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コスモバイオニュース No.157 (2019年9月)
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0 2 4 6 8 10 0 1000 2000
3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 Proteinabundance Log10(DIAintensity/MWx10-3) Abundance Rank 3,000 タンパク質 キナーゼ: 108 種類 転写因子: 243 種類 5,000 タンパク質 キナーゼ: 234 種類 転写因子: 484 種類 8,408 タンパク質 キナーゼ: 451 種類 転写因子: 1023 種類
5.
6.
糞便から DNA抽出 次世代シーケンサーによる メタゲノム解析 アレルギー発症モデルマウス6匹の糞便を用いた解析例 左:Normal 群(通常食) 右:Test
群(アレルギー誘導食) Normal 群(通常食) Test 群(アレルギー誘導食)
7.
8.
BAC-derived targeting vector Homologous
recombination Human genome sequence Mouse ESC chromosome SSR site Mouse genome sequence Select for drug resistance Screen for correct integration Remove selection marker by SSR
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特 集 受託サービス A.
ファースト抗体 B. ファースト抗体プラス 項目 ファースト抗体 ファースト抗体 プラス 抗原 ペプチド エピトープ デザイン 簡易報告 詳細報告 純度 ≧ 50% ≧ 70% 収量 5 ㎎ 5 ㎎ 鎖長 〜25 AA 〜25 AA 修飾 ― ○(有償オプション) MIX 免疫 ― ○(有償オプション) 検証 プレブリード ― ○(有償オプション) 免疫動物 ウサギ 1羽 ウサギ 1羽 中間試験 採血 ― 35日目 ELISA ― ○ 中間採血血清 ― ○ データ発送 2羽 1.6〜2.4 ㎎ 免疫日程 全採血日 49日目 49日目 延長の可否 ― 56日目まで可能 最終QC 簡易力価測定 (1点測定) ELISA 力価/死亡保証 ○ ○ 納期 ペプチド抗原 3カ月〜 3カ月〜 持込み抗原 2.5カ月〜 2.5カ月〜 基本 サービス 料金 ペプチド抗原 基本サービス : ¥63,000 精製パッケージ※1 : ¥98,000 基本サービス : ¥90,000 精製パッケージ※1 : ¥125,000 持ち込み抗原 基本サービス : ¥58,000 精製パッケージ※1 : ¥92,800 基本サービス : ¥82,000 精製パッケージ※1 : ¥118,000 ※1 基本サービスに有償オプションの精製作業を追加した、お得なセットです。 【注意事項】 ※実際の血清量は、個体差・体調により差が出ることがございます。 ※ニワトリにつきましては、採卵のタイミングによりスケジュール延長の可能 性がございます。 ※抗原カラム精製をご希望の場合、カラム作製とELISA用に別途2.5〜3.5 ㎎ 抗原が必要となります。 ※上記以外の免疫日数・投与量などご相談可能です。 ※価格や期間につきましては、免疫部分のみの記載です。別途抗原ペプチドの 価格・作製期間が発生いたします。 D. 抗リン酸化ポリクローナル抗体 基本プラン 抗原 ●エピトープデザイン ●ペプチド合成(リン酸化、非リン酸化、80%、5 ㎎) ●KLHコンジュゲーション 免疫 ●ウサギ2羽 ●77日免疫、ELISA(予備採血、中間採血、全採血) 精製 ●ウサギ1羽 ●力価の高い個体の血清10 ㎖をアフィニティカラム精製 (修飾/非修飾) 保証 ① 宿主動物死亡保証: 宿主動物が体調の急変により死亡 した場合 ② 低抗体価保証 : 全採血抗血清のELISA OD値が 4,000倍希釈で0.4以下となった場合 希望販売価格 ¥370,000 納期 4.5カ月 C. カスタマイズ抗体 プラン例 作業フロー 詳細 希望販売価格 ペプチド合成 仕様 : ≧50%、5 ㎎、20残基 ¥32,000 コンジュゲーション KLHコンジュゲーション3 ㎎ ¥30,000 免疫 仕様 : ウサギ1羽、モルモット1匹、 49日免疫、ELISA ¥230,000 精製 ペプチドカラム精製(1個体、10 ㎖) ¥50,000 C. カスタマイズ抗体 宿主動物例 動物種 免疫日程 数 免疫用抗原 ELISA用抗原 全採血血清量(1個体) 希望販売価格 納期 ウサギ 49日 1羽 1 ㎎以上 0.1〜1 ㎎ 40〜60 ㎖ ¥115,000 2〜2.5カ月 2羽 2 ㎎以上 ¥200,000 77日 1羽 0.8〜1.2 ㎎ ¥135,000 2.5〜3.5カ月 2羽 1.6~2.4 ㎎ ¥250,000 ラット・モルモット 49日 1匹 0.25 ㎎以上 ラット : 2〜8 ㎖ モルモット : 5〜10 ㎖ ¥115,000 2〜2.5カ月 2匹 0.5 ㎎以上 ¥200,000 77日 1匹 0.35 ㎎以上 ¥135,000 2.5〜3.5カ月 2匹 0.7 ㎎以上 ¥250,000 マウス 49日 3匹 0.08 ㎎以上 0.1〜0.4 ㎖ ¥79,800 2〜2.5カ月 77日 3匹 0.12 ㎎以上 ¥89,800 2.5〜3.5カ月 ニワトリ 63日 1羽 0.6〜0.8 ㎎ 5〜15 ㎖(+卵2個) ¥130,000 3〜4カ月 ヤギ 63日 1頭 8〜10 ㎎ 1 ℓ(最終採血「全採血は要相談」) ¥320,000 3〜4カ月 E. 異種動物免疫 プラン例 作製が難しい抗原をお考えの場合 通常のウサギ免疫に、ウサギとは異種の動物であるモルモッ トをプラスすることにより抗原認識構造の異なる抗体が得られ ます。ウサギ免疫で得られた抗体が使用できなかった場合でも モルモット免疫で得られた抗体が使用できる可能性があり、リ スク低減におすすめです。 ● ウサギ : 血清 約30〜50 ㎖ ● モルモット : 血清 約5〜10 ㎖ サンドイッチELISA用の抗体作製 抗原を挟む抗体(捕捉抗体、検出抗体)は、動物種が異なっ ている必要があります。それぞれのエピトープは距離が離れて いる方が向いています。 抗 原 ●エピトープデザイン : サンドイッチELISA用に2抗原を 選択(膜貫通部位や両抗原の距離や抗原性を考慮した抗 原配列をデザイン) ●抗原ペプチドの作製 :(抗原ペプチド合成+KLHコンジュ ゲーション)×2 免 疫 ●ウサギ1羽〜 49日免疫 ●モルモット1匹〜 49日免疫 品質管理は抗原プレートによるELISAで行います。 お見積り・お問い合わせ先 札幌事業部 TEL : 03-5632-9744 E-mail : peptide-ab@cosmobio.co.jp [ 特 集 ] 受 託 サ ー ビ ス プ ロ テ オ ー ム 解 析 エ ピ ジ ェ ネ テ ィ ク ス 標 識 ・ 検 出 細 胞 生 物 学 遺 伝 子 工 学 免 疫 10 Cosmo Bio News No.157 http://www.cosmobio.co.jp
13.
8.6 nm 8.7
nm 8.7 nm 抗EGFR抗体 抗EGFR抗体 抗EGFR抗体+EGFR Ⅰ. 電顕試料調製 Ⅱ. 電子顕 液化エタン(約-180℃)で急速凍結 トモグラフィーデー タンパク質溶液 (1~2µL) グリッド グリッド 電子線 検出器 Ⅰ. 電顕試料調製 Ⅱ. 電子顕微鏡観察 Ⅲ. 3次元構造 液化エタン(約-180℃)で急速凍結 トモグラフィーデータの入手 COMETによ タンパク質溶液 (1~2µL) グリッド グリッド 電子線 検出器 +70° -70° Ⅰ. 電顕試料調製 Ⅱ. 電子顕微鏡観察 Ⅲ. 3次元構造の再構築 液化エタン(約-180℃)で急速凍結 トモグラフィーデータの入手 COMETによる解析 タンパク質溶液 (1~2µL) グリッド グリッド 電子線 検出器 +70° -70°
14.
15.
16.
通常のプロトコール 293 細胞へのトランスフェクション 細胞ペレットの回収 細胞ライセート 1 回目
CsCl 超遠心 2 回目 CsCl 超遠心 バンドの回収 脱塩 Q-PCR によるタイター測定 SignaGen 社のプロトコール 293 細胞へのトランスフェクション 細胞ペレットの回収 特別な界面活性剤による処理 細胞ライセート 超遠心前のプレ沈降(ポリマー沈降) 1 回目 CsCl 超遠心 2 回目 CsCl 超遠心 バンドの回収 脱塩 Q-PCR によるタイター測定
17.
0 5 10 15 20 25 HeLa HCT116 HepG2 培養細胞培養上清由来エクソソーム CD9スタンダード相当量(ng/mL) CD9 標準タンパク質ビーズ換算 HeLa
HCT116 HepG2 exosome 500 ng/mL 1.0 20.1 2.0 (ng/mL) 0 5 10 15 HeLa HCT116 HepG2 培養細胞培養上清由来エクソソーム CD63スタンダード相当量(ng/mL) CD63 標準タンパク質ビーズ換算 (ng/mL) HeLa HCT116 HepG2 exosome 500 ng/mL 13.6 13.0 4.5 100 80 60 40 20 0 %HDAC6Activity 0 nM 0.5 nM 5 nM 50 nM 0 nM 0.5 nM 5 nM 50 nM [ Trichostatin A ] [ Scriptaid ]
18.
19.
N N N N N N N H N H N H Si O O O O2
20.
フィルム メンブレン 200 150 100 80 70 60 50 45 40 30 25 20 15 10 ピンク 青 緑 青
21.
a b a b Glucose
: Folds : Days : 4.2 6.5 5.4 6.5 7.6 1 2 3 4 7 4 × 105 cells Culture medium Cell lysate 1 2 3 4 7 4 × 105 cells Glucose : Folds : Days : 5 4 3 2 1 0 20 15 10 5 0 0.91 0.93 0.89 0.89 0.65 LuciferaseActivity(×109rlu/well) a b LuciferaseActivity(×109rlu/well) - + - + - + - + - + - + - + - + - + - +
22.
hCTコントロール - 70 0 (μm) ピットの体積(μm3) コントロール
hCT 1.60E+07 1.40E+07 1.20E+07 1.00E+07 8.00E+06 6.00E+06 4.00E+06 2.00E+06 0.00E+00
23.
ScienCellResearchLaboratories TM
24.
NaO OO O N
25.
%ofBMP-4Growth 120 100 80 60 40 20 Noggin Log ng /
mL -1 0 1 2
26.
27.
0 10 20 30 40 50 60 PercentoflibraryDNAfragmentswithcorrectlyligatedadaptors Human Rhodobacter Staphylococcus
E. coli K12 46% 60% 37% 51% 30% 31% 23% 10% 40% 10% 4% 1% NxSeq® AmpFREE K社 I 社
28.
29.
Sample Diluent PT
4-e Four Parameter Logistic (4-PL) Curve Fit OpticalDensity 10 1 0.1 0.01 IL-8 Concentration (pg /mL) 1 10 100 1,000 R2 = 0.999 Multi-sample : P2 IgG Control 18470-1-AP Count 020406080100 (×101 ) 101 102 103 104 105 106 FITC-A
30.
45 31 45 66 97.4 (kDa) α-EBNA-LP α-β-actin Ramos LCL P3HR1
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