1. معمل البكتيريا الرابع- ١٢٢ حدق
دراسة الصفات المزرعية للبكتيريا Bacterial cultural characteristics
الهدف: دراسة أشكال ومظاهر النمو المختلفة للبكتيريا على مختلف الوساط الغذائية
- تعتبر من أهم الدراسات لتعريف وتصنيف البكتيريا
- تعطي وصف دقيق للبكتيريا أثناء نموها على الوساط الصلبة والسائلة
أول: وصف النمو البكتيري على البيئات الصلبة في أطباق بتري Solid media
1-شكل المستعمرة :Colony formومن أهم الشكال
نقطية- دائرية- خيطية- جذرية- غير منتظمة- مغزلية
٢- ارتفاع المستعمرة : Colony elevation
مسطحة- مرتفعة- محدبة- كثيرة التحدب- مرتفعة المركز
٣- شكل حافة المستعمرة : Colony margin
كاملة- مموجة- مفصصة- مسننة- خيطية- مجعدة
٤- سطح المستعمرة Colony surface
ناعم- خشن
٥- الصفات الضوئية للمستعمرة Colony optics
معتمة- شبه شفافة- شفافة
٦- حجم المستعمرة Colony size
٧- لون المستعمرة ) انتاج الصبغات(Pigmentation
ملونة- غير ملونة
٨- الرائحة Odor
متعفنة- عطرية- بدون رائحة
٩- قوام المستعمرة Colony consistency
غشائي- لزج )مخاطي(- زبدي- هش
٠١- التأثير في الدم Hemolytic activity
تحلل الدم تحليل كامل – Beta hemolysisتحلل الدم جزئيا Alpha hemolysis
لتحلل الدم or non hemolysis Gamma hemolysis
ثانيا: مظاهر النمو البكتيري على انبوبة الجار المائل Nutrient agar slant
١- كمية النمو Growth amount
ليوجد نمو- قليل- متوسط- غزير
2-اللون
على النمو نفسه- منتشر في البيئة
3-الصفات الضوئية والشفافية
4-شكل النمو
خيطي- منتظم- مسنن- سبحي- منتشر- متفرع
ثالثا: وصف النمو البكتيري في البيئات السائلة Liquid media
١- كمية النمو Growth amount
ضئيل- متوسط- غزير
٢- شكل النمو Growth form
خيطي- مسنن- خرزي- منتشر- جذري- شجري-
٣- النمو على السطح
ليوجد- حلقي- رقيق- غشائي- صوفاني
5-النمو تحت السطح
ليوجد- عكر- حبيبي- صوفاني- قشاري
1
2. معمل البكتيريا الرابع- ١٢٢ حدق
6-النمو المترسب
ليوجد- حبيبي- صوفاني- قشاري- لزج- جليدي
الطرق المختلفة لزراعة النواع البكتيرية
س: لماذا اختلفت طرق زراعة البكتيريا؟
- يمكن زراعة البكتيريا بعدة طرق:
البيئة السائلة
الجار المائل
الجار العميق
الزراعة السطحية على بيئة اجار مغذي Surface plate
الزراعة العميقة على بيئة الجار المغذي Pour plate
دراسة الصفات الشكلية للخليا البكتيرية Morphological Studies
) صبغ الخليا البكتيرية ( Bacterial Staining
الصبغ هو دراسة مورفولوجية يقصد بها دراسة شكل الخلية البكتيري
س: لماذا تصبغ الخليا البكتيرية؟
الطرق العامة للصبغ تختلف باختلف الدراسة والغرض
تبدأ عملية فحص الخليا البكتيرية بتحضير الغشاء البكتيري ثم يتم الصبغ وبعده الفحص بالمجهر
باستخدام العدسة الزيتية.
تحضير الغشاء البكتيري Smear preparation
1-تحت ظروف التعقيم, ينقل الى منتصف شريحة زجاجية نظيفة قطرة من الماء
المقطر
2-باستخدام ابرة التلقيح المعقمة ينقل جزء من المزرعة البكتيرية حديثة العمر ويخلط
مع قطرة الماء, ويفرد الغشاء على الشريحة
3-تترك الشريحة لتجف في جو المعمل
4-يثبت الغشاء البكتيري بتمريره على اللهب من ٣-٤ مرات
5-تترك الشريحة لتبرد
صبغ جرام Gram Stain
- تعتبر صبغة مركبة – Compound stainوصبغة تفريقية Differential stain
- من أهم طرق الصبغ شيوعا في المختبرات الميكروبيولوجية
- أول من استخدمها كريستيان جرام
تكمن أهميتها في استعمالها لتشخيص البكتيريا حيث بواسطتها يمكن تقسيم البكتيريا الى قسمين:
Gram positive bacteria - Gram negative bacteria
- لها أهمية في توضيح الختلفات الساسية في تركيب الجدار الخلوي للبكتيريا
الغرض من صبغ جرام: معرفة شكل الخليا البكتيرية- انتظامها- الستجابة
2
3. معمل البكتيريا الرابع- ١٢٢ حدق
طريقة الصبغ: Stain technique
1-يتم اعداد غشاء بكتيري وتثبيته كما سبق
2-يغمر الغشاء البكتيري بكمية مناسبة من صبغة الكريستال البنفسجسي لمدة دقيقة
3-يغسل الغشاء تحت تيار ماء خفيف
4-يغمر الغشاء بكمية مناسبة من اليود لمدة دقيقة
5-يغسل الغشاء البكتيري بالكحول ٠٧% بوضع مائل حتى تنزل القطرات شبه رائقة
6-يغشل الغشاء تحت تيار ماء خفيف
7-يغمر الغشاء بصبغة الصفرانين لمدة دقيقة
8-يغسل الغشاء تحت تيار ماء خفيف
9-تجفف الشريحة بين ورقتي ترشيح
٠١-تفحص الشريحة باستخدام العدسة الزيتية وزيت السيدر
المشاهدة: اذا تلونت الخليا بلون أزرق بنفسجي تكون موجبة لجرام
اذا ظهرت الخليا بلون احمر تكون سالبة لجرام
ملحظة: استعمال المحاليل الصبغية بصورة غير كافية من ناحية الكمية أو الوقت ينتج عنه
صبغ غير جيد وتتاثر النتيجة
- لماذا اختلفت البكتيريا في استجابتها لصبغ جرام؟
- هل تتغير استجابة البكتيريا لصبغ جرام؟
- لماذا يستخدم زيت السيدر اثناء فحص الغشاء البكتيري؟
3
6. معمل البكتيريا الرابع- ١٢٢ حدق
A Gram Positive Bacteria Cell and a Gram Negative Bacteria Cell
Bacillus
A: Peptidoglycan layer Note the difference in thickness between the two cells. This
difference is what allows gram-positive and gram-negative bacteria to stain in separate colors.
B: Cytoplasmic Membrane Encases the cell’s cytoplasm.
C: Cytoplasm Living cell substance holding all of the cell’s “organs.”
D: Outer membrane Found only in gram-negative bacteria. It holds special chemicals toxic
to animals. This membrane is highly resistant to many antibacterial chemicals
Another feature found exclusively in gram-negative bacteria is the periplasmic space, found
between the outer membrane (D) and the cytoplasmic membrane (B). Most of the periplasmic
space is empty, except for the thin peptidoglycan layer (A) found inside.
E.coli S.aureus Bacillus
6
7. معمل البكتيريا الرابع- ١٢٢ حدق
Typical Gram Stain
Gram-positive cocci
Clusters: usually characteristic of Staphylococcus spp., such as S. aureus
Chain: usually characteristic of Streptococcus spp., such as S. pneumoniae, B group
streptococci
Tetrad: usually characteristic of Micrococcus spp.
Gram positive bacilli
Thick : usually characteristic of Clostridium spp., such as C. perfringens,
Thin: usually characteristic of Listeria spp.
7
8. معمل البكتيريا الرابع- ١٢٢ حدق
Branched: usually characteristic of Actinomycetes and Nocardia , such as A. israelii .
Gram-negative cocci
Diplococci: usually characteristic of Neiseria spp., such as N.
meningitidis
Coccobacilli: usually characteristic of Acinetobacter spp., which can be
either Gram-positive or Gram-negative, and is often Gram-variable.
Gram-negative bacilli
Thin rods: usually characteristic of enterobacteriaceae, such as E. Coli
Coccobacilli: usually characteristic of Haemophilus spp., such as H. influenzae
8
9. معمل البكتيريا الرابع- ١٢٢ حدق
Curved: usually characteristic of Vibrio spp.; Campylobactor spp., such as V.
cholerae
Thin needle shape: usually characteristic of Fusobacterium spp.
Negative Stain الصبغ السالب
9
10. معمل البكتيريا الرابع- ١٢٢ حدق
س: لماذا سمي صبغ سالب؟
الهدف من الصبغ السالب: معرفة شكل الخليا اليكتيرية- انتظامها
طريقة العمل:
1-تحت ظروف التعقيم, باستخدام ابرة التلقيح المعقمة ينقل جزء من اللقاح البكتيري
ويوضع على طرف الشريحة
2-تضاف قطرة من صبغة النيجروسين الى النمو البكتيري وتخلط جيدا
3-يفرد الخليط على الشريحة بطريقة متجانسة بواسطة شريحة أخرى
4-تترك الشريحة تجف في جو المعمل
5-تفحص الشريحة باستخدام العدسة الزيتية وتسجل النتيجة
Bacillus
Negatively Stained Cocci
01
