صبغ والكشف المجهري للبكتيريا

2,296 views

Published on

Published in: Education
0 Comments
2 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

No Downloads
Views
Total views
2,296
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
5
Actions
Shares
0
Downloads
56
Comments
0
Likes
2
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

صبغ والكشف المجهري للبكتيريا

  1. 1. ‫صبغ والكشف المجهري للبكتيريا‬ ‫األستاذ الدكتور يوسف محمد الشريك‬
  2. 2. ‫صبغ والكشف المجهري للبكتيريا‬ ‫‪Microscopy and Staining‬‬ ‫• فحص الشرائح تحت المجهر‬ ‫• الهدف من فحص الشرائح تحت المجهر: -‬ ‫• للكشف عن الميكروبات التي ال تري بالعين المجردة لضآلة حجمها:‬ ‫1. تعتبر خلية البكتيريا من نوع وحيدة الخلية ‪ prokaryotic‬بحيث أنها أصغر من نوع متعددة‬ ‫الخاليا ‪.Eukaryotic‬‬ ‫2. توجد طريقتان للكشف عن الخاليا البكتيرية تحت المجهر الضوئي التالية.-‬ ‫‪ ‬طريقة ‪. Wet mount‬‬ ‫‪ ‬صبغ اللطخة البكتيرية، وتعتبر هذه الطريقة أكثر استعماال، للكشف عن البكتيرية تحت المجهر،‬ ‫ومن عيوبها يمكن أنها تبين البكتيريا الحية والميتة، ومن أهم مميزاتها يمكن التفريق بها بين‬ ‫أو كروية وتنظيماتها (شكل )وغيرها، ويمكن بهذه الطريقة‬ ‫أشكال البكتيريا عصوية‬ ‫التفريق بين البكتيريا الموجبة، أو السالبة لصبغة الجرام.‬
  3. 3. ‫1. للكشف على خاليا البكتيرية تحت المجهر يستعمل عدسة مكبرة مع زيت خاص بالكشف‬ ‫‪.Oil immersion‬‬ ‫• هناك طريقتان لتجهيز الكشف عن البكتيرية الحية وهما:-‬ ‫1. طريقة الرطبة أو المبتلة ‪.Wet mount‬‬ ‫2. طريقة النقطة المعلقة ‪Hanging drop‬‬ ‫• طريقة الرطبة أو المبتلة ‪Wet mount‬‬ ‫• تطبق هذه الطريقة لدراسة شككل وترتيكا الخاليكا البكتيريكة، واختبكار اكدرة البكتيريكا علكى‬ ‫الحركة، ومن ها الطرق التالية:-‬ ‫1. ينقككع التككبن فككي 006 مككل مككن المككاة، لمككدة أسككبوع ابككل ةجككراة التجربككة، مككع الككتخلص مككن‬ ‫الفقاايع الهوائية.‬ ‫2. يعمل ةطار مربع فكي منتصكف الشكريحة النظيفكة، مكن الهكالم النفطكي ، بحيكث تككون أبعكاده،‬ ‫نفس أبعاد الشريحة الزجاجية الرايقة.‬
  4. 4. ‫1.توضككع اطككرة واحككدة، مككن محلككول نقككع التككبن، فككي منتصككف الشككريحة الزجاجي كة‬ ‫الرايقة.‬ ‫2.تقلككا الشككريحة الزجاجيككة، التككي تحتككوي علككى ا طككار ، ويلصككق األخيككر بغطككاة‬ ‫الشريحة الزجاجية الرايق، المحتوية على اطرة ماة التبن بحذر.‬ ‫3.تقلا الشريحة بحيث يصبح غطاة الشريحة الزجاجية ةلى أعلى.‬ ‫4.توضع الشريحة تحت المجهكر، لدراسكتها، مكع تقليكل كميكة الضكوة السكااط ،علكى‬ ‫العدسة العينية.‬ ‫5. تحديككد األحيككاة الدايقككة، فككي العينككة بعدسككة اوتهككا (01 ‪ ، ) X‬ثككم بعدسككة اوتهككا‬ ‫(04 ‪ ، ) X‬مع تعديل اوة ا ضاةة، عند كل تغيير العدسة .‬ ‫• يالحظ وجود أنواع مختلفة، من األحياء الدقيقة، في عينة التبن، مثل: وجود‬ ‫بكتيريا عصوية، أو كروية وغيرها، كما هو موضح في جدول (1 ) و ( 2 ) .‬
  5. 5. ‫جدول (1) أشكال مختلفة من البكتيريا الكروية‬
  6. 6. ‫جدول(2) أشكال المختلفة من البكتيريا العصوية‬
  7. 7. ‫• ومن أهم عيوا هذه الطريقة ما يلي:-‬ ‫1.تتعرض الشريحة لسرعة الجفاف، مما اد يؤثر على حركة البكتيريا.‬ ‫• قد يتعرض الفاحص لبعض األمراض من بعض أنواع البكتيريا الممرضة.‬ ‫• طريقة النقطة المعلقة الختبار ادرة البكتيريا على الحركة‬ ‫• هدف ومبادئ هذه الطريقة مثل الطريقة الرطبة، ومن أهم مميزاتها التالية:-‬ ‫1. مراابة حركة البكتيريا في نقطة معلقة داخل تجويف زجاجي مغلق‬ ‫2. نادرا ً ما يحدث جفاف للشريحة.‬ ‫3. بقاة الخاليا في حالة نشطة لمدة أطول من الطريقة الرطبة.‬
  8. 8. ‫• طريقة العمل‬ ‫1. تنظكككف الشكككريحة ذات التجويكككف تنظيفكككا ً جيكككدا ً ‪ Depression Slide‬مكككع غطائهكككا بالمكككاة السكككاخن‬ ‫والصابون زالة المواد الدهنية العالقة بها.‬ ‫2. توضع أربعة نقط من الماة أو الفازلين أو الهالم النفطي علكى ككل زاويكة مكن غطكاة الشكريحة بواسكطة‬ ‫ناال البيئة.‬ ‫3. توضع اطرة من البيئة البكتيرية في وسط غطاة الشريحة الزجاجية الرايقة.‬
  9. 9. ‫4. توضع الشريحة على غطاة الشريحة الزجاجية الرايقة ، بحيث يكون التجويف مقابال للقطرة في‬ ‫وسط التجويف، بحيث يكون الغطاة ملتصقا مع الشريحة‬ ‫5. تقلا الشريحة بسرعة مع الحفاظ على وجود نقطة البيئة البكتيرية في منتصف التجويف.‬
  10. 10. ‫6.‬ ‫تفحككص النقطككة المعلقككة تحككت المجهككر، مسككتعمال العدسككة الصككغيرة القككوة ، ثككم يخفككض المكثككف الككيال،‬ ‫ويقفل الحجاا جزئيا ً لتقليل ا ضاةة للتمكن من رؤية العينة بوضوح.‬ ‫7.‬ ‫تعدل حافة الشريحة لوضع حافة النقطة في وسط مجال المجهري.‬
  11. 11. ‫8.‬ ‫غير العدسة الصغيرة ةلى كبيرة القوة، ثم ةلى الزيتية، بعكد وضكع نقطكة زيكت السكيدر، علكى‬ ‫غطاة الشريحة.‬ ‫9.‬ ‫تفحص حافة العينة، مع تحريك الضابط الدايق ببطة، مع تعديل ا ضاةة، بواسطة المكثكف،‬ ‫حتى ترى البكتيريا بشكل واضح.‬ ‫01.‬ ‫احظ حركة البكتيريا، عند حافة النقطة المعلقة.‬ ‫11.‬ ‫تدون المالحظات برسم شكل البكتيرية، وطريقة تجميع الخاليا البكتيرية ونوعية حركتها.‬

×