TẾ BÀO GỐC

1. NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG TẾ BÀO GỐC
TỪ TỦY XƯƠNG ĐIỀU TRỊ BỆNH LÝ XƯƠNG

2. NỘI DUNG
ĐẶT VẤN ĐỀ1
MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU2
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU3
KẾT QUẢ4
HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO5

3. ĐẶT VẤN ĐỀ

4. + Mô xương => tự lành vết thương [1]
+ Với những khuyết hỗng xương lớn => mô không thể
tự chữa lành nếu không có sự can thiệp [2]
+ Vật liệu ghép thay xương:
– Ghép xương tự thân: “tiêu chuẩn vàng” [3]
– Ghép xương đồng loại
– Ghép xương dị loại
=> Những loại mô ghép trên có một số “hạn chế”

6. + Xương tự thân => Hạn chế số lượng, gây tổn thương
+ Xương ghép đồng loại => Hạn chế số lượng, “nguy
cơ” truyền nhiễm bệnh: HIV, HBV, HCV, VDRL …
+ Xương dị loại => Dồi giàu nhưng nguy cơ truyền
nhiễm những “protein lạ” không kiểm soát được, yếu
tố tâm linh …
=> NHU CẦU TÌM NGUỒN THAY THẾ

9. VẬT LIỆU GHÉP THAY
XƯƠNG
– Kim loại (Titanium, Vitallium,
Aluminium …)
– Calcium photphate (TCP và
HA)
– Thủy tinh sinh học (gốm sứ)
– Polymer tổng hợp
(Polyhydroxyethyl
methacrylate, Polythylen ...)

12. ĐÁP ỨNG NHU CẦU THỰC TẾ
KHÔNG CÓ
XƯƠNG GHÉP

13. Để tạo một mảnh ghép thay
xương hiệu quả cần có:
- Tế bào (nguyên bào xương)
- Giá thể (khung xương)

14. TẾ BÀO GỐC
TỰ ĐỔI MỚI
BIỆT HÓA
TẾ BÀO KHÁC
TẾ BÀO MỠ
TẾ BÀO XƯƠNG
NGUỒN
TẾ BÀO

15. RĂNG
MẠCH
MÁU
GAN
TỦY
XƯƠNG
NGUỒN THU NHẬN TẾ BÀO GỐC
TRƯỞNG THÀNH
NÃO
DA
TUYẾN TIÊU HÓA
MÔ
CƠ
MÁU NGOẠI VI
MÔ CƠ
TIM

16. TẾ BÀO
GỐC TRUNG MÔ
MÔ MỠ
THẦN
KINH TIM
MẠCH MÁU
THẬN
CƠ
TỦY XƯƠNG
MÁU NGOẠI VI
XƯƠNG
MỠ
SỤN

17. TẾ BÀO GỐC
TRUNG MÔ
MẢNH GHÉP
NUÔI CẤY
(IN VITRO)
CẤY GHÉP
VẤN ĐỀ TỒN TẠI ?
=> TẾ BÀO PHÂN TÁN

18. Giá thể - Porites lutea
Porites lutea - Đã được sử dụng để ghép thay xương
- Làm giá thể để nuôi cấy tế bào

20. CÔNG NGHỆ MÔ XƯƠNG
XƯƠNG GHÉP NHÂN TẠO

21. Tế bào gốc trung mô
(nguyên bào xương)
MẢNH GHÉP THAY XƯƠNG
CÔNG NGHỆ MÔ XƯƠNG
San hô Porites lutea
MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU

23. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU

24. TẠO MẢNH GHÉP THAY XƯƠNG
VỚI SỰ KẾT HỢP CỦA:
- San hô (Porites lutea)
- Tế bào gốc trung mô từ tủy xương

25. PHƯƠNG PHÁP
NGHIÊN CỨU

26. • Thiết kế nghiên cứu :
Thí nghiệm thực nghiệm - mô tả
• Đối tượng nghiên cứu :
- Tủy xương người thu nhận trong điều kiện phòng mổ
- Porites lutea: Phòng thí nghiệm Vật liệu Sinh học
Bộ môn Mô – Phôi
Trường ĐH Y Khoa Phạm Ngọc Thạch

27. QUY TRÌNH NGHIÊN CỨU
Phân lập và nuôi cấy tế bào gốc trung mô
Biệt hóa tế bào gốc trung mô thành nguyên bào xương
Chuyển tế bào gốc trung mô lên giá thể san hô
Tạo ra mảnh ghép

28. PHÂN LẬP VÀ NUÔI CẤY TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ
TỦY XƯƠNG NGƯỜI
Tủy
xương
Tủy
xương
Ficoll-
paque
Tế bào
đơn nhân
Nuôi trong
DMEM/F12, 10%
FBS, kháng sinh,
ủ ở 370C, 5%
CO2.

29. NUÔI CẤY TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ
C
(C). Tế bào sau 1 tuần
nuôi cấy, đạt được mật
độ cấy chuyền (10X)
A
(A). Tế bào sau 3 ngày
nuôi cấy (10X)
B
(B). Tế bào sau 5
ngày nuôi cấy (10X)

30. ĐỊNH DANH TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ

31. ĐẶC TÍNH BÁM DÍNH
Hình thái tế bào gốc thu nhận từ tủy xương trong quá trình nuôi cấy in
vitro.
(A). Tế bào sau 7 ngày nuôi cấy được chụp dưới kính hiển vi đảo ngược (20X).
(B). Tế bào sau 7 ngày nuôi cấy (20X được nhuộm Giemsa và chụp hình dưới kính hiển
vi đảo ngược.
A B

32. TIỀM NĂNG BIỆT HÓA
Biệt hóa mỡ
(nhuộm Oli Red O)
Biệt hóa xương
(nhuộm Alkaline phosphatase)
Biệt hóa sụn
(nhuộm Alcian Blue)
Tế bào gốc
(tủy xương)
Biệt hóa in vitro

33. TIỀM NĂNG BIỆT HÓA TẠO XƯƠNG

34. TIỀM NĂNG BIỆT HÓA TẠO MỠ

35. TIỀM NĂNG BIỆT HÓA TẠO MỠ

36. TIỀM NĂNG BIỆT HÓA TẠO SỤN
Nhuộm Alcian Blue để xác định chất nền sụn

37. BIỂU HIỆN MARKER BỀ MẶT
Tế bào gốc
(tủy xương)
Flow Cytometry

38. ĐÁNH GIÁ BỘ NST ĐỒ CỦA TẾ BÀO
SAU NUÔI CẤY
(A). Bộ nhiễm sắc thể đồ tế bào gốc trung mô trước khi biệt hóa.
(B). Bộ nhiễm sắc thể đồ của nguyên bào xương.

39. San hô Porites lutea

40. San hô Porites lutea

41. TẠO MẢNH GHÉP
Tế bào gốc
(tủy xương)
Chuyển tế bào lên san hô
ĐÁNH GIÁ:
- Đặc tính bám dính
- Tiềm năng biệt hóa
- Khả năng tăng trưởng
Nhuộm Alkaline
phosphatase
Nhuộm Giemsa Nhuộm H&E
Bám dính Tăng trưởngBiệt hóa

42. Control

45. A
C D
B
ĐÁNH GIÁ MẢNH GHÉP
TRÊN MÔ HÌNH THỎ

46. A B C
NUÔI CẤY IN VITRO

47. B
ĐÁNH GIÁ CFU-Fs

48. ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG TĂNG TRƯỞNG

49. A
C D
B
TIỀM NĂNG BIỆT HÓA TẠO XƯƠNG
Nhuộm Alkaline phosphatase
Nhuộm Von kossa Nhuộm Alirazin Red

50. A CB
ĐÁNH GIÁ CẤU TRÚC MẢNH GHÉP
Nhuộm Giemsa Nhuộm H-SG Nhuộm H-SG

51. A CB
ĐÁNH GIÁ CẤU TRÚC MẢNH GHÉP
Nhuộm Alkaline phosphatase Chụp SEM bề mặt

52. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

53. PHẪU THUẬT GHÉP
MẢNH GHÉP XƯƠNG CÔNG NGHỆ
A
E F
C
D
B

54. A B C
E F G
D
H
MẢNH GHÉP TỒN TẠI 1 THÁNG

55. A B C
D E F
MẢNH GHÉP TỒN TẠI 3 THÁNG

56. A B C
D E F
MẢNH GHÉP TỒN TẠI 6 THÁNG

57. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
TRÊN LÂM SÀNG

58. THỬ NGHIỆM MẢNH GHÉP TRÊN
HOẠI TỬ CHỎM XƯƠNG ĐÙI
Bệnh nhân bị hoại tử vô trùng chỏm xương đùi 2 bên
ARCO 2

59. KẾT QUẢ GHÉP TRÊN BỆNH LÝ
THOÁI HÓA CHỎM XƯƠNG ĐÙI
Phẫu thuật ghép mảnh ghép san hô có mang MSC tự thân

60. 02 tháng sau ghép, biểu hiện trên lâm sàng bình thường

61. SAU PHẪU THUẬT SAU 2 THÁNG GHÉP
SO SÁNH KẾT QUẢ GHÉP

62. THỬ NGHIỆM MẢNH GHÉP TRÊN
MẤT ĐOẠN XƯƠNG
06 tuần sau ghép, biểu hiện trên lâm sàng bình thường

63. THỬ NGHIỆM MẢNH GHÉP TRÊN
MẤT ĐOẠN XƯƠNG
04 tháng sau ghép, biểu hiện trên lâm sàng bình thường

64. THỬ NGHIỆM MẢNH GHÉP TRÊN
MẤT ĐOẠN XƯƠNG
03 tháng sau ghép, biểu hiện trên lâm sàng bình thường

65. GHÉP XƯƠNG KÉO DÀI CHI

66. GHÉP XƯƠNG KÉO DÀI CHI

67. CÂU CHUYỆN CỦA BẠN TÔI

68. KẾT LUẬN
• Ghép mảnh ghép từ san hô và MSC tự thân là một
phương thức điều trị đầy tiềm năng cho các
trường hợp tổn thương xương.
• Tiệm cận với công nghệ mô trên thế giới.
• Cần triển khai và nghiên cứu sâu để trở thành một
phương thức điều trị hiệu quả cho người bệnh