楊惟珶
- 1. 從雞蛋分離蛋清萃取蛋白質
做檢測及各種定量法
長榮大學生物科技學系100學年專題實習成果
實習單位:長榮大學生物科技系
指導老師:田宥恩老師
實習學生:楊惟珶
實習內容
兩個月說長不長,一瞬間就結束了,卻令我難忘。
實驗室的工作安全是每位實驗人員進入實驗室的時候必頇熟悉的,一開始先熟悉實驗室的大環境清
楚了解實驗室每一項儀器的操作與維護,前半個月每天都有儀器維護檢查的例行工作與跟著老師做
小實驗;儀器檢查讓我接觸到平常上課沒摸過的儀器,因此感覺很新鮮;小實驗雖小又簡單,但實
驗精神卻不容小覷,有細菌革蘭氏染色實驗、配製各種培養基,了解到各種養菌的小方法與多樣的
細菌生態,並跟著老師進行許多測試(如:落菌實驗、種青黴菌、黴菌與觀察細菌代謝生長…等等)
及學習使用生物技術相關電腦軟體;後半個月除了每天例行維護檢查工作外,正式進入我的實驗主
題蛋白質檢測,先從原本的一顆雞蛋取出蛋白蛋清,製備成蛋白質溶液、蛋白質氯化鈉溶液,利用
蛋白質鹽析反應得到球蛋白與白蛋白,進一步將蛋白質以SDS-PAGE電泳跑膠,來測定我們的蛋白質
分子量得結果↓
蛋白質檢測尚有許多種定量法來為蛋白質定量,在眾多種
定量法裡,這次實習做了三種定量法實驗:
Bradford Test、Lowry Test、Biuret Test
在做定量實驗前,必頇先製備好所需蛋白質濃度與所加入
的標準液,因此一步一步的序列稀釋,了解不同試劑對蛋
白質濃度不同及吸收光的波長也不同,徹底對蛋白質濃度
與試劑特性互相做結合,蛋白質透過試劑呈色對光的靈敏
度高低變化來得知我們的蛋白質濃度,進而求出的公式值
與R²值,並可從此公式推算出未知的蛋白質濃度。
以下為定量實驗的數據結果:
此為Bradford Test 結果↓ (縱列為測出OD值、行列為濃度)此為Biuret Test結果↓ 沒有Lowry Test
的結果,因為數
據最後為不準確
值,原本應當沒
有蛋白質濃度的
96孔位置測出有
蛋白質反應,又
做了許多探討,
因此無法得到公
式值也無法有圖
呈現在結果上。
實習心得與感謝
這次的實習,很感謝學校與系上老師的用心,不放棄任何一隻羊,為每位學生因材施教,使我能夠
順利在兩個月內完成實習進度,雖然在校的課程許多教學都很精闢,但在大環境跟著同學一起做實
驗和真正自己單獨和老師做卻有不同的領悟,也許那是沒修過專題的我與實習安排對實驗室充滿了
許多理想,兩個月的實習轉眼間就結束了,真的在不知不覺間發現短短兩個月卻有平常上課不一樣
的收穫,保持學習的心做每一項工作,即使是每天的例行工作也會有不同的發現,及使是學到的東
西,也未必能夠馬上完全吸收,但如果努力持續下去,美好的果實一定會手到擒來,希望此次的經
驗能夠分享給每一位。