ISO 15189 Accreditation - Genetic testing in Hematological neoplasms Georgia Bardi
How to prepare your lab to get accreditation for cytogenetic and molecular genetic tests used in Hematolog
Presented by Georgia Bardi, PhD, in Greek. Volos 2014, Hellenic Society of Hematology, working group on quality issues,
Data produced by Georgia Bardi, Theoni Trangas and Despina Iakovaki
Παρουσίαση από τον Δρ Γεώργιο Τσοκτουρίδη με θέμα "Εργαστήριο Προστασίας και Αξιοποίησης Αυτοφυών και Ανθοκομικών Ειδών" που έδωσε την Ημερίδα για τα Αρωματικά και Φαρμακευτικά Φυτά. Η διάλεξη έγινε στο Ινστιτούτο Γεωργικών Ερευνών στη Λευκωσία, την Τετάρτη 4 Φεβρουαρίου 2015.
Ιστομηχανική – Αναγεννητική Ιατρική, η τεχνολογία του μέλλοντοςNikos Papachristou
Η παρακάτω παρουσίαση έγινε στα πλαίσια των μαθημάτων του Μεταπτυχιακού Προγράμματος Σπουδών Ειδίκευσης στη Χειρουργική Ήπατος-Χοληφόρων-Παγκρέατος που οργανώνει η Β’ Πανεπιστημιακή Χειρουργική Κλινική της Ιατρικής Σχολής του Δημοκρήτιου Πανεπιστημίου Θράκης.
ISO 15189 Accreditation - Genetic testing in Hematological neoplasms Georgia Bardi
How to prepare your lab to get accreditation for cytogenetic and molecular genetic tests used in Hematolog
Presented by Georgia Bardi, PhD, in Greek. Volos 2014, Hellenic Society of Hematology, working group on quality issues,
Data produced by Georgia Bardi, Theoni Trangas and Despina Iakovaki
Παρουσίαση από τον Δρ Γεώργιο Τσοκτουρίδη με θέμα "Εργαστήριο Προστασίας και Αξιοποίησης Αυτοφυών και Ανθοκομικών Ειδών" που έδωσε την Ημερίδα για τα Αρωματικά και Φαρμακευτικά Φυτά. Η διάλεξη έγινε στο Ινστιτούτο Γεωργικών Ερευνών στη Λευκωσία, την Τετάρτη 4 Φεβρουαρίου 2015.
Ιστομηχανική – Αναγεννητική Ιατρική, η τεχνολογία του μέλλοντοςNikos Papachristou
Η παρακάτω παρουσίαση έγινε στα πλαίσια των μαθημάτων του Μεταπτυχιακού Προγράμματος Σπουδών Ειδίκευσης στη Χειρουργική Ήπατος-Χοληφόρων-Παγκρέατος που οργανώνει η Β’ Πανεπιστημιακή Χειρουργική Κλινική της Ιατρικής Σχολής του Δημοκρήτιου Πανεπιστημίου Θράκης.
El documento describe varias opciones para que una empresa realice exportaciones, incluyendo tener una subsidiaria comercial en el mercado extranjero, exportación concertada utilizando la red de ventas de otra compañía, consorcios de exportación con otras empresas, y franquicias internacionales o alianzas estratégicas con empresas locales. Cada opción presenta ventajas y desventajas dependiendo del tamaño de la empresa, volumen de ventas, y necesidad de inversión y control sobre las operaciones en el extranjero.
Nasir Hameed is seeking a position that utilizes his communication, time management, planning and coordinating skills. He has a Bachelor's degree in Science from the University of Punjab in Lahore, Pakistan. He has over 5 years of experience in sales roles for Etisalat UAE, DU Telecom UAE, and Pepsi Cola in Lahore. He is proficient in Microsoft Office, Oracle software, and other systems.
La película muestra la historia de un hombre adinerado, Jason, que aprende a valorar lo realmente importante en la vida, como la amistad y el trabajo duro, después de enfrentar varias pruebas establecidas por su abuelo para heredar su fortuna, incluyendo trabajar para ganarse la vida y enfrentar problemas. Jason conoce a una niña enferma que le enseña a apreciar cada momento de la vida.
This document provides information on various SEO, SMO, link building, and PPC packages and services offered by iBOT Solutions based in Cochin, Kerala, India. It outlines the key activities included in each package such as keyword research, on-page optimization, link building, social media engagement. It also lists career opportunities and contact details.
El documento describe el proceso penal en México de acuerdo con el Código Nacional de Procedimientos Penales. Explica las etapas iniciales como la denuncia, la investigación y la audiencia inicial con detenido. También cubre la etapa intermedia con la acusación formal, la audiencia intermedia y la apertura del juicio oral. Por último, resume los principios procesales como la presunción de inocencia y el debido proceso legal.
Developing an effective local quality improvement programmeCarl Walker
Carl Walker, the chair of the National Quality Improvement and Clinical Audit Network (NQICAN), gave a presentation on developing an effective quality improvement program. He discussed that quality improvement aims to improve patient outcomes and experiences by changing provider behaviors and organizations through systematic methods. Effective programs have strategies, structures and systems to support quality improvement, a culture of collaboration and learning, and technical support like training. Clinical audits can be used for assurance of standards, identifying areas for improvement, and research. Measuring improvement requires tracking outcome, process and balancing measures over time rather than single spot check audits.
The State Hermitage in Saint Petersburg, Russia is one of the largest and oldest museums in the world. Founded in 1764 by Catherine the Great, it has been open to the public since 1852 and houses a collection of art and culture. A Kremlin is a major fortified complex found in historic Russian cities, often referring to the most famous one in Moscow that also houses the government. GUM was the name for main department stores in Soviet cities, known as State Department Stores during Soviet times.
En esta presentacion podras estudiar como realizar un pronostico con series de tiempo que tienen un componente de tendencia.
los metodos que se utilizaran para hacer este pronostico son: ajuste de linea, curva exponencial, curva potencial y suavizacion exponencial de holt.
El documento proporciona orientación sobre cómo realizar una investigación académica. Explica que el título debe ser claro y preciso para identificar el contenido. Además, describe las diferentes secciones de un informe de investigación como la introducción, metodología, presentación de resultados, discusión y conclusiones. Finalmente, enfatiza la importancia de redactar de manera clara, sencilla y coherente.
Presented by Dr.Nial Ferguson at Pulmonary Medicine Update Course held at Cairo, Egypt. Pulmonary Medicine Update Course is the leading Pulmonary Critical Care event in Egypt. Organized by Scribe www.scribeofegypt.com
Solar street Lights
Most solar panels turn on and turn off automatically by sensing outdoor light using a light source.Solar streetlights are designed to work throughout the night. Many can stay lit for more than one night if the sun is not available for a couple of days. Older models included lamps that were not fluorescent or LED. Solar lights installed in windy regions are generally equipped with flat panels to better cope with the winds.
Stereotypes are oversimplified ideas about groups that are usually wrong. Stereotypes form the basis of discrimination and help inequality grow, especially against minorities. Mass media helps spread and normalize stereotypes. In media, women are often portrayed as weak and in need of saving by men. Racial stereotypes commonly depict Black people as violent, Asians as martial artists or cheap labor, and Latin people as domestic workers. Ethnic stereotypes sometimes show Jewish people as rich and greedy or Arabs as terrorists. Overall, the document discusses how mass media frequently relies on and promotes harmful stereotypes.
Este documento presenta un checklist de 36 ítems para verificar el cumplimiento de las normas eléctricas en declaraciones de instalaciones eléctricas interiores. El checklist verifica aspectos como los antecedentes del formulario, los planos presentados, la instalación eléctrica en terreno, y el empalme con la red eléctrica.
The document discusses energy conservation and reducing carbon footprints. It notes that current fuel reserves will be depleted within 75 years if consumption continues at the current rate. Some tips provided to reduce carbon footprints include switching off lights when not needed and replacing light bulbs with more efficient options. The document advocates for utilizing renewable energy sources like solar power and provides an example of financial savings from installing solar panels for water heating. It encourages individuals to conduct energy audits and adopt more efficient behaviors and technologies to conserve energy and reduce emissions.
Sociological review annual lecture: Dr Imogen Tyler Alex Dunedin
shared via the Ragged University after getting permission from the journal and the speaker.
The content of the talk is to unpack the problems surround the portrayal of poverty and disembodiment of the term class from discourse. Starting with an analysis of popularly dubbed 'poverty porn' she then spends time rooting down into what language is used in reportage and what concepts are helpful to deconstruct the Neoliberal cultural shifts we are seeing today.
El documento describe varias opciones para que una empresa realice exportaciones, incluyendo tener una subsidiaria comercial en el mercado extranjero, exportación concertada utilizando la red de ventas de otra compañía, consorcios de exportación con otras empresas, y franquicias internacionales o alianzas estratégicas con empresas locales. Cada opción presenta ventajas y desventajas dependiendo del tamaño de la empresa, volumen de ventas, y necesidad de inversión y control sobre las operaciones en el extranjero.
Nasir Hameed is seeking a position that utilizes his communication, time management, planning and coordinating skills. He has a Bachelor's degree in Science from the University of Punjab in Lahore, Pakistan. He has over 5 years of experience in sales roles for Etisalat UAE, DU Telecom UAE, and Pepsi Cola in Lahore. He is proficient in Microsoft Office, Oracle software, and other systems.
La película muestra la historia de un hombre adinerado, Jason, que aprende a valorar lo realmente importante en la vida, como la amistad y el trabajo duro, después de enfrentar varias pruebas establecidas por su abuelo para heredar su fortuna, incluyendo trabajar para ganarse la vida y enfrentar problemas. Jason conoce a una niña enferma que le enseña a apreciar cada momento de la vida.
This document provides information on various SEO, SMO, link building, and PPC packages and services offered by iBOT Solutions based in Cochin, Kerala, India. It outlines the key activities included in each package such as keyword research, on-page optimization, link building, social media engagement. It also lists career opportunities and contact details.
El documento describe el proceso penal en México de acuerdo con el Código Nacional de Procedimientos Penales. Explica las etapas iniciales como la denuncia, la investigación y la audiencia inicial con detenido. También cubre la etapa intermedia con la acusación formal, la audiencia intermedia y la apertura del juicio oral. Por último, resume los principios procesales como la presunción de inocencia y el debido proceso legal.
Developing an effective local quality improvement programmeCarl Walker
Carl Walker, the chair of the National Quality Improvement and Clinical Audit Network (NQICAN), gave a presentation on developing an effective quality improvement program. He discussed that quality improvement aims to improve patient outcomes and experiences by changing provider behaviors and organizations through systematic methods. Effective programs have strategies, structures and systems to support quality improvement, a culture of collaboration and learning, and technical support like training. Clinical audits can be used for assurance of standards, identifying areas for improvement, and research. Measuring improvement requires tracking outcome, process and balancing measures over time rather than single spot check audits.
The State Hermitage in Saint Petersburg, Russia is one of the largest and oldest museums in the world. Founded in 1764 by Catherine the Great, it has been open to the public since 1852 and houses a collection of art and culture. A Kremlin is a major fortified complex found in historic Russian cities, often referring to the most famous one in Moscow that also houses the government. GUM was the name for main department stores in Soviet cities, known as State Department Stores during Soviet times.
En esta presentacion podras estudiar como realizar un pronostico con series de tiempo que tienen un componente de tendencia.
los metodos que se utilizaran para hacer este pronostico son: ajuste de linea, curva exponencial, curva potencial y suavizacion exponencial de holt.
El documento proporciona orientación sobre cómo realizar una investigación académica. Explica que el título debe ser claro y preciso para identificar el contenido. Además, describe las diferentes secciones de un informe de investigación como la introducción, metodología, presentación de resultados, discusión y conclusiones. Finalmente, enfatiza la importancia de redactar de manera clara, sencilla y coherente.
Presented by Dr.Nial Ferguson at Pulmonary Medicine Update Course held at Cairo, Egypt. Pulmonary Medicine Update Course is the leading Pulmonary Critical Care event in Egypt. Organized by Scribe www.scribeofegypt.com
Solar street Lights
Most solar panels turn on and turn off automatically by sensing outdoor light using a light source.Solar streetlights are designed to work throughout the night. Many can stay lit for more than one night if the sun is not available for a couple of days. Older models included lamps that were not fluorescent or LED. Solar lights installed in windy regions are generally equipped with flat panels to better cope with the winds.
Stereotypes are oversimplified ideas about groups that are usually wrong. Stereotypes form the basis of discrimination and help inequality grow, especially against minorities. Mass media helps spread and normalize stereotypes. In media, women are often portrayed as weak and in need of saving by men. Racial stereotypes commonly depict Black people as violent, Asians as martial artists or cheap labor, and Latin people as domestic workers. Ethnic stereotypes sometimes show Jewish people as rich and greedy or Arabs as terrorists. Overall, the document discusses how mass media frequently relies on and promotes harmful stereotypes.
Este documento presenta un checklist de 36 ítems para verificar el cumplimiento de las normas eléctricas en declaraciones de instalaciones eléctricas interiores. El checklist verifica aspectos como los antecedentes del formulario, los planos presentados, la instalación eléctrica en terreno, y el empalme con la red eléctrica.
The document discusses energy conservation and reducing carbon footprints. It notes that current fuel reserves will be depleted within 75 years if consumption continues at the current rate. Some tips provided to reduce carbon footprints include switching off lights when not needed and replacing light bulbs with more efficient options. The document advocates for utilizing renewable energy sources like solar power and provides an example of financial savings from installing solar panels for water heating. It encourages individuals to conduct energy audits and adopt more efficient behaviors and technologies to conserve energy and reduce emissions.
Sociological review annual lecture: Dr Imogen Tyler Alex Dunedin
shared via the Ragged University after getting permission from the journal and the speaker.
The content of the talk is to unpack the problems surround the portrayal of poverty and disembodiment of the term class from discourse. Starting with an analysis of popularly dubbed 'poverty porn' she then spends time rooting down into what language is used in reportage and what concepts are helpful to deconstruct the Neoliberal cultural shifts we are seeing today.
Προσδιορισμός υπολειμμάτων των φυτοπροστατευτικών προϊόντων σε αγροτικά προϊό...Margarita Dima
A trend in the field of pesticide residue analysis is the implementation of easy, robust, cheap and multiresidue analytical methods. The recent advances of analytical instrumentation, offers new tools for the reliable and more accurate determination of unknown analytes in a variety of complex matrices like fruits and vegetables.
Under the current work a multiresidue analytical method, based on the extraction method QuEChERS, a short extraction procedure without complex equipment, low consumption of consumables and appropriate isolation of pesticide residues of different chemical classes was developed and validated. The identification and quantification of the analytes was performed using liquid chromatography coupled with mass spectrometry time of flight (LC-TOF), a relatively new technique in the field of pesticide residue, mostly applied for a screening method. The method was successfully validated in three matrices (cauliflower, mandarin and peach), representative commodities of the group of plant commodities with high water and high acid content, for 163 analytes of different chemical groups. Accuracy, precision, linearity and matrix effect were investigated.
The majority of analysts showed acceptable linearity with r ≥ 0,99, accuracy with 70-120% recovery rates and precision with SDR ≤ 20%. The limit of quantification was set at 0.01 mg / kg. Thus the method was found suitable for the determination of multiclass pesticide residues in cauliflower, peach and mandarins.
1. ΓΕΩΠΟΝΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΑΘΗΝΩΝ
ΤΜΗΜΑ ΖΩΙΚΗΣ ΠΑΡΑΓΩΓΗΣ ΚΑΙ ΥΔΑΤΟΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΩΝ
ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΜΕΤΑΠΤΥΧΙΑΚΩΝ ΣΠΟΥΔΩΝ:
«ΔΙΑΧΕΙΡΙΣΗ ΠΑΡΑΓΩΓΙΚΩΝ ΖΩΩΝ ΚΑΙ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΠΡΟΪΟΝΤΩΝ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ»
ΠΟΛΥΜΟΡΦΙΣΜΟΣ ΤΟΥ ΓΟΝΙΔΙΟΥ
DRB1 ΣΤΗΝ ΦΥΛΗ ΑΡΓΟΥΣ ΚΑΙ
ΣΤΗΝ ΚΟΚΟΒΙΤΙΚΗ ΦΥΛΗ
ΠΡΟΒΑΤΩΝ ΚΑΙ ΣΥΣΧΕΤΙΣΗ ΜΕ
ΠΑΡΑΣΙΤΟΛΟΓΙΚΕΣ ΠΑΡΑΜΕΤΡΟΥΣ
ΚΥΡΙΑΖΟΠΟΥΛΟΥ ΠΑΝΩΡΑΙΑ
2. Μείζον Σύστημα Ιστοσυμβατότητας (MHC-Major
Histocompatibility Complex)
To Ovar-MHC αποτελεί το Μείζον Σύστημα
Ιστοσυμβατότητας των προβάτων και είναι ιδιαίτερα
πολυμορφικός γονιδιακός τόπος .
Το γονίδιο Ovar-DRB1 στο εξόνιο 2, ανήκει στα
γονίδια τάξεως II και κωδικοποιεί μακρομόρια στον Τ-
κυτταρικό υποδοχέα (TCR) των CD4+ Τ-κυττάρων.
Τα μακρομόρια αυτά είναι εξειδικευμένα στην
έκθεση αντιγονικών πεπτιδίων που προέρχονται κατά
κύριο λόγο από εξωκυτταρικές πρωτεΐνες και
παράσιτα.
περιοχή
δέσμευσης
πεπτιδίου
(PBR)
3. Μελετηθέντα γονίδια
Ovar-DRA
Η πιο πολυμορφική περιοχή των γονιδίων MHC
είναι η περιοχή των DR-. Το γονίδιο DRA δεν
εμφανίζει ιδιαίτερα μεγάλο πολυμορφισμό.
Ovar-DRB
Τα γονίδια DRB υπάρχουν σε πολλαπλά
αντίγραφα, κάποια εκ των οποίων έχουν
λειτουργικό ρόλο,ενώ άλλα είναι μη λειτουργικά.
Το DRB γονίδιο που μελετάται στην παρούσα
εργασία είναι το DRB1.
4. Σκοπός
Η ποικιλότητα και ο πολυμορφισμός του γονιδίου
Ovar-DRB1 έχει μελετηθεί μόνο στις Ελληνικές
φυλές Άρτας, Χίου, Καλαρρύτικο και Κοζάνης.
Σκοπός της μελέτης ήταν η ταυτοποίηση των
αλληλομόρφων Ovar-DRB1 δύο σπάνιων
Ελληνικών φυλών: Άργους και Κοκοβίτικη και
πιθανή συσχέτισή τους με ανθεκτικότητα σε
παρασιτώσεις.
6. Υλικά και Μέθοδοι
Φυλές: Άργους, Κοκοβίτικη
Δείγματα αίματος και κοπράνων από 50 ζώα
Άργους και 45 Κοκοβίτικα.
Καταμέτρηση των αναπαραγωγικών στοιχείων των
παρασίτων (Μέθοδος McMaster)
Προσδιορισμός τιμών πεψινογόνου στο πλάσμα
(προσαρμογή της μεθόδου Hirschowitz)
7. Υλικά και Μέθοδοι
Απομόνωση γενωμικού DNA.
Οι εκκινητές που χρησιμοποιήθηκαν για γονοτύπηση μέσω
αλληλούχησης ήταν οι 455/329.
PCR cycling profile:
1 κύκλος 5 min, 94o C,
35 κύκλοι 30 s 94°C,
30 s 60°C,
30 s 72°C
Ακολουθούμενοι από 4 min ,72°C.
Ovar-DRB1 Exon 2Intron 1 Intron 2
Repetitive
Elements
286 275 Ov30
329 313
270 bp
33 bp
51 bp
9
256
201
268
330
340 339
455
8. Υλικά και Μέθοδοι
Τα δείγματα ταξινομήθηκαν σε ομάδες υψηλού και
χαμηλού παρασιτικού φορτίου -FEC (αυγά/ g- EPG).
Γονοτυπήθηκαν:
ΦΥΛΗ ΑΡΙΘΜΟΣ ΖΩΩΝ
ΜΕ ΥΨΗΛΟ FEC
ΑΡΙΘΜΟΣ ΖΩΩΝ
ΜΕ ΜΕΣΑΙΕΣ
ΤΙΜΕΣ FEC
ΑΡΙΘΜΟΣ ΖΩΩΝ
ΜΕ ΧΑΜΗΛΟ
FEC
Κοκοβίτικα 14
FEC>400
12
FEC<100
Άργους 14
FEC>1300
3
100>FEC>1300
13
FEC<100
9. Υλικά και Μέθοδοι
Η αποτελεσματικότητα της PCR ελέγχθηκε με
ανάλυση 10 µl του προϊόντος της αντίδρασης
σε πήκτωμα αγαρόζης, 1%.
Καθαρισμός του προϊόντος της PCR για
απομάκρυνση υπολειμμάτων νουκλεοτιδίων
και εκκινητών, αραίωση και αποστολή για
sequencing δύο κατευθύνσεων (bi-directional)
με χρήση των εκκινητών 455 και 329.
10. Υλικά και Μέθοδοι
Ταυτοποίηση του Ovar-DRB1 μέσω BLAST και
αναζήτηση στην Τράπεζα Δεδομένων IPD για τα
Ovar-DRB1 γονίδια χρησιμοποιώντας την
συντετμημένη και διορθωμένη αλληλουχία.
11. Υλικά και Μέθοδοι
Ανάλυση και στοίχιση - πρόγραμμα SeqMan (DNASTAR
package).
Εισάγοντας την πρόσθια και οπίσθια αλληλουχία
δημιουργήθηκαν contigs . Οι θέσεις στις οποίες
υπήρχαν διπλές κορυφές, χαρακτηρίζονται θέσεις
αμφισημίας και σημείωνονται ώστε να χαρακτηριστούν
με βάση τον κώδικα ονοματολογίας του International
Union of Biochemistry (IUB )
A: Αδενίνη , C:Κυτοσίνη ,G:Γουανίνη ,T: Θυμίνη , U:
Ουρακίλη
M A ή C
R A ή G
W A ή T
S C ή G
Y C ή T
K G ή T
Primers 330-313
Primers 455-329
Primers 330-329
12. Νέο Αλληλόμορφο
Σε ένα δείγμα της φυλής Άργους, δεν
ταυτοποιήθηκε αλληλουχία που να ταιριάζει
απόλυτα με την ευρεθείσα από την τράπεζα
δεδομένων ανοσοπολυμορφισμού, γεγονός που
καταδεικνύει την παρουσία ενός νέου
αλληλομόρφου.
Η χρήση των εκκινητών 330/313, δεν οδήγησε σε
ενίσχυση της αλληλουχίας.
Ovar-DRB1 Exon 2Intron 1 Intron 2
Repetitive
Elements
286 275 Ov30
329 313
270 bp
33 bp
51 bp
9
256
201
268
330
340 339
455
13. Νέο Αλληλόμορφο
Δοκιμάστηκαν διάφορα ζεύγη εκκινητών (330/329,
330/268, 275/313, 275/268) , αλλά μόνο ένα
οδήγησε σε ενίσχυση του νέου αλληλομόρφου
(330/329).
Ολοκλήρωση του 5’ άκρου: Χρήση τεσσάρων
κλώνων για την επικύρωση της ατελούς
αλληλουχίας του νέου αλληλομόρφου.
Ovar-DRB1 Exon 2Intron 1 Intron 2
Repetitive
Elements
286 275 Ov30
Ov32 329 313
270 bp
33 bp
51 bp
9
256
201
268
330
340 339
455
14. Νέο Αλληλόμορφο
Ολοκλήρωση του άκρου 3’ :
Δημιουργία ενός νέου εκκινητή , ειδικού ως προς το νέο
αλληλόμορφο (462).
o Nested –PCR
Πρώτη φάση : Εκκινητές 455/201
(Επέκταση : 55ο C 30 κύκλοι
Δεύτερη φάση: Χρήση 2 μ l 1ης φάσης, Εκκινητές 462/201
(Επέκταση: 60ο C 35 κύκλοι). Για την επικύρωση της
αλληλουχίας το τεμάχιο αυτό κλωνοποιήθηκε σε T-
vector με σκοπό την αλληλούχησή του.
Αλληλουχία -462: 5’-CGGGCCGAGGTGGACACGGTG -3’
Ovar-DRB1 Exon 2Intron 1 Intron 2
Repetitive
Elements
286 275 Ov30
Ov32 329 313
270 bp
33 bp
51 bp
9
256
201
268
330
462 339
455
19. Αποτελέσματα Γονοτύπησης
ΓΟΝΟΤΥΠΟΙ: Για την φυλή Άργους: 23
Για την Κοκοβίτικη φυλή: 19
ΚΟΙΝΟΙ ΓΟΝΟΤΥΠΟΙ:
DRB1*0806-DRB1*0806
DRB1*0806- DRB1*0702
DRB1*0806-DRB1*1301
DRB1*1001- DRB1*1001
DRB1*0105-DRB1*1606
20. Αποτελέσματα Γονοτύπησης
ΟΜΟΖΥΓΩΤΟΙ ΤΥΠΟΙ:
DRB1*0806- DRB1*0806,
DRB1*1001- DRB1*1001,
DRB1*0311- DRB1*0311
ΓΟΝΟΤΥΠΟΙ ΜΕ ΤΗΝ ΜΕΓΑΛΥΤΕΡΗ ΣΥΧΝΟΤΗΤΑ :
DRB1*0806- DRB1*1001 (4 ζώα στα 56~0,071)
DRB1*0806- DRB1*0806 (3 ζώα στα 56~0,053)
DRB1*0806- DRB1*1606 (3 ζώα στα 56~0,053)
DRB1*1001- DRB1*1001 (3 ζώα στα 56~0,053)
DRB1*1001- DRB1*2003 (3 ζώα στα 56~0,053)
21. Αποτελέσματα Παρασιτολογικού Ελέγχου
Θετικά σε παράσιτα:
91,2% του συνόλου των ζώων
92% των ζώων της φυλής Άργους
90,2% των ζώων της Κοκοβίτικης φυλής
Είδη Παρασίτων:
Άργους: Στρογγυλοειδή, Eimeria spp,
Strongyloides papillosus
Κοκοβίτικη: Eimeria spp, Στρογγυλοειδή,
Strongyloides papillosus, Moniezia expansa,
Nematodirus filicollis
Eimeria spp (Coccidia) Strongyle type egg Nematodirus filicollis Strongyloides papillosus
Moniezia expansa
22. Αποτελέσματα Παρασιτολογικού Ελέγχου
28 ζώα με
FEC> 500 EPG,
Max EPG= 4.000
6 ζώα με mI.U> 375
μονάδες τυροσίνης
Max τιμή: 691 mI.U
12 ζώα με
FEC> 500 EPG,
Max EPG= 13.000
16 ζώα με mI.U> 375
μονάδες τυροσίνης
Max τιμή:
11.030 mI.U
Άργους: Κοκοβίτικη:
23. Αποτελέσματα Στατιστικού Ελέγχου
Δεν υπήρξε συσχέτιση FEC-Πεψινογόνου
(P=0,562>0,05).
Δεν υπήρξε συσχέτιση μεταξύ του είδους
παρασίτου και τα επίπεδα πεψινογόνου στο
πλάσμα (P=0,074>0,05).
Ο παράγοντας «φυλή» δεν επηρεάζει το είδος
παρασιτικής μόλυνσης.
26. Σημαντικότητα Νέου Αλληλομόρφου
Το νέο αλληλόμορφο που βρέθηκε στα πρόβατα
της φυλής Άργους, έχει ιδιαίτερη σημασία
καθώς εμφανίζει σημαντική διαφοροποίηση,
έχοντας 7 νέες πολυμορφικές θέσεις, που δεν
έχουν εντοπιστεί μέχρι στιγμής σε άλλα DRB1
αλληλόμορφα στην IPD-MHC τράπεζα.
Αντιπροσωπεύει μια νέα οικογένεια
αλληλομόρφων (DRB1*2601).DRB1*1001
DRB1*2601
DRB1*1001
DRB1*2601
DRB1*1001
DRB1*2601
DRB1*1001
DRB1*2601
27. Σημαντικότητα Νέου Αλληλομόρφου
Μεγάλη συγγένεια με αλληλόμορφα που έχουν
βρεθεί στα άγρια πρόβατα (Ovis canadensis) της
Βορείου Αμερικής.
Παρόμοια αλληλόμορφα σε φυλές προβάτων στην
Κίνα (φυλή Kazak).
28. DRA γονίδιο
Τα γονίδια της Τάξης-ΙΙ εμφανίζονται σε ζεύγη ‘a’
και‘b’ καθώς το μόριο αποτελεί ετεροδιμερές.
Στα σπονδυλόζωα, το γονίδιο DRA της Τάξης ΙΙ
του MHC είναι υψηλά συντηρημένο και εμφανίζει
πολύ περιορισμένο πολυμορφισμό.
Ovar-DRB1*0901: σχετίστηκε με σπάνιο
πολυμορφισμό στην περιοχή DRA (DRA*201) στα
κατοικίδια πρόβατα.
29. DRA γονίδιο
DRB1*2601: Σημαντική διαφοροποίηση, σκόπιμο
να ελεγχθεί εάν σχετίζεται με κάποιο καινούργιο
πολυμορφισμό στην περιοχή DRA.
Τα ζώα που μελετήθηκαν βρέθηκαν πολυμορφικά
για την θέση του DRA, με αλληλόμορφα τα
DRA*0101 και DRA*0102.
Το αλληλόμορφο DRA*0102 βρίσκεται συχνά στις
αίγες και στα Άγρια πρόβατα της Βορείου
Αμερικής (Bighorn Sheep).
30. Μελλοντική Μελέτη
Διερεύνηση ανοσολογικών επιδράσεων των
αλληλομόρφων σε παραγωγικά χαρακτηριστικά.
Διερεύνηση της σχέσης των αλληλομόρφων αυτών
με ανθεκτικότητα σε ασθένειες.
Δημιουργία προγραμμάτων επιλογής με κριτήριο
επιθυμητούς γονότυπους.
Διερεύνηση της προέλευσης των ελληνικών
παχύουρων προβάτων και της σχέσης τους με
ασιατικές φυλές και άγρια είδη προβάτων.
Το σύμπλοκο αυτό παρουσιάζει μεγάλο ενδιαφέρον λόγω της έντονης παραλλακτικότητας και του βαθμού πολυμορφισμού των γονιδίων που εμφανίζονται στο
Σε αυτήν την περιοχή, τα γονίδια της Τάξεως II του MHC, κωδικοποιούν γλυκοπρωτεΐνες που προσδένουν και παρουσιάζουν πεπτιδικά τεμάχια παθογόνων στα κυκλοφορούντα βοηθητικά CD4+ T κύτταρα (Fremont et al., 1996).
Κατά συνέπεια είναι λογικό η μελέτη των αλληλομόρφων του συγκεκριμένου γονιδίου να στοχεύει σε συσχετίσεις με παρασιτολογικές παραμέτρους αλλά και στην εύρεση και ταυτοποίηση νέων αλληλομόρφων στις ελληνικές φυλές, που θα καταχωρηθούν σε διεθνείς τράπεζες δεδομένων και θα συμβάλλουν μελλοντικά σε ευκολότερη γονοτύπηση
Το σύμπλεγμα του MHC περιλαμβάνει:
κλασικά γονίδια τα DY DP, DM, DO, DQ, και DR.
Μη κλασικά γονίδια: LMP, TAP και TAPBP.
Σε κάθε set κλασικών γονιδίων, τα γονίδια της α-αλυσίδας χαρακτηρίζονται ως A, ενώ τα γονίδια της β-αλυσίδας καλούνται B. Τα γονίδια των α- και β-αλυσίδων σε κάθε set βρίσκονται πολύ κοντά και μοιάζουν με μια μονάδα διπλασιασμού 2 γονιδίων.together and resemble a two-gene duplication unit.
Δεν περιέχουν όλα τα set γονίδια και για τις 2 αλυσίδες, παρ’ ότι κάποια εμπεριέχουν πολλά ψευδογονίδια (Tizard, 2004).
(Ballingall and Tassi, 2010, αδημοσίευτες πληροφορίες).
Η αποτελεσματικότητα της PCR ελέγχθηκε με ανάλυση 10 µl του προϊόντος της αντίδρασης σε πήκτωμα αγαρόζης, 1%.
Καθαρισμός για απομάκρυνση υπολειμμάτων νουκλεοτιδίων και εκκινητών, αραίωση και αποστολή για sequencing δύο κατευθύνσεων (bidirectional ) με χρήση των εκκινητών 455 και 329.
(Basic Local Alignment Search Tool-
Τα αποτελέσματα της αλληλούχισης αναλύθηκαν και στοιχήθηκαν χρησιμοποιώντας το πρόγραμμα SeqMan (DNASTAR package).
Εισάγοντας την πρόσθια και οπίσθια αλληλουχία δημιουργήθηκαν contigs. Οι θέσεις στις οποίες υπήρχαν διπλές κορυφές είναι οι θέσεις εμφάνισης πολυμορφισμού και σημειώθηκαν ώστε να χαρακτηριστούν με βάση τον κώδικα ονοματολογίας του International Union of Biochemistry (IUB)
A: Αδενίνη, C:Κυτοσίνη ,G:Γουανίνη ,T: Θυμίνη , U: Ουρακίλη
M A ή C
R A ή G
W A ή T
S C ή G
Y C ή T
K G ή T
When both alleles making up the composite sequence have been inserted in the IPD database, the ones with the highest scores in the BLAST alignment table are the alleles in question.
Σε μια περίπτωση, για δείγμα της φυλής Άργους, η Τράπεζα Δεδομένων Ανοσοπολυμορφισμού (Immuno-polymorphism database -IPD) δεν ταυτοποίησε αλληλουχία να ταιριάζει απόλυτα με την ευρεθείσα, γεγονός που καταδείκνυε την παρουσία ενός νέου αλληλομόρφου.
Η χρήση των εκκινητών 330/313, (Ballingall and Tassi, 2010) δεν οδήγησε σε ενίσχυση της αλληλουχίας.
These primers are usually used in order to validate new alleles and provide the complete exon-2 sequence for submission to the IPD database. After checking the efficiency of the PCR once again and the clean-up process, the samples were once more sent for sequencing. The results of the sequencing reads showed that these two primers did not amplify the new allele.
The PCR product from a second PCR, using primers 330/329,
I have managed to obtain the complete sequence (330/201) of the new allele from Argos 28. For your presentation the 3-prime end was amplified by designing a forward primer at will only amplify the new allele (allele specific) and not *1001. This was done by aligning the new sequence with *1001 and finding a position where the last three bases of the primer are unique to the new allele. The sequence of the primer 462 is CGGGCCGAGGTGGACACGGTG.
Using a nested approach with a first round with primers 455 and 201, annealing temp 55oC, 30cycles, and 2ul of this into the second round with the new primer and 201, 60oC annealing temp X 35 cycles.
This amplified very well see picture. Gel clean up and direct sequence of the PCR product. I will submit the full length sequence to the ENA database and let you know the accession number when it arrives. This can take up to one month
The first and last of the known polymorphic sites are shown by vertical lines at positions 9 and 256 of the 270 bases within the second exon. The position of polymorphic sites and deletions within the 5’ and 3’ flanking regions are shown as vertical lines and shaded boxes. The simple repetitive elements in the second intron vary in size from 114 to 210 bases (Schwaiger et al. 1994).
Diagrammatical representation of the second exon and immediate intronic flanking regions of the Ovar-DRB1 gene showing the location and direction of the oligonucleotide primers.
Low levels of inbreeding
DRB1 *0105 εμφανίστηκε συχνά στα ζώα του υψηλού παρασιτικού φορτίου, και στις δύο φυλές.
Το νέο αλληλόμορφο που βρέθηκε στα πρόβατα της φυλής Άργους, έχει ιδιαίτερη σημασία καθώς εμφανίζει σημαντική διαφοροποίηση, έχοντας 7 νέες πολυμορφικές θέσεις, που δεν έχουν εντοπιστεί μέχρι στιγμής σε άλλα DRB1 αλληλόμορφα στην IPD-MHC τράπεζα.
Αντιπροσωπεύει μια νέα οικογένεια αλληλομόρφων (DRB1*2601).
which shows that for the number of animals selected diversity levels are high.
Most alleles identified were also identified previously in studies of DRB-1 polymorphism in Greek breeds (Frizarta, Kozani, Boutsiko).(Unpublished data), including alleles DRB1*1606 and DRB1*2003 , DRB1*1008 and DRB1*0806 which were specifically found in these Greek breeds.
(wild bighorn sheep -Ovis Canadensis).
raising interesting questions on the evolution of the two sheep species.
Από προηγούμενες μελέτες ένα DRB1 αλληλόμορφο που επίσης εμφάνιζε έντονη διαφοροποίηση στις θέσεις πολυμορφισμού
(Immuno-Polymorphism Database(IPD)-MHC database), ENA
To receive official name
sheep to determine the connection with wild Bighorn sheep (Ovis canadensis).
Την επιτροπή
Μπιζελη καθοδηγηση και σχεδιασμο πειράματος, συμβουλες και στατιστικη μελετη Κουτσουλη, βοηθεια κου Θεοδωρόπουλου
Σπετσαριά Σταύρο, Θεοδώρου Γιώργο
Καθηγητές μεταπτυχιακού Χαγερ, Γκολιομυτης , Χαρισμιαδου για γνωσεις, στηριξη και συμβουλές
