Rat modelinde iskemi reperfuzyon hasari uzerine silastazol ve diltiazemin etkileri

1. Rat Modelinde İskemi-Reperfüzyon Hasarı
Üzerine Silastazol ve Diltiazemin Etkileri
Bekir İNANBekir İNAN, Selma SÖNMEZ ERGÜN,, Selma SÖNMEZ ERGÜN,
Asiye NURTENAsiye NURTEN,, Aslı ZENGİNAslı ZENGİN
Bilge BİLGİÇBilge BİLGİÇ,, Şule SEÇKİNŞule SEÇKİN
Canan KÜÇÜKGERGİNCanan KÜÇÜKGERGİN
Kerem ERKALPKerem ERKALP

2. Açıklama :
 Bu sunumda herhangi bir ticari şirket veya kurum
ile çıkar ilişkisi yoktur.

3. Giriş 1:
 İskelet kaslarında oluşan iskemi-reperfüzyonİskelet kaslarında oluşan iskemi-reperfüzyon
hasarı belirgin morbiditeye ve mortaliteye nedenhasarı belirgin morbiditeye ve mortaliteye neden
olabilmektedir. Bu tip hasarlar akut arteryelolabilmektedir. Bu tip hasarlar akut arteryel
emboli, bir çok kas ve damarsal travma ve hastalıkemboli, bir çok kas ve damarsal travma ve hastalık
ile ekstremitelerdeki uzun süren ameliyatlarile ekstremitelerdeki uzun süren ameliyatlar
sonucunda kaçınılmaz olarak ortayasonucunda kaçınılmaz olarak ortaya
çıkabilmektedir.çıkabilmektedir.

4. Giriş 2:
 İskemi-reperfüzyon hasarında reoksijenasyonla
birlikte, ksantin oksidaz; hipoksantini ksantine
dönüştürerek serbest radikallerde aşırı derecede
artışa neden olur. Serbest radikaller ve nötrofiller
iskemi-reperfüzyon hasarının belirgin
kaynaklarıdırlar.

5. Giriş 3:
 Serbest oksijen radikalleri ve nötrofillerden
kaynaklanan doku hasarını gidermek için çok
sayıda eksojen ajan kullanılmıştır.

6. Giriş 4:
 Bu ajanlardan biri siklik adenozin monofosfat
fosfodiesteraz tip 3 inhibitörü olan silastazoldür.
 Diğeri ise sarkolemmal Ca2+ kanal blokeri olan
diltiazem hydroklörürdür

7. Giriş 5:
 Silastazol etkisini:
1. Platelet aggregasyonunu ve endotele nötrofil
adhezyonunu engelleyerek,
2. Endojen prostaglandin I2 ile sinerjistik davranıp
düz kas hücrelerinde vazodilatasyon arttırarak,
3. Miyokardda iskemi-reperfüzyon hasarı sonrasında
enfarktüs alanını azaltarak gösterir.

8. Giriş 6:
 Diltiazem hidroklorür ise:
1.İskemi esnasında mitokondrilerin işlevlerini
koruyarak,
2.Nötrofil akümülasyonunu azaltarak,
3.Reperfüzyonda enfarktüs alanını azaltarak etki
göstermektedir.

9. Giriş 7:
 Silastazol ve Diltiazem hidroklorürün iskemi-
reperfüzyon hasarı sonrasında miyokard
iyileşmesi üzerine olumlu etkilerinin olduğu
bilinmektedir. Ama bu iki ajanın iskemi-
reperfüzyon hasarı sonrasında iskelet kasları
üzerindeki etkileri tam olarak bilinmemektedir.

10. Bu çalışmanın amacı iskemi-reperfüzyon hasarıBu çalışmanın amacı iskemi-reperfüzyon hasarı
sonrasında silastazol ile diltiazem hidroklörürünsonrasında silastazol ile diltiazem hidroklörürün
iskelet kası üzerinde etkilerinin olup olmadığınıiskelet kası üzerinde etkilerinin olup olmadığını
göstermek ve birbirleri ile kıyaslamaktır.göstermek ve birbirleri ile kıyaslamaktır.
Amaç:

11. Metot 1:
 Deneysel çalışma İstanbul Üniversitesi DeneyselDeneysel çalışma İstanbul Üniversitesi Deneysel
Tıp Araştırma Enstitüsünde (DETAE)Tıp Araştırma Enstitüsünde (DETAE)
gerçekleştirildi.gerçekleştirildi.
 Wistar albino ratlar üzerinde çalışıldı.Wistar albino ratlar üzerinde çalışıldı.

12. Metod 2:
 Deney pentotal anestezisi (50 mg/kg,Deney pentotal anestezisi (50 mg/kg,
intraperitoneal) altında gerçekleştiridialtında gerçekleştiridi.
 Femoral artere mikrovasküler klamp (Yasargil-Femoral artere mikrovasküler klamp (Yasargil-
Phynox anevrizma klempi)Phynox anevrizma klempi) yerleştirilerek 2 saatlikyerleştirilerek 2 saatlik
iskemi oluşturuldu.iskemi oluşturuldu.
 2 saatlik iskemiyi izleyerek 1, 2 ve 4 saatlik2 saatlik iskemiyi izleyerek 1, 2 ve 4 saatlik
reperfüzyon sağlandı.reperfüzyon sağlandı.

13. Metod 3:
 Cerrahi öncesinde, mikrovasküler klampCerrahi öncesinde, mikrovasküler klamp
alındıktan sonra ve alt gruplara göre değişenalındıktan sonra ve alt gruplara göre değişen
reperfüzyon sürelerinin bitiminde olmak üzere 3reperfüzyon sürelerinin bitiminde olmak üzere 3
kez kuyruk kanı alındı.kez kuyruk kanı alındı.

14. Metod 4:
Reperfüzyon sürelerinin bitiminde bütün ratlar sakrifiye edildi
ve doku örnekleri alındı.
Histopatolojik değerlendirme için iskemik ve iskemik olmayan
bacakların tibialis anterior kasları kullanıldı.
Doku malondialdehid (MDA) ve myeloperoksidaz (MPO)
seviyelerinin tespiti için grasilis kasları kullanıldı.
Alınan kuyruk kanlarında serum malondialdehid (MDA) ve
serum nitrik oksit (NO) düzeylerine bakıldı.

15. Gruplar:
 Yetmiş iki adet Wistar-Albino rat rastgele olmakYetmiş iki adet Wistar-Albino rat rastgele olmak
üzere 4 ana gruba ayrıldı.üzere 4 ana gruba ayrıldı.

16. Gruplar: (n:72)
 Grup I (kontrol grubu): Serum fizyolojikGrup I (kontrol grubu): Serum fizyolojik
uygulandı,uygulandı,
 Grup II: Diltiazem hidroklorür (DH) uygulandı,Grup II: Diltiazem hidroklorür (DH) uygulandı,
 Grup III Silastazol ve 30% dimetil sülfoksitGrup III Silastazol ve 30% dimetil sülfoksit
(CLZ+30%DMSO) uygulandı,(CLZ+30%DMSO) uygulandı,
 Grup IV 30% Dimetil sülfoksit (30%DMSO)Grup IV 30% Dimetil sülfoksit (30%DMSO)
uygulandı.uygulandı.

17. Alt gruplar:
 Bu 4 ana grup, reperfüzyon süresine göre(1, 2 ve 4Bu 4 ana grup, reperfüzyon süresine göre(1, 2 ve 4
saat) 3 alt gruba ayrıldı.saat) 3 alt gruba ayrıldı.

18. Değerlendirilen Parametreler :Değerlendirilen Parametreler :
 Malondialdehid (lipid peroksidasyonu belirteci)Malondialdehid (lipid peroksidasyonu belirteci)
ve nitrik oksit (endojen vazodilatatör) serumve nitrik oksit (endojen vazodilatatör) serum
seviyeleri,seviyeleri,
 Malondialdehid ve miyeloperoksidazın (nötrofilMalondialdehid ve miyeloperoksidazın (nötrofil
sekestrasyonu belirteci) doku seviyeleri,sekestrasyonu belirteci) doku seviyeleri,
 Histolojik inceleme olarak sınıflandırıldı.Histolojik inceleme olarak sınıflandırıldı.

19. Serum MDA ve NO Seviyelerinin
Değerlendirilmesi:
 Kan numuneleri oda sıcaklığında 800 devirde 15 dakikaKan numuneleri oda sıcaklığında 800 devirde 15 dakika
santrifüj edildi ve -80°C de analizler yapılıncaya kadarsantrifüj edildi ve -80°C de analizler yapılıncaya kadar
muhafaza edildi.muhafaza edildi.
 Serum MDA konsantrasyonu, oksidatif stresin dolaylıSerum MDA konsantrasyonu, oksidatif stresin dolaylı
belirteci olan thiobarbitürik asid reaktif ürünleri (TBARS)belirteci olan thiobarbitürik asid reaktif ürünleri (TBARS)
ile spektrofotometrik olarak ölçüldü.ile spektrofotometrik olarak ölçüldü.
 NO oluşumunun göstergesi olan total serum nitrit ve nitratNO oluşumunun göstergesi olan total serum nitrit ve nitrat
seviyeleri kolorimetrik kit kullanılarak (EMSNOTOT)seviyeleri kolorimetrik kit kullanılarak (EMSNOTOT)
değerlendirildi.değerlendirildi.

20. Doku MDA ve MPO Seviyelerinin
değerlendirilmesi:
 SoğukSoğuk Phosphate Buffered SalinePhosphate Buffered Saline (PBS)(PBS) ile örneklerile örnekler
durulandı, kurulandı akabinde sıvı nitrojen ile hemendurulandı, kurulandı akabinde sıvı nitrojen ile hemen
donduruldu. Biyokimyasal analize kadar –80°C dedonduruldu. Biyokimyasal analize kadar –80°C de
saklandı.saklandı.
 MDA içeriği thiobarbituric acid ile kalorimetrik reaksiyonMDA içeriği thiobarbituric acid ile kalorimetrik reaksiyon
kullanılarak (Buege ve Aust metodu) değerlendirildi.kullanılarak (Buege ve Aust metodu) değerlendirildi.
 MPO aktivitesi iseMPO aktivitesi ise oo-dianisidine metoduyla-dianisidine metoduyla
değerlendirildi.değerlendirildi.

21. Histolojik değerlendirme:
 44µµm kalınlığında hazırlanan km kalınlığında hazırlanan kesitleresitler Hematoksilen-EozinHematoksilen-Eozin
ile boyanıp, patolog tarafından körlemesineile boyanıp, patolog tarafından körlemesine
değerlendirildi.değerlendirildi. Yüksek büyütmede (x400) alan başınaYüksek büyütmede (x400) alan başına
düşen nötrofiller sayılarak 0’dan 3’e kadar olan skala iledüşen nötrofiller sayılarak 0’dan 3’e kadar olan skala ile
skorlandı.skorlandı.
(0,nötrofil infiltrasyonu yok; 1, <5 nötrofil; 2, 5-10 nötrofil;
3, >10 nötrofil).
 Ayrıca kas fibrillerinin çizgilenmesi ve çapı, çekirdekAyrıca kas fibrillerinin çizgilenmesi ve çapı, çekirdek
santralizasyonu, segmental nekroz ve ödem histopatolojiksantralizasyonu, segmental nekroz ve ödem histopatolojik
olarak değerlendirildi.olarak değerlendirildi.

22. İstatistikte kullanılan metodlar:
 Kruskal-Wallis,Kruskal-Wallis,
 Mann-Whitney U,Mann-Whitney U,

23. SONUÇ

24. Diğer gruplarla kıyaslandığında silastazol ile tedavi
edilen grupta (Grup III) doku malondialdehid
seviyelerinde anlamlı derecede düşme olduğu tespit
edildi.
Tissue MDA
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
non-ischemic p:0,551 ischemic p: 0,000
nmol/mg
control
diltiazem
cilastazol
DMSO

25. Kontrol grubu dışındaki tüm deney gruplarında
doku miyeloperoksidaz seviyelerinde anlamlı
düşme saptandı.
Tissue MPO
0
0,005
0,01
0,015
0,02
0,025
0,03
0,035
non-ischemic p:0,381 ischemic p: 0,000
U/mgprotein
control
diltiazem
cilastazol
DMSO

26. Diğer gruplarla kıyaslandığında silastazol ile
tedavi edilen III. grupta serum malondialdehid
seviyelerinde anlamlı bir düşüş olduğu saptandı.
Serum MDA
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
p:0,224 p:0,010 p:0,000
1 2 3
nmol/ml
control
diltiazem
cilastazol
DMSO

27. Silastazol ile tedavi edilen III. grupta, diğer gruplara
kıyasla, serum nitrik oksit aktivitesi istatiksel olarak
anlamlı derecede yüksekti.
Serum NO
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
p:0,179 p:0,000 p:0,022
1 2 3
nmol/l
control
diltiazem
cilastazol
DMSO

28.  İskemik arka bacakların histopatolojikİskemik arka bacakların histopatolojik
parametreleri arasında anlamlı fark yoktu.parametreleri arasında anlamlı fark yoktu.
(p=0,995)(p=0,995)
 İskemik olan ve olmayan arka bacaklarınİskemik olan ve olmayan arka bacakların
histopatolojik parametreleri arasında anlamlı farkhistopatolojik parametreleri arasında anlamlı fark
mevcuttu. (p=0,033)mevcuttu. (p=0,033)

29. 1.Diltiazem hidroklorürün iskemi-reperfüzyon1.Diltiazem hidroklorürün iskemi-reperfüzyon
hasarını gidermede yararlı etkisinin olduğuhasarını gidermede yararlı etkisinin olduğu
görülmüştür.görülmüştür.
2.2. Silastazolün iskemi-reperfüzyon hasarınıSilastazolün iskemi-reperfüzyon hasarını
gidermedeki yararlı etkisi diltiazemgidermedeki yararlı etkisi diltiazem
hidroklörürden anlamlı derecede dahahidroklörürden anlamlı derecede daha
belirgindir.belirgindir.

30. Teşekkür ederim