Download to read offline
More Related Content
DNA isolation
- 1.
- 2. STEP 1. DNAisolation
- 4.
- 5. البلمره تفاعل المتسلسل ) Polymerase ChainReaction (PCR هو تقنية معملية تقوم علﻰ عمل نسﺦ عديدة من ﻗﻄﻌﺔ محددة م ﻦ الحمض النووي DNA و مﻀﺎﻋﻔﺔ إنتﺎجه ﺣتﻰ يمكﻦ إجراء اﻹ ختبﺎرات و اﻷ بحﺎث ﻋليه . ﺗمكﻦ الﻌﺎلم Dr. Kerry Mullis ﻓﻲ ﻋﺎم ١٩٨٥ م مﻦ نﺸر ﺗقنيﺔ الـ PCR ﻓكﺎنﺖ هذه التقنيﺔ بوابﺔ لكثير مﻦ التﻄورات المتسﺎرﻋﺔ ﻓ ﻲ مجﺎل التكنولوجيﺎ الحيويﺔ .
- 6. The techniquewas invented by Dr. Kary Mullis, 1986 for which he received the Nobel Prize in Chemistry in 1993.
- 7. • DNA amplificationby PCR (overview)
- 8.
- 9. عمل فكرة البلمره تفاعل المتسلسل ) (PCR درجةإرتفاع يعتمدعلﻰ لتفاعل متعاقبه دوره وانخفاضها الحرارة لمضاعفة من معين جزء عدديا الجزء هذا وتضخيم النووي الحمض .
- 10. PCR Cycle • Eachcycle (Round) of PCR contains 3 steps: 1- Denaturation 2- Primer annealing 3- Primer extension • The cycle usually repeated for 25 – 40 times.
- 12.
- 13. PCR Melting 94 oC Temperature 100 0 50 Ti m e 5’ 3’ 3’ 5’
- 14. Melting 94 oC Temperature 100 0 50 T im e 3’ 5’ 5’ 3’ Heat
- 15. PCR Melting 94 oC Annealing Primers 50oC Extension 72 oC Temperature 100 0 50 T i m e 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ Melting 94 oC
- 16. PCR Melting 94 oC Melting 94oC Annealing Primers 50 oC Extension 72 oC Temperature 100 0 50 T i m e 30x 3’ 5’ 5’ 3’ Heat Heat 5’ 5’ 5’
- 17. PCR Melting 94 oC Melting 94oC Annealing Primers 50 oC Extension 72 oC Temperature 100 0 50 T i m e 30x 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’
- 18. PCR Melting 94 oC Melting 94oC Annealing Primers 50 oC Extension 72 oC Temperature 100 0 50 T i m e 30x 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ Heat Heat
- 19. PCR Melting 94 oC Melting 94oC Annealing Primers 50 oC Extension 72 oC Temperature 100 0 50 T i m e 30x 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’
- 20. Fragments of defined length PCR Melting 94oC Melting 94 oC Annealing Primers 50 oC Extension 72 oC Temperature 100 0 50 T i m e 30x 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’
- 21. Polymerase Chain Reaction(PCR) • PCR is a technique which is used to amplify the number of copies of a specific region of DNA, (usually fewer than 3000 base pairs) in order to produce enough DNA to be adequately tested. • Millions of copies of a segment of DNA can be made within a few hours • As a result, it now becomes possible to analyze and characterize the DNA.
- 22. THERMOCYCLER PCR tube What dowe need for PCR? ?
- 23. البلمره تفاعل تقنيهمتطلبات المتسلسل ) (PCR DNA Sample
- 24. Primers A primer isa short synthetic oligonucleotide which is used in many molecular techniques from PCR to DNA sequencing. These primers are designed to have a sequence which is the reverse complement of a region of template or target DNA to which we wish the primer to anneal.
- 25. Primers CCGAATGGGATGC GGCTTACCCTACG نوعان : • أمامي ) Forward .( • ﺧﻠﻔي ) Reverse .( وهي ﺗﺗاﺑﻊ واحد شريط فيالنيﺗروجينيه القواعد من قصير ) 20-25 b ( في ﺗضﺧيمه المراد الجزء لﺑداية مكمل ا ل ـ DNA .
- 27. Taq polymerase • ﺗسمى ﺑكﺗيريهسﻼلة من مسﺗﺧرج Thermus aquaticus في ﺗعيش الﺗي ال مياه ال حارة . • ﻻ يﺗأثر ﺑ المرﺗﻔعه الحرارة درجات . • له المثﻠى الحراة درجه ٧٢ º م . First reports using DNA polymerase from Thermus aquaticus was at (1988)
- 29.
- 30.
- 31.
- 33. Making DNA: Components CellPCR ss DNA template helicase, etc. ? dNTPs present present Primer primase ? DNA Polymerase DNA polIII ? Environment nucleus test tube