Teknik pewarnaan gram digunakan untuk membedakan bakteri menjadi dua kelompok berdasarkan sifat dinding selnya. Bakteri gram negatif akan terlihat merah setelah pewarnaan karena peluntur dapat menghilangkan pewarna utama, sedangkan bakteri gram positif akan terlihat ungu karena pewarna utama tidak dapat dihilangkan peluntur. Uji coba menunjukkan Escherichia coli adalah gram negatif dan Streptococcus mut
3. PENGERTIAN TEKNIK PEWARNAAN GRAM
Pewarnaan gram atau metode gram adalah suatu
metode empiris untuk membedakan spesies bakteri
menjadi dua kelompok besar, gram positif dan gram
negatif, berdasarkan sifat kimia dan fisika dinding sel
mereka, metode ini diberi nama berdasarkan
penemunya, ilmuwan Denmark Hans Christian Gram
(1853-1938), yang mengembangkan teknik ini pada
tahun 1884 untuk membedakan pneumokokus dan
bakteri klebsiella pneumoniae.
4. TEKNIK PEWARNAAN GRAM
ALAT dan Bahan:
• Bakteri Escherichia colli (gram negatif), Streptococcus mutans (gram positif)
• Larutan pewarna bakteri gram:
Gram A , larutan hucker’s crystal violet
- Larutan a: Crystal violet + Alkohol 95%
- Larutan b: Amonium oksalat + Aquadest
Gram B, larutan Mordan Logal’s Iodine
- Iodine + Kalium iodine (KJ) + Aquadest , Campurkan Iodine dan KJ dalam mortar dan
haluskan. Tambahkan aquadest sedikit demi sedikit sampai habis
Gram C, larutan peluntur
- Alkohol 95%l + Aseton
Gram D, larutan pewarna bakteri safranin
- Safranin + Alkohol 95% + Aquadest, larutkan safranin dalam alkohol, tambahkan aquadest
• Alkohol 70%
• Object glass, lampu spiritus, jarum ose
• Mikroskop
Campurkan larutan a dan b tersebut
5. CARA KERJA PEWARNAAN GRAM
Object glass dibersihkan dengan
kapas + alkohol 70%
Ambil dengan jarum ose suspensi
bakteri kemudian ratakan
Suspensi
Bakteri
Teteskan larutan gram A
sebanyak 2-3 tetes, biarkan
selama 1 menit
Bilas dengan air suling kemudian
keringkan dengan kertas isap.
Proses fiksasi
6. Teteskan larutan gram B sebanyak 2-
3 tetes, biarkan selama 1 menit
Bilas dengan air suling kemudian
keringkan dengan kertas isap.
Teteskan larutan gram C sebanyak 2-
3 tetes, biarkan selama 30 detik
Bilas dengan air suling kemudian
keringkan dengan kertas isap.
7. Teteskan larutan gram D sebanyak 2-
3 tetes, biarkan selama 2 menit
Bilas dengan air suling kemudian
keringkan dengan kertas isap.
Amati bentuk dan warna bakteri
dengan menggunakan mikroskop
dengan lensa objektif 100 kali.
9. PENGGOLONGAN BAKTERI GRAM
Bakteri gram negatif, ialah bakteri
yang kemampuan mengikat
pewarna bakteri utama tidak kuat,
sehingga dapat dilunturkan oleh
peluntur, dan dapat diwarnai oleh
bakteri lawan.
Bakteri Gram Negatif
Bakteri gram positif, ialah bakteri
yang mengikat pewarna bakteri
utama dengan kuat, sehingga tidak
dapat dilunturkan dan tidak dapat
diwarnai lagi oleh pewarna bakteri
lawan.
Bakteri Gram Positif
10. KESIMPULAN
Pada pewarnaan gram ditemukan bahwa
bakteri Escherichia Colli adalah bakteri jenis
gram negatif dengan warna merah dan memiliki
bentuk basil pada perbesaran mikroskop hingga
100x. Dan bakteri Streptococcus Mutans adalah
bakteri jenis gram positif dengan warna ungu
dan memiliki bentuk coccus (bulat) yang
berantai pada perbesaran mikroskop hingga
100x.
