1. Penelitian ini mengisolasi inhibitor angiotensin 1-konverting enzim (ACE) dari hidrolisat jeroan bandeng menggunakan enzim papain dan tripsin. 2. Hidrolisat diaplikasikan pada kromatografi ion pertukaran dan gel-filrasi untuk memisahkan inhibitor ACE. 3. Aktivitas inhibitor ACE dan kemurnian protein dikonfirmasi dengan uji aktivitas inhibitor ACE dan elektroforesis SDS-PAGE.

1. Isolasi Inhibitor Angiotensin 1Converting Enzim (ACE) dari hidrolisat
jeroan bandeng
Chanos chanos Forsk.
Oleh:
MASTORI
04/PN/177615/09995
PEMBIMBING : 1. Dr. Ir. Ustadi, M.Sc.
2. Dr. Ir. Iwan Yusuf B.L. ,M.sc.

2. HIPERTENSI PENYAKIT ENDEMIK
• 15-29% PENDUDUK DUNIA MENDERITA
• MENYERANG TARGET ORGAN UTAMA
PENGOBATAN
• EFEK SAMPING
• 1-2 BULAN
JEROAN BANDENG
• LIMBAH BERPOTENSI SEBAGAI HIDROLISAT
• MENINGKATKAN NILAI TAMBAH HIDROLISAT

3. MENGETAHUI KEKUATAN
INHIBITOR
•HIIDOLISIS PAPAIN
•HIDROLISIS TRIPSIN
MENGISOLASI
•INHIBITOR ACE

4. BAHAN
 Jeroan ikan bandeng(
Chanos chanos Forsk.)
 ACE ( Angiotensin
Converting Enzyme)
 Substrat ACE (hippurylhistidyl-leucine)
 Buffer Sodium Borat, NaCl
0,5 M, HCl 1 M,
 Etil Asetat
 Aquades,
 SP-Sephadex C25
(35x350 mm),
 SP-Spadedex G-25 (2,5 x
150 cm)
 enzim papain dan
tripsin,
ALAT
Tabung dan gelas
inkubasi,
 mikro pipet
 tabung reaksi,
 sentifuse,
 freez dray
 UV-Spectrofotometer,
 Inkubator
 kromatografi,
 Electroforesis SDS-PAGE,
 alat uji protein,


5. Jeroan bandeng
dibersihkan dan direbus
Dihomogenkan diatur : HCl 1 /NaOH
1 N ( papain pH5,5 & tripsin pH8,5)
Tambahkan enzim ( papain & tripsin
secara terpisah) 5% b/b protein
inkubasi 50 0C 2jam papain& 35 0C
2jam & diinaktivasi pada suhu didih
air 10 menit
Dipisahkan & disaring , disentrifus
10 menit 110.000 rpm ( hidrolisat)

6. Pencampuran
dan inkubasi
• 50 µ l sampel
• 50 µ l larut ACE
( 25 munit/ml)
• pre-inkubasi;
37 oC, 10 menit
• 150 µ l substrat
( 8,3 mM HHl)
Diinkubasi
;37 oC, 30’
ekstraksi
• 250 µ l 1 M
HCl
• ekstrasi 0,5
ml etil asetat
• sentrifus (
800 gravitasi,
15’
• 0,2 ml
supernatan ke
tabung uji
Pengukuan
absorbansi
• Dievaporasi
suhu ruang 2
jam (
didalam
vakum)
• Dilarutkan 1
ml aquades
• Diukur 228
UVspectrophoto
meter

7. Presentase penghambatan (%) = ([Ec –
Es]/[Ec – Eb]) x 100
 Es = absorbansi larutan test
 Ec = absorbansi larutan control
 Eb = absorbansi larutan blank
 IC50 diperoleh jika larutan test
menghambat 50% aktivitas ACE


8. Ion Exchange : Fasa tetap: SP-Sephadex
C25
Fasa bergerak: buffer sodium borat
20 mM ( pH 4)
Linier gradient NaCl (0-2 M)
 Gel-filtration : fasa tetap: SP Sephadex G 25
fasa bergerak: aquades
kecepatan aliran ratarata 30 ml/ jam, setiap
fraksi dalm tabung 5 ml.


9.  Uji
aktifitas inhibitor ACE
 Uji kadar protein
 Uji kemurnian protein dengan
elektroporesis ( SDS-PAGE )

10. Papain
Jeroan
Bandeng
hidrolisat
Uji Inhibitor ACE
(220)
Uji Inhibitor
ACE (220)
SP Sephadex
C25
Fraksi-fraksi
SP Sephadex
G25
Fraksi-fraksi
Uji Kemurnian
Isolat
Tripsin
Uji inhibitor ACE
(220nm)
Uji protein
(280nm)
Uji protein
(280nm)