2. صبغ والكشف المجهري للبكتيريا
Microscopy and Staining
• فحص الشرائح تحت المجهر
• الهدف من فحص الشرائح تحت المجهر: -
• للكشف عن الميكروبات التي ال تري بالعين المجردة لضآلة حجمها:
1. تعتبر خلية البكتيريا من نوع وحيدة الخلية prokaryoticبحيث أنها أصغر من نوع متعددة
الخاليا .Eukaryotic
2. توجد طريقتان للكشف عن الخاليا البكتيرية تحت المجهر الضوئي التالية.-
طريقة . Wet mount
صبغ اللطخة البكتيرية، وتعتبر هذه الطريقة أكثر استعماال، للكشف عن البكتيرية تحت المجهر،
ومن عيوبها يمكن أنها تبين البكتيريا الحية والميتة، ومن أهم مميزاتها يمكن التفريق بها بين
أو كروية وتنظيماتها (شكل )وغيرها، ويمكن بهذه الطريقة
أشكال البكتيريا عصوية
التفريق بين البكتيريا الموجبة، أو السالبة لصبغة الجرام.
3. 1. للكشف على خاليا البكتيرية تحت المجهر يستعمل عدسة مكبرة مع زيت خاص بالكشف
.Oil immersion
• هناك طريقتان لتجهيز الكشف عن البكتيرية الحية وهما:-
1. طريقة الرطبة أو المبتلة .Wet mount
2. طريقة النقطة المعلقة Hanging drop
• طريقة الرطبة أو المبتلة Wet mount
• تطبق هذه الطريقة لدراسة شككل وترتيكا الخاليكا البكتيريكة، واختبكار اكدرة البكتيريكا علكى
الحركة، ومن ها الطرق التالية:-
1. ينقككع التككبن فككي 006 مككل مككن المككاة، لمككدة أسككبوع ابككل ةجككراة التجربككة، مككع الككتخلص مككن
الفقاايع الهوائية.
2. يعمل ةطار مربع فكي منتصكف الشكريحة النظيفكة، مكن الهكالم النفطكي ، بحيكث تككون أبعكاده،
نفس أبعاد الشريحة الزجاجية الرايقة.
4. 1.توضككع اطككرة واحككدة، مككن محلككول نقككع التككبن، فككي منتصككف الشككريحة الزجاجي كة
الرايقة.
2.تقلككا الشككريحة الزجاجيككة، التككي تحتككوي علككى ا طككار ، ويلصككق األخيككر بغطككاة
الشريحة الزجاجية الرايق، المحتوية على اطرة ماة التبن بحذر.
3.تقلا الشريحة بحيث يصبح غطاة الشريحة الزجاجية ةلى أعلى.
4.توضع الشريحة تحت المجهكر، لدراسكتها، مكع تقليكل كميكة الضكوة السكااط ،علكى
العدسة العينية.
5. تحديككد األحيككاة الدايقككة، فككي العينككة بعدسككة اوتهككا (01 ، ) Xثككم بعدسككة اوتهككا
(04 ، ) Xمع تعديل اوة ا ضاةة، عند كل تغيير العدسة .
• يالحظ وجود أنواع مختلفة، من األحياء الدقيقة، في عينة التبن، مثل: وجود
بكتيريا عصوية، أو كروية وغيرها، كما هو موضح في جدول (1 ) و ( 2 ) .
9. • ومن أهم عيوا هذه الطريقة ما يلي:-
1.تتعرض الشريحة لسرعة الجفاف، مما اد يؤثر على حركة البكتيريا.
• قد يتعرض الفاحص لبعض األمراض من بعض أنواع البكتيريا الممرضة.
• طريقة النقطة المعلقة الختبار ادرة البكتيريا على الحركة
• هدف ومبادئ هذه الطريقة مثل الطريقة الرطبة، ومن أهم مميزاتها التالية:-
1. مراابة حركة البكتيريا في نقطة معلقة داخل تجويف زجاجي مغلق
2. نادرا ً ما يحدث جفاف للشريحة.
3. بقاة الخاليا في حالة نشطة لمدة أطول من الطريقة الرطبة.
10. • طريقة العمل
1. تنظكككف الشكككريحة ذات التجويكككف تنظيفكككا ً جيكككدا ً Depression Slideمكككع غطائهكككا بالمكككاة السكككاخن
والصابون زالة المواد الدهنية العالقة بها.
2. توضع أربعة نقط من الماة أو الفازلين أو الهالم النفطي علكى ككل زاويكة مكن غطكاة الشكريحة بواسكطة
ناال البيئة.
3. توضع اطرة من البيئة البكتيرية في وسط غطاة الشريحة الزجاجية الرايقة.
11. 4. توضع الشريحة على غطاة الشريحة الزجاجية الرايقة ، بحيث يكون التجويف مقابال للقطرة في
وسط التجويف، بحيث يكون الغطاة ملتصقا مع الشريحة
5. تقلا الشريحة بسرعة مع الحفاظ على وجود نقطة البيئة البكتيرية في منتصف التجويف.
12. 6.
تفحككص النقطككة المعلقككة تحككت المجهككر، مسككتعمال العدسككة الصككغيرة القككوة ، ثككم يخفككض المكثككف الككيال،
ويقفل الحجاا جزئيا ً لتقليل ا ضاةة للتمكن من رؤية العينة بوضوح.
7.
تعدل حافة الشريحة لوضع حافة النقطة في وسط مجال المجهري.
13. 8.
غير العدسة الصغيرة ةلى كبيرة القوة، ثم ةلى الزيتية، بعكد وضكع نقطكة زيكت السكيدر، علكى
غطاة الشريحة.
9.
تفحص حافة العينة، مع تحريك الضابط الدايق ببطة، مع تعديل ا ضاةة، بواسطة المكثكف،
حتى ترى البكتيريا بشكل واضح.
01.
احظ حركة البكتيريا، عند حافة النقطة المعلقة.
11.
تدون المالحظات برسم شكل البكتيرية، وطريقة تجميع الخاليا البكتيرية ونوعية حركتها.
