Dokumen ini membahas tentang validasi metode bioanalitik untuk pengukuran obat dan metabolitnya dalam matriks biologis. Beberapa parameter penting yang perlu divalidasi meliputi selektivitas, sensitivitas, ketepatan, ketelitian, perolehan kembali, kurva kalibrasi, batas kuantifikasi terendah, dan stabilitas untuk memastikan metode dapat diandalkan dan direproduksi. Validasi metode perlu dilakukan sebelum digunakan dalam penelitian
Validasi metode analisis adalah suatu tindakan penilaian terhadap parameter tertentu berdasarkan percobaan laboratorium, untuk membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk penggunaannya (Harmita, 2004).
Menurut Harvey (2000), validasi merupakan suatu proses evaluasi kecermatan dan keseksamaan yang dihasilkan oleh suatu prosedur dengan nilai yang dapat diterima.
Validasi metode analisis adalah suatu tindakan penilaian terhadap parameter tertentu berdasarkan percobaan laboratorium, untuk membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk penggunaannya (Harmita, 2004).
Menurut Harvey (2000), validasi merupakan suatu proses evaluasi kecermatan dan keseksamaan yang dihasilkan oleh suatu prosedur dengan nilai yang dapat diterima.
Makanan dan minuman merupakan salah satu kebutuhan pokok yang
diperlukan manusia untuk hidup, tumbuh dan berkembang. Kebutuhan pokok
makanan dan minuman tersebut harus aman dan menyehatkan badan. Kesalahan
dalam penyediaan makanan dan minuman akan berakibat diperolehnya
makanan yang tidak aman dan tidak menyehatkan bahkan berdampak pada
gangguan kesehatan masyarakat. Pengelolaan makanan yang baik dan memenuhi syarat kesehatan
merupakan salah satu upaya untuk mencapai tingkat kesehatan masyarakat
yang optimal, sehingga perlu mendapat perhatian dari segi nilai gizi,
segi kemurnian, maupun dari segi kebersihan. Sebab meskipun nilai gizi
dan kemurnian baik namun kebersihan lingkungan tidak diawasi dan
dipelihara, maka makanan tersebut dapat menimbulkan penyakit akibat
kontaminasi.
It is a long established fact that a reader will be distracted by the readable content of a page when looking at its layout. The point of using Lorem Ipsum is that it has a more-or-less normal distribution of letters, as opposed to using 'Content here, content here', making it look like readable English. Many desktop publishing packages and web page editors now use Lorem Ipsum as their default model text, and a search for 'lorem ipsum' will uncover many web sites still in their infancy. Various versions have evolved over the years, sometimes by accident, sometimes on purpose (injected humour and the like).
Jual Obat Aborsi Cytotec | 083848007379 | Obat Aborsi Cytotec | Obat Telat Bulan | Obat Pelancar Haid | Obat Penggugur Kandungan | Cara Aborsi Aman | Cara Menggugurkan Kandungan | Apotek Cytotec | Klinik obataborsi7 | Jual Jamu Aborsi | Tempat Aborsi | Jual Obat Cytotec | Agen Cytotec | Alamat Penjual Cytotec | Tempat Penjual Cytotec | Harga Obat Aborsi | Harga Obat Cytotec | Obat Aborsi Wilayah.
Hp / WA :083848007379
APOTEK : Kami Jual Obat Aborsi Cytotec Hub :083848007379 | Jual Obat Aborsi Cytotec| Obat Penggugur Kandungan Cytotec |
Obat Pelancar Haid Tuntas. Dengan harga yang bisa Anda pilih sesuai usia kandungan Anda.
Tips menghindari penjual obat palsu:
(1) Hindari penawaran dengan harga yang murah / murahan hasil pasti (GAGAL).
(2) Layanan Setiap Waktu, bisa di TLP, dengan Respon yang baik & cepat.
(3) Mendapatkan No Resi Pengiriman supaya anda bisa cek melalui JNE/TIKI/POS terdekat untuk mengetahui / memastikan pesanan anda.
(4) Ada berbagai BUKTI nyata tanpa rekayasa & TERPERCAYA.
(5) Mintalah foto obat dengan mencantumkan alamat Anda di sekitarnya sebelum Anda mentransfer pembayaranya.
DAFTAR LENGKAP HARGA PAKET OBAT CYTOTEC AMAN DAN TERPERCAYA
Berikut daftar lengkap dari berbagai paket Obat Aborsi Cytotec — Obat Aborsi Tuntas — Obat Penggugur Kandungan ( Obat Telat Bulan — Dan Obat Aborsi Ampuh )
PAKET OBAT ABORSI HARGA STANDAR DAN HARGA TUNTAS
Paket Standar . 1 – 4 Minggu Rp. 800.000,
– Paket Tuntas 1 Bulan – Rp. 1.000.000,-
Paket Standar . 4 – 8 Minggu Rp. 1.200.000,
– Paket Tuntas – Rp. 1.500.000,-
Paket Standar . 8 – 12 Minggu Rp. 1.800.000,
– Paket Tuntas – Rp. 2.100.000,-
Paket Standar . 12 – 16 Minggu Rp. 2.400.000,
– Paket Tuntas – Rp. 2.800.000,
-16 – 24 Minggu Rp. 3.500.000,-
28 – 32 Minggu Rp. 4.500.000,-
Paket Obat Telat Bulan — Obat Aborsi Standar 90% Tingkat keberhasilan* Paket Obat Telat Bulan — Obat Aborsi Tuntas 99% Tingkat keberhasilan
INGAT … JANGAN TERGIUR HARGA MURAH … ANDA BISA MENYESAL, KARNA OBAT YANG ASLI MASIH BERKEMASAN TABLET UTUH, BENTUKNYA TABLET PUTIH SEGI ENAM BUKAN BULAT POLOS….!
TERIMAKASIH ATAS KEPERCAYAAN ANDA MENJADI PELANGGAN
KAMI
Pengiriman obat aborsi ampuh dilakukan melalui Tiki, Jne, pos indonesia untuk luar negri pos EMS EXPRESS 1–2 HARI SAMPAI. UNTUK LUAR NEGERI PAKET EMS 3–4 HARI DIJAMIN 100% SAMPAI DITEMPAT TUJUAN ALAMAT RUMAH ANDA,
INGAT … JANGAN TERGIUR HARGA MURAH … ANDA BISA MENYESAL
BUKTI PENGIRIMAN YANG DI KEMAS
Wa :083848007379
FORMAT PEMESANAN Pengiriman Via Paket JNE / TIKI / POS EMS INTERNASIONAL Untuk Luar Kota dan Luar Negeri.
Anda Bisa SMS kan Format Pemesanan Seperti Di Bawah Ini :
Nama Lengkap : __
Alamat Lengkap : __
No. Hp Aktif : __
Pesanan Barang : __
Bank Transfer : __
? Contoh Format Pemesanan
Nama Lengkap : Amelia Lestary
Alamat Lengkap : Jl. Pahlawan No.105
No. Hp Aktif : 08123456xxx
Pesanan Barang : Paket Obat Aborsi No.4, Rp xxxxxx
Transfer Bank : Via Bank BRI / BNI / MANDIRI / BCA
Lalu Anda Kirimkan SMS Ke Nomer Kami
.
Makanan dan minuman merupakan salah satu kebutuhan pokok yang
diperlukan manusia untuk hidup, tumbuh dan berkembang. Kebutuhan pokok
makanan dan minuman tersebut harus aman dan menyehatkan badan. Kesalahan
dalam penyediaan makanan dan minuman akan berakibat diperolehnya
makanan yang tidak aman dan tidak menyehatkan bahkan berdampak pada
gangguan kesehatan masyarakat. Pengelolaan makanan yang baik dan memenuhi syarat kesehatan
merupakan salah satu upaya untuk mencapai tingkat kesehatan masyarakat
yang optimal, sehingga perlu mendapat perhatian dari segi nilai gizi,
segi kemurnian, maupun dari segi kebersihan. Sebab meskipun nilai gizi
dan kemurnian baik namun kebersihan lingkungan tidak diawasi dan
dipelihara, maka makanan tersebut dapat menimbulkan penyakit akibat
kontaminasi.
It is a long established fact that a reader will be distracted by the readable content of a page when looking at its layout. The point of using Lorem Ipsum is that it has a more-or-less normal distribution of letters, as opposed to using 'Content here, content here', making it look like readable English. Many desktop publishing packages and web page editors now use Lorem Ipsum as their default model text, and a search for 'lorem ipsum' will uncover many web sites still in their infancy. Various versions have evolved over the years, sometimes by accident, sometimes on purpose (injected humour and the like).
Jual Obat Aborsi Cytotec | 083848007379 | Obat Aborsi Cytotec | Obat Telat Bulan | Obat Pelancar Haid | Obat Penggugur Kandungan | Cara Aborsi Aman | Cara Menggugurkan Kandungan | Apotek Cytotec | Klinik obataborsi7 | Jual Jamu Aborsi | Tempat Aborsi | Jual Obat Cytotec | Agen Cytotec | Alamat Penjual Cytotec | Tempat Penjual Cytotec | Harga Obat Aborsi | Harga Obat Cytotec | Obat Aborsi Wilayah.
Hp / WA :083848007379
APOTEK : Kami Jual Obat Aborsi Cytotec Hub :083848007379 | Jual Obat Aborsi Cytotec| Obat Penggugur Kandungan Cytotec |
Obat Pelancar Haid Tuntas. Dengan harga yang bisa Anda pilih sesuai usia kandungan Anda.
Tips menghindari penjual obat palsu:
(1) Hindari penawaran dengan harga yang murah / murahan hasil pasti (GAGAL).
(2) Layanan Setiap Waktu, bisa di TLP, dengan Respon yang baik & cepat.
(3) Mendapatkan No Resi Pengiriman supaya anda bisa cek melalui JNE/TIKI/POS terdekat untuk mengetahui / memastikan pesanan anda.
(4) Ada berbagai BUKTI nyata tanpa rekayasa & TERPERCAYA.
(5) Mintalah foto obat dengan mencantumkan alamat Anda di sekitarnya sebelum Anda mentransfer pembayaranya.
DAFTAR LENGKAP HARGA PAKET OBAT CYTOTEC AMAN DAN TERPERCAYA
Berikut daftar lengkap dari berbagai paket Obat Aborsi Cytotec — Obat Aborsi Tuntas — Obat Penggugur Kandungan ( Obat Telat Bulan — Dan Obat Aborsi Ampuh )
PAKET OBAT ABORSI HARGA STANDAR DAN HARGA TUNTAS
Paket Standar . 1 – 4 Minggu Rp. 800.000,
– Paket Tuntas 1 Bulan – Rp. 1.000.000,-
Paket Standar . 4 – 8 Minggu Rp. 1.200.000,
– Paket Tuntas – Rp. 1.500.000,-
Paket Standar . 8 – 12 Minggu Rp. 1.800.000,
– Paket Tuntas – Rp. 2.100.000,-
Paket Standar . 12 – 16 Minggu Rp. 2.400.000,
– Paket Tuntas – Rp. 2.800.000,
-16 – 24 Minggu Rp. 3.500.000,-
28 – 32 Minggu Rp. 4.500.000,-
Paket Obat Telat Bulan — Obat Aborsi Standar 90% Tingkat keberhasilan* Paket Obat Telat Bulan — Obat Aborsi Tuntas 99% Tingkat keberhasilan
INGAT … JANGAN TERGIUR HARGA MURAH … ANDA BISA MENYESAL, KARNA OBAT YANG ASLI MASIH BERKEMASAN TABLET UTUH, BENTUKNYA TABLET PUTIH SEGI ENAM BUKAN BULAT POLOS….!
TERIMAKASIH ATAS KEPERCAYAAN ANDA MENJADI PELANGGAN
KAMI
Pengiriman obat aborsi ampuh dilakukan melalui Tiki, Jne, pos indonesia untuk luar negri pos EMS EXPRESS 1–2 HARI SAMPAI. UNTUK LUAR NEGERI PAKET EMS 3–4 HARI DIJAMIN 100% SAMPAI DITEMPAT TUJUAN ALAMAT RUMAH ANDA,
INGAT … JANGAN TERGIUR HARGA MURAH … ANDA BISA MENYESAL
BUKTI PENGIRIMAN YANG DI KEMAS
Wa :083848007379
FORMAT PEMESANAN Pengiriman Via Paket JNE / TIKI / POS EMS INTERNASIONAL Untuk Luar Kota dan Luar Negeri.
Anda Bisa SMS kan Format Pemesanan Seperti Di Bawah Ini :
Nama Lengkap : __
Alamat Lengkap : __
No. Hp Aktif : __
Pesanan Barang : __
Bank Transfer : __
? Contoh Format Pemesanan
Nama Lengkap : Amelia Lestary
Alamat Lengkap : Jl. Pahlawan No.105
No. Hp Aktif : 08123456xxx
Pesanan Barang : Paket Obat Aborsi No.4, Rp xxxxxx
Transfer Bank : Via Bank BRI / BNI / MANDIRI / BCA
Lalu Anda Kirimkan SMS Ke Nomer Kami
.
Definisi dan Ruang Lingkup Farmakovigilans.pptx
Definisi dan Ruang Lingkup Farmakovigilans.pptx
Definisi dan Ruang Lingkup Farmakovigilans.pptx
Definisi dan Ruang Lingkup Farmakovigilans.pptx
audit stunting Desa Bengkak Kecamatan wongsorejoReniAnjarwati
AUDIT STUNTING BADUTA DESA BENGKAK YANG MENGALAMI MALNUTRISI
DARI HASIL RECALL 24 JAM DIPEROLEH HASIL :1. ENERGI 53,8 % (DEFISIT TINGKAT BERAT)2. KARBOHIDRAT 60,74% (DEFISIT TINGKAT BERAT)3. PROTEIN 113,5% (NORMAL)4.LEMAK 86,8% (DEFISIT TINGKAT RINGAN)
PPT PENGKAJIAN SISTEM MUSKULOSKELETAL 2.pptxEmohAsJohn
PENGKAJIAN MUSKULOSKELETAL
Gangguan neurologi sangat beragam bentuknya, banyak dari pasien yang menderita gangguan memori dan tidak mampu menjalani aktivitas sehari-hari secara normal. Penyakit-penyakit neurologi kebanyakan memiliki efek melemahkan kehidupan pasien, sehingga memberikan pengobatan neurologis sangat penting bagi kehidupan pasien.
1. Prof. DR. H. Harrizul Rivai. M.S.
Guru Besar Kimia Farmasi
Fakultas Farmasi
Universitas Andalas
2. Pedoman yang ada
Pedoman Industri dari FDA: Validasi Metode
Bioanalitik, September 2013
Pedoman EMA tentang Validasi Metode Bioanalitik,
Februari 2012
23/03/2020 Harrizul Rivai 2
3. Kepatuhan pada GCP / GLP
Studi klinis harus dilakukan dalam kondisi yang sesuai
dengan prinsip Good Clinical Practice (GCP), dan untuk
metode analisis dan prosedur penanganan data sampel
sesuai dengan prinsip Good Lab Practice (GLP).
GCP / GLP diperlukan untuk memastikan Kualitas dan
Kredibilitas
Kredibilitas sangat penting karena persetujuan produk
berdasarkan hanya 1 atau beberapa studi
Validasi metode bioanalitik meliputi:
pengembangan metode
validasi pra-studi
validasi dalam studi
23/03/2020 Harrizul Rivai 3
4. Standar pembanding
Analisis obat dan metabolitnya dalam matriks biologis
dilakukan dengan menggunakan sampel yang dibubuhi
dengan standar kalibrasi (referensi) dan menggunakan
sampel kontrol kualitas (QC).
Kemurnian standar pembanding yang digunakan untuk
menyiapkan sampel yang dibubuhi dengan standar dapat
mempengaruhi data penelitian.
Oleh karena itu, standar pembanding yang otentik dengan
identitas dan kemurnian yang diketahui harus digunakan
untuk menyiapkan larutan dengan konsentrasi yang
diketahui
23/03/2020 Harrizul Rivai 4
5. Standar pembanding
Nomor sumber dan jumlah, tanggal kedaluwarsa,
sertifikat analisis bila tersedia, dan / atau bukti
identitas dan kemurnian eksternal atau eksternal harus
dilengkapi untuk setiap standar pembanding.
Jika memungkinkan, standar pembanding harus
identik dengan analit
Bila hal ini tidak mungkin, bentuk kimia yang telah
stabil (basis basa atau asam, garam atau ester) dengan
kemurnian yang diketahui dapat digunakan
23/03/2020 Harrizul Rivai 5
6. Standar pembanding
Tiga jenis standar pembanding yang lazim digunakan:
(1) standar pembanding bersertifikasi (misalnya, standar
perbandingan USP, BPFI);
(2) standar pembanding yang tersedia secara komersial yang
diperoleh dari sumber komersial terkemuka;
(3) bahan lain dengan kemurnian yang terdokumentasi yang
disintesis oleh laboratorium analitik atau lembaga
nonkomersial lainnya
23/03/2020 Harrizul Rivai 6
7. PENGEMBANGAN METODE
Pengembangan metode memuat tentang penjelasan
rinci dan spesifik tentang metode bioanalitik yang
harus tertulis
Penjelasan ini bisa berupa protokol, rencana studi,
laporan, dan/atau standard operational procedure
(SOP)
Sesuatu metode yang dikembangkan itu dianggap sah
(valid) apabila metode itu telah divalidasi
23/03/2020 Harrizul Rivai 7
8. VALIDASI METODE
23/03/2020 Harrizul Rivai 8
Validasi metode adalah prosedur yang membuktikan
bahwa metode dapat diandalkan dan dapat direproduksi
untuk tujuan penggunaan tertentu.
Jenis validasi metode:
1. Validasi penuh: validasi untuk pertama kali, obat baru, atau
penambahan metabolit
2. Validasi sebagian: validasi terhadap modifikasi metode yang
telah divalidasi
3. Validation silang: validasi untuk perbandingan antar metode
9. VALIDASI PENDAHULUAN
23/03/2020 Harrizul Rivai 9
Parameter fundamental untuk validasi
• Selektif
• Sensitif
• Tepat
• Teliti
• Stabil
Metode yang
digunakan untuk
penentuan obat
dan/atau
metabolit harus:
10. Selektivitas
Selektivitas adalah kemampuan metode analitik untuk
membedakan dan mengukur analit dengan adanya
komponen lain dalam sampel
Untuk selektivitas, analisis sampel blanko dari matriks
biologis yang tepat (plasma, urin, atau matriks lainnya)
harus diperoleh dari setidaknya enam sumber
Setiap sampel blanko harus diuji untuk interferensi, dan
selektivitas harus dipastikan di batas bawah kuantifikasi
(LLOQ)
23/03/2020 Harrizul Rivai 10
11. Selektivitas …
Substansi yang berpotensi mengganggu dalam matriks biologis meliputi:
komponen matriks endogen,
metabolit,
produk dekomposisi,
pengobatan bersamaan dan
xenobiotik eksogen lainnya.
23/03/2020 Harrizul Rivai 11
12. Pencilan
Data validasi metode yang dilaporkan dan penentuan
akurasi dan presisi harus mencakup semua pencilan
Namun, perhitungan akurasi dan presisi tidak
termasuk nilai-nilai yang secara statistik ditentukan
sebagai pencilan juga dapat dilaporkan
23/03/2020 Harrizul Rivai 12
13. Ketepatan (akurasi)
Keakuratan metode analitis menggambarkan
kedekatan hasil uji rata-rata yang diperoleh dengan
metode untuk nilai sebenarnya (konsentrasi) dari
analit
Akurasi ditentukan dengan mereplikasi analisis sampel
yang mengandung jumlah analit (sampel-sampel) yang
diketahui
Akurasi harus diukur menggunakan minimal lima
determinasi per konsentrasi
23/03/2020 Harrizul Rivai 13
14. Ketepatan …
Disarankan minimal tiga konsentrasi dalam kisaran
konsentrasi yang diharapkan
Nilai rata-rata harus berada dalam 15% dari nilai aktual
kecuali di LLOQ, di mana nilai itu tidak boleh
menyimpang lebih dari 20%
Penyimpangan rata-rata dari nilai sebenarnya berfungsi
sebagai ukuran akurasi
23/03/2020 Harrizul Rivai 14
15. Presisi (ketelitian)
Ketelitian metode analitik menggambarkan kedekatan
ukuran individu analit ketika prosedur tersebut
diterapkan berulang kali pada banyak alikuot dari satu
volume homogen tunggal matriks biologis
Presisi harus diukur menggunakan minimum lima
penentuan per konsentrasi
Disarankan minimal tiga konsentrasi dalam kisaran
konsentrasi yang diharapkan
23/03/2020 Harrizul Rivai 15
16. Presisi (ketelitian) …
Ketelitian yang ditentukan pada setiap tingkat
konsentrasi tidak boleh melebihi 15% dari koefisien
variasi (CV) kecuali untuk LLOQ, di mana ia tidak
boleh melebihi 20% dari CV.
Presisi kemudian dibagi lagi ke dalam run, presisi
intra-batch atau pengulangan, yang menilai presisi
selama menjalankan analitis tunggal, dan antara-run,
presisi atau pengulangan antar-batch, yang mengukur
presisi dengan waktu, dan mungkin melibatkan analis,
peralatan yang berbeda, reagen, dan laboratorium.
23/03/2020 Harrizul Rivai 16
19. Perolehan kembali
Perolehan kembali analit dalam pengujian adalah
respons detektor yang diperoleh dari jumlah analit
yang ditambahkan dan diekstraksi dari matriks
biologis, dibandingkan dengan respons detektor yang
diperoleh untuk konsentrasi sebenarnya dari standar
otentik murni
Perolehan kembali berkaitan dengan efisiensi ekstraksi
metode analitik dalam batas variabilitas
23/03/2020 Harrizul Rivai 19
20. Perolehan kembali …
Perolehan kembali analit tidak harus 100%, tetapi
tingkat perolehan kembali analit dan standar internal
harus konsisten, tepat, dan dapat diproduksi ulang
Eksperimen perolehan kembali harus dilakukan
dengan membandingkan hasil analitis untuk sampel
yang diekstraksi pada tiga konsentrasi (rendah, sedang,
dan tinggi) dengan standar yang tidak diekstraksi yang
mewakili perolehan kembali 100%.
23/03/2020 Harrizul Rivai 20
21. Kurva Kalibrasi (Kurva Standar)
Kurva kalibrasi (standar) adalah
hubungan antara respons
instrumen dan konsentrasi analit
yang diketahui
Kurva kalibrasi harus dihasilkan
untuk setiap analit dalam sampel
Sejumlah standar yang memadai
harus digunakan untuk
mendefinisikan secara memadai
hubungan antara konsentrasi dan
respons.
Kurva kalibrasi harus disiapkan
dalam matriks biologis yang sama
dengan sampel dalam penelitian
yang dimaksudkan dengan
penambahan matriks dengan
konsentrasi analit yang diketahui.
23/03/2020 Harrizul Rivai 21
22. Kurva Kalibrasi (Kurva Standar) …
Jumlah standar yang digunakan dalam membuat kurva
kalibrasi akan menjadi fungsi dari rentang nilai
analitik yang diantisipasi dan sifat hubungan analit /
respons
Konsentrasi standar harus dipilih berdasarkan rentang
konsentrasi yang diharapkan dalam studi tertentu
Kurva kalibrasi harus terdiri dari sampel kosong
(sampel matriks diproses tanpa standar internal),
sampel nol (sampel matriks diproses dengan standar
internal), dan enam hingga delapan sampel tidak nol
mencakup rentang yang diharapkan, termasuk LLOQ.
23/03/2020 Harrizul Rivai 22
23. Batas Kuantifikasi yang Lebih
Rendah (LLOQ)
Standar terendah pada kurva kalibrasi harus diterima
sebagai batas kuantifikasi jika kondisi berikut
dipenuhi:
1. Respons analit di LLOQ harus setidaknya 5 kali respons
dibandingkan dengan respons kosong.
2. Puncak analit (respons) harus dapat diidentifikasi,
diskrit, dan dapat direproduksi dengan presisi 20% dan
akurasi 80-120%.
23/03/2020 Harrizul Rivai 23
24. Kurva Kalibrasi/Kurva Standar/
Respons-Konsentrasi
Model paling sederhana yang secara memadai
menggambarkan hubungan konsentrasi-respons harus
digunakan
Pemilihan pembobotan dan penggunaan persamaan
regresi kompleks harus dibenarkan
Kondisi berikut harus dipenuhi dalam
mengembangkan kurva kalibrasi:
1. Penyimpangan 20% dari LLOQ dari konsentrasi nominal
2. 15% deviasi standar selain LLOQ dari konsentrasi
nominal
23/03/2020 Harrizul Rivai 24
25. Kurva Kalibrasi/Kurva Standar/
Respons-Konsentrasi ...
Setidaknya empat dari enam standar tidak nol harus
memenuhi kriteria di atas, termasuk LLOQ dan
standar kalibrasi pada konsentrasi tertinggi (ULLQ)
Tidak termasuk standar tidak boleh mengubah model
yang digunakan
23/03/2020 Harrizul Rivai 25
26. Efek matriks
Dalam kasus prosedur berbasis LC-MS-MS, langkah-
langkah yang tepat harus diambil untuk memastikan
kurangnya efek matriks selama penerapan metode,
terutama jika sifat matriks berubah dari matriks yang
digunakan selama validasi metode.
Bila memungkinkan, matriks biologis yang sama
dengan matriks dalam sampel yang dimaksudkan
harus digunakan untuk tujuan validasi
Untuk jaringan dengan ketersediaan terbatas, seperti
sumsum tulang, matriks proksi yang sesuai secara
fisiologis dapat diganti
23/03/2020 Harrizul Rivai 26
27. Pengenceran sampel
Kemampuan untuk mengencerkan sampel yang
semula di atas batas atas kurva standar harus
ditunjukkan oleh parameter akurasi dan presisi dalam
validasi
23/03/2020 Harrizul Rivai 27
28. Stabilitas
Stabilitas obat dalam cairan biologis adalah fungsi dari
kondisi penyimpanan, sifat kimia obat, matriks, dan
sistem wadah.
Stabilitas analit dalam matriks dan sistem wadah
tertentu hanya relevan dengan sistem matriks dan
wadah tersebut dan tidak boleh diekstrapolasi ke
matriks lain dan sistem wadah lain.
Stabilitas analit harus ditetapkan sebelum analisis
sampel.
23/03/2020 Harrizul Rivai 28
29. Stabilitas …
Prosedur stabilitas harus mengevaluasi stabilitas analit
selama pengumpulan dan penanganan sampel, setelah
penyimpanan jangka panjang (beku pada suhu
penyimpanan yang dimaksudkan) dan penyimpanan
jangka pendek (suhu kamar), dan setelah melalui siklus
pembekuan dan pencairan dan proses analitis.
Kondisi yang digunakan dalam percobaan stabilitas
harus mencerminkan situasi yang mungkin dihadapi
selama penanganan dan analisis sampel actual.
23/03/2020 Harrizul Rivai 29
30. Stabilitas …
Prosedur juga harus mencakup evaluasi stabilitas analit
dalam larutan stok.
Semua penentuan stabilitas harus menggunakan satu
set sampel yang disiapkan dari larutan stok analit yang
baru dibuat dalam matriks biologis yang sesuai bebas-
analit, bebas-interferensi
Larutan stok analit untuk evaluasi stabilitas harus
disiapkan dalam pelarut yang sesuai pada konsentrasi
yang diketahui
23/03/2020 Harrizul Rivai 30
31. 1. Stabilitas Pembekuan dan
Pencairan
Stabilitas analit harus ditentukan setelah tiga siklus pembekuan dan
pencairan
Setidaknya tiga alikuot pada masing-masing konsentrasi rendah dan
tinggi harus disimpan pada suhu penyimpanan yang dimaksudkan
selama 24 jam dan dicairkan tanpa bantuan pada suhu kamar.
Ketika sepenuhnya dicairkan, sampel harus dibekukan kembali
selama 12 hingga 24 jam dalam kondisi yang sama
Siklus beku-cair harus diulang dua kali lagi, kemudian dianalisis pada
siklus ketiga
Jika analit tidak stabil pada suhu penyimpanan yang dimaksudkan,
sampel stabilitas harus dibekukan pada -70ºC selama tiga siklus
pembekuan dan pencairan
23/03/2020 Harrizul Rivai 31
32. 2. Stabilitas Suhu Jangka Pendek
Tiga alikuot dari masing-masing konsentrasi rendah
dan tinggi harus dicairkan pada suhu kamar dan
disimpan pada suhu ini dari 4 hingga 24 jam
(berdasarkan pada durasi yang diharapkan bahwa
sampel akan dipertahankan pada suhu kamar dalam
studi yang dimaksudkan) dan dianalisis
23/03/2020 Harrizul Rivai 32
33. 3. Stabilitas Jangka Panjang
Waktu penyimpanan dalam evaluasi stabilitas jangka
panjang harus melebihi waktu antara tanggal
pengumpulan sampel pertama dan tanggal analisis
sampel terakhir
Stabilitas jangka panjang harus ditentukan dengan
menyimpan setidaknya tiga alikuot dari masing-masing
konsentrasi rendah dan tinggi dalam kondisi yang sama
dengan sampel penelitian.
23/03/2020 Harrizul Rivai 33
34. 3. Stabilitas Jangka Panjang …
Volume sampel harus cukup untuk analisis pada tiga
kesempatan terpisah
Konsentrasi semua sampel stabilitas harus
dibandingkan dengan rata-rata nilai yang dihitung
kembali untuk standar pada konsentrasi yang sesuai
sejak hari pertama pengujian stabilitas jangka panjang.
23/03/2020 Harrizul Rivai 34
35. 4. Stabilitas Larutan Induk (Stok)
Stabilitas larutan stok obat dan standar internal harus
dievaluasi pada suhu kamar selama setidaknya 6 jam
Jika larutan stok didinginkan atau dibekukan untuk
periode yang relevan, stabilitasnya harus
didokumentasikan
Setelah penyelesaian waktu penyimpanan yang
diinginkan, stabilitasnya harus diuji dengan
membandingkan respons instrumen dengan larutan
yang baru disiapkan
23/03/2020 Harrizul Rivai 35
36. 5. Stabilitas Pasca Persiapan
Stabilitas sampel yang diproses, termasuk waktu
tinggal di autosampler, harus ditentukan
Stabilitas obat dan standar internal harus dinilai selama
jangka waktu yang diantisipasi untuk ukuran batch
dalam sampel validasi dengan menentukan konsentrasi
berdasarkan standar kalibrasi asli.
23/03/2020 Harrizul Rivai 36
37. APLIKASI UNTUK ANALISIS OBAT
RUTIN
Pengujian semua sampel analit dalam matriks biologis
harus diselesaikan dalam periode waktu ketersediaan
data stabilitas
Sampel dapat dianalisis dengan penentuan tunggal
tanpa duplikat atau analisis replikasi jika metode
pengujian memiliki variabilitas yang dapat diterima
Apabila presisi dan akurasi tinggi mungkin sulit
dicapai, analisis rangkap dua atau bahkan rangkap tiga
dapat dilakukan untuk estimasi analisis yang lebih
baik.
23/03/2020 Harrizul Rivai 37
38. Kurva kalibrasi
23/03/2020 Harrizul Rivai 38
Kurva kalibrasi harus dihasilkan
untuk setiap analit untuk
menguji sampel dalam setiap
analitik dan harus digunakan
untuk menghitung konsentrasi
analit dalam sampel yang tidak
diketahui dalam analitik.
Proses analitik dapat terdiri dari
sampel QC, standar kalibrasi,
dan (1) semua sampel yang
diproses untuk dianalisis
sebagai satu batch atau (2)
batch yang terdiri dari sampel
yang diproses tidak diketahui
dari satu atau lebih sukarelawan
dalam sebuah penelitian.
QC QCQC QC QCQC
39. Kurva kalibrasi …
23/03/2020 Harrizul Rivai 39
Sampel Standar & QC dapat disiapkan dari larutan spiking
stock yang sama, jika stabilitas dan akurasi diverifikasi
Satu sumber matriks dapat digunakan, jika selektivitas
diverifikasi
Sampel kurva standar, blanko, QC, dan sampel studi dapat
diatur sesuai dengan yang dipertimbangkan dalam
pelaksanaan.
Penempatan sampel standar dan QC dalam suatu proses
analitik harus dirancang untuk mendeteksi pergeseran
pengujian selama menjalankan proses analitik.
QC QCQC QC QCQC
40. Calibration curve
The calibration (standard) curve should cover the
expected unknown sample concentration range in
addition to a calibrator sample at LLOQ
Estimation of concentration in unknown samples by
extrapolation of standard curves below LLOQ or above
the highest standard is not recommended
Instead, the standard curve should be redefined or
samples with higher concentration should be diluted
and reassayed
23/03/2020 Harrizul Rivai 40
41. Calibration curve
A matrix-based standard curve should consist of a
minimum of six standard points, excluding blanks
(either single or replicate), covering the entire range.
The same curve fitting, weighting, and goodness of fit
determined during pre-study validation should be used
for the standard curve within the study
Changes in the response function relationship between
pre-study validation and routine run validation indicate
potential problems
23/03/2020 Harrizul Rivai 41
42. Acceptance criteria for calibration
curves
A matrix-based standard curve should consist of a
minimum of six standard points, excluding blanks
(either single or replicate), covering the entire range
The same curve fitting, weighting, and goodness of fit
23/03/2020 Harrizul Rivai 42
43. Acceptance range for calibration
standards
Matrix-based standard calibration samples: 75%, or a
minimum of six standards, when back-calculated
(including ULOQ) should fall within ±15%, except for
LLOQ, when it should be ±20% of the nominal value
Values falling outside these limits can be discarded,
provided they do not change the established model
Acceptance criteria for accuracy and precision should
be provided for both the intra-day and intra-run
experiment
Acceptance criteria of pre-study validation (15%)
23/03/2020 Harrizul Rivai 43
44. Quality Controls to monitor
It is preferable to analyze all study samples from a
subject in a single run
Once the analytical method has been validated for
routine use, its accuracy and precision should be
monitored regularly to ensure that the method
continues to perform satisfactorily
To achieve this objective, a number of QC samples
prepared separately should be analyzed with processed
test samples at intervals based on the total number of
samples
23/03/2020 Harrizul Rivai 44
45. Quality controls (QC)
The QC samples in duplicate at three concentrations
(one near the LLOQ (i.e., 3 x LLOQ), one in midrange,
and one close to the high end of the range) should be
incorporated in each assay run
The number of QC samples (in multiples of three) will
depend on the total number of samples in the run
The results of the QC samples provide the basis of
accepting or rejecting the run
23/03/2020 Harrizul Rivai 45
46. Acceptance criteria for QCs
At least 67% (four of every six) QC samples should be within 15% of
their respective nominal value
Two of the six (33%) QC samples may be outside the 15% of their
respective nominal value, but not both at the same concentration
The minimum number of samples (in multiples of three) should be at
least 5% of the number of unknown samples or six total QCs,
whichever is greater.
The data from rejected runs need not be documented, but the fact
that a run was rejected and the reason for failure should be recorded
23/03/2020 Harrizul Rivai 46
47. Re-analysis of samples or repeat
analyses
The rationale and the reporting should be clearly documented
Documentation should include
the initial and repeat analysis results
the reported result
assay run identification
the reason for the repeat analysis
the requestor of the repeat analysis, and
the manager authorizing reanalysis.
Repeat analysis of a clinical or preclinical sample should be
performed only under a predefined SOP.
23/03/2020 Harrizul Rivai 47
48. Repeat analysis
SOP or guideline for repeat analysis, reasons
for repeating and acceptance criteria
Reasons for repeat analyses could include:
Repeat analysis of clinical or preclinical samples
for regulatory purposes,
inconsistent replicate analysis,
samples outside of the assay range,
sample processing errors,
equipment failure,
poor chromatography, and
Inconsistent pharmacokinetic data
Reassays should be done in triplicate if
sample volume allows
23/03/2020 Harrizul Rivai 48
49. Sample Data Reintegration
An SOP or guideline for sample data reintegration
should be established
This SOP or guideline should explain the reasons for
reintegration and how the reintegration is to be
performed
The rationale for the reintegration should be clearly
described and documented
Original and reintegration data should be reported
23/03/2020 Harrizul Rivai 49
50. DOCUMENTATION
Documentation of successful completion of validation
studies should be provided in the assay validation
report
General and specific SOPs and good record keeping are
an essential part of a validated analytical method
The data generated for bioanalytical method
establishment and the QCs should be documented and
available for data audit and inspection
23/03/2020 Harrizul Rivai 50
51. Documentation to submit
Documentation for submission to the Agency should
include:
(1) summary information,
(2) method development and establishment,
(3) bioanalytical reports of the application of any methods
to routine sample analysis, and
(4) other information applicable to method development
and establishment and/or to routine sample analysis.
23/03/2020 Harrizul Rivai 51
52. Thank you very much for your
attention!
23/03/2020 Harrizul Rivai 52
Editor's Notes
Penelitian klinis harus dilakukan sesuai dengan prinsip-prinsip Praktik Klinik yang Baik (Good Clinical Practice), dan untuk metode analisis dan penanganan data sampel harus sesuai dengan prinsip-prinsip Praktik Laboratorium yang Baik (Good Laboratory Practice).