1. Bubrežni enzimi
Predavanja iz Kliničke enzimologije
Integrisane akademske studije: medicinska biohemija
školska 2014/2015 godina

2. Bubrežni enzimi
• Enzimi koji se ne filtriraju u glomerulima ali se
oslobađaju iz oštećenih tubula
• Detektuju se u urinu
– N-acetil-β-D-glukozaminidaza – NAG
– Alkalna fosfataza
– Gama-glutamil transferaza
– Laktat dehidrogenaza
• Markeri oštećenja tubula ?
• ALP, GGT i LD
– Nestabilnost u urinu
– Prisustvo inhibitora u urinu

3. N-acetil-β-D-glukozaminidaza
• N-acetil-B-D-glukozaminidaza –NAG
• Marker visoke molekulske mase
• Mm 150000 Da
• Lizozomalni enzim
• Distribucija
• Lizozomi bubrega, jetre i pluća
• Visoka aktivnost u ćelijama
proksimalnih tubula
• Dva izoenzima u urinu: kiseli i bazni
• Uloga NAG
• U intracelularnoj degradaciji glikolipida i
glikoproteina
• Marker oštećenja tubula

4. Klinički značaj N-acetil-β-D-glukozaminidaze
Ekskrecija NAG je povećana kod:
• Nefrotskog sindroma
• Glomerulonefritisa
• Tubulointersticijalnog nefritisa
• Trovanja teškim metalima
• Odbacivanja bubrežnog transplantata
• Dijabetes melitusa (sa ili bez nefropatije)
• Hipertenzivnih renalnih bolesti
• Hipertiroidizma
• Hirurških intervencija

5. Metoda određivanja
• Spektrofotometrijska metoda
• Hidroliza supstrata nitrofenil- N-acetilglukozamin
• Hidroliza supstrata i oslobađanje para-nitrofenola
• Merenje na 405 nm

6. Lizozim
• Lizozim – muramidaza
• N-acetilmuramid glikanhidrolaza
• Spada u glikozid hidrolaze
• EC 3.2.1.17
• Deluje na membranu bakterija i hidrolizuje 1,4-beta veze
– između N-acetilmuramske kiseline i N-acetil-D-glukozamina u
peptidoglikanima
– između N-acetilglukozamina u hitodekstrinima
• Male molekulske mase 14,7 Kda
• Gen za lizozim - LYZ

7. Struktura lizozima
• Primarna struktura
• Monomer, polipeptidni lanac od 129 ak
• 5 heliksa, 3 antiparalelne ploče i 4 disulfidne stabilizirajuće veze

8. Struktura lizozima
• Lizozim je izuvijan u obliku
kompaktne globularne strukture sa
jednom šupljinom na površini
proteina.
• Polisaharid – lizozim intermedijer

9. Distribucija enzima i funkcija
Lokalizacija enzima
• Saliva
• Suze
– U visokoj koncentraciji 3 % od ukupnih proteina
• Mleko majčino
• Mukus
• Citoplazmatske granule polimorfonuklearnih neutrofila PMN
• Nalazi se i u belancetu u velikim količinama

10. Mehanizam dejstva lizozima na polisaharide
Hidroliza C-O veze između NAM i NAG (N-acetilmuraminske
kiseline i N-acetil glukozamina)
Aktivnost lizozima zavisi od 2 aminokiseline glutaminske kiseline
(Glu 35) i aspartata (ASP52)
Glu35 donor protona za glikozidnu vezu
Asp52 deluje kao nukleofil i stvara intermedijer

11. Funkcija enzima
Funkcija enzima
• Razgrađuje ćelijske membrane nekih
bakterija posebno gram-pozitivnih
• Lizozim je odbrana od bakterija

12. Klinički značaj lizozima
• Lizozim u urinu
• Marker tubularne funkcije
– Povećana ekskrecija kod Fankonijevog sindroma
– Normalan kod nefrotskog sindroma
• Lizozim u plazmi
• Povećane vrednosti
– u inflamaciji i leukemijama
– lizozim je deo imunog sistema
• Snižene vrednosti
– kod bronhopulmonalne displazije dece
• Snižena sekrecija lizozima u suzama
– smanjuje protektivnu barijeru na očima
– konjuktivitis

13. Enzimi u likvoru
• Laktat dehidrogenaza LD
• Beta glukuronidaza
• Kreatin kinaza CK-BB
• Neuron-specifična enolaza NSE
• Glukoza-6-fosfat izomeraza G6PI
• Alanin aminotransferaza ALT
• Angiotensinogen konverirajući enzim ACE

14. LD u likvoru
• Bakterijski meningitis
• LD je osetljiviji i raniji marker nego glukoza u likvoru
• Preklapanje nalaza u bakterijskom i virusnom (aseptičnom)
meningitisu
• U slučaju kontaminacije eritrocitima lažno pozitivan rezultat
• LD i kod primarnih tumora CNS i kod širenja meningijalnih
metastaza
• Pre svega povećanje izoenzima LD4 i LD5

15. Enzimi u likvoru
• Primarni i metastatski tumori
• Beta-glukuronidaza
• Neuron specifična enolaza NSE
• Glukoza-6-fosfat izomeraza G6PI
• Alaninaminotransferaza ALT
• Cerebralna ishemija i meningoencephalitides
– Povećanje: CK BB i NSE
• Ishemijsko oštećenje mozga
• Reverzibilno ili permenantno ?
• CK BB, LD, NSE i ALT

16. Enzimi u likvoru
• Angiotenzinogen konvertujući enzim ACE
• Marker neuroloških promena u sarkoidozi
• Istovremeno porast i serumskog enzima ACE
• Diferencijacija od serumskog enzima u slučaju
oštećenja krvno-moždane barijere
• Određivanje aktivnosti enzima u likvoru
• Određivanje masene koncentracije enzima u likvoru
• Savremenije metode za određivanje izoenzima
imunohemijskim metodama

17. Angiotenzin konvertujući enzim ACE
• Angiotenzin konvertujući enzim, EC 3.4.15.1
• Dipeptidalna karboksipeptidaza I
• Peptidaza P
• Dipeptidna hidrolaza
• Peptidalna dipeptidaza
• Kininaza II
• Angiotenzin I-kovertujući enzim
• Dipetidalna karboksipeptidaza itd
• Peptidaza od velikog značaja za regulaciju krvnog
pritiska

18. Angiotenzin konvertujući enzim ACE
• Sekretuju je endotel krvnih sudova pluća i bubrega
• Zn-glikoprotein
• Dve uloge ACE
1. Katalizuje reakciju konverzije angiotenzina I u angiotenzin II
• povećava se vazokonstriktorno svojstvo
• povišenje pritiska
2. Razgrađuje bradikinin
• Potencijalni vazodilatator
• Katalizuje reakciju odvajanja dipeptida
• ACE inhibitori

20. Klinički značaj ACE
• Sarkoidoza
– Dijagnoza i praćenje bolesti
– Bolest pluća
• Bolesti pluća
• Milijarna tuberkuloza
• Hipetireoidoza