a. Fermentasi lumpur apel pomace menghasilkan enzim ligninolitik lebih tinggi daripada media sintetik oleh P. chrysosporium. Produksi enzim ligninolitik dipengaruhi oleh viskositas, ukuran partikel, dan potensial zeta selama fermentasi. b. Ekstrak aseton mengandung kadar polifenol lebih tinggi daripada ekstrak alkohol selama fermentasi. Kadar polifenol dan aktivitas antioksidan meningkat hingga menc

1. Liquid State Fermentation of Apple Pomace Sludge for The Production of
Ligninolytic Enzymes and Liberation of Polyphenolic Compounds
Nama kelompok:
Anggi S.A. 141211132022
Satria A.W. 141211133061
Imardha Rona F. 141211133066

2. 1.Pendahuluan
•Basidiomycetes busuk dapat menurunkan lignin, selulosa dan
hemiselulosa menjadi senyawa berat molekul rendah yang
dapat berasimilasi untuk degradasi nutrisi jamur, hemiselulosa
dan lignin yang dilakukan oleh enzim hidrolitik ekstraseluler
dan oksidatif tertentu.
•Jamur ini mensekresikan enzim ekstra selular yang penting
untuk degradasi lignin: lignin peroksidase, peroxidae Mn-
dependent, dan mengandung tembaga phenoloxidase, lakase.
•Enzim ligninolitik telah menunjukkan potensi yang tinggi
dalam aplikasi industri, seperti pulp dan kertas delignifikasi
dalam aplikasi industri, air limbah dan pengobatan tanah yang
terkontaminasi serta dalam sintesis organik

3. 2.Bahan & Metode
2.1 MEDIA
•Ultrafiltrasi sari apel pomace dipilih sebagai media
fermentasi karena terdapat pengkayaan nutrien untuk
memproduksi enzim ligninolytic dan pengekstraksi
senyawa polifenol. Sebelum melakukan fermentasi, pH
media disesuaikan menjadi 4,5 ± 0,1.
•Fermentasi keadaan cair dilakukan dengan menggunakan
media sintetis. Media sintetis digunakan sebagai kontrol
untuk membandingkan produksi enzim dengan sari apel
pomace.

4. 2.2 PERSIAPAN MIKROORGANISME DAN INOKULUM
•P. chrysosporium (ATCC 24275) terpilih sebagai organisme
yang cocok untuk bio-proses fermentasi karena potensinya
untuk lebih tinggi enzim pro-produksi.
•Budaya P.chrysosporium ditumbuhkan pada kentang
dextrose, dan diinkubasi pada suhu 37 ± 1◦C. Media ini
digunakan sebagai inokulum untuk fermentasi cair apel
pomac. Lalu inokulum dipindahkan secara aseptik menjadi
7,5 L fermentor setelah 48 jam inkubasi dalam termos.

5. 2.3 FERMENTASI
•Sebuah fermentor berkapasitas 7,5 L dengan volume 4 L
digunakan secara terpisah untuk sintetis menengah dan lumpur
apel pomace ( disterilkan pada121 ± 1◦C selama 30 menit ) untuk
menghasilkan enzim ligninolitik ekstraseluler. Media diinokulasi
dengan 10 % ( v / v ) inokulum . Suhu dan pH untuk fermentasi
media dikontrol pada 37 ± 1◦C dan 4,5 ± 0,1.
•Sampel ditarik dari fermentor pada selang waktu 12 jam untuk
analisis kelayakan, aktivitas enzim ligninolitik, ekstraksi polifenol,
viskositas ,potensial zeta , dan ukuran partikel sampai tahap
penipisan pertumbuhan P. chrysosporium dan produksi enzim
maksimal.

6. 2.4 UJI ENZIM
• Kegiatan LIP didasarkan pada transformasi veratril alkohol untuk veratil aldehyde.
Aktivitas lakase diuji dengan menggunakan bis 2,2-azino (asam 3
ethylbenzthiazoline-6-sulfonat). Analisis aktivitas MNP didasarkan pada
transformasi Mn2+ untuk Mn3.
2.5 UJI VIABILITAS
•Uji Viabilitas digunakan sebagai indikator dari jumlah biomassa yang tinggal di
media fermentasi. Viabilitas miselium jamur rusak dalam sampel yang
mengandung miselium dan sisa substrat diuji dengan nomor yang paling mungkin
(MPN) Metode seperti yang dijelaskan oleh Gassara et al.

7. 2.6 EKSTRAKSI SENYAWA POLIFENOL
•Sampel yang akurat ditimbang 10 g dan 20 ml dari 80% aseton dan 80%
etanol ditambahkan sebagai pelarut. Ekstraksi ultrasonik dilakukan selama 30
menit pada 40 ± 1◦C dalam penangas ultrasonication.
•Campuran kemudian disentrifugasi pada 7000 × g selama 20 menit dan
supernatan digunakan untuk pengukuran isi polifenol dan aktivitas
antioksidan.
•2.7 PERKIRAAN DARI TOTAL KADAR FENOLIK DAN RADIKAL BEBAS DARI
AKTIVITAS DARI EKSTRAK POLIFENOL
•Jumlah polifenol dalam ekstrak fenolik sampel ditentukan oleh metode
Swain dan Hillis. Aktivitas radikal bebas dari polifenol ekstrak ditentukan
seperti yang dijelaskan oleh Ajila et al.

8. 2.8 PARAMETER FISIKO-KIMIA
•2.8.1 Viskositas
Selama fermentasi, viskositas kaldu fermentasi diukur pada Interval 12 jam
dan 24 jam menggunakan viskometer rasional
•2.8.2 Ukuran partikel
Analisis ukuran partikel dari media fermentasi dilakukan dengan mengg
unakan Fritsch Sizer partikel Laser ANALYSETTE 22 Tes ini dapat mengukur
diameter rata-rata 10%, 43%, 50% dan 90% partikel (D10, D43, D50, D90 dan)
di kisaran 0,1-1000 mikrometer. Analisis ukuran partikel dilakukan untuk
mempertahankan kelangsungan hidup P. chrysosporium, produksi MNP, LIP
dan lakase selama fermentasi sari apel pomace pada interval waktu yang
berbeda.

9. •2.8.3Potensial Zeta
Analisis potensi zeta dipelajari untuk membangun hubungan antara
muatan partikel dari kaldu fermentasi, kelangsungan hidup mikroorganisme
dan produksi enzim ligninolitik. Biaya partikel dan interaksi antara mereka
sangat di-pengaruhi oleh ukuran partikel dan pH medium. Potensi zeta adalah
analisis menggunakan zetaphoremeter dengan mempertimbangkan rata-rata
10 pengukuran
•2.9 ANALISA STATISTIK
Semua percobaan diuji dalam ulangan dan rata-rata dari 3 ulangan dihitung
bersama dengan standar deviasi. Database menjadi sasaran sebuah analisi
varians (ANOVA) menggunakan sistem pernagkat lunak analisis statistik
digunakan untuk melakukan beberapa tes kisaran antara data dan hasil yang
memiliki P <0,05 yang dianggap signifikan.

10. 3. Hasil dan Pembahasan
Fase lag dari jamur P. chrysosporium lebih lama dalam media sintetik (66 jam)
dibandingkan dengan sari apel pomace (30 jam).

11. Fase eksponensial dalam sari apel pomace lebih dari 50 jam dibandingkan dalam
media sintetiknya.

12. a. Mikroorganisme tumbuh dan
miselium disintesis. kekentalannya
meningkat dari 111.58 mPa s dalam
waktu 55 jam.
b. Ukuran partikel meningkat dari D43 =
35.67 µm, D50 = 20.32 µm, D90 =
79.65 µm, D10 = 2.83 µm pada
waktu 38 jam sampai D43 = 467.64
µm, D50 = 574.04 µm, D90 =
681.80 µm, D10 = 42.61 µm pada
waktu 60 jam.
c. Potensial zeta meningkat dari −14.34
MV pada waktu 60 jam sampai
−21.9 mV pada akhir fermentasi sari
apel pomace.

13. a. kadar polifenol lebih tinggi
dalam ekstrak aseton
daripada alkohol. Kadar
polifenol dalam aseton
meningkat dari 383 sampai
720 mg
b. kapasitas antiradikal bebas
diukur dengan aktivitas
penangkap radikal bebas
DPPH yang lebih tinggi pada
waktu 67 jam dan
berhubungan dengan
peningkatan total kadar
polifenol.

14. 4. Kesimpulan
Produksi enzim ligninolytic dengan lumpur apel pomace lebih tinggi
pada media sintetiknya p.chrysoporium . Hal tersebut berhubungan
dengan produksi enzim ligninolytic keduanya. Viskositas ukuran
partikel, dan potensial zeta mempengaruhi transfer oksigen untuk
pertumbuhan mikroorganisme dan produksi enzim ligninolytic.
Penambahan jumlah polyfenol yang diamati selama fermentasi cair
nantinya memperlihatkan penurunan.

15. JUDUL SKRIPSI
Perbandingan Jumlah Apel Pomace Untuk Uji
Tingkat Efektifitas Produksi Ligninolytic dengan
Kombinasi Gula Tebu