2. ALAT YG DIBUTUHKAN :
1. Kaca objek
2. Kaca tutup
3. Pinset halus utk memegang kaca tutup
4. Pinset besar utk memegang kaca objek
5. Jarum bertangkai 2 buah
6. Kwas halus 1 buah
7. Kwas kurang halus 1 buah
8. Lap bersih (katun yg sdh sering dicuci)
9 Serbet besar dan bersih
10. Silet yang baru
11. Botol vial
12. Balok kayu
3. BAHAN YG DIBUTUHKAN :
1. Etil Alkohol 70 %, 96/95 % dan 100 %
2. Formalin 36 %/40 %
3. Asam Asetat glasial
4. Air suling
5. Xilol
6. Safranin
8. Fast Green
9 Parafin lunak (480C )
10. Parafin keras (580C)
11. Kanada balsam/kutek
4. I. PEMATIAN DAN FIKSASI
Pematian : penghentian proses-proses hidup
secara tiba-tiba dan kekal (permanen)
Fiksasi : mengawetkan semua struktur sel,
sehingga berada dalam keadaan sama atau
hampir sama dengan waktu masih hidup
Larutan fiksasi yang sering digunakan :
FAA (Formaldehyde Acetic-Acid Alcohol)
50 % atau 70 % etilalkohol 90 cc
asam asetat glasial 5 cc
formalin 37-40% 5 cc
Fiksasi untuk bahan kecil/lunak min. 12 jam
untuk bahan tebal/besar/keras min. 24 jam
Banyak lar.fiksasi 20 kali bahan
6. 3. DEHIDRASI :
Alkohol /Xilol 3:1 .................... 30 menit
Alkohol/Xilol 1:1 .................... 30 menit
Alkohol/Xilol 1:3 .....................30 menit
Xilol I ......................... 30 menit
Xilol II ........................ 30 menit
Campuran Xilol /Parafin 1:9 diletakkan dlm
oven 57 derjat Celcius selama 24 jam
4. Infiltrasi
• Dengan parafin murni diletakkan di oven 57
Celcius selama 24 jam
7. 5. Embedding
• Diganti dengan parafin murni biarkan 1 jam dalam
oven 57 derjat Celcius
• Bahan dan parafin dituang ke kotak kertas dibiarkan
mengeras
6. Penyayatan
* Potong balok parafin dan tempelkan pada
balok kayu
* Penyayatan dengan Rotary mikrotom
10. 7. Penempelan sayatan (Mounting)
• Kaca objek dibersihkan dan direndam dlm larutan
di bawah ini minimal 3 jam kaca objk baru, 24 jam
utk kaca objk bekas :
– Kalium bikormat 20 g
– H2SO4 100 cc
– Air suling 100 cc
• Irisan diletakkan di atas kaca objek yang sudah
diberi gliserin/albumin yang dibubuhi air.
• Kemudian diletakkan di atas Hot Plat dengan
temperatur 45 derajat celcius sampai pita parafin
merenggang.
11. 8. PEWARNAAN
Pewarnaan yang digunakan adalah safranin fast green.
Safranin 1 % dalam alkohol 70 % dan Fast green 1 %
dalam alkohol 95 %.
Berturut-turut objek gelas yang sdh berisi irisan tadi
dimasukkan ke dalam
1. Xilol I ........................................3 menit
2. Xilol II ........................................3 menit
3. Alkohol / Xilol 1:3 ..............................3 menit
4. Alkohol / Xilol 1:1 ..............................3 menit
5. Alkohol / Xilol 3:1 ..............................3 menit
6. Alkohol absolut I ................................3 menit