Download to read offline
![29714
2
Изобретение относится к ветеринарной
гельминтологии, в частности к способам получения
аллергена, применяемого для диагностики гемонхоза
овец.
Известен способ получения аллергена для
диагностики гемонхоза овец, включающий сбор
личинок гемонхусов, их сушку, растирание и
экстрагирование [Шихобалова Н.П. Вопросы
иммунитета при гельминтозах. - М. - Л., Издательство
АН СССР, 1950. с.120-121].
Недостатком данного способа является не высокая
специфичность чувствительности получаемого
аллергена.
Задачей изобретения является разработка способа
получения высокоактивного аллергена для выявления
гемонхоза овец и снижения себестоимости и
трудоемкости технологического процесса.
Технический результат, обеспечиваемый
изобретением, выражается в повышении
выявляемости больных гемонхозом овец.
Способ получения аллергена для диагностики
гемонхоза, включающий сушку половозрелых
гемонхусов, растирание и экстрагирование,
высушенные и растертые гемонхусы разводят
физиологическим раствором, фильтруют через
фильтровальную бумагу, фильтрат концентрируют в
роторном испарителе при температуре 46°С в течение
18 часов, полученный концентрат автоклавируют при
1,0 атм в течение 40 минут, затем смесь двукратно
центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут,
осадок удаляют, а в полученный супернатант
добавляют физиологический раствор и доводят
содержание белка в нем до 5,0 мг/мл, после чего
полученную смесь консервируют в 0,2% растворе
пропионовой кислоты, лиофилизируют и используют
в качестве целевого продукта.
Способ получения аллергена для диагностики
гемонхоза овец осуществляют следующим образом.
Пример 1. Помещают половозрелые гемонхусы в
стерильную посуду, разводят физиологическим
раствором 1:1, и проводят фильтрацию этой жидкости
через фильтровальную бумагу, полученный фильтрат
концентрируют на ротационном испарителе типа ИР-
1М3 при температуре 46°С в течение 18 часов. Затем
концентрат автоклавируют в течение 12 часов при
1,0 атм в течение 40 минут, полученную смесь
центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут,
удаляют осадок, а надосадочную жидкость сливают и
вновь центрифугируют при 3000 об/мин в течение
20 минут, затем осадок удаляют, полученный
супернатант разводят стерильным физиологическим
раствором, при этом конечную концентрацию белка
доводят до 5,0 мг/мл. После чего полученный аллерген
консервируют 0,02% раствором пропионовой кислоты,
разливают в ампулы по 1,0 мл в стерильных условиях.
Стерильность препарата проверяют путем посева
на питательные среды.
МПА, МПБ в количестве 0,1-0,15 мл аллергена,
который вносят стерильной пипеткой. Среды
помещают в термостат при 37°С на 10 суток. При этом
на поверхности питательных сред должен
отсутствовать рост бактерий.
Пример 2. Безвредность препарата проверяют на
белых мышах весом 18-20 г в количестве 3 особей,
которым препарат вводят подкожно в область брюшка
по 0,5 мл. Наблюдение осуществляют в течение 5-10
суток. При осмотре места введения видимых
изменений не обнаруживают. Общее физиологическое
состояние мышей, при этом, должно быть
удовлетворительным.
Активность аллергена проверяют на 6 кроликах в
возрасте 3-3,5 месяцев, разделенных на две группы по
3 в каждой. Животные первой группы служат
контролем, они не подвергаются сенсибилизации, им в
область спины подкожно вводят физиологический
раствор. Кроликам второй группы в область спины
подкожно вводят аллерген в дозе по 1,0 мл, двукратно,
с интервалом двое суток.
Через двое суток после последнего введения
аллергена проводят аллергическое исследование. Для
этого аллерген вводят внутрикожно в дозе по 0,1 мл
всем опытным кроликам в область поясницы. Учет
аллергической реакции осуществлялся через 2 часа
после введения препарата.
У животных первой группы (контроль) видимых
изменений не наблюдается. У кроликов второй группы
(опытной) на месте введения аллергена отмечается
гиперемия и утолщение кожной складки на
12,0-19,0 мм.
Активность и специфичность аллергена
проверяется в производственных условиях.
Препарат вводят внутрикожно в подхвостовую
складку овец в дозе 0,2 см3
. Результаты аллергической
пробы учитывают через 2,5-3 часа, при утолщении
кожной складки на 2,0-2,5٠3,0-3,5 см и больше
аллергическая реакция считается положительной.
Таким образом, применение способа получения
аллергена позволит повысить выявляемость больных
гемонхозом овец и профилактировать данную
инвазию.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ получения аллергена для диагностики
гемонхоза овец, включающий сбор личинок
гемонхусов, их сушку, растирание и экстрагирование,
отличающийся тем, что высушенные и растертые
половозрелые гемонхусы разводят физиологическим
раствором, фильтруют через фильтровальную бумагу,
фильтрат концентрируют в роторном испарителе при
температуре 46°С в течение 18 часов, полученный
концентрат автоклавируют при 1,0 атм в течение
40 минут, затем смесь двукратно центрифугируют при
3000 об/мин в течение 20 минут, осадок удаляют, а в
полученный супернатант добавляют физиологический
раствор и доводят содержание белка в нем до
5,0 мг/мл, после чего полученную смесь консервируют
в 0,2% растворе пропионовой кислоты,
лиофилизируют и используют в качестве целевого
продукта.
Верстка Ж. Жомартбек
Корректор К. Нгметжанова](https://image.slidesharecdn.com/29714ip-150618175631-lva1-app6892/85/29714ip-2-320.jpg)
29714ip
- 1. РЕСПУБЛИКА КАЗАХСТАН (19) KZ(13) A4 (11) 29714 (51) A61K 39/35 (2006.01) A61B 10/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ (21) 2014/0673.1 (22) 15.05.2014 (45) 15.04.2015, бюл. №4 (72) Аманжол Рафилбек Аманжолұлы; Тажбаева Даурия Талаповна; Сулейменов Маратбек Жаксыбекович (73) Товарищество с ограниченной ответственностью "Казахский научно- исследовательский ветеринарный институт" (56) Шихобалова Н.П. Вопросы иммунитета при гельминтозах. М.: Издательство АН СССР, 1950, с.120-121 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОНХОЗА ОВЕЦ (57) Изобретение относится к ветеринарной гельминтологии, в частности к способам получения аллергена для диагностики гемонхоза овец. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в повышении выявляемости больных гемонхозом овец. Способ получения аллергена для диагностики гемонхоза овец, включающий сбор половозрелых гемонхусов, их сушку, растирание и экстрагирование, высушенные и растертые половозрелые гемонхусы разводят физиологическим раствором, фильтруют через фильтровальную бумагу, фильтрат концентрируют в роторном испарителе при температуре 46°С в течение 18 часов, полученный концентрат автоклавируют при 1,0 атм в течение 40 минут, затем смесь двукратно центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут, осадок удаляют, а в полученный супернатант добавляют физиологический раствор и доводят содержание белка в нем до 5,0 мг/мл, после чего полученную смесь консервируют в 0,2% растворе пропионовой кислоты, лиофилизируют и используют в качестве целевого продукта. (19)KZ(13)A4(11)29714
- 2. 29714 2 Изобретение относится кветеринарной гельминтологии, в частности к способам получения аллергена, применяемого для диагностики гемонхоза овец. Известен способ получения аллергена для диагностики гемонхоза овец, включающий сбор личинок гемонхусов, их сушку, растирание и экстрагирование [Шихобалова Н.П. Вопросы иммунитета при гельминтозах. - М. - Л., Издательство АН СССР, 1950. с.120-121]. Недостатком данного способа является не высокая специфичность чувствительности получаемого аллергена. Задачей изобретения является разработка способа получения высокоактивного аллергена для выявления гемонхоза овец и снижения себестоимости и трудоемкости технологического процесса. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в повышении выявляемости больных гемонхозом овец. Способ получения аллергена для диагностики гемонхоза, включающий сушку половозрелых гемонхусов, растирание и экстрагирование, высушенные и растертые гемонхусы разводят физиологическим раствором, фильтруют через фильтровальную бумагу, фильтрат концентрируют в роторном испарителе при температуре 46°С в течение 18 часов, полученный концентрат автоклавируют при 1,0 атм в течение 40 минут, затем смесь двукратно центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут, осадок удаляют, а в полученный супернатант добавляют физиологический раствор и доводят содержание белка в нем до 5,0 мг/мл, после чего полученную смесь консервируют в 0,2% растворе пропионовой кислоты, лиофилизируют и используют в качестве целевого продукта. Способ получения аллергена для диагностики гемонхоза овец осуществляют следующим образом. Пример 1. Помещают половозрелые гемонхусы в стерильную посуду, разводят физиологическим раствором 1:1, и проводят фильтрацию этой жидкости через фильтровальную бумагу, полученный фильтрат концентрируют на ротационном испарителе типа ИР- 1М3 при температуре 46°С в течение 18 часов. Затем концентрат автоклавируют в течение 12 часов при 1,0 атм в течение 40 минут, полученную смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут, удаляют осадок, а надосадочную жидкость сливают и вновь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут, затем осадок удаляют, полученный супернатант разводят стерильным физиологическим раствором, при этом конечную концентрацию белка доводят до 5,0 мг/мл. После чего полученный аллерген консервируют 0,02% раствором пропионовой кислоты, разливают в ампулы по 1,0 мл в стерильных условиях. Стерильность препарата проверяют путем посева на питательные среды. МПА, МПБ в количестве 0,1-0,15 мл аллергена, который вносят стерильной пипеткой. Среды помещают в термостат при 37°С на 10 суток. При этом на поверхности питательных сред должен отсутствовать рост бактерий. Пример 2. Безвредность препарата проверяют на белых мышах весом 18-20 г в количестве 3 особей, которым препарат вводят подкожно в область брюшка по 0,5 мл. Наблюдение осуществляют в течение 5-10 суток. При осмотре места введения видимых изменений не обнаруживают. Общее физиологическое состояние мышей, при этом, должно быть удовлетворительным. Активность аллергена проверяют на 6 кроликах в возрасте 3-3,5 месяцев, разделенных на две группы по 3 в каждой. Животные первой группы служат контролем, они не подвергаются сенсибилизации, им в область спины подкожно вводят физиологический раствор. Кроликам второй группы в область спины подкожно вводят аллерген в дозе по 1,0 мл, двукратно, с интервалом двое суток. Через двое суток после последнего введения аллергена проводят аллергическое исследование. Для этого аллерген вводят внутрикожно в дозе по 0,1 мл всем опытным кроликам в область поясницы. Учет аллергической реакции осуществлялся через 2 часа после введения препарата. У животных первой группы (контроль) видимых изменений не наблюдается. У кроликов второй группы (опытной) на месте введения аллергена отмечается гиперемия и утолщение кожной складки на 12,0-19,0 мм. Активность и специфичность аллергена проверяется в производственных условиях. Препарат вводят внутрикожно в подхвостовую складку овец в дозе 0,2 см3 . Результаты аллергической пробы учитывают через 2,5-3 часа, при утолщении кожной складки на 2,0-2,5٠3,0-3,5 см и больше аллергическая реакция считается положительной. Таким образом, применение способа получения аллергена позволит повысить выявляемость больных гемонхозом овец и профилактировать данную инвазию. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения аллергена для диагностики гемонхоза овец, включающий сбор личинок гемонхусов, их сушку, растирание и экстрагирование, отличающийся тем, что высушенные и растертые половозрелые гемонхусы разводят физиологическим раствором, фильтруют через фильтровальную бумагу, фильтрат концентрируют в роторном испарителе при температуре 46°С в течение 18 часов, полученный концентрат автоклавируют при 1,0 атм в течение 40 минут, затем смесь двукратно центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут, осадок удаляют, а в полученный супернатант добавляют физиологический раствор и доводят содержание белка в нем до 5,0 мг/мл, после чего полученную смесь консервируют в 0,2% растворе пропионовой кислоты, лиофилизируют и используют в качестве целевого продукта. Верстка Ж. Жомартбек Корректор К. Нгметжанова