Praktikum ini bertujuan untuk mempelajari bakteri tahan asam (BTA) melalui pembuatan preparat, pewarnaan, dan pembacaan sampel dahak. Metode pewarnaan Ziehl-Neelsen digunakan untuk mengidentifikasi BTA berwarna merah dalam sampel. Hasil pengamatan akan dibahas untuk memahami sifat dan morfologi BTA.

1. I. Judul Praktikum :Bakteri Tahan Asam
II. Tujuan dan Manfaat :
Tujuan dari praktikum ini adalah diantaranya:
1. Untuk mengetahui dan mampu melakukan pembuatan preparat,pewarnaan, dan
pembacaan Bakteri Tahan Asam.
2. Agar dapat menyebutkan dan menjelaskan tahapan pewarnaan dan pembacaan
BTA.
3. Agar dapat mengidentifikasi Bakteri Tahan Asam.
Manfaat dari praktikum ini adalah diantaranya:
1. Dapat mengetahui dan mahir melakukan pembuatan preparat, pewarnaan, dan
pembacaan Bakteri Tahan Asam.
2. Mampu menyebutkan dan menjelaskan tahapan pembuatan preparat,
pewarnaan, dan pembacaan Bakteri Tahan Asam.
3. Mampu mengidentifikasi Bakteri Tahan Asam
III. Tinjauan Pustaka
Mikroorganisme di dunia ini ada yang menguntungkan dan ada juga yang
merugikan. Mikroorganisme yang menguntungkan dapat kita manfaatkan untuk
kepentingan kesejahteraan hidup manusia. Akan tetapi, banyak juga mikroorganisme
yang tidak menguntungkan kita yaitu dengan menyebabkan terjadinya penyakit pada
tubuh manusia. Salah satu mikroorganisme yang dapat menyebabkan atau menginfeksi
manusia adalam Mycobacterium tuberculosis. Bakteri ini dapat mengakibatkan
penyakit tuberculosis pada manusia. Tuberculosis merupakan salah satu penyakit yang
mematikan dan berbahaya di dunia.
1. Taksonomi
Kingdom: Bacteria
Phylum: Actinobacteria
Order: Actinomycetales

2. Suborder: Corynebacterineae
Family: Mycobacteriaceae
Genus: Mycobacterium
Species: M. tuberculosis
2. Morfologi
Mycobacterium tuberculosisberbentukbatanglangsing, lurusatauberbentuk
filament.Bakteriinibersifataerobik, tidakmembentukspora, non motil, tahanasam,
danmerupakanbakteri gram positif.Namun, sekali mycobacteria
diberiwarnaolehpewarnaan gram,
makawarnatersebuttidakdapatdihilangkandenganasam.Olehkarenaitu, maka
mycobacteria disebutsebagai Basil TahanAsamatau
BTA.Beberapamikroorganismelain yang jugamemilikisifattahanasam,
yaituspesiesNocardia, Rhodococcus, Legionella micdadei, dan protozoa
IsosporadanCryptosporidium. Padadindingsel mycobacteria,
lemakberhubungandenganarabinogalaktandanpeptidoglikan di
bawahnya.Strukturinimenurunkanpermeabilitasdindingsel,
sehinggamengurangiefektivitasdariantibiotik.Lipoarabinomannanadalahsuatumolekull
aindalamdindingsel mycobacteria, berperandalaminteraksiantarainangdanpatogen,
menjadikanM. tuberculosisdapatbertahanhidup di dalammakrofaga (Thomas, 1999).
Tuberkulosisadalahpenyakitmenularlangsung yang disebabkanolehkuman TB
(Mycobacterium tuberculosis).Sebagianbesarkuman TB menyerangparu,
tetapidapatjugamengenai organ tubuhlainnya (DepKes, 2007).Mycobacterium
tuberculosismenyebabkan TBC danmerupakanpatogenmanusia yang sangatpenting
(Jawetz, Melnick&Adfcerg, 2008).
Sebagianbesardindingkumanterdiriatas lipid,
kemudianpeptidoglikandanarabinomannan. Lipid inilah yang
membuatkumanlebihtahanterhadapasam (asamalkohol) sehinggabakteritahanasam
(BTA) daniajugalebihtahanterhadapgangguankimiadanfisis.
Kumandapathidupdalamudarakeringmaupundalamkeadaandingin,

3. haliniterjadikarenakumanberadadalamsifat dormant.Sifat dormant inilah yang
dapatmenyebabkanpenyakittuberkulosismenjadiaktiflagi (Bahar, 2003).
Sebagianbesar basil Mycobacterium
masukkedalamjaringanparumelaluiairborne infection).Padawaktubatukataubersin,
penderitamenyebarkankumankeudaradalambentuk droplet (percikandahak).Droplet
yang mengandungkumandapatbertahan di udarapadasuhukamarselamabeberapa
jam.Orang dapatterinfeksikalau droplet
tersebutterhirupkedalamsaluranpernafasan.Setelahkuman TB
masukkedalamtubuhmanusiamelaluipernafasan, kuman TB
tersebutdapatmenyebardariparukebagiantubuhlainnya, melaluisistemperedarandarah,
sistemsaluranlimfe, salurannafas, ataupenyebaranlangsungkebagian-
bagiantubuhlainnya (Depkes, 2007).
Cara Penularan
Sebagianbesar basil Mycobacterium
masukkedalamjaringanparumelaluiairborne infection).Padawaktubatukataubersin,
penderitamenyebarkankumankeudaradalambentuk droplet (percikandahak).Droplet
yang mengandungkumandapatbertahan di udarapadasuhukamarselamabeberapa
jam.Orang dapatterinfeksikalau droplet
tersebutterhirupkedalamsaluranpernafasan.Setelahkuman TB
masukkedalamtubuhmanusiamelaluipernafasan, kuman TB
tersebutdapatmenyebardariparukebagiantubuhlainnya, melaluisistemperedarandarah,
sistemsaluranlimfe, salurannafas, ataupenyebaranlangsungkebagian-
bagiantubuhlainnya (Depkes, 2007).
Gejala - gejalaTuberkulosis
Gejala-
gejalatuberkulosisterdiriatasgejalaumumyaitubatukterusmenerusdanberdahakselamatig
amingguataulebihdangejalalain, yang seringdijumpaiyaitudahakbercampurdarah,
batukdarah, sesaknafasdan rasa nyeri dada, badanlemah, nafsumakanmenurun,
beratbadanturun, malaise, berkeringatmalamwalaupuntanpakegiatan, sertademam/
merianglebihdarisebulan (Depkes, 2007).

4. IV. AlatdanBahan :
Alat :
1. Objek Gelas
2. Tusuk Gigi
3. Ose
4. Korek Api
5. Mikroskop
6. Tissue
7. Pembakar Spirtus
8. Kresek (tempat sampah)
9. Label
Bahan:
1. Sampel dahak
2. Carbol Fuchsin
3. Asam Alkohol 3%
4. Metilen blue

5. V. Cara Kerja :
A. Cara MembuatSediaan:
1. Bersihkanobjekgelas, beri label
2. Sterilkanose, dinginkan
3. Ambil 1 ose sputum letakkandiatasobjekgelas, ratakan dan di ulir dengan tusuk
gigi.
4. Sediaanbiarkankeringpadasuhukamar.
5. Setelahkeringfiksasidengamelewatkkandiatasnyalaapisebanyak 3 x,
sediaansiapuntukdiwarnai.
B. Cara Pewarnaan ZN:
1. SediaandituangiCarbolFuchsinsampaipenuh
2. Panaskanselama3-5 menit, jangansampaimendidih
3. Biarkandinginselama5 menit, cucidengan air
4. Dekolorisasidenganalkoholasam10-30 detik, cucidengan air
5. Tuangidenganmethylen blue selama20-30 detik, cucidengan air
Pembacaan
1. Teteskan oil imersipadasediaan sputumlihatpadapembesaranlensaobjektif100x

6. carilah BTA yang berbentukbatangwarnamerah.
2.
Periksadengancaramengeserdanmembentukzigzagdariataskebawahkemudianulangide
nganberlawananarah.
Pembacaan BTA sputum menggunakanskala IUATLD (International Union
Against Tuberculosis and Lung Diseases)
Tidakditemukan BTA dalam 100 lp, disebutnegatif
Ditemukan 1-9 BTA dalam 100 lp, ditulisjumlahkuman yang ditemukan
Ditemukan 10-99 BTA dalam 100 lp, disebut + atau (1+)
Ditemukan 1-10 BTA dalam 1 lp, disebut ++ atau (2+)
Ditemukan>10 BTA dlam 1 lp, disebut +++ atau (3+)
VI. HasilPengamatan
VII. Pembahasan :
Bakteritahanasamadalahjenisbakteri yang
tidakdapatdiwarnaidenganpewarnaananilinbiasakecualidenganmenggunakanfenoldan
denganpemanasan.Bakteriinimemilkidindingselberlilinkarenamengandungsejumlahbe

7. sarmaterilipidolehkarenaitubakteriinihanyadapatdiwarnaidenganpewarnaan BTA
(Acid-Fast
Stain).Dindingselhidrofobikdanimpermeabelterhadappewarnaandanbahankimialainpa
dacairanataularutanencer. Ketika proses pewarnaan,
bakteritahanasaminimelawandekolorisasidenganasamsehinggabakteritersebutdisebutb
akteritahanasam (Ball, 1997). Contohdaribakteritahanasamyaitudari genus
Mycobacterium.Bakteriinimemilikisejumlahbesarzatlipoidal (berlemak) di
dalamdindingselnyasehinggamenyebabkandindingseltersebut relative
tidakpermeabelterhadapzat-zatwarna yang umumsehinggasel-
selbakteritersebuttidakterwarnaiolehmetodepewarnaanbiasa,
sepertipewarnaansederhanaataupewarnaan gram (Dwijoseputro, 1994).
Zat warna carbol fuchsin 0,3 %, asam alkohol 3 %, dan methylen blue 0,3%.
Pada pemberian warna pertama, yaitu carbol fuchsin, BTA bersifat
mempertahankannya. Carbol fuchsin merupakan fuksin basa yang dilarutkan dalam
larutan fenol 5 %. Larutan ini memberikan warna merah pada sediaan dahak. Fenol
digunakan sebagai pelarut untuk membantu pemasukan zat warna ke dalam sel
bakteri sewaktu proses pemanasan. Fungsi pemanasan untuk melebarkan pori-pori
lemak BTA sehingga carbol fuchsin dapat masuk sewaktu BTA dicuci dengan larutan
pemucat, yaitu asam alkohol, maka zat warna pertama tidak mudah dilunturkan.
Bakteri kemudian dicuci dengan air mengalir untuk menutup pori-pori dan
menghentikan pemucatan. BTA akan terlihat berwarna merah, sedangkan bakteri
yang tidak tahan asam akan melarutkan carbol fuchsin dengan cepat sehingga sel
bakteri tidak berwarna. Setelah penambahan zat warna kedua yaitu methylen blue,
bakteri tidak tahan asam akan berwarna biru (Lay, 1994)
VIII. Kesimpulan :
Dari praktikum yang telah dilakukan, didapatkan hasil

8. DAFTAR PUSTAKA
Jawetz, Melnick, Adelberg’s. 2001. Mikrobiologi Kedokteran. Salemba Medika, Jakarta.
Jutono, Soedono, S., S. Hartanti, Suhandi, D. S., K. Soesanto. 1980. Analisis Praktikum
Mikrobiologi Umum untuk Perguruan Tinggi. UGM Press, Yogyakarta.
Kurniawatiet al., 2005.Perbandingan Tan ThiamHok, ZiehlNeelsen,
danfluorokromsebagaiMetodePewarnaan Basil
TahanAsamuntukPemeriksaanMikroskopis Sputum. MakaraKesehatan. Vol 9, June
2005 : 29-33.
Lay, B. W. 1994. Analisis Mikroba di Laboratorium. PT Raja Grafindo Persada, Jakarta.
Pelczar, M. J., E. C. S. Chan. 1988. Dasar-Dasar Mikrobiologi Jilid 2. UI Press, Jakarta.
Sari, Y.S. 2004.PenyakitInfeksius yang menularMelaluiUdarapada Orangutan
(Pongopygmaeus).KaryaTulis. FKH-IPB. Bogor.