Dokumen tersebut membahas tentang validasi dan verifikasi metode analisis. Secara ringkas, dokumen menjelaskan tentang tujuan dan tahapan-tahapan validasi dan verifikasi metode untuk memastikan bahwa suatu metode dapat digunakan secara akurat dan konsisten untuk menganalisis sampel.

1. Mirawati siregar
Validasi dan Verifikasi
Metode

2. Validasi
Kualifikasi
•Suatu percobaan laboratorium
•Untuk membuktikan bahwa
karakteristik kinerja metode
analisis telah memenuhi
persyaratan yang telah ditetapkan
sebelumnya
Kualifikasi instrumen:
DQ, IQ, OQ dan PQ
•Suatu percobaan laboratorium
•Untuk membuktikan bahwa
laboratorium mampu
menggunakan metode analisis
standar pada kondisi nyata di
laboratoriumnya

3.  Metode tidak baku,
 Metode pengembangan
 Metode baku yang
dimodifikasi
 Metode baku yang
digunakan di luar
lingkup
Verifikasi
Validasi

4.  Adopsi metode baku/standar
 Untuk membuktikan bahwa suatu
laboratorium mampu melakukan analisis di
laboratoriumnya
 untuk menunjukkan bahwa kinerja metode
dapat ditiru atau diulang oleh laboratorium
yang bersangkutan dengan hasil yang sama

5. Permintaan
Validasi/Verifikasi
Literature search
Telaah karakteristik Analit
Penyiapan bahan dan alat
Pengembangan/
optimasi Metode
Pembuatan
protokol
Validasi/verifikasi
Percobaan Lab
mengacu protokol
validasi/verifikasi
Analisis Data
Penyususnan Laporan
Validasi/Verifikasi
Penyerahan
dokumen
Tahapan Validasi/Verifikasi Metode

6. 
Application:
Titration, spectrphotometric,
chromatographic method etc.

General test do not typically
require verification
(water, heavy metal, residue on ignition etc.)

8. 8
Categories of Analysis
I. Quantitation of major components of bulk drug
substances/active ingredients
II. Determination of impurities/degradation products
A. Quantitative B. Limit Test
III. Determination of performance characteristics
(dissolution test, drug release etc.)
IV. Identification test

9. 9
Analytical
Performa
nce
Parameter
Assay
Category 1
Assay Category 2
Assay
Category
3
Quantitati
ve
Limit
Tests
Accuracy Yes Yes * *
Precision Yes Yes No Yes
Specificity Yes Yes Yes *
LOD No No Yes *
LOQ No Yes No *
Linearity Yes Yes No *
Range Yes Yes * *
Ruggedne
ss
Yes Yes Yes Yes
* May be required, depending on the nature of the specific test.

10. 10
Type of
Analytical
Procedure
Identificatio
n
Impurity testing
Assay
Quantitative Limit Tests
Accuracy No Yes No Yes
Precision
Repeatability
No Yes No Yes
Interm. Prec. No Yes No Yes
Specificity Yes Yes Yes Yes
LOD No No Yes No
LOQ No Yes No No
Linearity No Yes No Yes
Range No Yes No Yes

11. 11
Accuracy
Precision
Limit of Detection
Limit of Quantitation
Linearity and Range
Selectivity/Specificity
Ruggedness/Robustness
Validasi
Metode

12. 12
Akurasi rendah
Presisi tinggi
Akurasi tinggi
Presisi tinggi
Akurasi tinggi
Presisi rendah
Akurasi rendah
Presisi rendah

13. USP dan ICH  menggunakan istilah
Specificity
IUPAC dan AOAC  menggunakan istilah
Selectivity
AOAC: Specificity  “highest selectivity”
13

14. Specificity (USP/ICH):
Kemampuan untuk mengetahui adanya analit
di dalam campuran , tanpa adanya pengaruh
dari zat lain seperti impurities, hasil urai dan
komponen matriks.
Kuliah Anfar II, 2008 FFUA
14
Selectivity menggambarkan kemampuan
suatu metode analisis untuk membedakan
analit dari komponen lainnya pada sampel

15. Suntikkan atau totolkan:
 Blanko sampel/Placebo
(Sampel minus analit)
 Zat Hasil degradasi
(degradants)
 Zat yang memiliki struktur
mirip (Related
Substances
15
Jika tersedia zat hasil degradasi:
Selektif  Rs ≥ 1,5

16.  Lakukan forced degradation studies
 Sampel disimpan pada suhu/kelembaban
tertentu atau penambahan oksidator
 Bandingkan profil pemisahan peak
sebelum dan sesudah perlakuan
16
Jika tidak tersedia zat hasil degradasi (Degradants)

17.  Heat  Temperature (50 - 60 oC)
 Humidity  Kelembaban (70 to 80%)
 Acid Hydrolysis  HCl 0.1 N
 Base Hydrolysis  NaOH 0.1 N
 Oxidation  H2O2 (3 to 30%)
 Light  UV/Vis
17

19.  diode array detector  spectra overlay
 Evaluasi korelasinya (r, MF)
r> 0,99 or MF>990
 Spectra overlay “upslope,
apex dan down slope”
 Peak should be “pure”
19
MF = 1000  r = 1 100% pure peak
MF > 990  pure
MF < 900  impure
900 < MF < 950  contaminated

20. 20
Pure and Impure HPLC peaks
 Peak purity tests can also be evaluated with
– The 3D-spectra of Photodiode array detectors
– Mass spectrometry

22.  Linieritas metode analisis menunjukkan
kemampuan suatu metode untuk
memperoleh hasil uji, yang baik langsung
maupun dengan definisi transformasi
matematis yang baik, proporsional dengan
konsentrasi analit dalam sampel pada
rentang tertentu (Leyva, 2008).

23.  Melalui analisis statistik
Linear Regression (y = mx + b)
 Correlation Coefficient, y-intercept (b), slope
(m), residual sum of squares
 Disarankan menggunakan minimum 5 macam
konsentrasi analit
 Disarankan terhadap sampel yang independen, bukan
dari sampel hasil pengenceran
23

24.  
i
i
i
Y
Y
XO
xo
XO
bx
a
y
N
y
y
S
b
S
S
X
S
V








 ˆ
,
2
ˆ
where
%
100
 
 
0.05
p
and
2
-
N
f
for
factor
student t
t
,
1
1
1
.
.
Y
with
.
1
1
.
.
2
2
2
2
P
2
2













  i
i
XX
XX
table
Y
XX
P
table
XO
P
X
N
X
Q
Q
X
N
t
S
a
Q
b
Y
Y
N
t
S
X
24

25. 25

26.  Interval antara konsentrasi terbesar dan
terkecil dari analit dalam sampel
 Memenuhi syarat dalam hal presisi, akurasi dan
linieritas
26

27.  For Drug Substance & Drug product Assay
 80 to 120% of test Concentration
 For Content Uniformity Assay
 70 to 130% of test Concentration
 For Dissolution Test Method
 +/- 20% over entire Specification Range
 For Impurity Assays
 From Reporting Level to 120% of Impurity
Specification for Impurity Assays
27

28. 28
Uji Homogenitas kurva kalibrasi

29.  Biasanya dinyatakan dalam persen perolehan
kembali (% recovery)
 Dapat dilakukan melalui pebandingan hasil
analisis antara metode yang divalidasi dengan
metode standar  uji t  harus tidak berbeda
makna
 Dapat dilakukan metode adisi standar terhadap
blanko atau sampel.
29

30.  Persen perolehan kembali (% recovery)
Persyaratan untuk assay validation = 98-102%
 Dianjurkan menggunakan tiga macam konsentrasi
masing-masing 3 kali replikasi
 Adisi standar pada blanko/plasebo  dianjurkan
konsentrasi 80% - 120 %
30
%
100
Re
% x
ya
sesungguhn
Kadar
diperoleh
yang
Kadar
c 

31. 31
KURVA AKURASI menurut Funk et. al.
- Untuk mengetahui ada atau tidaknya kesalahan sistematis,
Dibuat kurva regresi antara Xf (konsentrasi analit hasil
analisi) terhadap Xc (konsentrasi nominal analit)
Xf = af + bf. Xc
-Dihitung confidence range (Cr) dari intercept {VB(af)} dan
slope {VB(bf)} dari recovery Pada p = 0.05
Qxx
Xc
N
1
.
S
.
t
a
=
a
Cr
2
yf
table
f
f 

Qxx
.S
t
b
=
b
Cr
yf
table
f
f 
2
-
N
)]
X
-
b
+
(a
-
[X
=
S
2
i
f
f
if
yf

t = Student-t-factor f = N-2, P = 95 %.

32. 32
M. Yuwono & G. Indrayanto, Validation method of Chromatography Methods of
Analysis, Profiles of Drugs Substances, Excipients and Related Methodology,
Vol. 32, Elsevier Academic Press, San Diego, New York, Boston, London,
Sydney, Tokyo, Toronto. In Press (2005)

33. Analyte Ingred.
(%)
Analyte
ratio
Unit Mean recovery (%)
100 1 100 % 98-102
≥ 10 10-1
10 % 98-102
≥ 1 10-2
1% 97-103
≥ 0.1 10-3
0.1% 95-105
0.01 10-4
100 ppm 90-107
0.001 10-5
10 ppm 80-110
0.0001 10-6
1 ppm 80-110
0.00001 10-7
100 ppb 80-110
0.000001 10-8
10 ppb 60-115
0.0000001 10-9
1 ppb 40-120
33
AOAC manual for the Peer-Verified Methods program

34.  Kedekatan dari suatu seri pengukuran yang diperoleh
dari sampel yang homogen
 Dalam bentuk RSD (relative standard deviation)
 Meliputi:
- Repeatability
- Intermediate Precision
- Reproducibility
34

35.  Kondisi sama pada interval waktu yang singkat
 Satu larutan uji  disuntikkan berkali-kali pada hari
yang sama, alat yang sama, analisis serta kondisi lain
yang sama.
 Disebut juga
Intra-assay precision
35

36. 36
Disebut juga “within-laboratory variations”.
Berbeda hari, atau analis, atau instrument
(dalam satu laboratorium)
Sebagai bagian Ruggedness menurut USP

37.  Repeatability test at different labs.
 Berbeda analisis atau instrument dari laboratorium
yang berbeda
37

38.  Dianjurkan menggunakan 3 macam
konsentrasi berbeda, misal 80, 100 dan 120 %
dari konsentrasi target
 Masing-masing konsentrasi dilakukan 3
replikasi
 Dianjurkan dilakukan pada hari yang berbeda
dan analisis yang berbeda
 Kriteria penerimaan: RSD < 2% (Assay
validation)
38

39. Analyte % Analyte ratio Unit RSD (%)
100 1 100 % 1.3
≥ 10 10-1
10 % 2.7
≥ 1 10-2
1 % 2.8
≥ 0.1 10-3
0.1% 3.7
0.01 10-4
100 ppm 5.3
0.001 10-5
10 ppm 7.3
0.0001 10-6
1 ppm 11
0.00001 10-7
100 ppb 15
0.000001 10-8
10 ppb 21
0.0000001 10-9
1 ppb 30
39
AOAC manual for the Peer-Verified Methods program

41.  Lowest amount of
analyte in a sample
that can be detected
but not necessarily
quantitated.
 Estimated by Signal to
Noise Ratio of 3:1.
41
 Lowest amount of
analyte in a sample
that can be quantified
with suitable accuracy
and precision.
 Estimated by Signal to
Noise Ratio of 10:1.
Quantitation
Limit (QL)

42. 1. Based in Visual Evaluations
- Used for non-instrumental methods
2. Based on Signal-to Noise-Ratio
- 3:1 for Detection Limit
- 10:1 for Quantitation Limit
3. Based on Standard Deviation of the Response and
the Slope
42
Detection Limit (DL) and Quantitation Limit (QL)

43.  Based on Visual Evaluation
 may be used for non-instrumental
methods.
 Based on Signal-to-Noise
 Based on the Standard Deviation of the
Response and the Slope
43

44. 44
Based on Signal-to Noise-Ratio

45. where
s = the standard deviation of the response ( SD
of blank samples or SD of intercepts of regression line)
S = the slope of the calibration curve
45

46.  Definition: Capacity to remain unaffected by small
variations in method parameters
 Determination: Comparison results under differing
conditions with precision under normal conditions
 Variations may include: stability of analytical solution,
variation of pH in a mobile phase, different column
(lot/supplier), temperature, flow rate.
46
Robustness

47.  degree of reproducibility of test results
 obtained by the analysis of same samples under a
variety of conditions,
such as different laboratories, analysts,
instruments, different lot of reagents,
days etc.
47

48.  “When sponsors make changes in the
analytical procedure, drug substance, drug
product, the changes, may necessitate
revalidation of the analytical procedures.”
 “The degree of revalidation depends on the
nature of the change.”
48