1.
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА
РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН
АО «КАЗАГРОИННОВАЦИЯ»
Казахский научно-исследовательский
институт рыбного хозяйства
ПОВЫШЕНИЕ ИММУННОГО СТАТУСА
ПРЕПАРАТОМ «РОНКОЛЕЙКИН»
ПРИ БАССЕЙНОВОМ ВЫРАЩИВАНИИ
ОСЕТРОВЫХ РЫБ
Астана 2011

2. УДК 639. 3 ( 07 )
ББК 47.2 я 7
Н 90
Повышение иммунного статуса осетровых рыб препаратом
«Ронколейкин» при бассейновой выращивании осетровых рыб. Алматы ,
2011 - 19 с.
Автор: Нуршин К.А.
ISBN 978-601-7344-31-3
Рекомендации представляют собой результаты собственных
исследований по применению препарата «Ронколейкин» в качестве
иммуностимулирующего средства организма сеголеток осетровых рыб,
выращиваемых в условиях бассейновой технологии. Предлага-емые
рекомендации предназначены для применения в рыбоводных и
фермерских хозяйствах республики Казахстан, руководителей и
специалистов в области рыбного хозяйства, а также для научных
работников, ветеринарных врачей, преподавателей, студентов и магис-
трантов ВУЗ-ов и колледжей.
Издано в рамках программы 057 «Информационное обеспечение
субъектов агропромышленного комплекса на безвозмездной основе»
Утверждено решением заседания научно-технической комиссии
АО «КазАгроИнновация» от 3 декабря 2011 года, № 2
ISBN 978-601-7344-31-3

3.
СОДЕРЖАНИЕ
Введение ……………………………………………………………………..……….……….…4
1 Иммуностимуляторы…………………………………………………………….…....…..5
2 Иммуномодулирующий препарат Ронколейкин …………………..…..………6
3 Результаты применения Ронколейкина на иммунное состояние
организма осетровых рыб………………………………………………..…………..……7
Заключение……………………………………………………………………………………..21
Список использованных источников………………………………………………...22
2

4.
ВВЕДЕНИЕ
Осетровые рыбы являются наиболее древней группой ихтиофауны
мира. Обладая рядом уникальных признаков в строении, они наделены
значительными возможностями пластичного приспособления к
изменяющимся условиям окружающей среды. Однако, в силу ряда
причин антропогенного характера: сокращение нерестового
миграциононго пути, частичная или полная потеря нерестовых участков,
нерегламентированный вылов и токсическое воздействие, в последние
20 – 30 лет наблюдается катастрафическое сокращение численности
осетровых рыб По утверждению отдельных ученых, полностью потеряли
промысловое значение и занесены в красную книгу атлантический,
сахалинский, обский и байкальский осетры, калуга и амурский осетр,
азовская белуга, шип, а также стерлядь бассейнов рек Дон, Кубань,
Урал, Кама . На грани вымирания популяции азовской и черноморской
белуги, донской севрюги и стерляди, каспийского осетра, шипа, севрюги,
атлантического осетра .
Выращивание рыб на самых ранних стадиях развития в
контролируемых условиях среды имеет несомненные преимущества по
сравнению с традиционными методами выращивания, позволяет достичь
более высоких значений показателей темпа роста, выживаемости и
упитанности [3]. Это положительно влияет на производственные
показатели на следующих этапах выращивания при условии, что
посадочный материал попадет в пруды или водоемы с хорошим
состоянием среды. Как показывают результаты проведенных
исследований, мальки осетровых рыб, выращенные в условиях
бассейнов и прудов, характеризуются более низкими показателями
иммунитета к болезням, чем рыбы из натуральных условий. Поэтому
технологии интенсивного выращивания посадочного материала
осетровых рыб в бассейнах требуют разработки эффективных методов
иммунопрофилактики инфекционных и инвазионных болезней. Одним из
путей решения этой проблемы является разработка и применение
активных биологических препаратов - иммуномодуляторов, стимули-
рующих рост, резистентность, выживаемость и другие аспекты
жизнедеятельности осетровых рыб, которые, как показали результаты
исследований, способны существенно увеличивать значение показателей
клеточного и гуморального иммунитета. Наряду с этим некоторые из них
положительно влияли на рост рыб и их выживаемость.
В настоящее время терапия рекомбинантными цитокинами
является одним из наиболее перспективных и постоянно расши-
ряющихся направлений медицины и иммунофармакологии. В
экспериментальных работах доказана эффективность лечения
4

5.
препаратом «Ронколейкин» диких, домашних, сельскохозяйственных,
экзотических животных и птиц, страдающих онкологическими,
бактериальными и вирусными заболеваниями. В последнее время
ронколейкин, как иммуномоделирующий и иммуностимулирующий
препарат, а также и антистрессант, стал успешно применяться и в
аквакультуре для профилактики и лечения различных патологии и
болезней карповых, лососевых и осетровых рыб [4,5]. Ронколейкин
обладает выраженной иммунокоррегирующей активностью, направ-
ленной на усиление и оптимизацию противобактериального, противо-
вирусного и противогрибкового иммунитета. Иммуно-фармакологии. В
экспериментальных работах доказана эффективность лечения
препаратом «Ронколейкин» диких, домашних, сельскохозяй-ственных,
экзотических животных и птиц, страдающих онкологическими,
бактериальными и вирусными заболеваниями.
Настоящие рекомендации составлены на основе проведенных,
лабораторией ихтиопатологии Казахского научно – исследовательского
института рыбного хозяйства, опытов в течение последних трех лет на
базе Капшагайского НВХ. На органном и клеточно-тканевом уровне
были изучены влияние ронколейкина на иммунное состоянме рыб и
отмечено заметное положительное влияние препарата на рыбоводные,
гематологические и гистологические показатели организма молоди
осетровых рыб. Применение указанного иммуностимулятора вполне
может служить определенной перспективой для развития искус-
ственного разведения осетровых рыб в республике
ИММУНОСТИМУЛЯТОРЫ
Иммуномодуляторы используются в медицинской практике при
лечении вирусных, опухолевых заболеваний и даже рассеянного
склероза. При некоторых заболеваниях их эффективность доказана
множеством исследований.
Среди иммуномодуляторов экзогенного происхождения выделяют
бактериальные и растительные препараты. Наиболее известными
препаратами бактериальных иммуномодуляторов являются «ИРС 19»,
«бронхо-мунал», «рибомунил», а растительных иммуномодуляторов:
«имунал», «эхинацея Вилар», «эхинацея композитум СН», «эхинацея
ликвидум».
Эндогенные иммуномодуляторы разделяют на препараты,
выделенные из тимуса, костного мозга, цитокины (интерлейкины,
интерфероны и индукторы интерферонов) и препараты нуклеиновых
кислот. Лекарственными средствами, полученными из ткани тимуса
(органа иммунной системы), являются: «тактивин», «тималин»,
5

6.
«тимоптин», которых применяют при иммунодефицитах с преимущест-
венным поражением Т-клеточного звена иммунитета, развивающихся
при гнойных и опухолевых заболеваниях, туберкулезе, псориаз,
офтальмогерпесе и других. Основными показаниями препа-ратов из
костного мозга – «миелопид» являются иммунодефициты с преимущест-
венным поражением гуморального звена иммунитета; гнойные
заболевания, в составе комплексной терапии лейкозов и хронических
инфекционных заболеваний.
Интерлейкины делятся на естественые (суперлимф) и реком-
бинантные (беталейкин, ронколейкин).
Естественные цитокины (суперлимф) используются для лечение
ран и трофических язв, а рекомбинантные цитокины: ронколейкин -
гнойно-воспалительных заболеваний, некоторых злокачественных
опухолей; беталейкин - лейкопении (сниженное количество лейкоцитов
крови). Класс иммуномодуляторов - цитокины очень обширный,
включает в себя интерфероны трех разновидностей (альфа, бета,
гамма). В зависимости от происхожения интерфероны делятся на
естественые и рекомбинантные. Наиболее частая форма введения -
инъекционная, однако существуют и другие формы выпуска: свечи, гели,
мази.
Иммуномодуляторы синтетического происхождения предствлены
различными по своей химической структуре лекарственными средствами,
в связи с чем у каждого препарата есть свои особенности механизма
действия, переносимости и нежелательных эффектов. К этой группе
относятся: изоприназин, галавит, гепон, глутоксим, полиоксидоний,
имунофан, тимоген, ликопид.
Из множества иммуномодуляторов, наиболее эффективным на наш
взгляд являются Ронколейкины, которыми проведены настоящие опыты.
2. ИММУННОМОДУЛИРУЮЩИЙ ПРЕПАРАТ РОНКОЛЕЙКИН
Ронколейкин® - интерлейкин-2 человека рекомбинантный, являясь
ключом к иммунному ответу организма, обладает иммунокорригирующим
действием, направленным на усиление противобактериального,
противовирусного, противогрибкового и противоопухолевого имму-
нитета.
В 80-е годы двадцатого столетия, мировая общественность с
энтузиазмом встретила создание в США методами генной инженерии
интерлейкина-2 (ИЛ-2) – цитокина, чья способность влиять на
функциональную активность различных эффекторных клеток указывала
на перспективы его использования в качестве иммунотерапевтического
агента. Однако, клиническое использование зарубежного ИЛ-2 выявило
наличие большого количества побочных эффектов, что наряду с высокой
6

7.
стоимостью, создавало определённые трудности для его применения.
Благодаря наличию мощной базы фундаментальных исследований в
области молекулярной биологии и генетики российские ученые
разработали и в 1995 году зарегистрировали российский
рекомбинантный интерлейкин-2 - Ронколейкин®. Этот препарат
разработан и производится отечественной компанией ООО «Биотех» г.
Санкт-Петербург.
Из существующих в мире рекомбинантных интерлейкинов-2 только
Ронколейкин® является полным структурным и функциональным
аналогом ИЛ-2 человека. Ронколейкин® создан на основе продуцента
непатогенных штаммов дрожжей-сахаромицетов (S. сerevisiae) и не
содержит токсичных компонентов. В отличие от западных аналогов,
созданных на основе кишечной бактерии (E. coli), препарат хорошо
переносится пациентами и практически не обладает побочными
эффектами
В настоящее время Ронколейкин® входит в протоколы лечения
различных заболеваний во многих регионах России. Ронколейкин®
известен далеко за пределами России и зарегистрирован в шести
странах ближнего зарубежья: в Украине, Грузии, республиках Беларусь,
Казахстан, Кыргызстан, Азербайджан. В настоящее время проходит его
регистрация в республиках Молдова, Армения, Узбекистан.
За десять лет с момента регистрации Ронколейкин® получили
около 400 тысяч пациентов с различными видами иммунодефицитных
состояний; проведено более 600 клинических испытаний и научных
исследований в 180 ведущих медицинских научно-исследовательских
центрах и лечебных заведениях крупных городов России. Получение
золотой медали за разработку Ронколейкина®на III Московском
международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы
развития» и участие в конкурсе «Платиновая Унция» в номинации
«Рецептурный препарат» ещё раз подтвердило практическую значимость
и достоинства данного лекарственного средства
Ронколейкин® используется в комплексной терапии сепсиса
различной этиологии: посттравматического, хирургического, акушерско-
гинекологического, ожогового, раневого и других. За последнее
десятилетие ярко высветилось ключевое значение коррекции
иммунодефицита в лечении тяжелых ранений и травм.
Включение Ронколейкина® в комплексное лечение различных
болезней способствует ликвидации проявлений иммунной недос-
таточности, прежде всего, в клеточном звене иммунной системы и
позволяет повысить эффективность лечения по срокам санации от
возбудителя, частоте возникновения осложнений и проценту рецидивов
7

8.
заболевания. Иммунотерапия Ронколейкином® позволяет снизить
уровень летальности и сократить сроки лечения.
Исследования эффективности применения Ронколейкина®
приобретают особую значимость в современных условиях ухудшения
эпизотоологической и эпидемиологической обстановки по многим
заболеваниям.. Ронколейкин®, усиливая противомикробный иммунитет,
приобретает особую актуальность при поиске эффективных средств
борьбы с проявлением биотерроризма с применением возбудителей
особо опасных инфекций.
В настоящее время Ронколейкин успешно применяется в
ветеринарных клиниках и имеет самые положительные отзывы со
стороны лечащих врачей. За короткий срок этот препарат зарекомен-
довал себя как новое высокоэффективное средство для лечения и
профилактики иммунодефицита как у мелких домашних, так и
сельскохозяйственных животных. Ронколейкин оказывает регулирующее
влияние на реакции клеточного, гуморального иммунитета и
неспецифическую резистентность организма, стимулирует процессы
регенерации в случае их ослабления. Ронколейкин совместим
практически со всеми препаратами различных лекарственных групп
может быть использован в сочетании с традиционными методами
лечения.
Ронколейкин эффективен в комплексной или монотерапии у
домашних и сельскохозяйственных животных при гнойно-воспали-
тельных заболеваниях: эндометриты, абсцессы, пиодермии,
стафилококковое поражение, травматические состояния; офталь-
мологических заболеваниях. Его успешно стали применять при
кератоконъюктивитах и травматических поражениях глаз, инфекционных
и вирусных заболеваниях различной этиологии: чуме плотоядных,
вирусном энтерите, вирусном папиломатозе, ринотрахеите и
хирургических манипуляциях. Как эффективное средство его используют
при профилактике послеоперационных иммунодефицитов, при
неблагоприятной эпидемиологической обстановке совместно с
вакцинацией.
Препарат не накапливается в организме, не имеет побочных действий. В
отдельных случаях возможно появление кратковременного озноба и
повышение температуры тела не более, чем на один градус Цельсия, что
является следствием процесса активизации иммунной системы и не
требует дополнительного лечения.
Анализ литературных данных показывает, что терапия Ронколей-
кином приводит к значительному улучшению общего состояния
животных. Послеоперационное однократное введение Ронколейкина на
60-70% снижает риск послеоперационных осложнений; заживление
8

9.
тканей наблюдается к 5-7 дню. При лечении хронических заболеваний
дыхательной и мочеполовой систем улучшение наступает к 3-5 дню.
Однократная инъекция обеспечивает защиту от вирусных и
бактериальных инфекций на 15-28 дней, применение совместно с
вакцинацией значительно усиливает иммунный ответ. Благодаря обез-
боливающему эффекту улучшается состояние животных с онколо-
гическими заболеваниями.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ РОНКОЛЕЙКИНА
НА ИММУННОЕ СОСТОЯНИЕ ОРГАНИЗМА
ОСЕТРОВЫХ РЫБ
Эффективность ронколейкина на организм осетровых рыб
определялась на сеголетках оссева (гибрид осетра с севрюгой) и
сибирского осетра, в возрасте 3 - 6 месяцев, выращиваемых в условиях
бассейновой технологии. В ходе работы былы проведены: определение
исходного иммунного состояния контрольных рыб, осуществлены 5
опытов с различной группой сеголеток разного возраста, роста и
развития и клинического состояния с изучением иммунного состояния
клиническим [6]., патологоанатомическим, гематологическим [7] и
гистологеским [8,9] анализами.
Исходное иммунное состояние рыб. При микроскопическом
изучении мазков крови сеголетков рыб при клиническом осмотре
выявлены средняя и ниже средняя упитанность, небольшие
покраснения, пропитанные желтовато-красной жидкостью у отдельных
рыб на различных участках тела, серо-желтоватый оттенок в области
брюшка, темно-синеватые жабры с ослаблением их лепестков.
Патологоанатомическими исследованиями у рыб установлены
паренхиматозная дистрофия печени с переполнением желчного пузыря,
гиперемия внутренних органов, сосудистые поражения жабр,
желтушность слизистых оболочек, отечность головного мозга с
полнокровием сосудов мозговых оболочек. В мазках крови выявлено
большое количество бластных клеток слабо дифференцированного
эритроидного ряда, увеличена доля клеток с дегенеративными измене-
ниями, мало встречаются как гранулоциты, так и агранулоциты. В крови
много гемоцитобластов, миелобластов, базофильных нормобластов.
Эритроциты представлены в небольшом количестве, овальной и
округлой формы, с четко обозначенными и большими ядрами. У
отдельных эритроцитов, наблюдается небольшие выделения цито-
плазмы. Характерными изменениями белой крови оказалось лимфо-
пения и сдвиг ядра влево у нейтрофилов. Клетки белой крови представ-
лены значительно мало, лимфоциты немногочисленные. Такая же
9

10.
картина наблюдается со стороны эозинофилов и нейтрофилов, в
основном, присутствуют палочкоядерные. Только в некоторых местах
наблюдаются небольшие скопления тромбоцитов. Гистологическими
исследованиями выявлено значительное уменьшение числа лимфоцитов
в селезенке, лимфоциты и клетки красной крови лежат рыхло,
разрозненно. В головной почке хорошо видны созревающие светлые
клетки хроммафиновой ткани. Они представлены крупными, светлыми,
полигональной формы клетками, расположены в виде коротких тяжей.
Ядро у них крупное, а цитоплазма зернистое. Интерреналовая ткань
была образована небольшими оксифильными клетками и лежат
беспорядочно небольшими группами. Однако, здесь совершенно мало
клеток агранулярного и гранулярного типов белой крови и
просматривается изреженное расположение интерреналовой и
хромаффиновых клеток (Рис.2). В туловищной почке четко различимы
корковое и мозговое вещество. В корковом веществе, по периферии
органа, лежат различного размера сосудистые клубочки Анализ клеток
межканальцевой ткани показал, что пролиферация и дифференцировка
клеток эритроидного и лейкоцитарного рядов идут запоздалыми
темпами. В печени имеет место дискомплексация балок и
дистрофические изменения зернистого и жирового характера. Получен-
ные показатели свидетельствует о задержке гемопоэза и резкой
лейкопении, характеризущие слабое исходное иммунное состояние
исследуемых рыб
2
1
1
Рис. 1 - Оссев. Изменение структуры эритробластов. 1 – эритробласты,
2 – эритроциты. Окраска по Романовскому, 1000Х.
10

11.
Рисунок 2. - Оссев. Головная почка. Интерренальные и хромофильные клетки
расположены реже обычного. Гематоксилин-эозин, 400Х
Постановка опытов. Опыты проводили в виде одноразовой
получасовой водяной ванны с ронколейкином [10] . В отдельную ванну
залили 100 л воды с температурой - 19° С, содержанием кислорода –
12,6 и рН = 8,3 и запускали опытных групп рыб. Затем в ванну
наливали ронколейкин, разведенный в 100 мл 0,9 % растворе
хлористого натрия в дозе , всоответствии с планируемой схемой
опытов, в расчете на 1 г живой массы рыб. В ванне с водой с
раствором ронколейкина рыб держали 30 минут с принудительной
аэрацией, после чего их поместили в другой бассейн, в котором, в
дальнейшем, они находились вместе с контрольными. Для
установления дозы ронколейкина на 1 г живой массы рыб количество
МЕ препарата разделяли на общую суммарную живую массу рыб.
Например, для воздействия 100 МЕ ронколейкина на 1 г живой массы
рыбы, при общем суммарном живом весе рыб 5000 г требуется 500000
МЕ препарата.
Опыты с 1, 2 и 3 кратным введением препарата во внутрь через
рот рыб осуществляля стерильным одноразовым шприцом. полной дозы
150 МЕ в расчете на 1 г живой массы рыбы. Гемоглобин крови рыб
определяли на биохимическом анализаторе Specol. Результаты опытов
оценивали через каждый месяц.
11

12.
Первые опыты. Опыты проведены с сеголетками оссева
(гибриды осетра и севрюги), в возрасте 3 месяцев, развивающихся
вполне нормально. Для рыб средней живой массой 25,0 г использована
доза ронколейкина 33 МЕ в ванне с водой.
Вторые опыты. Во внутрь организма сеголеток оссева введением
через рот полной дозы – 150 МЕ на 1 г живой массы рыбы была
введена одной опытной подгруппе за один раз, другой подгруппе - два
раза по 75 МЕ с интервалом 48 часов и третьей подгруппе – три раза по
50 МЕ с интервалом также 48 часов. Результаты первых и вторых опытов
отражены в таблице 1.
Таблица 1 – Изменение живого веса опытных рыб первой и
второй опытных групп
Ванна с Перораль Перораль Перораль Контрольн
Сроки ронколейк но но но ые
опытов ином однократн двукратно трехкратн
о о
Исход 25,0 20,0 20,0 20,0 22,0
ные
данные в
начале
опыта
Через 25,9 24,4 25,2 26,4 26,5
7 дней
через 32,8 27,7 28,3 31,3 28,3
14 дней
через 41,4 29,7 30,3 37,6 31,8
21 дней
61,5 40,3 44,3 47,3 45,0
через 28
дней
Согласно данных таблицы 1 наилучшие результаты были получены
при помещении рыб в ванну с ронколейкином. Средний вес рыб после
содержания их в условиях ванны с ронколейкином быстрее нарастал, по
сравнению с рыбами как контрольной группы, так и других подопытных
экземпляров. Прибавляя незначительно в живом весе за первые 7 дней
после начала опыта в дальнейшем, резко улучшали данный показатель и
к концу 1 месяца набрали в среднем, 61,5 г, а отдельные экземпляры
достигли 80 г. Обший прирост живого весе у них составил 36,5 г, тогда
как, у рыб контрольной группы наибольший средний вес доходил только
12

13.
до 45,0 г, против начального 22,0 г. Рост и развитие рыб, при опыте с
ванной, нарастал с каждой последующей недели по геометрической
прогрессии. Так, если за первую неделю с начала опыта, рыбы
прибавили только 0,9 г привеса, на следующие недели этот показатель
равнялся соответственно на 7,8 г, 16,4 г и 36,5 г. Ежедневный привес
данной группы составил 1,5 г, тогда как у контрольных рыб он равнялся
0,5 г. Только за одну последнюю неделю данные рыбы прибавили в весе
до 20,5 г. Прирост живого веса у 1 опытной группы за 1 месяц составил,
в среднем, 30 % больше по сравнению с контрольными рыбами.
Применение ронколейкина во внутрь через рот, на дали
преимущества развития по сравнению с контрольными рыбами. Однако,
данные рыбы на протяжении всего периода опыта, были подвижными,
бодрыми, оставались здоровыми и не подвергались к заболеваниям,
тогда как среди других, не подвергнутых к опыту рыб, нередко были
замечены крайне ослабевшие и погибшие. Немаловажным фактором
является резкое нарастание живого веса рыб при введении через рот на
последней неделе опыта. Они имели прирост при этом в среднем более
12,0 г , что также характеризует данный препарат с хорошей стороны.
Гематологические исследования показали нормализацию процесса
гемопоэза, Эритроциты представлены созревшими, овальной и округлой
формы, с большими ядрами. Много встречаются базофильные и
полихроматофильные нормобласты. В мазках довольно в большом
количестве представлены большие, средние и малые лимфоциты (Рис 3).
Видно и достаточное количество палочкоядерных и сегментоядерных
нейтрофилов. Подвергнутых к патологическим изменениям клетки не
обнаружены.
2
1
3
Рисунок 3 - Оссев. Большое количество лимфоцитов. 1 –лимфоциты, 2 –
эритроциты, 3 – нормобласты. Окраска по Романовскому. 1000Х.
13

14.
Результаты гистологических исследований также подтверждают
выше указанные результаты. Изменения в печени и почках не выявлены.
Селезенка представлена структурой близкой к норме. В органе
лимфоциты располагались густым слоем, распределены равномерно и
имели ясно выраженную морфологию (Рис.4).
Рисунок 4 - Оссев. Селезенка. Усиленное размножение лимфоидных клеток в
пульпе. Гематоксилин-эозин. 400Х.
Таблица 2 - Показатель гемоглобина с цельной крови рыб у отдельных рыб в
биохимическом анализаторе Specol вначале опытов первой и второй опытных групп
№ Вид Назначение Вес Длина см Концентрация
рыбы (г) гемоглобина
(г/л)
L
1 Оссев Контрольный 26,5 20,5 38,81 15,6
2 Оссев Контрольный 28,5
3 Оссев Ванна с 26,2 20,0 39,87 15,5
ронколейкином
4 Оссев Ванна с 24,6 20,0 33,98 15,7
ронколейкином
5 Оссев введение через 18,9 17,9 27,91 14,2
рот (полная
доза)
14

15.
Таблица 3 - Показатель гемоглобина с цельной крови рыб у отдельных рыб в
биохимическом анализаторе Specol через 12 дней от начала опыта
№ Вид Назначение Вес Длина см Концентрац
рыбы (г) ия
гемоглобин
а
(г/л)
L
1 Оссев введение 41,8 22,6 18,0 36,38
через рот
(полная доза)
2 Оссев введение 21,5 18,5 14,3 19,17
через рот
(полная доза)
3 Оссев Ванна с 35,8 22,2 17,0 34,25
ронколейкино
м
4 Оссев Ванна с 31,3 21,4 16,9 7,05
ронколейкино
м
5 Оссев Контрольный 33,2 21,7 16,9 35,07
Согласно таблицам 2 и 3 наблюдается некоторое уменьшение
количества гемоглобина через две недели опыта, что видимо объясняя-
ется быстрыми темпами развития рыб от положительного влияния
ронколейкина
Третьи опыты. В опытах со специально отобранными,
отстающими в росте и развитии, сеголетками сибирского осетра в
возрасте 6 месяцев, со средней живой массой 26,3 г, (контрольные рыбы
весили в среднем 29 г.) ронколейкин давали в дозе 38 МЕ. .За 1 месяц
после опыта средняя живая масса рыб возросла до 66,4 г, то есть
выросла на 45,9 г, в то же время как, контрольные рыбы прибавили
лишь 23,7 г и имели средний вес 52,7, хотя имели абсолютно
одинаковые условия содержания и кормления с опытной группой.
При повторной обработке ронколейкином в дозе 61 МЕ на 1 г
живого веса опытные рыбы, набравшие после первого опыта живую
массу менее 75,0 г, стали расти значительно быстрее Результаты
полученные через три месяца от начала опытов показали значительную
разность между подопытными и контрольными рыбами. (Табл. 4).
15

16.
Таблица 4 – Рыбоводно-биологические показатели третьих опытно-контрольных
групп сибирского осетра по окончании эксперимента
Показатели Ед.изм Значение
опыт Контроль
Период эксперимента сутки 90
Количества рыб шт. 50 50
Выживаемость % 100 100
Исходная масса Г 26,3 29,3
Конечная масса Г 113,1 74,3
Абсолютный прирост Г 86,8 45,0
Среднесуточный прирост
Г 1,0 0,5
Относительный прирост % 3,30 1,53
Рыбы, подвергнутые воздействию ронколейкина, набрали среднюю
массу 113,1 г, прибавив 86,8 г к первоначальному 26,3 г. Данные рыбы
на протяжении всего периода опыта, были подвижными, бодрыми,
оставались здоровыми и не подвергались к заболеваниям и гибели.
Среди контрольных рыб, не подвергнутых воздействию ронколейкина,
были замечены ослабевшие, исхудалые. Абсолютный прирост рыб из
контрольной группы составили 45 г.
Клинически опытные рыбы, по сравнению с контрольными,
выглядели более крупными, бодрыми, прыгучими, отличались блеском
наружной поверхности тела.
У опытных рыб в крови заметен ускоренный темп дифференциации
клеток эритроидного ряда, из которых хорошо представлены
эритроциты. Немало также и базофильных нормобластов. В мазках
крови находится значительное количество полихроматофильных нормо-
бластов, указывающие на резкое усиление эритропоэза в организме.
Гистологическая картина органов рыб опытной группы значительно
отличается от таковой у контрольных рыб. В печени видно
незначительное расширение без полнокровия центральных сосудов. В
отдельных участках органов наблюдается небольшие скопления
лимфоидных клеток. Балочная структура паренхимы хорошо выражены,
печеночные столбики лежат плотными рядами. В желчных протоках
эпителиальная выстилка хорошо сохранена. В почках сосудистые
клубочки хорошо выражены, тесно лежат друг другу. Эпителий извитых
канальцев имеют высокие призматические и кубические клетки. Между
почечными канальцами находятся значительные скопления лимфоцитов.
Селезенка с близкой к норме структурой. Лимфоциты лежат густо с
темно-синими ядрами. Эритроциты, расположенные между ядрами
лимфоцитов, удлиненно овальной формы, с центрально расположенным
16

17.
круглым небольшим ядром. В целом, в органе эритроциты и лимфоциты
лежат равномерно. Зерна гемосидерина в органе мало и представлены
незначительными размерами.
Четвертые опыты. Опыты со специально отобранными
слаборазвитыми и ослабленными сеголетками сибирского осетра в
возрасте 5 месяцев со средней живой массой 9,7 г проводили в дозе
ронколейкина 100 МЕ на 1 г живого веса. Опытные рыбы росли очень
быстро и за один месяц после опыта набрали 60 г среднего живого веса,
прибавив 51,3 г. Отдельные экземпляры весили 80 – 90 г, контрольные
экземпляры имели 35 г среднего веса, против 12 г первоначального.
При повторной обработке, рыбы данной опытной группы,
несколько отставших в живом весе (35 – 55 г), по сравнению с
остальными рыбами (60 – 90 г,) дозой ронколейкина 200 МЕ / г живого
веса, за следующий месячный срок значительно прибавили в массе.
Общая средняя масса всех опытных рыб данной партии за 2 месяца
стала 120 г, что на 110,3 г выше первоначального. Отдельные особи
превысили в весе 200 г. Средняя масса контрольных рыб достигла
только 76 г.
Отдельные особи рыб, набравших среднюю живую массу только
около 100 г в течение 2 месяцев опыта, подвергнуты дополнительно
действию ронколейкина в ванне с повышенной дозой – 500 МЕ на 1 г
живой массы рыбы (табл.5).
Таблица 5 - Рыбоводно-биологические показатели опытно-контрольных групп
сибирского осетра четвертых опытных групп по окончании эксперимента
Показатели Ед.изм Значение
опыт Контроль
Период эксперимента сутки 90
Количества рыб шт. 60 20
Выживаемость % 99,4 70
Исходная масса Г 9,7 10,5
Конечная масса Г 233,6 152,6
Абсолютный прирост Г 223,9 142,1
Среднесуточный
прирост Г 2,48 1,57
Относительный % 22,85 13,53
прирост
Рыбы, подвергнутые воздействию ронколейкина, набрали очень
большую среднюю массу 233, 6 г, прибавив 223,9 г к первоначальному
9,7 г, сохраняемость рыб составила 99,4 %. Среди контрольных рыб, не
подвергнутых воздействию ронколейкина, были 6 экз. павшие и
17

18.
сохраняемость составила 70 %. Абсолютный прирост рыб из контроль-
ной группы составили 142,1 г.
При клиническом осмотре рыб выявлена большая активность,
прыгучесть, выше-средняя упитанность. Опытные рыбы, на протяжении
всего периода опыта, были подвижными, бодрыми, оставались
здоровыми с быстрым нарастанием живого веса и не подвергались к
заболеваниям и гибели. Кожа цела, слизь на поверхности умеренный,
прозрачный, нет участков кровоточивости, отсутствуют раны, экземы,
язвы. Глаза блестящие, жабры розово-красные, жаберные лепестки
крепко сидят на основе, кожа цельная, блестящая, мышщы упругие.
Патологоанатомическое вскрытие свеже-уснувших рыб на внутрен-
них органах заметных изменений не выявили. В брюшной полости нет
постороннего содержимого. Серозные и слизистые покровы гладкие,
блестящие. Органы имеют обычную форму, естественную окраску,
умеренную плотность. Поверхность разрезов гладкие, сухие. Отсут-
ствуют паразиты, их личинки и их следы.
При гематологических исследованиях заметен ускоренный темп
дифференциации клеток эритроидного ряда, из которых хорошо
представлены эритроциты. Они созревшие, овальной и округлой
формы, с большими ядрами, хорошо заметной перинуклеарной зоной. В
поле зрения микроскопа чаще встречаются оксифильные (Рис.5) и
полихроматофильные нормобласты, указывающие на резкое усиление
эритропоэза в организме. Много также базофильных нормобластов.
Количество лимфоцитов заметно возросшее, представлены большие,
средние и малые лимфоциты Достаточное количество палочкоядерных
и сегментоядерных нейтрофилов.
Рисунок 5 - Значительное количество оксифильных нормобластов.
По Романовскому. 1000 Х
18

19.
Гистологическая картина органов рыб опытной группы значительно
отличается от таковой у контрольных рыб. Иммунно-кроветворные
органы: печень, почки и селезенка приобретают выраженные морфо-
логические структуры.
В печени выраженое умеренно - плотное расположение балок
(Рис.6), отсутствуют сосудистые изменения, за исключением,
наблюдающиеся местами умеренных, незначительных расширении
кровеносных сосудов. В некоторых местах видны небольшие скопления
лимфоидно-гистиоцитарных элементов.
Почечные канальцы и сосудистые клубочки хорошо выражены,
тесно расположены между собой. Между извитыми канальцами
находятся умеренное количество клеток крови. Эпителиальную выстилку
канальцев образуют кубические клетки с центрально расположенным
округлым ядром.
Селезенка также не отличается какими бы либо изменениями.
Лимфоциты располагаются густым слоем с ясно выраженной темно-
синей структурой. Среди лимфоцитов лежат довольно большое
количество эритроцитов.
Рисунок 6 - Печень. Плотное расположение балочной структуры.
Гематоксилин-эозин. 100 Х
Пятые опыты. Действие препарата Ронколейкин дополнительно
испытали на 23 экземплярах совершенно мелких, отсталых в росте и
развитии, безнадежно слабых сеголетках сибирского осетра в возрасте
почти 10 месяцев и средней живой массой 15 г. Их обрабатывали
повышенной дозой препарата – 210 МЕ на 1 г живого веса рыб (Табл. 6).
19

20.
Таблица 6 – Рыбоводно-биологические показатели опытно-контрольной группы
совершенно ослабленной молоди сибирского осетра
Показатели Ед.изм Значение
Опыт Контроль
Период эксперимента сутки 30
Количество рыб шт. 15 8
Выживаемость % 86 37
Исходная масса Г 15,8 19,4
Конечная масса Г 26,4 19,6
Абсолютный прирост г 10,6 0,2
Среднесуточный
прирост г 0,3 0,006
Относительный % 67,1 1,03
прирост
Согласно полученным данным абсолютный прирост рыб из опытной
группы составил 10,6 г, что на 10,4 г больше чем у рыб из контрольной
группы. Относительный прирост у рыб из опытной группы составил 67,1
%, что на 66,1 % больше, чем у рыб из контрольной группы.
Положительный эффект влияния ронколейкина виден также в том, что 4
экз. осетра из опытной группы набрали массу до 40,0 г. Отход составил 7
экз., из них 5 экз. были из контрольной группы и 2 экз. - из опытной.
Причиной, что большинство рыб не набрало большую массу,
видимо является то, что данные рыбы, в возрасте почти 10 месяцев,
были уже затянуты в росте, и ронколейкин оказал на них положительное
влияние, что несомненно объясняется очень позитивным эффектом
ронколейкина.
20

21.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенными испытаниями препарата «Ронколейкин» в
профилактических целях были достигнуты определенные результаты.
Опытами установлено достаточно хорошее иммуностимулирущее
влияние препарата ронколейкина на организм сеголеток обоих видов
осетровых рыб. Применение препарата ронконейкина способствовало
быстрому увеличению живой массы подопытных рыб по сравнению с
контрольными. При этом достигается хорошая сохранность всего
опытного поголовья рыб. Под воздействием ронколейкина в организме
рыб происходят иммунные преобразования, в крови клетки эритро-
идного ряда быстрее проходят стадии дифференцировки, большинство
эритроцитов приобретают правильные морфологические очертания,
нарастает количество защитных лейкоцитов, нормобласты переходят в
оксифильные и полихроматофильные стадии. Иммунно-кроветворные
органы: печень, почки и селезенка приобретают выраженные
морфологические структуры. Под влиянием ронколейкина в организме
опытных рыб были мобилизованы клеточные и гуморальные звенья
защиты иммунитета, стимулирован гемопоэз и активизированы
обменные процессы.
Наилучшие результаты были получены при помещении рыб в ванне
с ронколейкином, после чего их средний вес к концу опыта значительно
превышал таковое у рыб контрольной группы. У опытных рыб увеличи-
вается суточные привесы, значительно возрастают абсолютные и
относительные привесы рыб. Массовая обработка рыб ронколейкином в
ванне является простым и дешевым способом.
Применение ронколейкина во внутрь перорально, на дают
преимущественного развития по сравнению с контрольными рыбами.
Однако, данные рыбы на протяжении всего периода опыта, остаются
подвижными, бодрыми, здоровыми и не подвергаются заболеваниям,
что также надо относить преимуществу ронколейкина.
Использование препарата ронколейкина имеет значительное
положительное влияние на рост и развитие молоди осетровых рыб при
использовании бассейновой технологии выращивания. Ронколейкин
стимулирует ускоренный рост и развитие выращиваемой молоди рыб,
быстрый рост отстающей в развитии и ослабленной молоди рыб,
ускоряет гемопоэз, исключает заболеваемость и гибель рыб, способст-
вует раннему становлению, дифференцировки и развитию органов
иммуногенеза и других органов и тканей организма и значительно
улучшает иммунное состояние организма рыб.
Наибольшую эффективность препарат оказывает в дозах 100, 200,
300 и 500 МЕ на 1 г живого веса рыб. Применение препарата в ванне с
водой для повышения жизнестойкости выпускаемых в естественные
21

22.
водоемы осетровых рыб, имеет возможность, стать в будущем,
промышленным методом обработки рыб большими партиями.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. Kolman R. Wyniki intensywnego chowu wylęgu i narybku bestera w
warunkach zamkniętego obiegu wody. Kom. Ryb. 1993. - № 5. - C. 10-13.
2. Kolman H., A.K. Siwicki, R. Kolman. The effect of natural
immunomodulators applied in immersion on non-specific immune responses
in Russian sturgeon (Acipenser gueldenstaedti Brandt). Arch. Ryb. Pol. 1998.
– Vol. 6. - № 2.- C. 391-410.
3. Кольман Г. Влияние 24-эпибрассинолида на микроскопический
образ клеток крови у русского осетра (Acipenser gueldenstaedti Br.) /
Г.Кольман, Р.Кольман, М.Михаляк // Инновации в науке и образовании -
2005: научная конф. (19-21 окт. 2005 г.): труды / КГТУ. – Калининград,
2005. - C. 84-85.
4. Сыч Г. О., Гаврилова И. П., Рудь Ю. П., Бучацкий Л. П.
Ронколейкин – перспективный препарат для использования в рыбной
отрасли. ФГУП НПЦ по осетроводству «БИОС». Материалы второй
Международной конференции по проблемам патологии, иммунологии и
охраны здоровья рыб и других гидробионтов (в печати), 8 с.
5. Касаева С.Ю., Судакова Н.В., Савенкова Е.Н. Влияние
рекомбинантного интерлейкина-2 (rIL-2) на показатели белой крови
производителей стерляди после хирургического вмешательства. ФГУП
НПЦ по осетроводству «БИОС». Материалы второй Международной
конференции по проблемам патологии, иммунологии и охраны здоровья
рыб и других гидробионтов (в печати), с.1.
6. Кудрявцев А. А., Кудрявцева Л. А. Клиническая гематология
животных. М. 1974, С. 69-70.
7 Н.Т. Иванова «Атлас клеток крови рыб» Москва «Легкая и пищевая
промышленность» 1983 г. 83 с.
8 Б. Ромейс «Фиксация гистологических препаратов», Микроскопическая
техника, М. 1953. С. 48 – 79.
9 С.М. Шалгимбаева, С.С. Кобегенова. К.А. Нуршин «Микротехника
негіздері» Алматы 2007. 58 с.
10. Островский М. В., Моисеев А. Н., Сахарова Е. Д. «Ронколейкин®:
методические рекомендации для ветеринарных врачей», ООО «Биотех»,
Санкт-Петербург, 2009.с. 19
11. К. А. Нуршин канд. вет. наук, доцент, К. К. Бекмухамбетов
«Использование ронколейкина для повышения иммунитета осетровых
рыб». Материалы Междунаролной научно-практической конференции.
Научное обеспечение развития агропромышленного комплекса стран
таможенного союза. Астана, 2010, с. 407-412
22

23. для заметок

24. для заметок