanosine
Guanine
Guanosine
OH-Guanine
NO2-Tyrosine
- 14. Actinonin ( nM )
比活性(%)
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
1.95
3.91
7.81
15.63
31.25
62.50
125
250
500
1000
比活性(%)
100
80
60
40
20
10
0
Actinonin ( µM )
0.78
3.13
12.5
50
200
- 15. 10 % SDS-PAGE
Single bands recovered from
protein ladder gel slices by our kit
Protein
Ladder
250
98
64
50
36
30
MW
kDa
- 21. Four Parameter Logistic (4-PL) Curve Fit10
0.01
0.1
1
OpticalDensity
APOL1 Concentration (ng/㎖)
0.1 1 10 20
R2
=0.9999
- 22. 作用点公知 細胞増殖抑制 生物活性未知
作用機構研究ツール
アッセイコンセプト確認
陽性化合物
創薬リード化合物 / 構造展開
用途特許出願
など、幅広い利用法
18.4 29.7 51.9
酵素阻害
膜蛋白質(受容体・
チャネル)
複製・転写・翻訳
シグナル伝達
細胞骨格・細胞周期
その他(RedOx)
30.0
25.0
20.0
15.0
10.0
5.0
0.0
100
-200
200
-300300
-400400
-500500
-600
600
-700
800
-900
1,000
-1,100
900
-1,000
700
-800
1,100
-1,200
1,200
-1,300
1,300
-1,400
1,400
-1,500>
1,500
- 25. 66 kd→
35 kd→
45 kd→
25 kd→
18 kd→
14 kd→
① Control IgG
② MYL2
③ Input
① ② ③
70 kd→
50 kd→
40 kd→
30 kd→
20 kd→ ←19 kd
IP
116 kd→
66 kd→
45 kd→
35 kd→