越多的生物多樣性被發現 !研究環境也越來越競爭 !只是單純合成單一條胜肽早已不敷需求 !!!胜肽的修飾具有生物意義 !也是 研究、應用 的趨勢 ! 全自動化的微波胜肽合成儀，可合成胜肽(peptides)、類胜肽(peptoids)、肽核酸（Peptide nucleic acid；PNA）或 擬肽化合物(peptidomimetics)，此外還提供了 支鏈、雙硫鍵 合成功能!另可擴充UV監控、有機合成等功能，除了一般標準化的方法，使用者更可自行開發方法創造無限可能!!!

1. 胜肽藥物合成 與
經 皮 吸 收 評 估
以 微 針 貼 片 為 例
許綸中 生物科技碩士
博士科儀 產品應用
銘傳大學 兼任講師

2. 1. 原料藥合成
2. 快速純化
3. 極速濃縮
4. 打錠、製劑 ( 品管系統 )5. 藥物溶離
6. 分段取樣
7. HPLC分析

3. 1. 原料藥合成
2. 快速純化
3. 極速濃縮
5. 藥物溶離
6. 分段取樣
7. HPLC分析
有效成分開發
劑型設計 成分吸收、釋放
4.經皮吸收試驗

4. Initiator+ Alstra
自動化微波胜肽合成系統
Initiator+ Alstra 自動化微波胜肽合成系統

5. 胜肽 合成、純化 到 蒸乾濃縮一條龍
Initiator+ Alstra
自動化微波胜肽合成系統
合成 純化 蒸乾濃縮
V-10 TOUCH
超高速濃縮儀
Selekt
高速純化系統

6. PPAP胜肽合成教學
Initiator+ Alstra 自動化微波胜肽合成系統

7. 合成從碳端 C-termimal 開始
Fmoc為
氨端保護基

8. 20%
Piperidine
in NMP
Deprotection : 去 Fmoc

10. Wash : 洗掉 Fmoc、Piperidine
NMP
Resin很大
固定在上面的東
西都不會被洗掉

11. Coupling : 加入下一個氨基酸
I have a
I have a

12. Coupling : Oxyma 0.5M in DMF + DIC 0.5M in DMF
Ummm !
Peptide bond

13. Wash : 洗掉 沒反應的 氨基酸、Oxyma 、DIC 、DMF
NMP

18. Cleavage : 斷開 Resin

19. 化學反應沒有絕對完全的 ? 所以胜肽合成的狀況有可能 . . .
PPAP 需要純化!需要純化!需要純化!
機率上
合成不完全的可能
PAP
AP
PPP
PP
P

20. Selekt 高速純化系統 與 Sfär 管柱 系統

21. 為什麼是Selekt ? 量大!快速!高純度!
製備型HPLC : 61克樣品(7種化合物)、流速25mL/min
Biotage Flash : 60克樣品(7種化合物)、流速93mL/min
一般的HPLC專為分析設計，力求以最小體積的消耗，表現最高
的解析度，若用於純化!分批蒐集的次數將會是場噩夢?!

22. 管柱選擇

23. 管柱選擇

24. 透過Selekt觸控螢幕下方的QR掃描器，系統就可以確認接下來要使用的管柱種類，並自動
匯入 純化性質、體積、純化量 . . . 等規格參數，並提供內建的實驗參數建議。
透過 QR 掃描 自動匯入使用參數設定
支援轉換以TLC條件的
Normal phase方法開發

25. 純化後的極速蒸乾
V-10 TOUCH 超高速濃縮儀
-25°C冷凝器
⚫ 回收蒸發溶劑
⚫ 降低對環境的汙染
⚫ 維護使用者健康

26. V-10 TOUCH 蒸乾有多快 ?

27. 受熱面積小
熱傳導慢
受熱面積大
熱傳導快
極速旋轉
抗突沸
蒸乾要快!達到最大真空度即可 ! 但 ~ 一定 突沸
突沸造成液態樣品噴濺

29. Peptide-based drugs approved by the Food Drug Administration(2015–2019)

30. Molecules 2020, 25, 2293; doi:10.3390/molecules25102293

31. Semaglutide 商品名 Ozempic
Semaglutide是用於治療2型糖尿病的藥物，作用類似於人類 glucagon-like
peptide-1 (GLP-1) 在刺激胰島素分泌，從而增加糖代謝。Ozempic以可計量
的注射筆使患者自行皮下注射。與其他抗糖尿病藥物相比，它的優勢之一是
持續作用時間長，因此可每週注射一次。

32. 原本的 Ala 換成 Aib ( 2-aminoisobuthyric acid )可減少被
DPP-4酶水解
延長半衰期 . .
原Lys換成Arg可防C-18結合到錯誤的位置
第26位的Lys接上
C-18 用以提高與
albumin的結合力
曾耀賢 醫師 口服GLP-1 RAs
Semaglutide 的改良修飾

33. 設定自動程序 合成 支鏈、雙硫鍵 . . . 等修飾

34. 修飾合成實例
抗原合成的模擬測試
嗜熱鏈球菌的肽聚醣片段
α - Conotoxin MII

35. Cyclo-[D-Ala-L-Lys-D-Cys-L-Lys-D-Ala-L-Lys(5-FAM)-D-Ala-L-Glu]
自動化合成環狀胜肽 與 5-FAM修飾

36. Bremelanotide 商品名 Vyleesi
是一種 環狀7-胺基酸黑色素皮質素肽
cyclic 7-amino-acid melanocortin peptide
，其為α黑色素細胞刺激素（alpha-melanocyte
stimulating hormone, α-MSH）的合成類似物，
2019年美國FDA宣布核准作為女性低性慾障礙治
療藥物。

37. Mardirossian et al., 2018, Cell Chemical Biology 25, 530–539 May 17, 2018

38. Tur1A 海豚抗菌肽 : 抑制 細菌核醣體
50S
30S
Tur1A
PDB ID : 6FKR
RRIRFRPPYLPRPGRRPRFPP

40. C● H● O● N●
Tur1A R R I R F R P P Y L P R P G R R P R F P P

41. C● H● O● N●
Tur1A R R I R F R P P Y L P R P G R R P R F P P

42. Tur1A is likely to inhibit translation by interfering
with the binding of aminoacyl-tRNA to the A site.

44. Ribosome A site
50S
30S
P site
tRNA-peptide
A site
tRNA-aa
Chloramphenicol
Linezolid
PNAS October 25, 2016 113 (43) 12150-12155; first published October 10, 2016

45. Ribosome A site
PNAS October 25, 2016 113 (43) 12150-12155; first published October 10, 2016
50S
30S

46. Tur1A 海豚抗菌肽 : 可通透細菌細胞膜
Tur1A
RRIRFRPPYLPRPGRRPRFPP
Mardirossian et al., 2018, Cell Chemical Biology 25, 530–539 May 17, 2018

47. 1. 原料藥合成
2. 快速純化
3. 極速濃縮
5. 藥物溶離
6. 分段取樣
7. HPLC分析
有效成分開發
劑型設計 成分吸收、釋放
4.經皮吸收試驗

48. Dosage delivery system ~ 藥物傳導三大方向
胃腸吸收 經皮吸收 注射、植入

49. Dosage delivery system ~ 藥物傳導三大方向
經皮吸收 注射、植入

50. 藥物溶離之微針貼片
經 皮 吸 收 試 驗

51. Microneedle

53. Microneedle drug delivery 微針貼片
⚫ 微針貼片（microneedle patch, MNP）為一新型經皮吸收遞藥系統
（transdermal drug delivery system，TDDS），可簡單的將蛋白質、胜
肽、疫苗送進真皮層。
⚫ 指尖大小的貼片上有幾百根小針，大約和人類的毛髮一樣寬，只有半毫米
多一些，微針一般是由一些類似糖的物質與藥物混合製成。
⚫ 當微針貼片貼在皮膚上時，微針刺入皮膚並溶解，釋放藥物而不會引起疼
痛或出血。

54. 角質
表皮
真皮
Solid
固態微針
Coated
塗佈型微針
Dissolving
溶解型微針
Hollow
中空微針
Microneedle 各種微針設計
微針貼片的進化史

55. 角質
表皮
真皮
Microneedle 各種微針設計

56. 取樣 與 溶液 回補台面
取樣 與 溶液回補 均
以注射筒操作
6 組cell組裝位置
Cell holder
可傾斜檯面
排除氣泡
乾熱式經皮吸收系統
氣泡上浮▲
氣泡排出▲

57. 經皮吸收試驗 : 微針測試
↗
微針陣列

58. 經皮吸收試驗 : Franz Cell
微針陣列
↘
⚫測試成分是否穿透角質層
⚫成分進細胞與否不在此範疇
⚫應該穿透角質層成分 :
確定有效性
⚫不應該穿透角質層成分 :
評估安全性
角質層
顆粒層
有棘層
基底層
真
皮
表
皮
為什麼要進行經皮吸收試驗 ?

59. ⚫ 需要穿透 : 美白、抗氧化、抗發炎、刺激再生…等
⚫ 不需要穿透 : 保濕、防曬、彩妝…等
⚫ 物理性穿透 : 微針貼片
產品用途，決定是否穿透角質層 ?
接下來如果需要嚴謹的考慮有
效成份的釋放時間，用以瞭解
生體可利用率評估!這時就需
要進行溶離試驗!

60. 角質
表皮
真皮
微針貼片有效成份釋放
經配方設計
製造的顆粒 治療成份釋放中
顆粒
崩散中
完全崩散
成份完全釋放
⚫ 評估作用時間、副作用?
⚫ 蛋白質、胜肽 的製劑 :
佐劑、微脂體、結晶型態 . . .

61. 總結 : 一個發展流程
當然還省略很多細節

62. www.drins.com.tw