Dokumen ini membahas metode spektrofotometri UV dan prinsip kerjanya dalam analisis struktur molekul serta kemurnian senyawa. Selain itu, dijelaskan komponen spektrofotometer UV dan terminologi terkait analisis kualitatif dan kuantitatif, seperti kromofor dan auksokrom. Proses analisis kuantitatif mencakup preparasi sampel, pembuatan kurva kalibrasi, dan penetapan kadar sampel.

1. SPEKTROFOTOMETRI UV
DEWI LIDIAWATI S.Si., M.Si

2. • Metode spektroskopi digunakan untuk menentukan,
mengkonfirmasi struktur molekul, dan untuk mengetahui
kemurnian suatu senyawa.
• Spektroskopi Ultraviolet (UV) ---- Keadaan energi elktronik
Digunakan untuk ---- molekul konjugasi, gugus karbonil, gugus nitro
• Spektroskopi Infrared (IR) ---- keadaan energi vibrasi
Digunakan untuk ---- gugus fungsional, struktur ikatan
• Spektroskopi NMR ---- keadaan spin inti
Digunakan untuk ---- bilangan, tipe dan posisi relatif dari proton (inti
hidrogen dan inti karbon 13)
• Spektroskopi Massa ---- Penembakan elektron berenergi tinggi
Digunakan untuk ---- berat molekul, keberadaan nitrogen, halogen

3. PRINSIP DASAR
Prinsip dasar dari spektrofotometer adalah Hukum Lambert-
Beer.
 Bunyi Hukum Lambert Beer “Bila seberkas cahaya
melewati medium yang transparan maka intensitas sinar
yang diteruskan berkurang dengan bertambahnya
konsentrasi larutan dan ketebalan medium yang
mengabsorbsi ”

4. Rentang Cahaya UV
Panjang gelombang 10-400 nm

5. SKEMA PERALATAN SPEKTROFOTOMETER
UV
Sumber cahaya – Monokromatis – sel sampel/kuvet – detector-amplifier read out

6.  Sumber cahaya (Lampu) : memancarkan semua warna
cahaya (yaitu, cahaya putih).
 Monokromator : memilih satu panjang gelombang dan
panjang gelombang yang dikirimkan melalui sampel.
 Detektor : mendeteksi panjang gelombang cahaya
yang telah melewati sampel.
 Amplifier : meningkatkan sinyal sehingga lebih mudah
untuk baca terhadap kebisingan latar belakang.

7. Sumber Cahaya
Sumber Cahaya berfungsi sebagai sumber sinar polikromatis dengan berbagai macam
rentang panjang gelombang. biasanya UV menggunakan lampu deuterium atau disebut
juga heavi hidrogen sebagai sumber cahaya

8. SUMBER CAHAYA
Sumber Sinar Daerah Panjang Gelombang
(nm)
Xenon 250-600
Deuterium 160-380
“Spektrofotometer UV”

9. Monokromator
Monokromator berfungsi sebagai penyeleksi panjang
gelombang yaitu mengubah cahaya yang berasal dari
sumber sinar polikromatis menjadi cahaya monokromatis

10. Sel Sampel/kuvet
Sel sampel/kuvet berfungsi sebagai
tempat sampel. Kuvet untuk
spektrometer UV umumnya
mengunakan kuvet Quartz

11. KUVET
Jenis Kuvet Wavelengths
Kuarsa (Quartz) 200-700 nm

12. Detektor
Detektor berfungsi
menangkap cahaya yang
diteruskan dari sampel dan
mengubahnya menjadi arus
listrik.

13. Readout
Read out merupakan suatu sistem
baca yang menangkap besarnya
isyarat listrik yang berasal dari
detector

14. Gambar Alat

15. Jenis Spektrofotometer

16. Syarat larutan yang digunakan dalam
analisa menggunakan Spektrofotometer :
1. Larutan jernih
2. Konsentrasi larutan rendah
3. Larutan bersifat stabil

17. Lidiawati, dll. 2019

18. Lidiawati, dll. 2019

19. ISTILAH DALAM ANALISA KUALITATIF
Kromofor;
merupakan gugus tak jenuh (pada ikatan kovalen) yang bertanggung jawab
terhadap terjadinya absorbsi elektronik (misalnya C=C, C=O, dan NO2).
• Auksokrom;
merupakan gugus jenuh dengan adanya elektron bebas (tidak terikat), dimana jika
gugus ini bergabung dengan kromofor, akan mempengaruhi panjang gelombang
dan intensitas absorban.
• Pergeseran Batokromik;
merupakan pergeseran absorban ke daerah panjang gelombang yang lebih panjang
karena adanya substitusi atau efek pelarut.
• Pergeseran Hipsokromik;
merupakan pergeseran absorban ke daerah panjang gelombang yang lebih pendek
karena adanya substitusi atau efek pelarut.
• Efek Hiperkromik; merupakan peningkatan intensitas absorban.
• Efek Hipokromik; merupakan penurunan intensitas absorban.

20. TAHAPAN ANALISA KUANTITATIF
SPEKTROFOTOMETRI UV
Preparasi sampel
Pembuatan Kurva Kalibrasi
 Pembuatan larutan baku induk
 Pengenceran larutan baku induk
 Penentuan panjang gelombang maksimum
 Pengukuran absorbansi masing-masing konsentrasi
 Pembuatan kurva
Penetapan kadar sampel

21. Thank You