imunichemsitry on forensic investigation

1. Immunohistochemistry (IHC)
Post Morthem of SARS-CoV-2
Anjar Pribadi/ 0921146530002

2. Identitas Jurnal
● Lupariello, F., Godio, L
dan Vella, G. V.
● Immunohistochemistry
Pattens of SAR-Cov-2
deaths in Frensic
Autopsies
● 2021
● Legal Medicine

3. Pendahuluan
CD61
ANTIBODI
SAR-COV-19

4. studi Kasus
● Demam >38 ◦C
● pengobatan antibiotik dan
parasetamol
● hari ke 7 meninggal dunia
● dilakukan ototpsi untuk otopsi klinis
● oragan paru-paru di ambil dan
dilakukan pengamatan dengan
pewarnaan HE -> kerusakan alveolar,
hiperlasia, fibrinous intra alveolar,
membran hialin yang padat.
Pria Usia 66 tahun
Pria Usia 83 tahun
Panto jompo

5. Metode
Fiksasi
Fiksasi jaringan
menggunakan larutan
buffer formalin 10%.
Perendaman minimal
selama 1x24 jam
dengan volume larutan
10x dari besar
specimen.
Dehidrasi
Proses dehidrasi
dengan menggunakan
alkohol. Dimulai dari
konsentrasi 70%
selama 1 jam, 80%
selama 1 jam, 90%
selama 1 jam
sebanyak 2 kali,
kemudian 100%
selama 1 jam
sebanyak 3 kali.
Penjernihan
Proses clearing
(menjernihkan jaringan
hingga tampak
transparan) dengan
menggunakan xylol
sebanyak 3 kali
selama 1 jam, 2 jam
dan 3jam.
Infiltrasi Parafafin
Proses impregnansi (proses infiltrasi parafin).
Dilakukan dengan mencairkan paraffin solid
pada suhu 60°C dan selanjutnya memasukkan
jaringan dalam parafin. Kemudian proses ini
dilanjutkan ke proses embedding (penanaman
jaringan pada parafin solid) sehingga
didapatkan blok parafin.

6. Pewarnaan Histokimia antibodi CD61
 Potongan jaringan blok parafin sebesar 4μm.
 deparafinasi dengan xylene, hidrasi dengan alcohol bertingkat
dan cuci dengan Tris-buffered saline (TBS) selama 10 menit
dan air distilasi selama 10 menit.
 Aktifitas peroksidase endogen diblok dengan H2O3 3% selama
5 menit.
 Antigen retrieval untuk semua antibody dilakukan dengan
meletakkan preparat dalam citrate buffer dan dipanaskan
dalam microwave selama 15 menit.
 Inkubasi semalam dengan antibody primer untuk CD61,
kemudian dilakukan inkubasi dalam antibody sekunder biotin-
conjugated selama 10 menit.
 Metode standar kompleks streptavidin-biotin-peroxidase
dilakukan untuk mengikat antibody primer dengan
menggunakan LSAB System Universal Kit (Dako) selama 10
menit, DAB (diaminobenzidin tetrahydrochloride) digunakan
sebagai chromogen selama 5 menit dan semua bagian di
counterstained dengan mayers-haematoxylin selama 1 menit
dan kemudian preparat ditutup.
Intrepetasi Hasil
• Ekspresi CD61 dilakukan dengan
menghitung jumlah sel makrofag yang
mengekspresikan CD61 menggunakan
pewarnaan IHC pada pembesaran 400x
(Brizeno et al., 2016).

7. Hasil
Ekspresi antibody CD 61 pada paru-paru.
A dan B adalah pasien laki-laki 66 tahun.
C dan D adalah pasien perempuan 83 Tahun.
A dan b memberikan gambaran sebaran antibody CD61 pada
pembuluh di pau-paru dengan perbesaran 120x
C da D memberikan gambaran sebaran antibody cd61 vena yang
mengarah ke jantung dengan perbesaran 180x

8. Kesimpulan

9. TERIMA KASIH