Sci ppt
- 11. 二. 临床样本在基因功能研究中的作用
收集临床样本
RNA DNA Protein
microRNA芯片 基因芯片 组织芯片
RT-PCR或Real-time PCR Western-blot 免疫组化
microRNA研究 基因表达差异
参考文献 确定目的基因
- 14. RNA干扰实验流程图
收集标本,比较基因表达差异 确定靶基因 参考文献
参考文献或文库 寻找靶位点,设计干扰序列 设计全新序列
普通质粒载体
外源筛靶 将shRNA片段装载至表达载体
病毒载体
包装病毒 转染或感染细胞,表达shRNA mRNA水平
检测或验证RNA干扰效果 蛋白质水平
预实验:确定目的细
胞质粒转染效率 细胞表型水平
体外法
RNA干扰回复实验 动物模型 体内法
- 15. 3.1 靶位点的选择 & shRNA序列设计
非常重要的一步!事半功倍 or 事倍功半?
现有免费软件设计:成功率较低(30%左右)
商业化软件或shRNA库:成功率高(75%以
上)
- 51. 动物处理
RT-PCR
Western-blot
免疫组化
TUNEL测凋亡
统计学分析
- 64. 文章思路
1. 在H1299细胞中验证Livin shRNA的干扰效率:
mRNA水平、蛋白质水平、细胞表型水平
2. 在目的细胞Hela细胞中进一步验证Livin shRNA的干扰效率:
mRNA水平、蛋白质水平、细胞表型水平
3. 研究发现,抑制Livin-β可以诱导Hela细胞凋亡,还可以增
强其对其它肿瘤治疗方式的敏感性。
4. 对3中的相关机制进行了探讨:Caspase-3、PARP。
5. RNA干扰回复实验。
6. 为什么干扰Livin-α和干扰Livin-β对Hela细胞影响大不相
同?对其机制进行了研究(酵母双杂交实验:Smac)。