1.giới thiệu về công nghệ cấy truyền phôi ở ngựa. 2.gây rụng trứng nhiều . 3. kỹ thuật thu phôi. 4.kỹ thuật gây động dục đồng pha. 5.cấy truyền phôi. 6.các công nghệ khác. 7.bảo quản phôi ngựa

1. HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM
KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC
GVHD: TS. Nguyễn Hữu Đức
SVTH: Lương Kim Anh 585887
Đỗ Thị Hằng 586381
Bùi Thị Hoa 586473
HÀ NỘI – 10/2015 1

2. Đặt vấn đề
Nội dung
Kết Luận
A
B
C
2

3. Năm 2000, trên
thế giới đã có 5398
ngựa cái được giội
rửa phôi, 3139 phôi
thu được có khả năng
cấy truyền và thực tế
đã cấy 2830 phôi cho
ngựa cái nhận (IETS,
2001).
3
Một lý lẽ
nổi trội
Con cho phôi có tiềm năng di
truyền tốt (nhất là ngựa đua) lại
không được sinh đẻ.
Mong muốn cấy truyền phôi
là kỹ thuật khai thác được tiềm
năng di truyền tốt (tốc độ, sức
dẻo dai, bước chạy v.v…) của
những con ngựa cái không được
phép sinh đẻ (vì kỷ lục).

4. 1. Gây rụng trứng
nhiều
2.Kỹ thuật thu phôi
3. Kỹ thuật gây động
duc cùng pha
4. Cấy truyền phôi
5. Các công nghệ
khác
6. Bảo quản phôi
ngựa
4

5. Gonadotropin
ngoại sinh
Phản
ứng
kém
5
Chất chiết tuyến yên
ngựa còn thô hoặc
tinh khiết
Tiêm hai lần /ngày
trong 14 ngày vào
mùa không rụng
trứng của ngựa cái
Pony
Tiêm một lần/ ngày
trong từ năm đến
bảy ngày vào giai
đoạn động dục hay
giữa động đực
Nghiên cứu đầu tiên, năm 1974 của Douglas, Nuti, Ginther
Các phương pháp gây dụng trứng

6. Sử dụng
HCG
Tiêm vào ngày thứ 15-19 đã
cho kết quả rõ ràng hơn là
vào những ngày 19-23 của
chu kỳ động dục.
Sử dụng một liều
PGF2α vào ngày đầu
tiên tiêm chất chiết
tuyến yên với 750-
1500 IU hay 2500 IU
Cho lượng
trứng rụng tương
ứng 2,9+_0,5 và
1,3+_0,2
6

7. Gây rụng trứng nhiều ở ngựa
cái để cho phôi bằng FSH của
ngựa tinh khiết (e-FSH).
Thụ tinh nhân tạo cho ngựa cái với
tinh tươi có phẩm chất như nhau từ
nang trứng có đường kính 33mm cho
đến khi rụng trứng.
Thao tác
NGHIÊN CỨU CỦA B.REMY VÀ J.B.BECKERS (1997),
J.F.BRUYAS VÀ CS (1997)
Kết quả
Chỉ tiêu theo dõi eFSH
( n=22)
Đối chứng
( n=22)
Số ngày tiêm trung bình 10.8(4-18) 10,57(5-17)
Số nang trứng trung bình /con cho
trước khi rụng
1,81*(1-3) 1,13*(1-2)
Số trứng rụng trung bình / con cho 1,59*(0-3) 1.09*(0-2)
Số ngựa có trứng rụng nhiều (2) 11/22* 1/22**
Số phôi trung bình / con cho 0,47(0-3) 0,19(0-1)
Số phôi trung bình / rụng trứng 0,26(9/33) 0,22(5/23)
Bảng 2: Số trứng rụng và số phôi thu được trung bình ở ngựa cái.
( Remy và Bruyas, 1997 ) 7

8. Thu phôi bằng
phương pháp không
mổ là tốt nhất vì ở
ngựa nguy cơ nhiễm
trùng sau khi mổ rất
cao và chậm hồi
phục
8http://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/222927
Dung dịch và
dụng cụ giội
rửa áp dụng
như ở bò
http://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/222927
THỜI GIAN THU PHÔI
Ngựa bình thường
Thường là 7, 8 hoặc 9 ngày
sau khi rụng trứng.
Ngựa có tiền sử viêm
tử cung
Ngày thứ 6 sau rụng trứng
nhằm hạn chế ảnh hưởng của
các tác nhân gây bệnh tử cung.

9. Kết quả thu phôi có thể
đạt tới 80%.
Phôi ngựa ở trạng thái phôi dâu
Đi đến tử cung vào ngày thứ sáu sau khi rụng
trứng (Ginther, 1979) và có đường kính xấp
xỉ 100µm
Ngày thứ bảy phát triển thành phôi nang có
kích thước hơn 200µm
Ngày thứ chín hơn 2mm (Douglas, 1982)
9http://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/222927

10. Bổ sung progesterone thông qua
thức ăn
Cho ngựa ăn Altrenogest liều
0,044mg/kg trong 15 ngày. Sau đó
ngựa sẽ động dục từ 2 đến 3 ngày.
Tiêm PGF2α vào giữa chu kì động dục
Tiêm fluprostenol với liều 250µg vào ngày
thứ 14 của chu kỳ, trước khi rụng trứng,
ngựa còn được tiêm bổ sung HCG với liều
2000-3000 IU.
Xác định ngựa cái động đực và rụng trứng , phải sờ khám buồng trứng hằng ngày để
kết luận mức độ đồng pha và cấy phôi mới có kết quả .
Việc kích thích cho ngựa cái động dục cho đến nay còn gặp nhiều khó khăn và kết quả
chưa đạt được theo yêu cầu như ở một số gia súc cái khác.
10

11. Kỹ thuật cấy phôi bằng phương pháp mổ hoặc không mổ ở ngựa
được thực hiện giống như ở bò
Mổ
Không
mổ
Castalberry và cs:Tỉ lệ chửa 60%
Iuniano và Squire:Tỉ lệ chửa 75%
(cấy vào ngày thứ 7 và 8)
Imen và cs: Tỉ lệ chửa 53% (1981)
Allen và Rowson: Tỉ lệ
chửa 71% (1975)
Wade và cs Wilson Tỉ lệ
chửa 60-70% (1987)
11http://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/222927

12. • Hiệu quả khai thác phôi gây rụng trứng nhiều và
phối giống ở ngựa đạt kết quả rất thấp so với các loại
gia súc khác
Chiều hướng nghiên cứu khai thác trứng
Sự tiến triển
của nhân
thành thục
trong tế bào
trứng ở nang
trứng trước
khi rụng
Kích thích
nang trứng
tăng trưởng
Trạng thái tế
bào trứng
nuôi chín và
tiêm tinh
trùng vào
trứng
Sự phát triển
của tế bào
trứng
12

13. Bảng 2: tỷ lệ thụ tinh của tế bào trứng
ở giai đoạn MII( metaphase II) được tiêm tinh trùng (ICSC)
Nhóm Số lượng trứng MII
được tiêm
Số lượng trứng
sống (%)
Số lượng trứng
thụ tinh (%)
1 133 127(95,5) 48(37,8)
2 18 17(94,4) 10(58,8)
3 19 17(89,5) 4(23,5)
Tổng số 170 161(94,7) 62(38,5)
M.E.Dell Aquala và cs (1977) đã nghiên cứu trạng thái tế bào
trứng nuôi chín (IVM) và tiêm tinh trùng vào trứng (ICSI) đã
đạt tỷ lệ trứng thụ tinh bình quân là 38,5% ( bảng 1)
Nhóm
trứng 1
• Nguyên sinh chất trong sạch đồng nhất hoặc có
bóng tối
Nhóm
trứng 2
• Trong nguyên sinh chất xuất hiện thể phân cực của
những hạt lipit tối ⇒tỉ lệ % trứng thụ tinh cao nhất
Nhóm
trứng 3
• Trong nguyên sinh chất còn những chấm hạt lipit
rải rác
trứng thụ tinh phải có hai tiền nhân ( pronucle ) hoặc hai thể nhiễm sắc phân cực
13

14. a.Có túi mầm ; b.Chất nhiễm sắc dày đặc ; c.Metaphase I; d.Telophase I; đ.Metaphase II
J.Bezard và cs (INRA –Pháp ,1997)
đã nghiên cứu
sự tiến triển của nhân thành
LH thục trong tế bào trứng
ở nang trứng trước khi rụng
(≥28mm) sau khi tiêm e- LH
(chiết xuất từ tuyến yên
ngựa )
khả năng thành thục
đồng loạt khi nuôi chín
trong ống nghiệm (IVM)
của tế bào trứng ở
những nang trứng
<28mm trên ngựa cái
Pony
Bảng 3.Kết quả thu trứng từ những nang trứng sắp rụng
Cứ trung bình
sáu nang trứng ở
buồng trứng sắp
rụng trứng của
ngựa cái Pony
cho ra được 3,2
trứng
Trứng có lớp tế bào gờ trứng
(cumulus cell) mở rộng sau khi tiêm
12 giờ và nhân của tế bào trứng chín
muộn hơn (MI lúc 24 giờ ,MII lúc 35
giờ ) so với trứng có lớp tế bào gờ
trứng thu nhỏ không mở rộng
Kết luận
14

15. Phương pháp đông lạnh
-Sử dụng chất bảo vệ sinh học
lạnh glycerin 1M
-Đồ thị hại nhiệt :
+Hạ nhiệt -6℃⇒tinh thể nước đá
+Hạ nhiệt -35℃ với v=0,3℃/𝑝ℎú𝑡
+Bảo quản trong nito lỏng
Phương pháp giải đông: diễn
ra càng nhanh càng tốt
-giải đông trong nước ấm
37℃, lắc đều sao cho tan
nhiệt
(trước khi giải đông cần kiểm
tra cẩn thận các nhãn và mũ
ống để chắc chắn nắp còn
chặt)
⇒Kếtquảthụthaicủaphươngpháp
nàyđạttỷlệ 50% -70%
vàcácphôinangđạtđượctrạngthái
pháttriểntốt.
15
ĐÔNG
LẠNH PHÔI
Gửi phôi đến các
lục điạ
Bảo quản dự trữ phôi
đông lạnh
Lưu giữ nghiên cứu
di truyền con cái
Nâng cao hiệu quả
sử dụng phôi
Nhập các giống mới
Giảm chi phí đẻ duy
trì cái nhận phôi
Thương mại hóa
quốc tế
Giảm lây
truyền bệnh
Sơ đồ về lợi ích đông lạnh phôi

16. 16
Cấy truyền phôi ở ngựa tuy còn nhiều hạn chế và khó
khăn nhưng đã có vai trò to lớn trong việc tạo ra thế hệ
mới tốt hơn, có ý nghĩa cao trong đời sống kinh tế sản
xuất của con người.
Cấy truyền phôi ở ngựa đã góp phần vào việc bảo tồn
và duy trì những vốn gen quý hiếm, đồng thời mở ra
nhiều triển vọng mới cho ngành khoa học công nghệ
nuôi cấy phôi tế bào động vật.
KẾT LUẬN

17. Công nghệ cấy truyền phôi ở gia súc PGS.TS Hoàng Kim Giao
Nhà xuất bản Khoa Học và Kĩ Thuật. 207trang.Chương 8 (t187-t190).
TÀI LIỆU THAM KHẢO
17

18. 181
“Change your thoughts and you
change your world”
Norman Vincent Peale
“Life is a dream for the wise, a
game for the fool, a comedy for
the rich, a tragedy for the poor”
Sholom Aleichem