Laporan ini membahas analisis spektroskopi menggunakan spektrofotometer UV-Vis untuk memahami prinsip kerjanya dan mengkalibrasinya, serta menentukan panjang gelombang maksimum (λmaks) dari senyawa seperti benzen dan aseton. Hasil percobaan menunjukkan panjang gelombang maksimum benzen adalah 206 nm dan aseton 266 nm, yang konsisten dengan literatur. Metode spektrofotometri UV-Vis menawarkan analisis kimia yang sederhana dan biaya rendah untuk pengukuran konsentrasi senyawa dalam larutan.

1. LAPORAN PRAKTIKUM
ANALISIS SPEKTROSKOPI
PERCOBAAN I
PENGENALAN INSTRUMEN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS,
KALIBRASI DAN PENGUKURAN PANJANG GELOMBANG
MAKSIMUM
NAMA : MILA INDRIANI
NIM : J0B113214
KELOMPOK : I (SATU)
ASISTEN : RIRI AL KAHFI
PROGRAM STUDI DIII ANALIS FARMASI DAN MAKANAN
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURAT
BANJARBARU
2014

2. LEMBAR PENILAIAN
ANALISIS SPEKTROSKOPI
PERCOBAAN I
PENGENALAN INSTRUMEN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS,
KALIBRASI DAN PENGUKURAN PANJANG GELOMBANG
MAKSIMUM
Nama : MILA INDRIANI
NIM : J0B113214
Asisten : RIRI AL KAHFI
Tanggal mengumpul
: 23 Oktober 2014
laporan
PROGRAM STUDI DIII ANALIS FARMASI DAN MAKANAN
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURAT
BANJARBARU
2014
Tanggal laporan
dikembalalikan
:
Nilai Sementara : Nilai Akhir :

3. PERCOBAAN I
PENGENALAN INSTRUMEN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS,
KALIBRASI DAN PENGUKURAN PANJANG GELOMBANG MAKSIMUM
I. TUJUAN PERCOBAAN
Tujuan percobaan praktikum ini adalah mahasiswa dapat
memahami prinsip kerja alat spektrofotometer UV-Visible, mengetahui
cara mengkalibrasi alat spektrofotometer UV-Visibel dan mengetahui cara
menentukan nilai λmaks panjang gelombang maksimum sebagai parameter
penting dalam analisa spektrofotometri UV-Vis.
II. TINJAUAN PUSTAKA
Dalam analisis spektrofotometri digunakan suatu sember cahaya
radiasi yang menjorok ke dalam daerah ultaviolet spektum itu. Dari
spektrum ini dipilih panjang-panjang gelombang tertentu dengan lebar pita
kurang dari 1 nm. Proses ini memerlukan penggunaan instrumen yang
lebih rumit dan karenanya lebih mahal. Instrumen yang digunakan untuk
maksud ini adalah spektrofotometer, dan seperti tesirat dalam nama ini,
instrumen ini sebenarnya terdiri dari dua instrumen dalam satu kotak
sebuah spektrometer dan sebuah fotometer (Bassett, 1994).
Spektrofotometer adalah alat untuk mengukur transmitans atau
absorbans suatu contoh sebagai funsi panjang gelombang, pengukuran
terhadap suatu deretan contoh pada suatu panjang gelombang tunggal
mungkin juga dapat dilakukan (Day & Underwood, 1986). Komponen-komponen
dari spektrofotometer meliputi :
a. Sumber tenaga radiasi yang stabil
b. Sistem yang terdiri atas lensa, lensa, cermin, celah-celah, dan lain-lain.
c. Monokromator untuk mengubah radiasi menjadi komponen-komponen
panjang gelombang tunggal
d. Tempat cuplikan yang transparan
e. Detektor radiasi yang dihubungkan dengan sistem meter atau pencatat

4. SUMBER MONOKRO
MATOR
SEL METER
PENYERAP
DETEKTOR
Gambar 1.1 Diagram spektrofotometer
(Sastrohamidjojo, 1994).
Suatu spektrofotometer standar terdiri atas spektrofotometer
untuk menghasilkan cahaya dengan panjang gelombang terseleksi yaitu
bersifat monokromatik serta suatu fotometer yaitu suatu piranti untuk
mengukur intensitas berkas monokromatik, digabungkan bersama
dinamakan sebagai spektrofotometer (Khopkar, 1990). Semua tipe
spektroskopi tergantung pada absorpsi ataupun emisi radiasi
elektromagnetik oleh sampel yang diselidiki. Dua parameter yang diukur
oleh eksperimen yaitu :
a. Energi radiasi elektromagnetik yang diserap atau diemisikan sampel
b. Intensitas absopsi atau emisi sampel (Yahya, 2001).
Spektrofotometer UV-Vis adalah pengukuran serapan cahaya
didaerah ultraviolet (200 – 350 nm) dan sinar tampak (350 – 800 nm) oleh
suatu senyawa. Serapan cahaya uv atau cahaya campak mengakibatkan
transisis elektronik, yaitu promosi elektron elektron dari orbital keadaan
dasar yang berenergi rendah ke orbital keadaan tereksitasi berenergi lebih
tinggi. Panjang gelombang cahaya uv atau cahaya tampak tergantung pada
mudahnya promosi elektron.molekul molekul yang memerlukan lebih
banyak energi untuk promosi elektron, akan menyerap pada panjang
gelombang yang lebih pendek. Molekul yang memerlukan energi lebih
sedikit akan menyerap pada panjang gelombang yang lebih panjang.
Senyawa yang menyerap cahaya dalam daerah tampak (senyawa
berwarna) mempunyai elektron yang mudah dipromosikan dari pada
senyawa yang menyerap pada panjang gelombang lebih pendek (Herliani,
2008).
Absorpsi adalah suatu berkas radiasi elektromagnetik, bila
dilewatkan melalui sampel kimia, sebagian akan terabsorbsi. Energi
elektromagnetik ditransfer ke atom atau molekul dalam sampel, berarti

5. partikel dipromosikan dari tingkat energi yang lebih rendah ke tingkat
energi yang lebih tinggi yaitu tingkat tereksitasi. Pada temperatur kamar,
biasanya berada pada tingkat dasar. Absorbsi meliputi transisi dari tingkat
dasar ke tingkat yang lebih tinggi. Penelaahan frekuensi spesies yang
terabsorbsi merupakan cara untuk mengidentifikasi dan analisis sampel,
yaitu spektra absorbs yang berupa pengaluran absorbansi terhadap panjang
gelombang. Spektra ini dapat disebabkan absorbsi atom atau absobsi
molekul. Absorbsi tergantung pada keadaan fisis, lingkungan spesies
pengabsobsi dan faktor-faktor lainnya (Khopkar, 1990).
Kedua hukum yang terpisah yang mengatur absorpsi biasanya
dikenal sebagai hukum Lambert dan hukum Beer. Dalam bentuk gabungan
hukum ini dikenal sebagai hukum Lambert-Beer. Hukum Lambert
menyatakan bahwa bila cahaya monokromatik melewati medium tembus
cahaya, laju berkurangnya intensitas oleh bertambahnya ketebalan,
berbanding lurus dengan intensitas cahaya. Ini setara dengan menyatakan
bahwa intensitas cahaya yang dipendarkan berkurang secara eksponensial
dengan bertambahnya ketebalan medium yang menyerap. Hukum Beer
mengkaji efek konsentrasi penyusun yang berwarna dalam larutan,
terhadap transmisi maupun absopsi cahaya. Dijumpainya hubungan yang
sama antara transmisi dan konsentrasi dan ketebalan lapisan, yakni
intensitas berkas cahaya monokromatik berkurang secara eksponensial
dengan bertambahnya konsentrasi zat penyerap secara linier (Bassett,
1994).
Banyak zat organik juga menunjukkan absorpsi khusus, misalnya
permanganat, ion nitrat, ion kromat, dan ruthenium, molekul iodium dan
ozon. Banyak pereaksi akan bereaksi dengan zat yang tidak mengabsorpsi
memberikan hasil yang akan mengabsorpsi sinar ultra-violet atau sinar
tampak dengan kuat. Pereaksi organik yang membentuk kompleks
berwarna yang stabil adalah o-phenanthrolin untuk besi, dimetil glioksim
untuk nikel, dietil thio karbamat untuk tembaga, dan sebagainya (Etty,
1985).

6. Suatu grafik yang menghubungkan antara banyaknya sinar yang
diserap dengan frekuensi (panjang gelombang) sinar merupakan spektrum
absorpsi. Transisi yang dibolehkan untuk suatu molekul dengan struktur
kimia yang berbeda adalah tidak sama sehingga spektra absorpsinya juga
berbeda. Dengan demikian, spektra dapat digunakan sebagai bahan
informasi yang bermanfaat untuk analisis kualitatif. Banyaknya sinar yang
diabsorpsi pada panjang gelombang tertentu sebanding dengan banyaknya
molekul yang menyerap radiasi, sehingga spektra absorpsi juga dapat
digunakan untuk analisis kuantitatif (Gandjar dan Rohman, 2007).
Analisis kuantitatif suatu obat dalam cairan biologis membutuhkan
metode dengan selektifitas dan sensitivitas yang tinggi serta memiliki
pengganggu sesedikit mungkin. Salah satu metode yang dapat digunakan
untuk analisis ini adalah metode spektrofotometri UV-Vis. Metode ini
memiliki keuntungan utama yaitu memberikan cara sederhana untuk
menetapkan jumlah zat yang sangat kecil dan dengan biaya yang tidak
mahal untuk suatu analisis kimia. Metode Spektrofotometri UV-Vis
dipakai untuk analisis terhadap molekul-molekul yang strukturnya ada
ikatan rangkap terkonjugasi atau mengandung kromofor dan auksokrom
(Nur,dkk, 2010).
III. ALAT DAN BAHAN
A. Alat
Alat-alat yang digunakan pada percobaan ini adalah kuvet
quartz dan spektrofotometer UV-Visible Lambda 25 Perkin Elmer.
B. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan pada percobaan ini adalah
akuades, aseton, benzen/toluen.

7. IV. PROSEDUR KERJA
A. Kalibrasi Alat Spektrofotometer UV-Vis.
1. Dinyalakan alat spektrofotometer UV-Vis selama ±15 menit
untuk menstabilkan sumber cahaya dan fotodetektor.
2. Disiapkan laritan blangko (aquadest), dimasukkannya ke dalam
kuvet yang telah dibersihkan dengan menggunakan tissue.
3. Dipilih menu aplikasi wavelength scan. Dilakukan kalibrasi
dengan menggunakan larutan blangko (min. 2 kali dengan
menekan tombol autozerro).
B. Menentukan panjang gelombang yang memiliki absorbansi
maksimum (λmaks)
1. Ditentukan range panjang gelombang yang akan digunakan
(untuk sampel yang tidak berwarna, digunakan range panjang
gelombang sinar UV : 180 – 400 nm).
2. Dimasukkan sampel aseton ke dalam kuvet yang kering dan
bersih.
3. Dilakukan scanning panjang gelombang maksimum untuk
sampai untuk sampel aseton hingga dihasilkan nilai λmaks.
4. Dibuatkan grafik hubungan antara nilai absorbans sebagai fungsi
panjang gelombang.
5. Ditentukannya λmaks untuk sampel lain (benzen dan metanol)
dengan cara yang sama seperti sampel aseton.
6. Dibuatkan tabel yang menjelaskan spesifitas gugus kromofor
dengan panjang gelombang yang dihasilkan.

8. V. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil
Hasil yang diperoleh dari praktikum yang telah dilaksanakan,
yaitu sebagai berikut:
No. Nama
Senyawa
Gugus
Kromofor
Panjang gelombang
Maksimal (nm)
1. Benzen - 206 nm
2. Aseton - 266 nm
B. Pembahasan
Percobaan ini bertujuan untuk memahami prinsip kerja alat
spektrofotometer UV-Visible, mengetahui cara mengkalibrasi alat
spektrofotometer UV-Visible, dan mengetahui cara menentukan nilai
λmaks (panjang gelombang maksimum) sebagai parameter penting
dalam analisa spektrofotometer UV-Vis.
Sinar yang melewati suatu larutan akan terserap oleh
senyawa-senyawa dalam larutan tersebut. Intensitas sinar yang diserap
tergantung pada jenis senyawa yang ada, konsentrasi dan tebal atau
panjang larutan tersebut. Makin tinggi konsentrasi suatu senyawa
dalam larutan, makin banyak sinar yang diserap. Berbeda dengan
spektrofotometri visible, pada spektrofotometri UV berdasarkan
interaksi sampel dengan sinar UV. Sinar UV memiliki panjang
gelombang 190-380 nm. Sebagai sumber sinar dapat digunakan lampu
deuterium. Deuterium disebut juga heavy hidrogen. Dia merupakan
isotop hidrogen yang stabil yang terdapat berlimpah dilaut dan
daratan. Inti atom deuterium mempunyai satu proton dan satu neutron,
sementara hidrogen hanya memiliki satu proton dan tidak memiliki
neutrron. Nama deuterium diambil dari bahasa Yunani, deuteras yang
berarti dua, mengacu pada intinya yang memiliki 2 partikel. Karena
sinar UV tidak dapat dideteksi dengan mata kita maka senyawa yang
dapat menyerap sinar ini terkadang merupakan senyawa yang tidak

9. memiliki warna, bening dan transparan. Oleh karena itu, sampel tidak
berwarna tidak perlu dibuat berwarna dengan penambahan reagen
tertentu. Bahkan sampel dapat langsung dianalisa meskipun tanpa
preparasi. Namun perlu diingat, sampel keruh tetap harus dibuat jernih
dengan filtrasi atau sentifungi (Petruci, 1987).
Prinsip kerja spektrofotometer merupakan alat analisis yang
dapat digunakan untuk keperluan kualitatif dan kuantitatif dengan cara
melewatkan sinar (dalam spektrofotometer) melalui larutan jernih
serta untuk mengukur tranmitans atau absorban suatu sampel sebagai
fungsi panjang gelombang. Instrumen ini bekerja dengan
menempatkan larutan pembanding, misalnya blanko dalam sel
pertama sedangkan larutan yang dianalisis pada sel yang kedua.
Kemudian pilih fotosel yang cocok 200 nm-400 nm (400 nm-110 nm)
agar daerah λ yang diperlukan dapat terliputi. Dengan ruang fotosel
dalam keadaan tertutup “nol” galvanometer didapat dengan memutar
tombol sensitivitas. Dengan menggunakan tombol transmitasi,
kemudian atur besarnya pada 100%. Lewatkan berkas cahaya pada
larutan sampel yang akan dianalisis. Skala absorbansi menunjukkan
absorbansi larutan sampel.
Spektrofotometri UV-Vis dapat dilakukan penentuan
terhadap sampel yang berupa larutan, gas, atau uap. Untuk sampel
yang berupa larutan perlu diperhatikan beberapa persyaratan pelarut
digerakan antara lain :
1. Pelarut yang digunakan tidak menggunakan sistem ikatan rangkap
terkonjugasi pada struktur molekulnya dan tidak berwarna.
2. Tidak terjasi interaksi dengan senyawa di analisa.
3. Kemurniaannya harus tinggi atau derajat untuk analisis.
Spektrum absorpsi yang diperoleh dari hasil analisis dapat
memberikan informasi panjang gelombang dengan absorban
maksimum dari senyawa atau unsur. Panjang gelombang dan absorban
yang dihasilkan selama proses analisis digunakan untuk membuat
kurva standar. Konsentrasi suatu senyawa atau unsur dapat dihitung

10. dari kurva standar yang diukur pada panjang gelombang dengan
absorban maksimum. Dari kurva standar kalibrasi, diperoleh
persamaan garis:
Y = ax + b
Dimana Y merupakan serapan dan x adalah konsentrasi unsur
atau senyawa. Dengan persamaan garis tersebut dapat ditentukan
konsentrasi sampel. Pada spektrofotometer UV-VIS, warna yang
diserap oleh suatu senyawa atau unsur adalah warna komplementer
dari warna yang teramati. Hal tersebut dapat diketahui dari larutan
berwarna yang memiliki serapan maksimum pada warna
komplementernya. Namun apabila larutan berwarna dilewati radiasi
atau cahaya putih, maka radiasi tersebut pada panjang gelombang
tertentu akan diserap secara selektif sedangkan radiasi yang tidak
diserap akan diteruskan.
Keaditifan absorbans larutan ini dilakukan dengan mengukur
absorbans aseton dan benzen dengan panjang gelombang 200 nm
dengan alat spektrofotometer UV-Vis. Sebelum melakukan
pengukaran absorbans spektrofotometer harus disetel sedemikian rupa
sehingga transmisi larutan blanko menjadi 100% atau absorbansinya =
0% dengan mengatur celah-celah keluar monokromator dan kepekaan
dari amplifator. Larutan yang diukur absorbansinya dimasukkan ke
dalam kuvet dan larutan blankonya dimasukkan ke dalam kuvet lain.
Ukuran larutan aseton dan benzen larutan blanko yang digunakan
adalah akuades. Larutan blanko yang digunakan disesuaikan dengan
pelarut. Setelah didapatkan nilai absorbans dengan panjang
gelombang tertentu, maka dibuat grafik tersebut, dapat ditentukan
nilai panjang gelombang maksimum dimana absorbansi bernilai
maksimum.
Bahan yang digunakan yaitu benzen, aseton dan akuades.
Prosedur pertama yaitu kalibrasi alat spektrofotometer UV-Vis.
Selanjutnya dilakukan pengenceran pada larutan aseton dan benzen

11. agar tidak terlalu pekat, serta mudah untuk diadsorpsi pada panjang
gelombang maksimum.Dari hasil percobaan, pengukuran spektroskopi
diperoleh dua panjang gelombang maksimal untuk benzena pada
panjang gelombang sekitar 206 nm dengan gugus kromofor sebesar .
Panjang gelombang yang didapatkan tersebut sesuai dengan panjang
gelombang pada literatur (Suwandri, 2006) yang menunjukkan
panjang gelombang toluen/benzen adalah 226 nm-274 nm. Pada
aseton didapatkan panjang gelombang sekitar 266. karena alat yang
digunakan tidak bisa membaca panjang gelombang dibawah 200 nm
dan diatas 8000 nm. Maka harus dilakukan pengencenceran 10 ml/
100ml sekitar (20 tetes), agar dapat terbaca oleh kerja alat
spektrofotometri uv-visible.

12. VI. KESIMPULAN
Dari pembahasan diatas maka dapat disimpulkan bahwa:
1. Prinsip kerja spektrofotometer berdasarkan hukum Lambert Beer, bila
cahaya monokromatik (Io) melalui suatu media maka sebagian cahaya
tersebut diserap (Ia) sebagian dipantulkan (Ir) dan sebagian lagi
dipancarkan (It).
2. Bahan yang digunakan yaitu benzen, aseton dan akuades.
3. Terdapat 1 panjang gelombang maksimum pada benzen yaitu 206 nm
dengan gugus kromofor sebesar .
4. Pada aseton panjang gelombang maksimum yang di peroleh sekitar
266 nm dangan gugus kromofor sebesar .

13. DAFTAR PUSTAKA
Basset, J. 1994. Buku Ajar Vogel Kimia Analisis Kuantitatif Anorganik. Penerbit
Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Day, R.A. Jr. & A.L. Underwood. 1986. Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Keenam.
Erlangga. Jakarta.
Etty, T. 1985. Spektrofotometer Ultra-Violet dan Sinar Tampak Serta Aplikasinya
Dalam Oseanologi. Oseana. Vol 10. No. 1 : 39-47.
Gandjar, I.G. & Rohman A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar.
Yogyakarta.
Herliani, An an. 2008. Spektrofotometri. Pengendalian Mutu Agroindustri-
Program D4-PJJ
Khopkar, S.M. 1990. Konsep Dasar Kimia Analitik. UI Press. Jakarta.
Nur, I.D.R., P.I. Utami & D. Setiawan. 2010. Analisis Kuantitatif Tablet
Levofloksasin Merk Dan Generik Dalam Plasma Manusia Secara In Vitro
Dengan Metode Spektrofotometri Ultraviolet Visible. Pharmacy. Vol 7.
No. 1 : 119-128.
Petruci, R. 1987. Kimia Dasar Edisi 4 Jilid 2. Bogor. Erlangga.
Sastrohamidjojo, H. 1994. Spektroskopi Resonansi Magnetik Inti. Liberty.
Yogyakarta.
Yahya, M.U. 2001. Ikatan Kimia. Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta.