More Related Content
Similar to Козаков Д.С. Основи молекулярних методів
More from AlinaPokhilko
Козаков Д.С. Основи молекулярних методів
- 1.
- 2. ДНК • A=T; G≡C •Negative charge • Double-stranded • Зберігання інформації • Deoxyribose – flexibility (double helix)
- 3. РНК • A=U; G≡C •Negative charge • Single*-stranded • Експресія генів • Ribose – unstable/degrading • Визначається послідовністю ДНК
- 4. Білок • Визначається послідовністюРНК • 20 амінокислот • Просторово неоднорідні • Первинна (2-,3-,4-) структура • Безпосередня участь в клітинних просцесах
- 5. Універсальні молекулярні методи •Гель-Електрофорез • Спектрометрія (-photo – quantification; mass- – identification of compounds/composition) • Спектроскопія (IR – structural analysis; Fluorometry – Quantification) • Хроматографія (separation by physicochemical properties) • Методи гібридизації (Western-, Southern-, Northern blot, other)
- 6. ДНК. Молекулярні методи •ПЛР • ПЛР в реальному часі • Методи гібридизації: • FISH • Hybridisation capture methods • Southern blot • Секвенування: • Sanger sequencing • NGS • Фрагментаційний аналіз (рестрикція/ампліфікація – електрофорез)
- 7. РНК. Молекулярні методи •Зворотня транскрипція (комплементарна ДНК) • RT-qPCR • Molecular cloning • Секвенування (Sanger, NGS) • Методи гібридизації: • Northern blot
- 8. Білки. Молекулярні методи •Методи гібридизації: • ELISA • Western-blot • Immunoprecipitation/Pull-down assays • CHIP • IHC
- 9. Гель-Електрофорез • Розділення замасою, зарядом • Виділення специфічних фрагментів • Аналітичний етап багатьох методів
- 10. Спектрофотометрія • Визначення концентраціїнуклеїнових кислот/білків в суміші за поглинанням світла • Низькоспецифічний аналіз DNA vs. RNA • Наявність домішок сильно впливає на результат
- 11. Масс-спектрометрія • Визначення молекулярногоскладу простих/складних молекул за розподілом фрагментів • Базований на принципі вимірювання співвідношення маси до заряду
- 12. Спектроскопія • Аналіз функціональнихгруп за відповіддю молекул на промені (infra-red) або наявність сильного мангітного поля (NMR) • Визначення структури/функціонального складу молекул
- 13. Хроматографія • Методика адаптованадля очистки та виділення біомолекул • Розподіл молекул при проходженні через субстрат на колонці за фізикохімічними властивостями: • Заряд • Маса (розмір) • Специфічність до субстрату (афінність)
- 14. ПЛР – полімеразналанцюгова реакція • Ампліфікація ДНК • Денатурація • Приєднання праймерів (анілінг) • Елонгація (синтез) • В реакції беруть участь: • Оригінальна суміш ДНК • Праймери (15-25b) • ДНК Полімераза • Середовище (+нуклеотиди)
- 15. ПЛР в режиміреального часу (qPCR) • Визначення кількості копій/довжину/кількість ампліконів за флуорисцентними маркерами • Використовуються інтеркалюючі фарбники та флуорисцентні мітки
- 16. Зворотня транскрипція • Ферментативнеперетворення мРНК на комплементарну ДНК для подальших аплікацій: • Аналіз експресії генів (qPCR) • Аналіз наявності транскриптів певних генів • Аналіз сплайсингу • Секвенування
- 17.