1. 不同的時間和濃度下H2O2對E.coli的敏感性研究
吳梓銜
長榮大學生物科技學系
指導老師: 黃海美 老師
新竹清華大學
生物科技研究所
摘要：
OD-CFU-Dilution、大腸桿菌對H2O2的敏感性研究，OD-CFU指的是用測出來的OD595值去做一系列的Dilution來計算CFU(colony-
forming unit)菌落形成數，然後H2O2來測試大腸桿菌的敏感性，一開始先種菌過夜培養，準備７個椎型瓶，分別標示不同濃度量的雙
氧水和一個control組，而control組就是沒有加任何濃度的H2O2，可以用來比較其它濃度的雙氧水的細菌量差別，分成30 min 和60
min 兩個時段，利用分光光度計測量OD595值推算出理論值，記錄之後經過一系列Dilution塗在盤子上，放入培養箱過夜培養，然後比
較理論值和實際值，計算出來的百分比再畫成折線圖觀看結果是否和理論值一樣，也可以知道H2O2在多少濃度下細菌的LC 50 。
前言：
H2O2有很多用途，在醫學研究方面，常拿來做消毒劑，其結構式為 H－O－O－H和水分子比較，雙氧水的分子中多了一個氧原子，
由於 O－O bond相對較弱，其鍵能為 210 kJ/ mol，所以雙氧水有輕微的不穩定，可分解出新生氧來殺死細菌，在一般情況下，雙氧
水也會自動分解成為水和氧氣，因此，傷口上擦雙氧水，傷口表面的細胞分泌酵素分解雙氧水，而產生的高農度氧氣圍繞在附近，對
於抑制細菌的滋生有一定的作用。
實驗材料與步驟：
種菌 測OD595值 系列稀釋 塗盤 觀看結果
結果：
30 min survival
120
100
LC50
80
survival
60 數列
1
40
20
0
H2O2 0 mM 1 mM 2 mM 4 mM 5 mM
dose
(圖四)為30min平均存活率折
線圖
60 min survival
120
(圖一)為依照個別A、C、B的OD595值我們推 (圖二)為依照個別A、D的OD595值我們推算出 (圖三)為依照個別A、G、F、E的OD595值我 100
算出菌落數的估計理論值，然後再去比較 菌落數的估計理論值，然後再去比較實際 們推算出菌落數的估計理論值，然後再
實際所算出來的菌落數 所算出來的菌落數 去比較實際所算出來的菌落數 80
survival
60 數
Time H2O2 Survival% Time H2O2 Survival% 列1
0 mM 100 0 mM 100 40
30 min 1 mM 49.7 60 min 1 mM 23.2 20
30 min 2 mM 50.7 60 min 2 mM 19.8
0
30 min 4 mM 31.7 60 min 4 mM 7.94 H2O2 0 mM 1 mM 2 mM 4 mM 5 mM
dose
30 min 5 mM 8.87 60 min 5 mM 2.35
(圖五)為60min平均存活率折
(表一)為30min和60min不同濃度下的細菌平均存活率 線圖
結論：
總整理出30分鐘和60分鐘每個H2O2濃度的平均存活率，並把它畫成折線圖，我們可以知道在30分鐘下1mM~2mM為細菌的LC50，30分鐘
到60分鐘細菌都有明顯下降，表示在中途實驗中沒有汙染的現象，雖然還是有些小誤差，實際算出的細菌數量比理論值還低，因為盤子
上的面積有限，導致細菌生長多而堆疊在一起或是塗盤時沒有塗均勻，在計算過程就會有誤差，結果表示H2O2的殺傷力強，在低濃度下
細菌也無法存活太久，雖然殺死細菌對人類有益，但是同樣也會殺死細胞，所以建議少用，塗抹太深的傷口會導致細胞壞死，無法修復
完整使傷口留下疤痕。
致謝：
在這要謝謝長榮大學生物科技學系能讓我有這樣的機會校外實習，特別要謝謝清華大學的偉廷學長、萬順學長、俞村學長熱心的協
助我完成實驗，最後要謝謝黃海美老師細心的教導我，讓我學習到很多新知，謝謝大家。