Successfully reported this slideshow.
We use your LinkedIn profile and activity data to personalize ads and to show you more relevant ads. You can change your ad preferences anytime.

2_Методы экспериментальной микологии. Питательные среды

188 views

Published on

Презентація до курсу "Методи експериментальної мікології", що його викладають на кафедрі мікології та фітоімунології біологічного факультету Харківського національного університету імені В.Н. Каразіна, Україна

Published in: Education
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

2_Методы экспериментальной микологии. Питательные среды

  1. 1. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ● по консистенции: жидкие, полужидкие и плотные. ● по составу: натуральные, полусинтетические и синтетические. ● по назначению: универсальные, дифференциально-диагностические, селективные (элективные,избирательные, ингибиторные), консервирующие. Первые основы питательных сред: - коагулированный яичный белок - клейстер из крахмала - мясной отвар с добавлением желатины Недостатки желатины:. - разлагается и разжижается м/о - при 25-30° С желатиновые среды плавятся - плотность этих сред при рН ниже 6,0 и выше 7,0 уменьшается и они плохо застывают К растворам солей добавляют: 10-15% желатины
  2. 2. АГАР-АГАР — продукт (смесь агарозы и агаропектина), получаемый путем экстрагирования из красных и бурых водорослей, произрастающих в Черном море, Белом море и Тихом океане, и образующий в водных растворах плотный студень. Содержит около 1,5—4 % минеральных солей, 10—20 % воды и 70—80 % полисахаридов, в составе которых выявлены D- и L- галактозы, 3,6-ангидрогалактозы, пентозы, пировиноградная кислота и др. Преимущества агара: - не растворим в холодной воде - полностью растворяется только при 95 -100 °С - горячий раствор является прозрачным и ограниченно вязким - при охлаждении до 35—40°С он становится чистым и крепким гелем - при нагревании до 85—95°С опять становится жидким раствором - не расщепляется большинством микроорганизмов при культивировании - не ингибирует рост микроорганизмов и не изменяет питательную ценность среды - прозрачнее желатиновых сред К растворам солей добавляют: 2-2,5% агар-агар, 1,5% силикагеля, карбоксиметилцеллюлоза желтовато-белый порошок или пластинки
  3. 3. Функция Пример загустение агар, желатина, силикагель, карбоксиметилцеллюлоза метаболиты пластического и энергетического обмена сахара, отвары различных частей растений, экстракты и гидролизаты продуктов животного происхождения селективность органические кислоты, антибиотики, красители источник воды вода (дистиллированная) ОСНОВНЫЕ СОСТАВЛЯЮЩИЕ ПОЛУСИНТЕТИЧЕСКОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ
  4. 4. кристаллвиолет и некоторые другие красители угнетение роста грибов и грамположительных бактерий подкисление (понижение pH) подавление роста бактерий подщелачивание (повышение pH) предоставление конкурентного преимущества миксомицетам, акразиевым антибиотики подавление роста бактерий обеднение среды (уменьшение сахаров) стимулирование спороношения, устранение быстрорастущих видов Выравнивание соотношения растительных и животных продуктов предоставление конкурентного преимущества фитопатогенным или зоопатогенным грибам КАК СДЕЛАТЬ ПИТАТЕЛЬНУЮ СРЕДУ СЕЛЕКТИВНОЙ
  5. 5. РЕЦЕПТЫ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД Голодный агар: агар-агара – 10 г; воды – 1 л. Для исследования микофлоры воздуха, для получения спороношения большинства грибов Среда Чапека (Cz, Czapek Agar) Элективный агар, предложенный Чапеком (1902-1903) и Доксом (1910) для культивирования грибов и почвенных бактерий. сахароза - 30 г NaNO3 - 3 г KH2PO4 - 1 г MgSO4 * 7H2О - 0,5 г KCl - 0,5 г FeSO4* 7H2O - 0,01 г Агар-агар 20 г Вода – 1 л Чапека-Докса (CzD, Czapek-Dox Agar): KH2PO4 - 0,7 г K2HPO4 * 3H2О - 0,3 г Остальные компоненты как у предыдущей рН питательной среды 6 ± 0,5
  6. 6. Среда Барнеса Фосфорнокислый калий - 1 г аммоний азотнокислый – 10 г азотнокислый калий – 1 г глюкоза – 1 г агар – 20 г Вода – 1 л Используется для получения плодовых тел сумчатых грибов Минеральный раствор Петри Нитрат кальция - 0,40 сульфат магния - 0,15 фосфат кислого калия - 0,15 г хлорид калия - 0,06 г Вода – 1 л Для получения спорангиев грибов рода Phytophthora Декстрозный агар декстроза – 10 г фосфорнокислый калий - 0,5 г аспарагин – 0,5 г агар – 15 г вода – 1 л Для культивирования актиномицетов
  7. 7. Картофельно-глюкозный (сахарозный) агар (КГА) Состав: картофель – 200 г; глюкоза (сахароза)– 20 г; агар – 20 г; дистиллированная вода – 1 л. рН 5,5-7 Для большинства фитопатогенных грибов Картофельно-декстрозный агар (PDA, Poptato-Dextrose Agar) Среду готовят так же, как и предыдущую, но вместо сахарозы добавляют декстрозу (20 г). Используют для широкого спектра грибов. Обедненная среда (углеводов в 10 раз меньше) стимулирует спорообразование грибов рода Fusarium. Черносливовый агар чернослив – 50 г агар – 20 г вода – 1 л Кипятят 1 час + агар + снова кипятят 1 час. Стерилизуют 2 раза по 1 часу текучим паром с суточными промежутками. Для культивирования грибов рода Sclerotinia. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ НА ОСНОВЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ
  8. 8. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ НА ОСНОВЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ Кукурузный агар (СМА, Cornmeal Agar) Экстракт кукурузной муки Вода Агар Для широкого спектра грибов Модифицированный кукурузный агар Экстракт кукурузной муки Дрожжевой экстракт Глюкоза Вода Агар Для культивирования миксомицетов
  9. 9. Сусло-агар агар -20 г 5-10 % пивное сусло (неохмеленное) – 1 л. рН 6,5-7 Мальц-агар (MEA, Malt Extract Agar) Состав: мальц-экстракт -15 г агар – 20 г; вода -1 л Среды используют для культивирования широкого спектра грибов (базидиальных, головневых, плесневых грибов) ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ НА ОСНОВЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ
  10. 10. Пивное сусло - это водный раствор экстрактивных веществ солода и хмеля Этапы производства пива: 1.Приготовление солода Дробление солода 2. Получение пивного сусла Затирание Фильтрование Кипячение сусла с хмелем Отделение сусла от хмелевой дробины Охлаждение и осветление сусла 3. Сбраживание пивного сусла и дображивание пива Осветление и розлив пива В пивоваренном производстве используют дрожжи: Saccharomyces carlsbergensis (дрожжи низового брожения) и Saccharomyces cerevisiae (дрожжи верхового брожения).
  11. 11. Питательный агар для культивирования микроорганизмов (ГРМ-агар) Состав: Гидролизат рыбной муки Пептон ферментативный Натрия хлорид Агар Вода рН 7,1-7,5 Используют для выделения широкого спектра микроорганизмов ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ НА ОСНОВЕ ЖИВОТНОГО СЫРЬЯ
  12. 12. навозный агар (DEA, Dung Extract Agar) агар экстракт из конского навоза вода Имитирует природный субстрат для копротрофных видов агар экстракт из измельченных плодовых тел трутовиков Для культивувания некоторых микофильных грибов Трутовиковый агар (PEA, Polypore Extract Infusion Agar)
  13. 13. ТРЕБОВАНИЯ, ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫЕ К ПИТАТЕЛЬНЫМ СРЕДАМ -содержать все необходимые элементы питания в легко усвояемой форме и в оптимальных количествах; -иметь оптимальную концентрацию водородных и гидроксильных ионов; -быть стерильными; -плотные среды должны быть влажными и иметь оптимальную консистенцию; -быть по возможности унифицированными; -желательно, чтобы среды были прозрачными. Этапы приготовления сред: 1) варка; 2) установление оптимальной величины рН; 3) осветление; 4) фильтрация; 5) разлив; 6) стерилизация; 7) контроль. Осветление: белок куриного яйца, сыворотка крови, декантирование. Антибиотики: - пенициллин и стрептомицин добавляют после автоклавирования; - левомицитин 2 т. по 0,25 или 1 по 0,5 растирают и добавляют 100 мл воды. 20 мл р-ра на 1 л среды. До автоклавирования.
  14. 14. Стерилизация питательных сред -синтетические среды и все агаровые среды, не содержащие в своем составе нативного белка и углеводов, стерилизуют 15-20 мин в автоклаве при температуре 115-120°С (0,5 – 1 атм); -среды с углеводами и молоком, питательный желатин стерилизуют текучим паром при температуре 100°С дробно или в автоклаве при 112°С; - среды, в состав которых входят белковые вещества обеспложиваются тиндализацией или фильтрованием; - для стерилизации питательных сред, содержащих в своем составе наживные белки, пользуются фильтрацией через мембранные фильтры Зейтца.

×