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NOVITA’ IN DIAGNOSTICA
ALLERGOLOGICA MOLECOLARE
ALLERGIA ALIMENTARE
Danilo Villalta
Immunologia e Allergologia
Ospedale «S. Maria degli Angeli»
Pordenone
• Generalità sulla diagnostica molecolare
dell’allergia alimentare
• L’allergia al grano
• L’allergia alla carne
• Il problema delle omologie
• Generalità sulla diagnostica molecolare
dell’allergia alimentare
• L’allergia al grano
• L’allergia alla carne
• Il problema delle omologie
1. Resolving genuine versus cross-reactive sensitization in poly-
sensitized patients
2. Assessing the risk of severe, systemic versus mild local reactions
in food allergy, thereby reducing unnecessary anxiety for the
patient and the need for food challenge testing
3. Identifying patients and triggering allergens for specific
immunotherapy (SIT)
Villalta D. Not Allergol 2011
Risk assessment
Protein family Function Source Allergens
Prolamin superfamily Prolamins Seed storage Cereals Tri a19, gliadins,
gluten components
2S albumins Seed storage Peanut, tree nuts,
mustard
Ber e1, Jug r1, Ara h2,
Ara h 6, Cor a 14
nsLTP Plant defence All type of plant, latex Pru p3, Tri a 14, Cor a
8, Jug r 3
α-amylase/prot.
inhibitors
Cereals Tri a 30 (Tri a aA_TI )
Cupin superfamily 7S globulins Seed storage Legumes, nuts, seeds Ara h 1, Jug r 2, Ses i1
11S globulins Seed storage Penaut tree nuts Ara h3, Cor a9
Profilins Actin binding All type of plant foods,
latex
Bet v 2, Hev b 8, Phl p
12
PR-10 (Bet v 1 related
proteins)
Plant defence All type of plant Bet v 1, Gly m4, Act
d8, Pru p1
Oleosins Stabilizing oil body Legumes, nuts, seeds
Endochitinases Plant defence, chitin
hydrolisis
Banana, avocado,
chestnut, latex
Pers a1, Cas s5, Vit v5
(Hev b6)
β-1,3 glucanases Plant defence Banana, avocado,
chestnut, latex
Hev b2, Mus a5, Ole
e9
Thaumatin-like
proteins
Plant defence Kiwi, citrus and
Rosaceae fruit, grape
Act d2, Mal d2, Pru
av2
Protein family Function Source Allergens
Tropomyosins Muscle contraction Crustaceans, molluscs,
fish parasite (Anisakis)
Pen a1, Pen m1, Ani s3,
Der p10
Parvalbumins Ca++-binding proteins Fish, amphibians Cyp c1, Gad c1
Caseins Increase C++ level in milk Milk Bos d8
α-Lactalbumin
(C-type lysozyme)
Ca++ binding protein Milk Bod d4
β-lactoglobulin
((Lipocalins)
Carrier of small
molecules
Milk Bos d5
Kazal-type protease
inhibitors (ovomucoid)
Protease inhibitor Egg Gal d1
Serpin serine protease
inhibitor (Ovoalbumin)
Protease inhibitor Egg Gal d2
Iron-binding
glycoproteins
Iron-binding Egg Gal d3
C-type lysozyme Egg Gal d4
From Hoffmann-Sommergruber K & Mills K. Anal Bioanal Chem 2009
* Currently available for
sigleplex diagnostics
** Available only in
multiplex (ISAC)
diagnostics
Villalta D et al.
Eur Ann Allergy Immunol
(in press)
2016
In press
alpha-Gal
ImmunoCAP®
ISAC sIgE 112
Ricerca marcatori di sensibilizzazione primaria
(termo- e gastro-stabili)
Ricerca marcatori di cross-
reattività
 Profiline (Bet v2/ Phl p 12)
 PR-10 (Bet v 1/Cor a 1)
 CCD
Clinica suggestiva per allergia alimentare
Test con allergene estrattivo
POS
NEG Bassa probabilità di allergia
alimentare
• Lipid tranfer proteins (LTP)
• 2S-albumine
• Cupine
• Tropomiosine
• Parvalbumine
• altro
Alto rischio di reazione
sistemica
Basso rischio di reazione
sistemica
Villalta D et al IJLM 2016
• Generalità sulla diagnostica molecolare
dell’allergia alimentare
• L’allergia al grano
• L’allergia alla carne
• Il problema delle omologie
Allergens in wheat
Wheat proteins
Proteomic map of wheat (~ 1000 individual components)
Tatham AS & Shewry PR Clin Exp Allergy 2008
Wheat proteins
Osborne classification
- Albumins (water extraction)
-Globulins (saline extraction)
-Prolamins (alchol/water mixture
extraction)
-Glutenins (dilute acid extraction)
Functions based classification (80% major storage protein)
Gluten proteins
Monomeric
gliadins
Polymeric
glutenins
α/β γ ω
Gliadin groups based on electrophoretic
mobility of native proteins at low pH
HMW LMW
Groups of glutenin subunits separated by SDS-
PAGE after reduction of disulphide bonds
18
Allergen MW Biochemical name
Tri a 12 14 Profilin
Tri a 14 9 Non-specific lipid tranfer
protein (LTP)
Tri a 15 Monomeric alpha-amylase
inhibitor
Tri a 18 Agglutinin Isolectin I
Tri a 19 65 Omega-5 gliadin
Tri a 21 Alpa-beta-gliadin
Ti a 25 Thioredoxin
Tri a 26 88 HMW glutenin
Tri a 27 27 Thiol reductase
Tri a 28 13 Dimeric alpha-amylase
Inhibitor
Allergen MW Biochemical name
Tri a 29 13 Tetrameric alpha-amylase
inhibitor CM1/CM2
Tri a 30 16 Tetrameric alpha-amylase
inhibitor CM3
Tri a 31 Triosephosphate-isomerarase
Tri a 32 1-cys-peroxiredoxin
Tri a 33 Serpin
Tri a 34 Gliceraldehyde-3-phosphate-
dehydrog.
Tri a 35 Dehydrin
Tri a 36 40 LMW glutenin
Tri a 37 12 Alpha purothionin
Tri a 39 Serin protease Inhib.
19
Allergen MW Biochemical name
Tri a 12 14 Profilin
Tri a 14 9 Non-specific lipid tranfer
protein (LTP)
Tri a 15 Monomeric alpha-amylase
inhibitor
Tri a 18 Agglutinin Isolectin I
Tri a 19 65 Omega-5 gliadin
Tri a 21 Alpa-beta-gliadin
Ti a 25 Thioredoxin
Tri a 26 88 HMW glutenin
Tri a 27 27 Thiol reductase
Tri a 28 13 Dimeric alpha-amylase
Inhibitor
Allergen MW Biochemical name
Tri a 29 13 Tetrameric alpha-amylase
inhibitor CM1/CM2
Tri a 30 16 Tetrameric alpha-amylase
inhibitor CM3
Tri a 31 Triosephosphate-isomerarase
Tri a 32 1-cys-peroxiredoxin
Tri a 33 Serpin
Tri a 34 Gliceraldehyde-3-phosphate-
dehydrog.
Tri a 35 Dehydrin
Tri a 36 40 LMW glutenin
Tri a 37 12 Alpha purothionin
Tri a 39 Serin protease Inhib.
Wheat-dependent, exercise-induced anaphylaxis (WDEIA)
Wheat
Shrimp
Cuttlefish
Crab
Grape
Nuts
Buckwheat
Fish
57%18%
Morita E. J Derm Sci 2007
Triggering factors
Foods (amount, sort and combination)
Exercise (strength, type, duration and
timing after meal)
General conditions (cold, stress,
menstruation, etc)
Alcohol
Drugs (aspirin and NSAIDs)
-FDEIA: - 0.06% of the elementary school students
- 0.21% of the high school students
- peak incidence in the second decade
- M/F = 2:1
Tanaka S 1994
Wheat
Tri a 19 ( ω 5 Gliadin )
Matsuo et al:J Biol Chem 2004
IgE cross-reactivity
γ-70 secalin (91%)
γ-35 secalin (83%)
γ-3 hordein (91%)
Transglutaminase-mediated cross
linking of ω-5-gliadin proteins
Formation of large allergen complexes
capable to eliciting anaphylactic
reaction
Palosuo et al. JACI 2003
80%
20%
WDEIA
Morita E, et al J Dermatol Sci 2007
Increased GI permeability
Increased Il-6 and increased tTG
Increased plasma osmolarity
Changes in acid-base balance
Redistribution of blood flow from
visceral organs to skeletal muscle,
skin, and heart
2015; 70:1212-21
Morita E et al J Dermatol Sci 2007
Oral Food Challenge
Caso Clinico 1
M.T. ♂ 59 aa
Mentre ballava dopo aver cenato (antipasto di moscardini,
pasta alla scogliera, verdura mista e 2 bicchieri di vino
bianco) ha accusato orticaria e lieve difficoltà respiratoria.
Anamnesi negativa per allergopatie. Riferisce, però, che a
volte negli ultimi 2-3 anni ha presentato prurito post-
prandiale, ma non lo ha mai correlato con assunzione di un
cibo specifico.
In seguito a tale episodio ha assunto ancora pasta e vino,
ma non ha più mangiato pesce e crostacei.
Uovo Neg
Latte Neg
Noce Neg
Nocciola Neg
Pesca Neg
Cereali mix Neg
Arachide Neg
Soia Neg
Carni mix Neg
Pesce Neg
Crostacei Neg
SPT
Gamberetto 0.02 kUA/L
Polpo <0.01 kUA/L
Pen a 1 <0.01 kUA/L
Salmone 0.03 kUA/L
Trota <0.01 kUA/L
Gad c 1 <0.01 kUA/L
Dosaggio IgE specifiche
Grano 0.39 kUA/L
Gliadine 1.27 kUA/L
Tri a 19 2.46 kUA/L
Dopo 1 anno in cui non ha più eseguito
esercizio fisico e assunto alcol dopo assunzione
di cibi contenenti grano non ha più presentato
sintomi ed è scomparso il prurito post-prandiale
Diagnosi finale: WDEIA
Caso Clinico 2
A.V. ♂ 63 aa
Dopo intervento ortopedico alla spalla, mentre era
ancora ricoverato, subito dopo aver assunta 1 cps
di Ibuprofene da 600 mg e aver fatta colazione con
fette biscottate, marmellata di mirtilli e un succo di
arancia ha accusata una reazione di orticaria-
angioedema.
Sospeso il trattamento con il FANS, è stata chiesta
una consulenza allergologica
Dall’anamnesi emerge che il paziente nel corso
dell’ultimo anno ha accusati almeno altri tre
episodi di orticaria che erano regrediti
spontaneamente e a cui non aveva dato molto
peso.
Non sa riferire associazioni con cibi specifici, o
di aver assunti farmaci in tali circostanze
Uovo Neg
Latte Neg
Noce Neg
Nocciola Neg
Pesca Neg
Cereali mix 1+
Arachide Neg
Soia Neg
Carni mix Neg
Pesce Neg
Crostacei Neg
SPT Dosaggio IgE specifiche
Pheum P <0.01 kUA/L
Cynodon d <0.01 kUA/L
Grano 1.6 kUA/L
Gliadine 10.8 kUA/L
Tria 19 36.8 kUA/L
TPO con Ibuprofene: NEGATIVO
Diagnosi: Allergia al grano associata
a presenza di cofattori (FANS)
Caso Clinico 3
R.A. ♂ 34 aa
Mentre correva in mountain-bike in una strada di
montagna, dopo aver pranzato in un rifugio con uova e
speck, una fetta di torta al grano saraceno e una birra
weiss, ha iniziato ad accusare sudorazione profusa,
nausea, prurito diffuso, edema labiale
Due settimane dopo, sempre mentre era in mountain-bike,
1 ora dopo aver assunta un barretta al sesamo (che ricorda
di aver assunta anche la volta precedente) e circa 20’ dopo
essersi fermato al rifugio e aver pranzato con un piatto di
formaggio, speck e rafano e aver ribevuta una birra weiss,
ha presentato nuovamente orticaria
Uovo Neg
Latte Neg
Noce Neg
Nocciola Neg
Pesca Neg
Cereali mix Neg
Arachide Neg
Soia Neg
Carni mix Neg
Pesce Neg
Crostacei Neg
Sesamo (PbP) Neg
SPT IgE specifiche
Sesamo <0.01 kUA/L
Grano saraceno <0.01 kUA/L
Grano 0.98 kUA/L
Orzo 0.56 kUA/L
Gliadine 2.70 kUA/L
Tri a 14 0.45 kUA/L
Tri a19 9.60 kUA/L
Da 2 anni il paziente non assume più cibi
contenenti grano 1 ora dopo aver termimato
esercizio fisico e non esegue esercizio fisico
entro le 4 ore dall’assunzione di gliadine e non
ha più accusati sintomi
Diagnosi: WDEIA
• Generalità sulla diagnostica molecolare
dell’allergia alimentare
• L’allergia al grano
• L’allergia alla carne
• Il problema delle omologie
Allergia di tipo immediato:
* Carni di mammiferi(bue, maiale,
etc.)
* Carni di volatili (pollo, tacchino)
Allergia di tipo ritardato:
* Carni di mammiferi
Allergia di tipo immediato:
* Carni di mammiferi(bue, maiale,
etc.)
* Carni di volatili (pollo, tacchino)
Species
(common name
Species
(latin name)
Allergen name Biochemical
name
Molecular
weight (kDa)
Cow Bos domesticus Bos d 6 * Serum albumin 67
Cow Bos domesticus Bos d 7 Immunoglobulin 160
Pork Sus scrofa Sus s 1 * Serum albumin 60
Chicken Gallus
domesticus
Gal d 5 ** Serum albumin 69
Meat allergens present in the list of the Allergen Nomenclature Sub-
Committee of the International Union of Immunological Societies (IUIS)
* ImmunoCAP
** ISAC
Albumin
Ligh chain Ig
Heavy chain Ig
Actin
a
Restani P et al Curr Opin Allergy Clin Immunol 2009;9:265-9
Cross-reattività
• Tra carni di differenti animali
• Tra carne e altri cibi
• Tra carne ed epiteli animali (della stessa
specie o di specie diverse)
Cross-reattività
• Tra carni di differenti animali
• Tra carne e altri cibi
• Tra carne ed epiteli animali (della stessa
specie o di specie diverse)
RESULTS:
The findings suggest that animal monoclonal antibodies specific for cow's milk
proteins are able to recognize the major part of milk proteins from mammals
bred in Mediterranean countries (sheep, goat, and buffalo); weak cross-
reactivity was observed with milk proteins from mares and donkeys. None of the
antibodies used in our studies reacted with proteins from an exotic mammalian
species: the camel. Similar cross-reactions were found with human circulating
immunoglobulin E from children allergic to milk. With regard to beef allergy,
monoclonal antibodies specific for bovine serum albumin cross-reacted only with
ovine serum albumin, whereas the number of sera from allergic children able to
recognize other mammalian serum albumins depended directly on the
closeness of phylogenetic relationship between animal species and
inversely on the percent identity with human serum albumin in the main epitopic
sequence.
Ann Allergy Asthma Immunol. 2002 Dec;89(6 Suppl 1):11-5.
Cross-reactivity between mammalian proteins.
Restani P1, Beretta B, Fiocchi A, Ballabio C, Galli CL.
Matricardi PM et al.
Cross-reattività
• Tra carni di differenti animali
• Tra carne e altri cibi
• Tra carne ed epiteli animali (della stessa
specie o di specie diverse)
Ann Allergy Asthma Immunol. 2002 Dec;89(6 Suppl 1):38-43.
Beef allergy in children with cow's milk allergy; cow's milk
allergy in children with beef allergy.
Martelli A1, De Chiara A, Corvo M, Restani P, Fiocchi A.
RESULTS:
In the literature, between 13 and 20% of children with cow's milk allergy also
have beef allergy. In our personal series of patients, 28 children (18 boys and
10 girls) diagnosed with beef allergy underwent skin prick tests and double-
blind, placebo-controlled food challenge, which showed that 26 (92.9%) were
allergic to cow's milk. Two children nonallergic to cow's milk were the only
ones who were not sensitized to bovine serum albumin.
CONCLUSIONS:
Most children with beef allergy are also allergic to cow's milk and should
avoid the consumption of dairy products. Sensitization to bovine serum
albumin is a marker of cow's milk allergy in children with beef allergy.
Elimination of beef from the diet of children with cow's milk allergy should be
evaluated on an individual basis after diagnostic workup.
Cross-reattività
• Tra carni di differenti animali
• Tra carne e altri cibi
• Tra carne ed epiteli animali (della stessa
specie o di specie diverse)
Monogr Allergy. 1996;32:164-73.
The pork/cat syndrome or crossed reactivity between cat epithelia
and pork meat.
Drouet M1, Sabbah A.
Cat serum albumin (Fel d 2) Pork serum albumin (Sus s 1)
Matricardi et al EAACI Mol
ecluar Allergology User’s Guide
Posthumus J et al JACI 2013,131.923-5
Fel d 2
Can f 3 *
Bos d 6
* ISAC
Int Arch Allergy Appl Immunol. 1988;87(2):143-50.
Bird-egg syndrome. Cross-reactivity between bird antigens and
egg-yolk livetins in IgE-mediated hypersensitivity.
Mandallaz MM1, de Weck AL, Dahinden CA.
Bird albumin Chicken serum albumin (egg-yolk α-
livetin) (Gal d 5)
Allergy 2001
Allergia di tipo immediato:
* Carni di mammiferi(bue, maiale,
etc.)
* Carni di volatili (pollo, tacchino)
Allergia di tipo ritardato:
* Carni di mammiferi
Alpha-Gal
Galactosyl alpha 1,3 galactosyl tranferase
Saleh h et al CMA 2012
28 milioni di anni fa inattivazione del
gene alpha1,3 GT per comparsa di due
mutazioni puntiformi (delezioni)
Clinica della «anafilassi ritardata» da α-Gal
Kennedy JL et al Pediatric 2013
Diagnosi
SPT Intradermo SPT estratto carne fresca
Commins SP et al J Allergy Clin Immunol 2009
Tireoglobulina bovina
Caso clinico
♂ 55 aa
2 episodi di anafilassi (marzo 2013 e agosto 2013)
Dopo il primo episodio aveva eseguita valutazione
allergologica con esito completamente negativo.
conclusione episodio di anafilassi idiopatica.
Rivalutazione allergologica dopo il secondo episodio.
Dall’anamnesi emergeva che aveva pranzato 5-6 ore prima
con carne, frutta e vino.
Prick test alimenti standard negativo
Prick by prick con carne di agnello, bue e porco negativo
Dall’anamnesi emergeva che il paziente tra il 2013 e il 2013 era stato punto
più volte da zecche.
Prick by prick con fegato e rene di bue positivo
IgE specifiche
α-Gal >100 kUA/L a ottobre 2013 e 41 kUA/L a giugno 2014.
Diagnosi finale: anafilassi ritardata da carne rossa alpha-Gal dipendente
- ♂ 55 anni
- 2 episodi di anafilassi (marzo 2013 e
agosto 2013)
- Nel secondo episodio aveva assunto
carne rossa 6 ore prima
- Prick test alimenti standard negativo
- Prick by prick con carne di agnello, bue e
porco negativo
- Prick by prick con fegato e rene di bue
positivo
- IgE specifiche α-Gal >100 kUA/L a ottobre
2013 e 41 kUA/L a giugno 2014.
- Il paziente nell’estate 2012 e 2013 era
stato più volte morso da zecche
Diagnosi finale: anafilassi ritardata da carne rossa alpha-Gal dipendente
1
12
2
8
6
11
4
2 4*
4
2
1
5
3
9
2
* 1 San Marino
79 allergy centres
1
1
1
9
1
3
1
1
9
3
27
1
3
Red meat allergy (40 cases)
Villalta D et al. Eur Ann Allergy Clin Immunol 2017
• Generalità sulla diagnostica molecolare
dell’allergia alimentare
• L’allergia al grano
• L’allergia alla carne
• Il problema delle omologie
Principali molecole omologhe e cross-reattive
di importanza allergologica
• Profiline
• PR-10 –like
• Polcalcine
• ns LTP
• 2S albumine
• Cupine
• Albumine sieriche
• Tropomiosine
• Lipocaline
• Parvalbumine
0%
100%
Identità
Probabilitàdicross-reattivitàIgE
35%
Profiline
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Bet v 2 Ole e 2 Hev b 8 Mer a 1 Phl p12
Prevalenza della positività degli omologhi di Bet v 2 in
pazienti allergici alla betulla
Villalta D & Asero R. JIACI 2010
Equ c 1, Fel d 4,
Can f 6
Can f 1, Can f 2,
Can f 4
Lipocaline
nsLTP
Ana o 3 Ara h 2 Ara h 6 Ara h 7 Ber e 1 Bra j 1 Bra n 1 Bra r 1 Car i 1 Cor a 14 Fag e 2 Fag t 2 Gly m 8 Jug n 1 Jug r 1 Pis v 1 Ric c 1 Ses i 1 Ses i 2 Sin a 1
20,9 24,5 22,1 27,2 20,7 20,7 21,9 34 37,6 21,6 22,4 14,6 30,2 31,3 64,4 16,2 32,9 24 16,7 Ana o 3
50,6 32,8 22,5 16,7 14,8 18,5 19,3 24,6 20,6 21,2 31,5 22,1 22 21,9 14,8 23,9 20,4 15,7 Ara h 2
34,5 24,8 13,8 14,1 20,5 22,9 31,2 23,7 24,3 30,5 21,8 22,3 24,3 14,9 25,8 23,1 13,9 Ara h 6
19,3 13,6 13,2 16 19 21,8 18,4 16,2 23,5 21,1 20,5 18,5 12,3 20,7 17,7 11,6 Ara h 7
16,2 17,4 17,9 36,2 40,5 19,1 20,7 16,6 33,5 37,5 28 14,9 30,8 35,1 14,8 Ber e 1
88,4 60,6 20,8 19,1 12,8 14,8 11,3 18,2 20,7 21,7 10,9 17,7 15,2 79,3 Bra j 1
61,6 20,8 18,5 13 14,3 12,1 19,3 20,7 20,8 12,2 17,4 15,5 80,7 Bra n 1
21,9 19,8 17,1 18,2 14,8 19,8 20,2 25,8 15,8 24,1 20,6 67,7 Bra r 1
59,7 22,3 22,3 16,6 77,6 86 30,9 17,7 35,6 32,4 19,1 Car i 1
21,5 20,7 16,2 58,5 61,7 35,8 22,7 39,8 32,7 14,8
Cor a
14
82,5 21 20,5 22,6 20,7 15,6 21,6 20 12 Fag e 2
21,4 20,4 22,6 21,3 14,9 20,4 21,9 13,8 Fag t 2
12,7 15,8 19,5 12,6 16,1 17,7 11,9 Gly m 8
83,2 29,4 18,1 32,1 28 16,8 Jug n 1
30,9 18,1 34,4 29 18,4 Jug r 1
16,6 29,9 23,5 20 Pis v 1
22,9 14,8 10,1 Ric c 1
35,7 17,3 Ses i 1
14,1 Ses i 2
Sin a 1
Amino acid
identities (%)
among 2s Albumin
Courtesy of E. Scala
Ana o 1 Ara h 1 Car i 2
Cor a
11 Fag e 3 Gly m 5 Jug n 2 Jug r 2 Len c 1 Lup an 1 Pin k 2 Pis s 1 Pis s 2 Pis v 3 Ses i 3
23,3 24,5 44,8 5,5 23,7 29,8 31,3 22,5 25,6 28,5 23,3 28,9 76,3 42,6 Ana o 1
24,8 25,3 4,7 38,4 28,3 30 35,8 41,4 21,6 34,5 39,1 24,4 26,6 Ara h 1
26,6 5,4 22,5 56,1 69,3 19,8 28,5 20 20 25,2 25,9 32,2 Car i 2
3 25,3 43,4 35,9 30,9 26,2 32,9 31,9 29,1 48,6 41
Cor a
11
6 5 7 8 4,8 5 7 5 4 5,6 Fag e 3
29,6 29,2 40,1 43,3 22 40,8 42,9 26,2 26,4 Gly m 5
78,2 31,9 31,1 33,8 32,6 30,8 33,4 34,4 Jug n 2
25,7 33,5 28 26,5 31,6 34,8 39 Jug r 2
38,4 26,4 90,1 48,7 24,8 21,1 Len c 1
23,7 38,7 44,8 25,5 29,1
Lup an
1
26,5 23,9 29,5 28,3 Pin k 2
47,2 25,5 22 Pis s 1
27,8 27,8 Pis s 2
44,3 Pis v 3
Ses i 3
Amino acid
identities (%)
among Vicilins (7s globulin)
Courtesy of E. Scala
Ana o 2 Ara h 3 Ber e 2 Cor a 9 Gly m 6 Jug r 4 Pis v 2 Pis v 5 Pru du 6 Ses i 6 Ses i 7 Sin a 2
38,6 46,4 49,7 45,2 54 44,8 75,5 40,9 37,5 44.8 41,2 Ana o 2
33,2 41,4 53,8 41,2 34,3 38,9 37,1 29,8 31,2 27,7 Ara h 3
47,4 37,5 47,6 44,3 46,3 39,8 38,7 44,7 36,2 Ber e 2
42,3 71,6 46,7 53,2 48,9 36,5 45,4 40,3 Cor a 9
44,5 38,2 44,8 37,4 29,9 36,1 32,6 Gly m 6
46,1 55 48,3 39,2 46,3 38,9 Jug r 4
48,3 39,2 35,2 45,4 36,8 Pis v 2
43,5 37,5 44,6 41,9 Pis v 5
34,5 35,9 40,8 Pru du 6
35,4 31,5 Ses i 6
36,4 Ses i 7
Sin a 2
Amino acid
identities (%)
among Legumins (11s Globulin)
Courtesy of E. Scala
Fabales
Fagales
Brassicales
Caryophyllales
Sapindales
phylogenetic trees
Arecales
Pinales
Enrico SCALA
IDI-IRCCS
• Idealmente un risultato negativo per una
classe molecolare (es 2S albumine) per una
specifica fonte, può escludere sia una cross-
reattività sierologica che clinica
• In un pannello di risultati di test eseguiti per
molecole omologhe (es 2S albumine) il
risultato più alto verosimilmente indica il
sensibilizzante primario, anche se ciò non è
sempre comprovato
Regole empiriche
Nelle allergie alimentari da vegetali le cross-
reattività sierologiche e cliniche è più
probabile che avvengano fra classe di
alimenti più strettamente apparentati da un
punto di vista botanico (generi, famiglie)
Come interpretare il caso dove sIgE sono
positivi per proteine omologhe presenti in
diverse specie (es Ara h 2, Cor a 14, Jug r 1,
Ber e 1, Ses i 1) ?
-Storia clinica
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20171111 - Villalta - Allergia alimentare

  • 1. NOVITA’ IN DIAGNOSTICA ALLERGOLOGICA MOLECOLARE ALLERGIA ALIMENTARE Danilo Villalta Immunologia e Allergologia Ospedale «S. Maria degli Angeli» Pordenone
  • 2. • Generalità sulla diagnostica molecolare dell’allergia alimentare • L’allergia al grano • L’allergia alla carne • Il problema delle omologie
  • 3. • Generalità sulla diagnostica molecolare dell’allergia alimentare • L’allergia al grano • L’allergia alla carne • Il problema delle omologie
  • 4. 1. Resolving genuine versus cross-reactive sensitization in poly- sensitized patients 2. Assessing the risk of severe, systemic versus mild local reactions in food allergy, thereby reducing unnecessary anxiety for the patient and the need for food challenge testing 3. Identifying patients and triggering allergens for specific immunotherapy (SIT)
  • 5. Villalta D. Not Allergol 2011 Risk assessment
  • 6. Protein family Function Source Allergens Prolamin superfamily Prolamins Seed storage Cereals Tri a19, gliadins, gluten components 2S albumins Seed storage Peanut, tree nuts, mustard Ber e1, Jug r1, Ara h2, Ara h 6, Cor a 14 nsLTP Plant defence All type of plant, latex Pru p3, Tri a 14, Cor a 8, Jug r 3 α-amylase/prot. inhibitors Cereals Tri a 30 (Tri a aA_TI ) Cupin superfamily 7S globulins Seed storage Legumes, nuts, seeds Ara h 1, Jug r 2, Ses i1 11S globulins Seed storage Penaut tree nuts Ara h3, Cor a9 Profilins Actin binding All type of plant foods, latex Bet v 2, Hev b 8, Phl p 12 PR-10 (Bet v 1 related proteins) Plant defence All type of plant Bet v 1, Gly m4, Act d8, Pru p1 Oleosins Stabilizing oil body Legumes, nuts, seeds Endochitinases Plant defence, chitin hydrolisis Banana, avocado, chestnut, latex Pers a1, Cas s5, Vit v5 (Hev b6) β-1,3 glucanases Plant defence Banana, avocado, chestnut, latex Hev b2, Mus a5, Ole e9 Thaumatin-like proteins Plant defence Kiwi, citrus and Rosaceae fruit, grape Act d2, Mal d2, Pru av2
  • 7. Protein family Function Source Allergens Tropomyosins Muscle contraction Crustaceans, molluscs, fish parasite (Anisakis) Pen a1, Pen m1, Ani s3, Der p10 Parvalbumins Ca++-binding proteins Fish, amphibians Cyp c1, Gad c1 Caseins Increase C++ level in milk Milk Bos d8 α-Lactalbumin (C-type lysozyme) Ca++ binding protein Milk Bod d4 β-lactoglobulin ((Lipocalins) Carrier of small molecules Milk Bos d5 Kazal-type protease inhibitors (ovomucoid) Protease inhibitor Egg Gal d1 Serpin serine protease inhibitor (Ovoalbumin) Protease inhibitor Egg Gal d2 Iron-binding glycoproteins Iron-binding Egg Gal d3 C-type lysozyme Egg Gal d4 From Hoffmann-Sommergruber K & Mills K. Anal Bioanal Chem 2009
  • 8. * Currently available for sigleplex diagnostics ** Available only in multiplex (ISAC) diagnostics Villalta D et al. Eur Ann Allergy Immunol (in press)
  • 12. Ricerca marcatori di sensibilizzazione primaria (termo- e gastro-stabili) Ricerca marcatori di cross- reattività  Profiline (Bet v2/ Phl p 12)  PR-10 (Bet v 1/Cor a 1)  CCD Clinica suggestiva per allergia alimentare Test con allergene estrattivo POS NEG Bassa probabilità di allergia alimentare • Lipid tranfer proteins (LTP) • 2S-albumine • Cupine • Tropomiosine • Parvalbumine • altro Alto rischio di reazione sistemica Basso rischio di reazione sistemica Villalta D et al IJLM 2016
  • 13. • Generalità sulla diagnostica molecolare dell’allergia alimentare • L’allergia al grano • L’allergia alla carne • Il problema delle omologie
  • 15. Wheat proteins Proteomic map of wheat (~ 1000 individual components) Tatham AS & Shewry PR Clin Exp Allergy 2008
  • 16. Wheat proteins Osborne classification - Albumins (water extraction) -Globulins (saline extraction) -Prolamins (alchol/water mixture extraction) -Glutenins (dilute acid extraction) Functions based classification (80% major storage protein)
  • 17. Gluten proteins Monomeric gliadins Polymeric glutenins α/β γ ω Gliadin groups based on electrophoretic mobility of native proteins at low pH HMW LMW Groups of glutenin subunits separated by SDS- PAGE after reduction of disulphide bonds
  • 18. 18 Allergen MW Biochemical name Tri a 12 14 Profilin Tri a 14 9 Non-specific lipid tranfer protein (LTP) Tri a 15 Monomeric alpha-amylase inhibitor Tri a 18 Agglutinin Isolectin I Tri a 19 65 Omega-5 gliadin Tri a 21 Alpa-beta-gliadin Ti a 25 Thioredoxin Tri a 26 88 HMW glutenin Tri a 27 27 Thiol reductase Tri a 28 13 Dimeric alpha-amylase Inhibitor Allergen MW Biochemical name Tri a 29 13 Tetrameric alpha-amylase inhibitor CM1/CM2 Tri a 30 16 Tetrameric alpha-amylase inhibitor CM3 Tri a 31 Triosephosphate-isomerarase Tri a 32 1-cys-peroxiredoxin Tri a 33 Serpin Tri a 34 Gliceraldehyde-3-phosphate- dehydrog. Tri a 35 Dehydrin Tri a 36 40 LMW glutenin Tri a 37 12 Alpha purothionin Tri a 39 Serin protease Inhib.
  • 19. 19 Allergen MW Biochemical name Tri a 12 14 Profilin Tri a 14 9 Non-specific lipid tranfer protein (LTP) Tri a 15 Monomeric alpha-amylase inhibitor Tri a 18 Agglutinin Isolectin I Tri a 19 65 Omega-5 gliadin Tri a 21 Alpa-beta-gliadin Ti a 25 Thioredoxin Tri a 26 88 HMW glutenin Tri a 27 27 Thiol reductase Tri a 28 13 Dimeric alpha-amylase Inhibitor Allergen MW Biochemical name Tri a 29 13 Tetrameric alpha-amylase inhibitor CM1/CM2 Tri a 30 16 Tetrameric alpha-amylase inhibitor CM3 Tri a 31 Triosephosphate-isomerarase Tri a 32 1-cys-peroxiredoxin Tri a 33 Serpin Tri a 34 Gliceraldehyde-3-phosphate- dehydrog. Tri a 35 Dehydrin Tri a 36 40 LMW glutenin Tri a 37 12 Alpha purothionin Tri a 39 Serin protease Inhib.
  • 20. Wheat-dependent, exercise-induced anaphylaxis (WDEIA) Wheat Shrimp Cuttlefish Crab Grape Nuts Buckwheat Fish 57%18% Morita E. J Derm Sci 2007 Triggering factors Foods (amount, sort and combination) Exercise (strength, type, duration and timing after meal) General conditions (cold, stress, menstruation, etc) Alcohol Drugs (aspirin and NSAIDs) -FDEIA: - 0.06% of the elementary school students - 0.21% of the high school students - peak incidence in the second decade - M/F = 2:1 Tanaka S 1994
  • 21. Wheat Tri a 19 ( ω 5 Gliadin ) Matsuo et al:J Biol Chem 2004 IgE cross-reactivity γ-70 secalin (91%) γ-35 secalin (83%) γ-3 hordein (91%) Transglutaminase-mediated cross linking of ω-5-gliadin proteins Formation of large allergen complexes capable to eliciting anaphylactic reaction Palosuo et al. JACI 2003 80% 20% WDEIA
  • 22. Morita E, et al J Dermatol Sci 2007 Increased GI permeability Increased Il-6 and increased tTG Increased plasma osmolarity Changes in acid-base balance Redistribution of blood flow from visceral organs to skeletal muscle, skin, and heart 2015; 70:1212-21
  • 23. Morita E et al J Dermatol Sci 2007 Oral Food Challenge
  • 24. Caso Clinico 1 M.T. ♂ 59 aa Mentre ballava dopo aver cenato (antipasto di moscardini, pasta alla scogliera, verdura mista e 2 bicchieri di vino bianco) ha accusato orticaria e lieve difficoltà respiratoria. Anamnesi negativa per allergopatie. Riferisce, però, che a volte negli ultimi 2-3 anni ha presentato prurito post- prandiale, ma non lo ha mai correlato con assunzione di un cibo specifico. In seguito a tale episodio ha assunto ancora pasta e vino, ma non ha più mangiato pesce e crostacei.
  • 25. Uovo Neg Latte Neg Noce Neg Nocciola Neg Pesca Neg Cereali mix Neg Arachide Neg Soia Neg Carni mix Neg Pesce Neg Crostacei Neg SPT Gamberetto 0.02 kUA/L Polpo <0.01 kUA/L Pen a 1 <0.01 kUA/L Salmone 0.03 kUA/L Trota <0.01 kUA/L Gad c 1 <0.01 kUA/L Dosaggio IgE specifiche Grano 0.39 kUA/L Gliadine 1.27 kUA/L Tri a 19 2.46 kUA/L
  • 26. Dopo 1 anno in cui non ha più eseguito esercizio fisico e assunto alcol dopo assunzione di cibi contenenti grano non ha più presentato sintomi ed è scomparso il prurito post-prandiale Diagnosi finale: WDEIA
  • 27. Caso Clinico 2 A.V. ♂ 63 aa Dopo intervento ortopedico alla spalla, mentre era ancora ricoverato, subito dopo aver assunta 1 cps di Ibuprofene da 600 mg e aver fatta colazione con fette biscottate, marmellata di mirtilli e un succo di arancia ha accusata una reazione di orticaria- angioedema. Sospeso il trattamento con il FANS, è stata chiesta una consulenza allergologica
  • 28. Dall’anamnesi emerge che il paziente nel corso dell’ultimo anno ha accusati almeno altri tre episodi di orticaria che erano regrediti spontaneamente e a cui non aveva dato molto peso. Non sa riferire associazioni con cibi specifici, o di aver assunti farmaci in tali circostanze
  • 29. Uovo Neg Latte Neg Noce Neg Nocciola Neg Pesca Neg Cereali mix 1+ Arachide Neg Soia Neg Carni mix Neg Pesce Neg Crostacei Neg SPT Dosaggio IgE specifiche Pheum P <0.01 kUA/L Cynodon d <0.01 kUA/L Grano 1.6 kUA/L Gliadine 10.8 kUA/L Tria 19 36.8 kUA/L TPO con Ibuprofene: NEGATIVO Diagnosi: Allergia al grano associata a presenza di cofattori (FANS)
  • 30. Caso Clinico 3 R.A. ♂ 34 aa Mentre correva in mountain-bike in una strada di montagna, dopo aver pranzato in un rifugio con uova e speck, una fetta di torta al grano saraceno e una birra weiss, ha iniziato ad accusare sudorazione profusa, nausea, prurito diffuso, edema labiale Due settimane dopo, sempre mentre era in mountain-bike, 1 ora dopo aver assunta un barretta al sesamo (che ricorda di aver assunta anche la volta precedente) e circa 20’ dopo essersi fermato al rifugio e aver pranzato con un piatto di formaggio, speck e rafano e aver ribevuta una birra weiss, ha presentato nuovamente orticaria
  • 31. Uovo Neg Latte Neg Noce Neg Nocciola Neg Pesca Neg Cereali mix Neg Arachide Neg Soia Neg Carni mix Neg Pesce Neg Crostacei Neg Sesamo (PbP) Neg SPT IgE specifiche Sesamo <0.01 kUA/L Grano saraceno <0.01 kUA/L Grano 0.98 kUA/L Orzo 0.56 kUA/L Gliadine 2.70 kUA/L Tri a 14 0.45 kUA/L Tri a19 9.60 kUA/L Da 2 anni il paziente non assume più cibi contenenti grano 1 ora dopo aver termimato esercizio fisico e non esegue esercizio fisico entro le 4 ore dall’assunzione di gliadine e non ha più accusati sintomi Diagnosi: WDEIA
  • 32. • Generalità sulla diagnostica molecolare dell’allergia alimentare • L’allergia al grano • L’allergia alla carne • Il problema delle omologie
  • 33. Allergia di tipo immediato: * Carni di mammiferi(bue, maiale, etc.) * Carni di volatili (pollo, tacchino) Allergia di tipo ritardato: * Carni di mammiferi
  • 34. Allergia di tipo immediato: * Carni di mammiferi(bue, maiale, etc.) * Carni di volatili (pollo, tacchino)
  • 35. Species (common name Species (latin name) Allergen name Biochemical name Molecular weight (kDa) Cow Bos domesticus Bos d 6 * Serum albumin 67 Cow Bos domesticus Bos d 7 Immunoglobulin 160 Pork Sus scrofa Sus s 1 * Serum albumin 60 Chicken Gallus domesticus Gal d 5 ** Serum albumin 69 Meat allergens present in the list of the Allergen Nomenclature Sub- Committee of the International Union of Immunological Societies (IUIS) * ImmunoCAP ** ISAC
  • 36. Albumin Ligh chain Ig Heavy chain Ig Actin a Restani P et al Curr Opin Allergy Clin Immunol 2009;9:265-9
  • 37. Cross-reattività • Tra carni di differenti animali • Tra carne e altri cibi • Tra carne ed epiteli animali (della stessa specie o di specie diverse)
  • 38. Cross-reattività • Tra carni di differenti animali • Tra carne e altri cibi • Tra carne ed epiteli animali (della stessa specie o di specie diverse)
  • 39. RESULTS: The findings suggest that animal monoclonal antibodies specific for cow's milk proteins are able to recognize the major part of milk proteins from mammals bred in Mediterranean countries (sheep, goat, and buffalo); weak cross- reactivity was observed with milk proteins from mares and donkeys. None of the antibodies used in our studies reacted with proteins from an exotic mammalian species: the camel. Similar cross-reactions were found with human circulating immunoglobulin E from children allergic to milk. With regard to beef allergy, monoclonal antibodies specific for bovine serum albumin cross-reacted only with ovine serum albumin, whereas the number of sera from allergic children able to recognize other mammalian serum albumins depended directly on the closeness of phylogenetic relationship between animal species and inversely on the percent identity with human serum albumin in the main epitopic sequence. Ann Allergy Asthma Immunol. 2002 Dec;89(6 Suppl 1):11-5. Cross-reactivity between mammalian proteins. Restani P1, Beretta B, Fiocchi A, Ballabio C, Galli CL.
  • 41. Cross-reattività • Tra carni di differenti animali • Tra carne e altri cibi • Tra carne ed epiteli animali (della stessa specie o di specie diverse)
  • 42. Ann Allergy Asthma Immunol. 2002 Dec;89(6 Suppl 1):38-43. Beef allergy in children with cow's milk allergy; cow's milk allergy in children with beef allergy. Martelli A1, De Chiara A, Corvo M, Restani P, Fiocchi A. RESULTS: In the literature, between 13 and 20% of children with cow's milk allergy also have beef allergy. In our personal series of patients, 28 children (18 boys and 10 girls) diagnosed with beef allergy underwent skin prick tests and double- blind, placebo-controlled food challenge, which showed that 26 (92.9%) were allergic to cow's milk. Two children nonallergic to cow's milk were the only ones who were not sensitized to bovine serum albumin. CONCLUSIONS: Most children with beef allergy are also allergic to cow's milk and should avoid the consumption of dairy products. Sensitization to bovine serum albumin is a marker of cow's milk allergy in children with beef allergy. Elimination of beef from the diet of children with cow's milk allergy should be evaluated on an individual basis after diagnostic workup.
  • 43. Cross-reattività • Tra carni di differenti animali • Tra carne e altri cibi • Tra carne ed epiteli animali (della stessa specie o di specie diverse)
  • 44. Monogr Allergy. 1996;32:164-73. The pork/cat syndrome or crossed reactivity between cat epithelia and pork meat. Drouet M1, Sabbah A. Cat serum albumin (Fel d 2) Pork serum albumin (Sus s 1) Matricardi et al EAACI Mol ecluar Allergology User’s Guide
  • 45. Posthumus J et al JACI 2013,131.923-5 Fel d 2 Can f 3 * Bos d 6 * ISAC
  • 46.
  • 47. Int Arch Allergy Appl Immunol. 1988;87(2):143-50. Bird-egg syndrome. Cross-reactivity between bird antigens and egg-yolk livetins in IgE-mediated hypersensitivity. Mandallaz MM1, de Weck AL, Dahinden CA. Bird albumin Chicken serum albumin (egg-yolk α- livetin) (Gal d 5) Allergy 2001
  • 48. Allergia di tipo immediato: * Carni di mammiferi(bue, maiale, etc.) * Carni di volatili (pollo, tacchino) Allergia di tipo ritardato: * Carni di mammiferi
  • 49. Alpha-Gal Galactosyl alpha 1,3 galactosyl tranferase Saleh h et al CMA 2012
  • 50. 28 milioni di anni fa inattivazione del gene alpha1,3 GT per comparsa di due mutazioni puntiformi (delezioni)
  • 51.
  • 52.
  • 53.
  • 54.
  • 55. Clinica della «anafilassi ritardata» da α-Gal Kennedy JL et al Pediatric 2013
  • 56. Diagnosi SPT Intradermo SPT estratto carne fresca Commins SP et al J Allergy Clin Immunol 2009
  • 58. Caso clinico ♂ 55 aa 2 episodi di anafilassi (marzo 2013 e agosto 2013) Dopo il primo episodio aveva eseguita valutazione allergologica con esito completamente negativo. conclusione episodio di anafilassi idiopatica. Rivalutazione allergologica dopo il secondo episodio. Dall’anamnesi emergeva che aveva pranzato 5-6 ore prima con carne, frutta e vino. Prick test alimenti standard negativo Prick by prick con carne di agnello, bue e porco negativo
  • 59. Dall’anamnesi emergeva che il paziente tra il 2013 e il 2013 era stato punto più volte da zecche. Prick by prick con fegato e rene di bue positivo IgE specifiche α-Gal >100 kUA/L a ottobre 2013 e 41 kUA/L a giugno 2014. Diagnosi finale: anafilassi ritardata da carne rossa alpha-Gal dipendente
  • 60. - ♂ 55 anni - 2 episodi di anafilassi (marzo 2013 e agosto 2013) - Nel secondo episodio aveva assunto carne rossa 6 ore prima - Prick test alimenti standard negativo - Prick by prick con carne di agnello, bue e porco negativo - Prick by prick con fegato e rene di bue positivo - IgE specifiche α-Gal >100 kUA/L a ottobre 2013 e 41 kUA/L a giugno 2014. - Il paziente nell’estate 2012 e 2013 era stato più volte morso da zecche Diagnosi finale: anafilassi ritardata da carne rossa alpha-Gal dipendente
  • 61.
  • 62. 1 12 2 8 6 11 4 2 4* 4 2 1 5 3 9 2 * 1 San Marino 79 allergy centres 1 1 1
  • 64.
  • 65. Villalta D et al. Eur Ann Allergy Clin Immunol 2017
  • 66. • Generalità sulla diagnostica molecolare dell’allergia alimentare • L’allergia al grano • L’allergia alla carne • Il problema delle omologie
  • 67. Principali molecole omologhe e cross-reattive di importanza allergologica • Profiline • PR-10 –like • Polcalcine • ns LTP • 2S albumine • Cupine • Albumine sieriche • Tropomiosine • Lipocaline • Parvalbumine
  • 70.
  • 71. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Bet v 2 Ole e 2 Hev b 8 Mer a 1 Phl p12 Prevalenza della positività degli omologhi di Bet v 2 in pazienti allergici alla betulla Villalta D & Asero R. JIACI 2010
  • 72. Equ c 1, Fel d 4, Can f 6 Can f 1, Can f 2, Can f 4 Lipocaline
  • 73.
  • 74. nsLTP
  • 75.
  • 76. Ana o 3 Ara h 2 Ara h 6 Ara h 7 Ber e 1 Bra j 1 Bra n 1 Bra r 1 Car i 1 Cor a 14 Fag e 2 Fag t 2 Gly m 8 Jug n 1 Jug r 1 Pis v 1 Ric c 1 Ses i 1 Ses i 2 Sin a 1 20,9 24,5 22,1 27,2 20,7 20,7 21,9 34 37,6 21,6 22,4 14,6 30,2 31,3 64,4 16,2 32,9 24 16,7 Ana o 3 50,6 32,8 22,5 16,7 14,8 18,5 19,3 24,6 20,6 21,2 31,5 22,1 22 21,9 14,8 23,9 20,4 15,7 Ara h 2 34,5 24,8 13,8 14,1 20,5 22,9 31,2 23,7 24,3 30,5 21,8 22,3 24,3 14,9 25,8 23,1 13,9 Ara h 6 19,3 13,6 13,2 16 19 21,8 18,4 16,2 23,5 21,1 20,5 18,5 12,3 20,7 17,7 11,6 Ara h 7 16,2 17,4 17,9 36,2 40,5 19,1 20,7 16,6 33,5 37,5 28 14,9 30,8 35,1 14,8 Ber e 1 88,4 60,6 20,8 19,1 12,8 14,8 11,3 18,2 20,7 21,7 10,9 17,7 15,2 79,3 Bra j 1 61,6 20,8 18,5 13 14,3 12,1 19,3 20,7 20,8 12,2 17,4 15,5 80,7 Bra n 1 21,9 19,8 17,1 18,2 14,8 19,8 20,2 25,8 15,8 24,1 20,6 67,7 Bra r 1 59,7 22,3 22,3 16,6 77,6 86 30,9 17,7 35,6 32,4 19,1 Car i 1 21,5 20,7 16,2 58,5 61,7 35,8 22,7 39,8 32,7 14,8 Cor a 14 82,5 21 20,5 22,6 20,7 15,6 21,6 20 12 Fag e 2 21,4 20,4 22,6 21,3 14,9 20,4 21,9 13,8 Fag t 2 12,7 15,8 19,5 12,6 16,1 17,7 11,9 Gly m 8 83,2 29,4 18,1 32,1 28 16,8 Jug n 1 30,9 18,1 34,4 29 18,4 Jug r 1 16,6 29,9 23,5 20 Pis v 1 22,9 14,8 10,1 Ric c 1 35,7 17,3 Ses i 1 14,1 Ses i 2 Sin a 1 Amino acid identities (%) among 2s Albumin Courtesy of E. Scala
  • 77. Ana o 1 Ara h 1 Car i 2 Cor a 11 Fag e 3 Gly m 5 Jug n 2 Jug r 2 Len c 1 Lup an 1 Pin k 2 Pis s 1 Pis s 2 Pis v 3 Ses i 3 23,3 24,5 44,8 5,5 23,7 29,8 31,3 22,5 25,6 28,5 23,3 28,9 76,3 42,6 Ana o 1 24,8 25,3 4,7 38,4 28,3 30 35,8 41,4 21,6 34,5 39,1 24,4 26,6 Ara h 1 26,6 5,4 22,5 56,1 69,3 19,8 28,5 20 20 25,2 25,9 32,2 Car i 2 3 25,3 43,4 35,9 30,9 26,2 32,9 31,9 29,1 48,6 41 Cor a 11 6 5 7 8 4,8 5 7 5 4 5,6 Fag e 3 29,6 29,2 40,1 43,3 22 40,8 42,9 26,2 26,4 Gly m 5 78,2 31,9 31,1 33,8 32,6 30,8 33,4 34,4 Jug n 2 25,7 33,5 28 26,5 31,6 34,8 39 Jug r 2 38,4 26,4 90,1 48,7 24,8 21,1 Len c 1 23,7 38,7 44,8 25,5 29,1 Lup an 1 26,5 23,9 29,5 28,3 Pin k 2 47,2 25,5 22 Pis s 1 27,8 27,8 Pis s 2 44,3 Pis v 3 Ses i 3 Amino acid identities (%) among Vicilins (7s globulin) Courtesy of E. Scala
  • 78. Ana o 2 Ara h 3 Ber e 2 Cor a 9 Gly m 6 Jug r 4 Pis v 2 Pis v 5 Pru du 6 Ses i 6 Ses i 7 Sin a 2 38,6 46,4 49,7 45,2 54 44,8 75,5 40,9 37,5 44.8 41,2 Ana o 2 33,2 41,4 53,8 41,2 34,3 38,9 37,1 29,8 31,2 27,7 Ara h 3 47,4 37,5 47,6 44,3 46,3 39,8 38,7 44,7 36,2 Ber e 2 42,3 71,6 46,7 53,2 48,9 36,5 45,4 40,3 Cor a 9 44,5 38,2 44,8 37,4 29,9 36,1 32,6 Gly m 6 46,1 55 48,3 39,2 46,3 38,9 Jug r 4 48,3 39,2 35,2 45,4 36,8 Pis v 2 43,5 37,5 44,6 41,9 Pis v 5 34,5 35,9 40,8 Pru du 6 35,4 31,5 Ses i 6 36,4 Ses i 7 Sin a 2 Amino acid identities (%) among Legumins (11s Globulin) Courtesy of E. Scala
  • 80. • Idealmente un risultato negativo per una classe molecolare (es 2S albumine) per una specifica fonte, può escludere sia una cross- reattività sierologica che clinica • In un pannello di risultati di test eseguiti per molecole omologhe (es 2S albumine) il risultato più alto verosimilmente indica il sensibilizzante primario, anche se ciò non è sempre comprovato Regole empiriche
  • 81. Nelle allergie alimentari da vegetali le cross- reattività sierologiche e cliniche è più probabile che avvengano fra classe di alimenti più strettamente apparentati da un punto di vista botanico (generi, famiglie)
  • 82. Come interpretare il caso dove sIgE sono positivi per proteine omologhe presenti in diverse specie (es Ara h 2, Cor a 14, Jug r 1, Ber e 1, Ses i 1) ? -Storia clinica -Challenge orale