Biosafety adalah spesies kumbang ini juga merupakan bagian dari genus ini juga merupakan bagian dari genus ini juga dapat menyerap air mata yang kontam hingga ke kamar tidur di kecamatan dan kingdom is the only one that was

1. BIOSAFETY IN
MICROBIOLOGY
LABORATORY
NOVA MAULIDINA ASHURI, M.SI.

2. TUJUAN
Mahasiswa mampu memahami prosedur laboratorium mikrobiologi dalam hal aseptik dan steril (CPMK2)

3. BIOSAFETY
• Biosafety merupakan usaha yang dilakukan untuk melindungi manusia dan
lingkungan dari unsur-unsur yang berasal dari bahan biologis.
• Biosafety adalah penerapan pengetahuan, teknik, dan peralatan untuk
melindungi personalia laboratorium dan lingkungan dari paparan agen yang
berpotensi menyebarkan penyakit.

4. PRINSIP BIOSAFETY
KRITERIA RESIKO
1. Pencegahan
• memerlukan tempat kerja khusus
(containment) untuk mencegah agen
biologis berbahaya (biohazard)
terpapar keluar dari lingkungan kerja
dan mencegah adanya risiko paparan
patogen terhadap staf peneliti di
laboratorium, orang yang berada di
luar laboratorium, serta lingkungan
laboratorium
• Berdasarkan klasifikasi kelompok risiko
mikroorganisme yang ditangani,
perancangan laboratorium biosafety dibagi
menjadi 4 kelompok yaitu :
• ● Biosafety Tingkat 1 (Dasar)
• ● Biosafety Tingkat 2 (Dasar)
• ● Biosafety Tingkat 3 (Terkendali)
• ● Biosafety Tingkat 4 (Pengendalian
Maksimum).

5. • KLASIFIKASI MIKROORGANISME MENULAR BERDASARKAN KELOMPOK RISIKO
(WHO.2004. ISBN 92 4 154650 6, GENEVA)
Kelompok resiko Klasifikasi Deskripsi
1 Resiko yang sangat sedikit terhadap
komunitas dan perorangan, atau tidak
beresiko sama sekali.
Mikroorganisme yang tidak
menyebabkan penyakit
pada manusia atau hewan

6. • KLASIFIKASI MIKROORGANISME MENULAR BERDASARKAN KELOMPOK RISIKO
(WHO.2004. ISBN 92 4 154650 6, GENEVA)
Kelompok
resiko
Klasifikasi Deskripsi
2 Resiko yang
rendah
terhadap
komunitas,
tetapi memiliki
resiko yang
menengah bagi
perorangan.
Miroorganisme tidak menyebabkan bahaya serius
terhadap pekerjalaboratorium, mahluk hidup atau
lingkungan tetapi dapat menyebabkan penyakit pada
hewan dan manusia. Mikroorganisme pada kelompok
ini adalah: E. coli yang biasa ditemukan pada usus
manusia dan hewan.Neisseria meningitides bakteri
yang menyebabkan penyakit meningitis atau
peradangan membran pada otak manusia. Virus
hepatitis penularan melalui cairan tubuh, alat suntik,
termasuk juga transfusi darah yang tidak terskirining.

7. • KLASIFIKASI MIKROORGANISME MENULAR BERDASARKAN KELOMPOK RISIKO
(WHO.2004. ISBN 92 4 154650 6, GENEVA)
Kelompok
resiko
Klasifikasi Deskripsi
3 Resiko tinggi
bagi perorangan
tetapi rendah
bagi komunitas.
Mikroorganisme patogen yang menyebabkan
penyakit serius pada manusia dan hewan tetapi tidak
menular. Mikroorganisme yang berada pada
kelompok ini adalah: Bakteri Brucella sp. yang
menyebabkan penyakit brucellosis pada manusia dan
hewan. Mycobacterium tuberculosis, bakteri ini
menyebabkan gangguan pada saluran pernafasan
dengan gejala batuk yang produktif, demam,
berkeringat pada saat malam hari dan berat badan
menurun, dapat ditularkan melalui aerosol (udara).

8. • KLASIFIKASI MIKROORGANISME MENULAR BERDASARKAN KELOMPOK RISIKO
(WHO.2004. ISBN 92 4 154650 6, GENEVA)
Kelompok resiko Klasifikasi Deskripsi
4 Resiko
yang
tinggi bagi
peroranga
n dan
komunitas
.
Senyawa mikroorganisme patogen yang menyebabkan
penyakit serius pada manusia dan hewan serta dapat
menularkan dari satu orang ke orang lainnya, secara
langsung maupun tidak langsung. Mikroorganisme pada
kelompok ini adalah: Lassa virus penyebab penyakit akut
pada manusia. Machupo virus penyebab penyakit
Bolivian Hemorrhagic Fever (BHF). Ebola virus serta
Herpes virus.

9. ISTILAH DISINFEKSI DAN STERILISASI
• Antimicrobial : An agent that kills microorganisms or
suppresses their growth and multiplication.
• Antiseptic : A substance that inhibits the growth and
development of microorganisms without necessarily
killing them. Antiseptics are usually applied to body
surfaces.
• Biocide : A general term for any agent that kills
organisms.
• Chemical germicide : A chemical or a mixture of
chemicals used to kill microorganisms.
• Decontamination : Any process for removing and/or
killing microorganisms. The same term is also used
for removing or neutralizing hazardous chemicals and
radioactive materials.
• Disinfectant : A chemical or mixture of chemicals
used to kill microorganisms, but not necessarily
spores. Disinfectants are usually applied to inanimate
surfaces or objects.
• Disinfection : A physical or chemical means of killing
microorganisms, but not necessarily spores.
• Microbicide : A chemical or mixture of chemicals that
kills microorganisms. The term is often used in place
of “biocide”, “chemical germicide” or “antimicrobial”.
• Sporocide : a chemical or mixture of chemicals used
to kill microorganisms and spores.
• Sterilization : A process that kills and/or removes all
classes of microorganisms and spores.

10. DEKONTAMINASI /DESINFEKSI
• Penanganan yang membuat peralatan, bahan, instrumen, sampah atau
permukaan lingkungan menjadi aman untuk ditangani.
• Menggunakan bahan kimia cair untuk menghilangkan hampir semua
mikroorganisme patogen, kecuali spora bakteri.
• Adapun faktor yang memengaruhi efektifitas dekontaminasi bahan biologis
adalah adanya aktifitas laboratorium mikrobiologi yang menghasilkan bahan
biologis dengan berbagai macam karakteristik sifat bahan dan agen biologi
yang digunakan.

11. DEKONTAMINASI /DESINFEKSI
Prinsip kerja dari pada agen
dekontaminasi tersebut dapat
dipengaruhi oleh beberapa hal berikut
ini:
• berdasarkan sifat permukaan yang
didekontaminasi.
• Jumlah mikroorganisme
• Resistensi mikroorganisme terhadap
germisida bahan kimia
• Jangka waktu paparan dan suhu
Agen kimia dengan variasi disenfektan
tingkat rendah dan tinggi:
• alkohol, fenol dan turunannya,
quaternary ammonium compounds,
klorin, iodophors, glutaraldehid,
hidrogen peroksid serta gas
formaldehid.

12. CHEMICAL GERMICIDES

13. CHEMICAL GERMICIDES
• Chlorine (sodium hypochlorite)
• Sodium dichloroisocyanurate
• Chloramines
• Chlorine dioxide
• Formaldehyde
• Glutaraldehyde
• Phenolic compounds
• Quaternary ammonium compounds
• Alcohols, Ethanol (ethyl alcohol,
C2H5OH) and 2-propanol (isopropyl
alcohol, (CH3)2CHOH)
• Iodine and iodophors
• Hydrogen peroxide and peracids

14. CLEANING LABORATORY MATERIALS
• Pembersihan (cleaning) adalah
menghilangkan kotoran, bahan organik
dan noda. Pembersihan meliputi
menyikat, menyedot debu,
mengeringkan debu, mencuci atau
mengepel basah dengan air yang
mengandung sabun atau deterjen.
Kotoran, tanah dan bahan organik
dapat melindungi mikroorganisme dan
dapat mengganggu dengan aksi
membunuh dekontaminan (antiseptik,
bahan pembasmi kuman kimia dan
desinfektan).
• Pembersihan awal (precleaning) sangat
penting untuk mencapai desinfeksi atau
sterilisasi yang tepat. Banyak yang bersifat
pembasmi mikroorganisme Produk
mengeklaim aktivitas hanya aktif sudah
dibersihkan sebelumnya item. Pembersihan
awal harus dibawa keluar dengan peduli ke
menghindari paparan ke agen infeksi.
• Bahan-bahan yang secara kimia kompatibel
dengan germisida yang akan digunakan
selanjutnya haruslah sesua. Sangat umum
untuk menggunakan bahan kimia pembasmi
mikroorganisme yang sama untuk
pembersihan awal dan desinfeksi.

15. LOCAL ENVIRONMENTAL DECONTAMINATION
• Dekontaminasi ruang laboratorium,
perabotan dan peralatannya memerlukan
kombinasi desinfektan cair dan gas.
• Permukaan dapat didekontaminasi
menggunakan larutan natrium hipoklorit
(NaOCl); larutan yang mengandung 1 g/l
untuk sanitasi lingkungan umum, namun
larutan yang lebih kuat (5 g/l)
direkomendasikan ketika menghadapi
situasi berisiko tinggi.
• Untuk lingkungan, dekontaminasi, larutan
yang diformulasikan mengandung 3%
hidrogen peroksida
• Ruangan dan peralatan dapat didekontaminasi
dengan fumigasi menggunakan formaldehida gas
yang dihasilkan dengan memanaskan
paraformaldehyde atau merebus formalin. Proses ini
sangat berbahaya yang memerlukan personel terlatih
khusus. Semua bukaan di dalam ruangan (yaitu
jendela, pintu, dll.) harus ditutup dengan selotip atau
sejenisnya sebelum gas dihasilkan. Fumigasi harus
dilakukan pada suhu sekitar minimal 21 °C dan
kelembaban relatif 70%.
• Setelah fumigasi, area tersebut harus memiliki
ventilasi yang baik sebelum diperbolehkan memasuki.
Respirator yang sesuai harus dipakai oleh siapa pun
yang memasuki ruangan sebelumnya telah
berventilasi. Gas amonium bikarbonat dapat
digunakan untuk menetralkan formaldehida.
• Fumigasi ruangan yang lebih kecil dengan uap
hidrogen peroksida juga efektif memerlukan
peralatan khusus untuk menghasilkan uap.

16. HAND-WASHING/HAND DECONTAMINATION
• Jika memungkinkan, sarung tangan yang
sesuai harus dipakai saat menangani bahan
berbahaya. Namun, hal ini tidak
menggantikan perlunya mencuci tangan
secara teratur dan benar oleh petugas
laboratorium. Tangan harus dicuci setelah
menangani bahan biohazard dan sebelum
meninggalkan laboratorium.
• Dalam kebanyakan situasi, mencuci tangan
secara menyeluruh dengan sabun dan air
biasa adalah hal yang penting cukup untuk
mendekontaminasinya, namun penggunaan
sabun pembasmi kuman dianjurkan situasi
berisiko tinggi.
• Tangan harus dicuci secara menyeluruh dengan
sabun, menggunakan gesekan, selama minimal 10
detik, bilas dengan air bersih dan keringkan
menggunakan kertas bersih atau handuk kain (jika
tersedia, pengering tangan udara hangat dapat
digunakan).
• Keran yang dioperasikan dengan kaki atau siku
direkomendasikan. Jika tidak dipasang, gunakan
kertas/kain handuk dan sebaiknya digunakan untuk
mematikan gagang keran agar cucian tidak
terkontaminasi ulang tangan.
• Seperti disebutkan di atas, pembersih tangan
berbahan dasar alkohol dapat digunakan untuk
melakukan dekontaminasi ringan tangan kotor ketika
tempat cuci tangan yang benar tidak tersedia.

18. STERILISASI
• Penanganan menggunakan
prosedur fisik atau kimia untuk
menghancurkan semua kehidupan
mikroba, termasuk endospora
bakteri yang sangat resisten.
• Adapun sterilisasi dapat dilakukan
dengan beberapa cara seperti
metode pemanasan (perebusan,
pasteurisasi, autoklaf), filtrasi,
radiasi sinar uv, radiasi ionisasi
atau microwaves)

19. AUTOKLAF
• Hampir tiap laboratorium menggunakan
autoklaf sebagai alat sterilisasi
• Berikut perangkat limbah tidak dapat sterilisasi
autoklaf :
Bahan yang mudah meledak
Bahan yang mudah terbakar koorosif, reaktif,
Bahan yang mudah meleleh dibawah suhu
100°C

20. AUTOKLAF
• Uap jenuh bertekanan (autoklaf) adalah cara
yang paling efektif dan andal mensterilkan
alat dan bahan laboratorium. Untuk
sebagian besar tujuan, siklus berikut akan
memastikan sterilisasi dengan autoklaf yang
dimuat dengan benar:
• 1. Waktu penahanan 3 menit pada 134 °C
• 2. Waktu penahanan 10 menit pada 126 °C
• 3. Waktu penahanan 15 menit pada 121 °C
• 4. Waktu penahanan 25 menit pada suhu
115 °C.

21. Tindakan pencegahan dalam penggunaan
autoklaf
• Aturan berikut ini dapat meminimalkan bahaya yang melekat pada pengoperasian bejana
bertekanan.
1. Tanggung jawab operasi dan perawatan rutin harus diberikan kepada orang yang terlatih individu.
2. Program pemeliharaan preventif harus mencakup pemeriksaan rutin terhadap ruang, segel pintu
dan semua pengukur serta kontrol oleh personel yang berkualifikasi.
3. Uap harus jenuh dan bebas dari bahan kimia (misalnya penghambat korosi) yang dapat
mengkontaminasi barang yang disterilkan.
4. Semua bahan yang akan diautoklaf harus berada dalam wadah yang memungkinkan untuk
dikeluarkan udara dan memungkinkan penetrasi panas yang baik; ruangan itu harus dikemas
secara longgar uap tersebut akan mencapai beban secara merata.
5. Untuk autoklaf tanpa alat pengaman yang saling mengunci yang mencegah pintu keluar dibuka
ketika ruang diberi tekanan, katup uap utama harus ditutup dan suhu dibiarkan turun di bawah 80
°C sebelum pintu dibuka.

22. Tindakan pencegahan dalam penggunaan
autoklaf
6. Pengaturan pembuangan yang lambat harus digunakan saat melakukan autoklaf cairan,
karena dapat mendidih berakhir ketika dikeluarkan karena pemanasan berlebih.
7. Operator harus mengenakan sarung tangan dan pelindung yang sesuai untuk perlindungan
saat membuka autoklaf, meskipun suhu telah turun di bawah 80 °C.
8. Dalam setiap pemantauan rutin terhadap kinerja autoklaf, indikator biologis atau
termokopel harus ditempatkan di tengah setiap beban. Pemantauan rutin dengan
termokopel dan alat perekam dalam beban “kasus terburuk” sangat diinginkan untuk
menentukan siklus operasi yang tepat.
9. Filter saringan pembuangan ruangan (jika ada) harus dilepas dan dibersihkan sehari-hari.
10. Perhatian harus diberikan untuk memastikan bahwa katup pelepas dari autoklaf pressure
cooker jangan sampai terhalang oleh kertas, dll. di dalam muatan.

23. Apa aturan dasar teknik aseptik?
• Sejumlah prosedur dasar harus diikuti
ketika menangani peralatan steril atau
bekerja di lingkungan yang steril. Hal
ini mencakup:
1.memastikan bahwa lingkungan bebas
dari sumber kontaminasi eksternal,
seperti jendela atau pintu yang
terbuka
2.memastikan bahwa semua peralatan
atau perkakas yang akan digunakan
telah disterilkan secara menyeluruh.
• Selain itu, semua peralatan yang
disterilkan harus mudah dijangkau
untuk mencegah kemungkinan
• Di laboratorium, bekerja di samping
pembakar Bunsen menciptakan aliran udara
ke atas melalui konveksi, sehingga
menurunkan risiko debu atau kontaminan
lainnya menempel pada permukaan atau
peralatan steril.
• Tabung reaksi dan bejana lain yang berisi
sampel biologis sensitif harus dibakar di
sekitar tutup dan leher saat dibuka, untuk
mencegah kontaminan memasuki tabung.
• Wire loop, juga dikenal sebagai inokulasi
atau smear loop, sering digunakan dalam
mikrobiologi untuk tujuan transfer dan
kultur mikroorganisme. Mereka disterilkan
dengan cara dibakar di atas pembakar
Bunsen, dipanaskan hingga berwarna merah
menyala, untuk memastikan bahwa semua
mikroorganisme yang ada pada loop

24. Apa aturan dasar teknik aseptik?
• Pipet sekali pakai juga sering digunakan untuk
memindahkan cairan, dan harus dikeluarkan
dari kemasannya tanpa menyentuhkan
ujungnya ke permukaan apa pun selain cairan
yang akan dipindahkan.
• Pot desinfektan harus disimpan dekat untuk
membuang barang-barang tersebut tanpa
meninggalkan area kerja.
• Pemindahan kultur antar cawan agar harus
diselesaikan secepat mungkin, namun dengan
cara yang terkendali. Pelat agar-agar harus
dibuka menghadap jauh dari pengguna, dan
sebaiknya dibuka secukupnya untuk
menyelesaikan pekerjaan. Hal ini mencegah
kontaminasi pada cawan agar oleh
mikroorganisme yang ada di udara, khususnya
spora jamur.
• Perkakas, pakaian dan peralatan yang mampu
menahan tekanan dan suhu autoklaf biasanya
disterilkan dengan cara ini setelah pekerjaan
mikrobiologi, meskipun barang sekali pakai
semakin banyak digunakan di bidang yang
sangat steril seperti pembedahan.
• Bahan kimia pembersih sering digunakan
untuk mensterilkan suatu area sebelum dan
sesudah bekerja, salah satu yang paling umum
adalah semprotan etanol sederhana.
• Peralatan pelindung diri standar harus dipakai
setiap saat di laboratorium mikrobiologi,
termasuk kacamata pengaman, sarung tangan
sekali pakai, dan jas lab.
• Jas lab tipe Howie biasanya dipakai di
laboratorium mikrobiologi karena sepenuhnya

25. Teknik aseptik tingkat lanjut
• Laboratorium penelitian dan industri yang menangani
mikroorganisme yang sangat sensitif, berbahaya, atau
mahal menggunakan berbagai perlengkapan
tambahan untuk memastikan kondisi steril tetap
terjaga.
• Kap atau lemari aliran laminar yang menjaga aliran
udara konstan di seluruh permukaan kerja
memastikan tidak ada kontaminan di udara yang
masuk ke dalam ruangan.
• Bila diperlukan, ruang yang lebih besar yang dikenal
sebagai ruang bersih dapat digunakan untuk
mempertahankan aliran udara laminar atau turbulen
ke seluruh ruangan.
• Pekerja biasanya diharuskan menggunakan furnitur
dan pakaian khusus di ruang tersebut untuk
mencegah masuknya kontaminan atau infeksi oleh
mikroorganisme yang bekerja dengannya.

26. ASEPTIC

27. CONTACT
US
MAULIDINA@BIO.ITS.AC
.ID