4. Ιστορία του DNA
Στο αίμα και ζωντανά
λεία βακτήρια!!!
Τα αδρά βακτήρια
μετασχηματίστηκαν
σε λεία. Πώς έγινε
αυτό;;;
5. 1944: Πείραμα Avery – Mc Leod – Mc Carthy
Πείραμα Griffith in vitro
Διαχωρισμός συστατικών νεκρών λείων βακτηρίων
Υδατάνθρακες
Πρωτεΐνες
Λιπίδια
DNA
RNA
Ιστορία του DNA
Προκαλούσε ΜΕΤΑΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟ
6. Άλλα βιοχημικά δεδομένα υπέρ του DNA:
1. Ποσότητα DNA σταθερή – Δε μεταβάλλεται λόγω
περιβάλλοντος – Σε όλα τα (σωματικά) κύτταρα
2. Οι γαμέτες των ανώτερων οργανισμών μισή
ποσότητα
3. Ποσότητα DNA κατά κανόνα ανάλογη με την
πολυπλοκότητα του οργανισμού
Ιστορία του DNA
10. 1952: Πείραμα Hershey & Chase
ΟΡΙΣΤΙΚΗ επιβεβαίωση DNA = γενετικό υλικό
Μελέτη κύκλου ζωής βακτηριοφάγου T2
Ιχνηθέτηση με:
Ραδιενεργό 35S ενσωματώνεται ΜΟΝΟ στις πρωτεΐνες
Ραδιενεργό 32P ενσωματώνεται ΜΟΝΟ στο DNA
Ιστορία του DNA
11. Μόνο το DNA των φάγων εισέρχεται στα βακτήρια
και δίνει εντολές για τον πολλαπλασιασμό του ιού
Ιστορία του DNA
12. In vivo: διαδικασία που πραγματοποιείται σε
ζωντανό οργανισμό (vivo = ζωντανός)
In vitro: διαδικασία που πραγματοποιείται σε
δοκιμαστικό σωλήνα (vitro = γυαλί)
Ιχνηθέτηση: σήμανση μορίων με ραδιενεργά
ισότοπα, φθορίζουσες ουσίες, κτλ
Αποσαφηνίσεις όρων:
16. Σκελετός αλυσίδας:
Πρώτο νουκλεοτίδιο ελεύθερη τη φωσφορική
ομάδα του 5ου άνθρακα
Τελευταίο νουκλεοτίδιο ελεύθερο το υδροξύλιο του
3ου άνθρακα
φ. ομάδα – πεντόζη – φ. ομάδα – πεντόζη - … - φ. ομάδα - πεντόζη
Πολυνουκλεοτιδική αλυσίδα
18. Αρχικά όχι δεδομένα για δομή DNA στο χώρο
Ωστόσο, δεδομένα αναλύσεων:
Σταθερά [A = T] & [G = C] σε κάθε μόριο DNA
Αναλογία [(A+T)/(G+C)] = διαφέρει στα είδη
Ανακάλυψη διπλής έλικας
19. Έρευνες (ακτίνες Χ) Wilkins & Franklin και Watson &
Crick
ΜΟΝΤΕΛΟ ΔΙΠΛΗΣ ΕΛΙΚΑΣ DNA (Watson & Crick, 1953)
Ανακάλυψη διπλής έλικας
21. 2 πολυνουκλεοτιδικές αλυσίδες δεξιόστροφη διπλή έλικα
Εξωτερικά: σταθερός σκελετός (υδρόφιλος) [φωσφορική
ομάδα – δεοξυριβόζη, με φωσφοδιεστερικό δεσμό]
Εσωτερικά: αζωτούχες βάσεις (υδρόφοβες)
Κανόνας συμπληρωματικότητας: δεσμού υδρογόνου μεταξύ
των αζωτούχων βάσεων των δύο αλυσίδων, η μία απέναντι
από την άλλη [A-T] (x2), [G-C] (x3)
2 αλυσίδες συμπληρωματικές = η αλληλουχία της μίας
καθορίζει την αλληλουχία της άλλης [διατήρηση & μεταβίβαση
γενετικής πληροφορίας – η μία για την άλλη καλούπι]
Αντιπαράλληλες αλυσίδες: 3’ άκρο της μίας απέναντι από το 5’
άκρο της άλλης
Μοντέλο διπλής έλικας DNA
25. Μήκος νουκλεϊκού οξέος = αριθμός (ζευγών)
βάσεων
π.χ. RNA με 1000 βάσεις, DNA με 4000 βάσεις – με 2000
ζεύγη βάσεων, ανθρώπινο γονιδίωμα με 3x109 ζ.β.
Αλληλουχία νουκλεϊκού οξέος = αλληλουχία βάσεων
π.χ. η αλληλουχία του RNA …AUGCAAUGGACCU…, η
αλληλουχία του DNA …ATGCAATGGACCT…
…TACGTTACCTGGT…
Γενετικό υλικό
26. Κύριο DNA (κυκλικό δίκλωνο DNA)
Μήκος ~1mm
Αναδίπλωση με πρωτεΐνες 1μm
x1 (απλοειδείς οργανισμοί)
Πλασμίδια (μικρά κυκλικά δίκλωνα
DNA – 1-2% ολικού)
1 ή περισσότερα (ή κανένα)
Ανεξάρτητη αντιγραφή
Γονίδια
1. ανθεκτικότητας στα αντιβιοτικά
2. μεταφοράς γενετικού υλικού
a) μεταξύ τους
b) με το κύριο DNA
c) σε άλλα βακτήρια
(ΜΕΤΑΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟΣ)
Γενετικό υλικό προκαρυωτικών
* Χρήσιμα εργαλεία Γενετικής
Μηχανικής
27. Πολύ μεγαλύτερο από των προκαρυωτικών
Πολλά γραμμικά μόρια (χαρ/κό για κάθε είδος)
DNA πακετάρεται/συμπυκνώνεται με πρωτεΐνες
ΙΝΙΔΙΑ ΧΡΩΜΑΤΙΝΗΣ
Κομπολόι με χάντρες – νουκλεοσώματα (=βασική
μονάδα οργάνωσης της χρωματίνης)
Νουκλεόσωμα: 146 ζ.β. DNA + 8 πρωτεΐνες (ιστόνες)
Επιπλέον συμπύκνωση επιπλέον πρωτεΐνες
Γενετικό υλικό ευκαρυωτικών
33. Γονιδίωμα απλοειδούς κυττάρου ανθρώπου: ~ 3x109
ζ.β. σε 23 χρωμοσώματα
Μελέτη ΜΟΝΟ σε κύτταρα που διαιρούνται
φυσιολογικά
με επαγωγή σε κυτταροκαλλιέργειες
ΓΙΑΤΙ;
Παρατήρηση ανθρώπινων
χρωμοσωμάτων
34. 1. ΚΥΤΤΑΡΟΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑ ουσίες με μιτογόνο δράση
2. ΣΥΓΧΡΟΝΙΣΜΕΝΗ ΚΥΤΤΑΡΙΚΗΔΙΑΙΡΕΣΗ ουσίες που σταματούν τη διαίρεση
3. ΚΥΤΤΑΡΑ ΣΤΗ ΜΕΤΑΦΑΣΗ υποτονικό διάλυμα (σπάει η μεμβράνη)
4. ΑΠΛΩΜΕΝΑ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑΤΑ ΣΕ ΑΝΤΙΚΕΙΜΕΝΟΦΟΡΟ χρωστικές
5. ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΗ ΣΤΟ ΟΠΤΙΚΟ ΜΙΚΡΟΣΚΟΠΙΟ
Καρυότυπος
35. Μεταφασικά χρωμοσώματα διαφέρουν ως προς:
a. μέγεθος
b. θέση κεντρομεριδίου (διαφορετικοί μικροί & μεγάλοι
βραχίονες)
Καρυότυπος
36. Η απεικόνιση των χρωμοσωμάτων ανά
ζεύγη, κατά ελαττούμενο μέγεθος
Αριθμός & μορφολογία χρωμοσωμάτων
χαρακτηριστική για κάθε είδος
Για κάθε ζεύγος χρωμοσωμάτων το ένα
πατρικής & το άλλο μητρικής προέλευσης
Καρυότυπος
37. Φυσιολογικά 23 ζεύγη χρωμοσωμάτων
22 μορφολογικά όμοια σε ♂ & ♀: αυτοσωμικά χρωμοσώματα
1 που διαφέρει στα 2 φύλα: φυλετικά χρωμοσώματα
♀: ΧΧ
♂: ΧΥ (παρουσία Υ καθορίζει το ♂ σε πολλούς οργανισμούς,
όπως ο άνθρωπος)
Ανθρώπινος καρυότυπος
38. Ημιαυτόνομα οργανίδια
Μιτοχόνδρια
Πληροφορίες για: ΟΞΕΙΔΩΤΙΚΗ
ΦΩΣΦΟΡΥΛΙΩΣΗ
Μικρός αριθμός πρωτεϊνών
Οι περισσότερες πρωτεΐνες από
πυρηνικό DNA
Κυκλικό DNA (εξαίρεση
μιτοχόνδρια κατώτερων
πρωτοζώων γραμμικό)
2 – 10 αντίγραφα / μιτοχόνδριο
Μητρικής προέλευσης (ζυγωτό
μόνο από ωάριο)
Χλωροπλάστες
Πληροφορίες για:
ΦΩΤΟΣΥΝΘΕΣΗ
Μικρός αριθμός πρωτεϊνών
Οι περισσότερες πρωτεΐνες
από πυρηνικό DNA
Κυκλικό DNA
Μεγαλύτερο μέγεθος από
μιτοχονδριακό
39. Ιοί
DNA ιοί
Μονόκλωνο – δίκλωνο
Γραμμικό - κυκλικό
RNA ιοί
Μονόκλωνο – δίκλωνο
Γραμμικό – κυκλικό (σπάνια)
ΠΡΟΣΟΧΗ!!! Κάθε ένας ιός μπορεί να έχει μόνο ένα είδος νουκλεϊκού οξέος