تمثل جامعة الاسكندرية خطوة مهمة في مجال دراسة الوراثة، حيث يعود تاريخ عزل المادة الوراثية DNA إلى عام 1869 بواسطة فريدريش ميسشر. يتناول الوثيقة تقنيات عزل وتنقية الـ DNA، بما في ذلك طرق مختلفة مثل استخدام المواد الكيميائية المناسبة للحفاظ على استقرار جزيئات الـ DNA أثناء العمليات المخبرية. كما تقدم خطوات ملموسة ومناسبة لتنفيذ هذه العمليات بشكل فعال.

1. ‫ية‬‫ر‬‫االسكند‬‫جامعة‬
‫اعة‬‫ر‬‫الز‬ ‫كلية‬
‫اثة‬‫ر‬‫و‬‫قسم‬
‫قم‬‫ر‬‫العملى‬‫س‬‫ر‬‫الد‬5
‫الكائنات‬ ‫من‬ ‫الوراثية‬ ‫المادة‬ ‫عزل‬‫الحية‬

2. ‫لعزل‬ ‫ناجحة‬ ‫محاولة‬ ‫اول‬ ‫ان‬
‫الوراثية‬ ‫المادة‬‫ال‬‫ـ‬DNA
‫عام‬ ‫كانت‬1869‫للعالم‬
Friedrich Miescher‫و‬ ،
‫استخالص‬ ‫تكنيك‬ ‫مازال‬‫الـ‬
DNA‫اساسيات‬ ‫من‬ ‫هو‬
‫الوراثة‬ ‫مجال‬ ‫فى‬ ‫العمل‬
‫ان‬ ‫حيث‬ ‫الوراثية‬ ‫والهندسة‬‫ه‬
‫التى‬ ‫الخام‬ ‫المادة‬ ‫يمثل‬
‫هذ‬ ‫فى‬ ‫العلماء‬ ‫عليها‬ ‫يعمل‬‫ا‬
‫المجال‬.

3. ‫االستخالص‬Extraction
‫التنقية‬Purification
‫الترسيب‬Precipitation

5. ‫و‬ ‫الخاليا‬ ‫جدر‬ ‫من‬ ‫الوراثية‬ ‫المادة‬ ‫حول‬ ‫ما‬ ‫كل‬ ‫تكسير‬ ‫فى‬ ‫يتمثل‬ ‫هو‬ ‫و‬
‫م‬ ‫تتكون‬ ‫ما‬ ‫غالبا‬ ‫التى‬ ‫و‬ ‫هستونات‬ ‫و‬ ‫نووية‬ ‫اغشية‬ ‫و‬ ‫البالزمية‬ ‫االغشية‬‫ن‬
‫السكر‬ ‫عديديات‬ ‫و‬ ‫دهنية‬ ‫جزيئات‬ ‫و‬ ‫بروتين‬.
‫مستوى‬ ‫فى‬ ‫المحلول‬ ‫يكون‬ ‫ان‬ ‫يجب‬ ‫لكن‬ ‫و‬pH‫مناسب‬:
‫الـ‬ ‫يتكسر‬ ‫ال‬ ‫حتى‬DNA.
‫ب‬ ‫ترسيبها‬ ‫لسهولة‬ ‫المحلول‬ ‫فى‬ ‫مبعثرة‬ ‫تكون‬ ‫ال‬ ‫حتى‬ ‫جزيئاته‬ ‫تجميع‬‫ذلك‬ ‫عد‬
.

6. CTAB-
mercapto
ethanole
EDTA SDS Tris HCl Nacl

7. 8Tris .HCl PH=:‫الـ‬ ‫على‬ ‫يحافظ‬ ‫هو‬ ‫و‬Ph‫الـ‬ ‫يقرب‬ ‫ما‬ ‫هو‬ ‫و‬ ‫مناسب‬ ‫مستوى‬ ‫فى‬
8.
SDS(sodium dodocyle sulphate: )‫بالـ‬ ‫يحيط‬ ‫ما‬ ‫باذابة‬ ‫يقوم‬ ‫هو‬ ‫و‬DNA
‫تكسيرها‬ ‫و‬ ‫البروتينات‬ ‫باذابة‬ ‫يقوم‬ ‫كما‬ ، ‫خروجه‬ ‫لتسهيل‬ ‫الخلية‬ ‫اجزاء‬ ‫من‬.
EDTA:‫تحفيز‬ ‫لمنع‬ ‫الماغنسيوم‬ ‫ايونات‬ ‫مثل‬ ‫الثنائية‬ ‫االيونات‬ ‫بخلب‬ ‫تقوم‬‫االنزيمات‬
‫الـ‬ ‫تكسر‬ ‫الى‬DNA‫مثل‬DNAases‫الـ‬ ‫بتحليل‬ ‫تقوم‬ ‫ال‬ ‫حتى‬DNA.
CTAB&Mercaptoethanole:‫الـ‬ ‫بمساعدة‬ ‫يقوم‬ ‫ذلك‬ ‫و‬SDS‫نفس‬ ‫فى‬
‫الوظيفة‬(‫بالـ‬ ‫يحيط‬ ‫ما‬ ‫كل‬ ‫اذابة‬DNA)‫االستخالص‬ ‫اداء‬ ‫تحسين‬ ‫كذلك‬ ‫و‬.
NaCl:‫الـ‬ ‫على‬ ‫الموجودة‬ ‫السالبة‬ ‫الشحنة‬ ‫لمعادلة‬ ‫ذلك‬ ‫و‬DNA‫عملية‬ ‫من‬ ‫فيقلل‬
‫المحلول‬ ‫فى‬ ‫مبعثر‬ ‫يكون‬ ‫ال‬ ‫حتى‬ ‫تجميعه‬ ‫على‬ ‫يعمل‬ ‫ذلك‬ ‫و‬ ‫التنافر‬Neutralization.

8. ‫ال‬ ‫تنقية‬ ‫هى‬ ‫و‬DNA‫مختلفة‬ ‫جزيئات‬ ‫من‬ ‫به‬ ‫يحيط‬ ‫ما‬ ‫كل‬ ‫من‬.
‫من‬ ‫التنقية‬ ‫محلول‬ ‫مواد‬ ‫تتكون‬ ‫لذلك‬ ‫و‬:
Chloroform 24:isoamylealchol 1:
‫الـ‬ ‫تنقية‬ ‫على‬ ‫يعمل‬ ‫هو‬ ‫و‬DNA‫عمل‬ ‫طريق‬ ‫عن‬
Aqueous phase‫و‬organic phase
‫الـ‬ ‫يذوب‬ ‫حيث‬DNA‫الـ‬ ‫فى‬Aqueous phase
‫الـ‬ ‫فى‬ ‫االخرى‬ ‫الجزيئات‬ ‫تكون‬ ‫و‬organic phase
‫االخرى‬ ‫الجزيئات‬ ‫عن‬ ‫عزله‬ ‫فيسهل‬.

9. ‫الـ‬ ‫يذوب‬DNA‫فى‬
‫الـ‬Aqueous
phase
‫الجزيئات‬ ‫تكون‬ ‫و‬
‫الـ‬ ‫فى‬ ‫االخرى‬
organic phase

10. ‫الـ‬ ‫فيه‬ ‫يذوب‬ ‫ال‬ ‫محلول‬ ‫بواسطة‬ ‫الترسيب‬ ‫يتم‬DNA
‫من‬ ‫يتكون‬ ‫الترسيب‬ ‫محلول‬ ‫لذلك‬ ‫و‬:
Ethanol or isopropanole 100%
‫يعمل‬ ‫حتى‬ ‫ذلك‬ ‫و‬ ‫جدا‬ ‫بارد‬ ‫يضاف‬ ‫لكن‬ ‫و‬
‫الـ‬ ‫جزيئات‬ ‫جعل‬ ‫على‬DNA‫حول‬ ‫تتجمع‬
‫االستخالص‬ ‫كفاءة‬ ‫من‬ ‫فيزيد‬ ‫البعض‬ ‫بعضها‬.
‫الـ‬ ‫ان‬ ‫وجد‬ ‫حيث‬DNA‫يذوب‬ ‫ال‬alcohols
(‫البعض‬ ‫بعضها‬ ‫عن‬ ‫الجزيئات‬ ‫تبعد‬ ‫المرتفعة‬ ‫الحرارة‬ ‫درجة‬).

11. ‫للحف‬ ‫الثانوية‬ ‫الخطوات‬ ‫من‬ ‫لكنه‬ ‫و‬ ‫لالستخالص‬ ‫االساسية‬ ‫الخطوات‬ ‫من‬ ‫ليس‬ ‫هو‬ ‫و‬‫اظ‬
‫الـ‬ ‫على‬DNA‫الحفظ‬ ‫محلول‬ ‫يكون‬ ‫و‬ ‫عليه‬ ‫العمل‬ ‫لحين‬TE-buffer‫من‬ ‫مكون‬ ‫عادة‬
Tris‫و‬EDTA‫الـ‬ ‫على‬ ‫للمحافظة‬pH‫الـ‬ ‫و‬ ‫مناسب‬ ‫مستوى‬ ‫فى‬EDTA‫الـ‬ ‫لخلب‬
DNases.

12. .1‫النباتية‬ ‫العينة‬ ‫بطحن‬ ‫قم‬0.5‫تكون‬ ‫حتى‬ ، ‫السائل‬ ‫النيتروجين‬ ‫فى‬ ‫جم‬
‫الجافة‬ ‫كالبودرة‬.
.2‫مركزى‬ ‫طرد‬ ‫انبوبة‬ ‫الى‬ ‫العينة‬ ‫انقل‬.
.3‫اضف‬9‫االستخالص‬ ‫محلول‬ ‫من‬ ‫مل‬.
.4‫حرارة‬ ‫درجة‬ ‫على‬ ‫مائى‬ ‫حمام‬ ‫فى‬ ‫توضع‬65‫من‬ ‫تتراوح‬ ‫لمدة‬ ، ‫مئوى‬
‫ساعتين‬ ‫الى‬ ‫ساعة‬ ‫نصف‬.
.5‫لمدة‬ ‫العينات‬ ‫تترك‬5-10‫اليها‬ ‫يضاف‬ ‫و‬ ‫تبرد‬ ‫حتى‬ ‫دقائق‬5‫من‬ ‫مل‬
‫محلول‬24:1‫كلورفورم‬:‫لمدة‬ ‫جيدا‬ ‫الرج‬ ‫مع‬ ‫ايزواميل‬15‫دقيقة‬.
.6‫مركزى‬ ‫طرد‬ ‫عمل‬ ‫يتم‬3000‫لمدة‬ ‫الدقيقة‬ ‫فى‬ ‫لفة‬15‫دقيقة‬.
.7‫اخرى‬ ‫انبوبة‬ ‫فى‬ ‫نضيفه‬ ‫و‬ ‫الرائق‬ ‫نأخذ‬.
.8‫اضافة‬ ‫يتم‬5‫من‬ ‫مل‬24:1‫كلوروفورم‬:‫لمدة‬ ‫الرج‬ ‫مع‬ ‫ايزواميل‬5-10
‫دقائق‬

13. .9‫مركزى‬ ‫طرد‬ ‫عمل‬ ‫يتم‬3000‫لمدة‬ ‫الدقيقة‬ ‫فى‬ ‫لفة‬10‫دقيقة‬.
.10‫اخرى‬ ‫انبوبة‬ ‫الى‬ ‫نضيفه‬ ‫و‬ ‫الرائق‬ ‫ناخذ‬.
.11‫اضافة‬ ‫يتم‬6-5‫مل‬isopropanol‫لمدة‬ ‫الفريزر‬ ‫فى‬ ‫االنابيب‬ ‫وتوضع‬12‫ساعة‬.
.12‫مركزى‬ ‫طرد‬ ‫عمل‬ ‫يتم‬3000‫لمدة‬ ‫الدقيقة‬ ‫فى‬ ‫لفة‬10‫دقيقة‬.
.13‫فى‬ ‫الرائق‬ ‫من‬ ‫التخلص‬ ‫يتم‬laminar cabinet.
.14‫الـ‬ ‫من‬ ‫تجف‬ ‫حتى‬ ‫االنابيب‬ ‫تترك‬isopropanole.
.15‫حوالى‬ ‫اضافة‬100ul‫الـ‬ ‫من‬TE-buffer‫الـ‬ ‫لعينة‬DNA‫نقلها‬ ‫بعدها‬ ‫و‬ ، ‫المترسبة‬
‫انبوبة‬ ‫الى‬Eppendorv.

17. Micro-centrifuge
‫الصغير‬ ‫المركزى‬ ‫الطرد‬ ‫جهاز‬

18. Mortar
‫الهون‬

19. Dry bath
‫الجاف‬ ‫الحمام‬ ‫جهاز‬

20. Ph-meter
‫الـ‬ ‫درجة‬ ‫قياس‬ ‫جهاز‬PH

21. Micropipette

22. Tips --------------------------------------------------------
ependorfe tubes

23. Chloroform
: isoamyle
CTAB
SDS
Tris
NaCl
EDTA
Isopropanol
or Ethanol

24. ‫ال‬ ‫استخلص‬DNA‫بنفسك‬
‫الفرولة‬ ‫من‬