Dalla loro introduzione nell’ottobre 2011, i test basati sulla frazione fetale di DNA circolante nel sangue materno per lo screening delle principali aneuploidie si sono rapidamente diffusi nella pratica clinica. Si tratta di test di screening quindi non diagnostici che devono essere integrati nel percorso di diagnosi prenatale individuale per ciascuna coppia

1. NPTT
NON-INVASIVE PRENATAL TESTING
Dalla loro introduzione nell’ottobre 2011, i test basati sulla frazione fetale di DNA
circolante nel sangue materno per lo screening delle principali aneuploidie si sono
rapidamente diffusi nella pratica clinica.
Si tratta di test di screening quindi non diagnostici che devono essere integrati nel
percorso di diagnosi prenatale individuale per ciascuna coppia
Tutti i test PRENATALI NON INVASIVO sono test molecolari nati con l’obiettivo di
determinare l’assetto cromosomico del feto da materiale fetale presente nel sangue
materno.
Piccoli frammenti di DNA fetale sono presenti nel sangue materno già partire dalla
10 settimana di gravidanza, e la quota aumenta nel corso delle settimane fino a
rappresentare il 10% circa del DNA libero nel sangue materno.
Il DNA fetale scompare in modo rapidissimo e completamente subito dopo
l’espletamento del parto.
L’origine di tutto questo materiale non è ancora ben chiara, ma sembra provenire
dalla dismissione (apoptosi) degli strati superficiali del sinciziotrofoblasto (porzione
periferica del tessuto placentare)

2. Queste caratteristiche lo rendono un candidato ideale per effettuare valutazioni sul
materiale fetale.
Le metodiche di biologia molecolare impiegate per effettuare queste indagini
dipendono dall’obiettivo da raggiungere.
I test disponibili sul mercato impiegano METODICHE DIFFERENTI
Le metodiche QUANTITATIVE si basano sul presupposto che in feti con sindrome
di Down la quantità totale di frammenti del CRS 21 siano presenti in una quota
superiore (1.5 volte) rispetto a feti con corredo cromosomico normale - per cui nel
sangue di una donna con feto portatore di sindrome di Down verrà identificato un

3. aumento del 50% della concentrazione di DNA appartenente al cromosoma 21
fetale.
Dato che la differenza in totale si fonda su valori molto piccoli, sono necessari
sistemi estremamente sofisticati ed accurati per il conteggio ( il massive parallel
sequencing) che consente la valutazione contemporanea di milioni di frammenti di
DNA. Altre metodiche consentono la amplificazione solo di regioni cromosomiche
di interesse (targeted massive parallel sequencing)
Altri approcci cercano di misurare la proporzione di cromosoma 21 mediante
marcatori (come ad esempio la differenza di metilazione nel DNA tra geni
materni e fetali) o la quota di RNA nel plasma materno espresso solo da geni feto-
placentari.
Infine la valutazione dell’assetto cromosomico fetale può essere ottenuto anche
dallo studio dei polimorfimi (SNP’S). Queste tecniche si basano sul confronto tra i
polimorfismi materni/paterni e quelli fetali, al fine di identificare la quota di
cromosoma 21 fetale.
Queste metodiche sono impiegate per la valutazione del fenotipo RH del feto in
mamme con gruppo sanguigno Rh negativo. E hanno già ottenuto una robusta
conferma tanto da essere già impiegate in ambito clinico.
NELLA SEGUENTE TABELLA sono elencati alcuni dei TEST MOLECOLARI
disponibili sul mercato con il nome commerciale della casa produttrice.
La scelta della metodica dipende ovviamente dalla effettiva disponibilità sul territorio
della particolare metodica o da criteri di tipo clinico.

4. I lavori scientifici pubblicati sinora, in cui si impiegano tali metodiche hanno prodotto
risultati eccellenti. I primi studi sono stati condotti in casistiche di donne ad alto
rischio (età elevata), tuttavia dati in pubblicazione sembrano confermare tali
aspettative anche in gruppi a basso rischio.
I test fin qui elencati, consentono infatti di identificare la trisomia 21 in più del 99%
dei casi.
La quota di falsi allarmi (falsi positivi) rilevata è inferiore all’1%.
Per le altre anomalie cromosomiche i risultati non sono così soddisfacenti, in parte
dovuti al fatto che le altre anomalie sono decisamente meno frequenti, ma più
spesso sospettate sulla base di elementi ecografici.
I dubbi relativi all’impiego su larga scala di tali esami dipende dal fatto che non
conosciamo ancora precisamente il VALORE PREDITTIVO POSITIVO e
NEGATIVO di questi test (ovvero la probabilità che ad un risultato positivo del test
corrisponda effettivamente una diagnosi di anomalia cromosomica sul feto e che
viceversa ad un risultato negativo corrisponda effettivamente un feto con corredo
cromosomico normale)
Probabilmente saranno necessari studi di popolazione piuttosto ampi e ancora un
po’ di tempo per esplorare a fondo tutti questi dettagli
Questi esami sono relativamente nuovi e le società scientifiche non si sono
ancora pronunciate in modo definitivo sulla modalità di impiego e
sull’integrazione di tali metodiche con gli esami consolidati tuttavia queste
sono le indicazioni sugli screening prodotte nel 2014 dall’ISUOG (società
internazionale di ecografia in ostetricia e ginecologia)
A tutte le donne dovrebbe essere offerta una CONSULENZA sui vari esami di
diagnosi prenatale (test di screening, test diagnostici, performance limiti, costi etc)
dopo una accurata ecografia di datazione le opzioni possono essere le seguenti:
SCREENING del primo trimestre (ecografia della translucenza nucale + prelievo
biochimico) come strategia per il calcolo individuale del rischio.
In base al risultato, la coppia può decidere di
- non proseguire con ulteriori approfondimenti
- effettuare un NIPT
- procedere con un esame invasivo/diagnostico

5. In merito ai test non invasivi
• NIPT non è un test diagnostico
• NIPT non è stato ancora validato in popolazioni a basso rischio per
anomalie
• NIPT può essere una opzione alternativa ai test invasivi,in caso di alterato
screening del primo trimestre, o esito intermedio
• NIPT non è utile nelle pazienti ad altissimo rischio (1/10) in questa
popolazione le anomalie indagate raprrsentano solo 70% del totale
• NIPT non è indicato in caso di anomalie strutturali
• NIPT non è ancora standardizzato in caso di gravidanza gemellare
• Non è ancora stato identificato il test con migliori caratteristiche
• NIPT può offrire l’estensione ad altre indagini (tale opzione deve essere
discussa estesamente con la coppia)
COSA SUCCEDE :
• In caso di POSITIVITA’ del test è SEMPRE necessaria una conferma mediante
tecniche diagnostiche convenzionali (prelievo di villi coriali e amniocentesi).
• Anche in caso in cui il test molecolare dia un risultato negativo (escluse le
aneuploidie) è opportuno procedere con un esame diagnostico se lo SCREENING
del I trimestre o l’esame ecografico pongono un sospetto di anomalia cromosomica
e/o strutturale
VANTAGGI
Non rischiosa per il feto
Eseguibile a partire da 10 settimane fino a 20 settimane
Prelievo ematico da sangue periferico materno
Ottima performance dei test
Eseguibile anche in pz in gravidanze da Procreazione medica assistita
Eseguibile in casi a rischio per aborto o prelievo tecnicamente difficile
LIMITI
Non è una completa analisi del DNA fetale
non rileva anomalie di altri cromosomi
non rileva mosaicismi <10-30%
non rileva trisomie parziali o difetti strutturali
talvolta necessario ripetere il prelievo (se DNA Fetale <4%)
COSTO elevato a carico del paziente

6. Attualmente offriamo alle nostre pazienti le seguenti opzioni
PRENATALTEST- Azienda ospedaliera Careggi – Firenze
1. primo test completamente italiano
2. elaborato e refertato a Firenza dal lab di genetica molecolare
3. approvato dalla Società di Genetica Medica (SIGU)
4. verificato su un campione di donne italiane
5. costo inferiore ai test oltreoceano
PANORAMA - Natera
1. Impiega direttamente il DNA fetale sottraendolo da quello materno e
paterno
2. Accuratezza prossima al 100% per le trisomia a valori >4% di
frazione fetale
3. Identifica la frazione fetale sempre
4. Identifica il rischio per la monosomia X
5. Individua la triploidia
6. Consente l’esecuzione di test addizionali (microdelezioni)
7. No in caso di ovodonazioni
Dott.ssa Chiara Elsa Boschetto