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生态 与农村环境学报 ２ ０ ，２ （ ） ３— ６
０ ６ ２ ３ ：３ ３
Ｊｕｎ ｌｆＥ ｏ ｇ ｎ ｕａ ｎｉ ｎ ｅｔ
ｏ ｒ ｃｌ ｙａ ｄＲ ｒｌ ｖ ｏｍ ｎ
ａｏ ｏ Ｅ ｒ
４种玉米水解肽的除草活性及与相对分子质量的关系
杨 剑 ， 昌义 ，
卢 于兴娜。 （． 大学 环境科学研究中心， 厦门 ３１ ５ ２深圳职业技术学院 应用化学与
１厦门 福建 ６０ ； ．
０
生物技术学院 ，
广东 深圳 ５ ８５ ；３ 复旦 大学 环境科学与工程系 ，
１０ ５ ． 上海 ２ ０３ ）
０ ４ ３
摘要 ：以碱性蛋 白酶 、 蛋 白酶 、
木瓜 风味蛋 白酶和 中性蛋 白酶 ４种蛋白酶 为水 解酶制备 玉米 蛋白水解肽 ， 培养皿
用
生物分析法检测在不 同浓度 （ ． 、． ２ ０和 ５ ０ ｍ
０ ５ １０、． ． ｇ・ｍ ） 的 ４种玉 米蛋 白水解肽 对光 鳞水蜈 蚣 （ ｙ ｉ ａ
Ｌ 下 Ｋ ｌｎ
ｌｇ
ｂ ｖｏａ ａ １ｏｐ ）
ｒ ｉｌ ｔ ｅ ｌ ｉ 种子 萌发过程 中根系生长的抑制 活性 ；
ｅｔｉｖ ． ｉｅ ｓ 采用超滤法 制备相对分 子质量不 同的肽段并 比较其
除草活性 。结果表 明： 同浓度 下的 ４ 玉米蛋 白水解肽对光鳞水蜈蚣种子萌发过程 中根系生长均有抑 制作用 ，
不 种
且随着水解肽浓度的增高，
其对根系生长的抑制活性增强 ；
碱性蛋白酶、
木瓜蛋白酶制备的玉米蛋白粉水解肽对
根 系生长 的抑制 活性 明显高 于风 味蛋 白酶 和中性蛋 白酶制备 的玉米 蛋 白粉水解 肽。相对分子 质量 不同的玉米蛋
白粉水解肽对根系生长的抑制活性存在差异 ， ００Ｕ以下的小分子肽具有更高的抑制活性 。
５ ０
关键 词：蛋 白酶；玉米蛋 白粉 ；水解肽 ；根系 ；抑制活性 ；分子量
中图分类号 ：￥ ８ ． ９ ５ ６ ３
４ ２ ４ ；Ｑ ５ ． 文献 标识码 ：
Ａ 文章编号 ：６ ３— ８ １ ２０ ） ３— ０ ３一 ４
１７ ４ ３ （０６ ０ ０ ３ ｏ
Ｈｅ ｂｅｄ ｌ ｔ ｉｉｓｏ ｒ ｕ ｅ ｅ ｔ ｅ ｒ ｐ ｒ ｄ ｂ ｆｅｅ ｔＰ ｏ ｅ ｓｓａ ｄ Ｔ ｅｒＲｅａ ｏ ｓｔ ｏｅ ｕａ
ｒ ｉｉａ ｉ ｔ ｆＣｏ ｎ Ｇｌｔｎ Ｐ ｐ ｄ Ｐ ｅ ａ ｅ ｙ Ｄｉ ｒｎ ｔａｅ ｎ ｈ ｉ ｌ廿 ｎ ｏ Ｍ ｌｃ ｌｒ
Ａｃ ｖ ｅ ｉ ｓ ｒ
Ｗｅｇ ｔＹ Ｎ ｉｎ ， Ｃ ａｇｙ Ｙ ｉｇｒ １ Ｅ ｖｒｎ ｅｔｌ ｃｅｃ ｅｅｒｈＣ ｎｅ， ｉ ｅ ｎ ｅｓｙ Ｘａ
ｉｈ． Ａ ＧＪａ Ｌ ｈ ｎ —ｉ， Ｕ Ｘｎ （ ． ｎｉ ｍ ｎａ Ｓｉ ｅＲ ｓａｃ ｅｔ Ｘａ ｎＵ ｉ ｒ ｔ， ｉ
ｔ
ａ ｏ ｎ ｒ ｍ ｖ ｉ －
ｍｅ ６ ０ ５， ｈｎ ； ２ Ｓ ｈ ｏ ｆＡｐ ｌ ｄ Ｃ ｅ ｓ ａ ｄ Ｂｏｅ ｈ ｏｏ ｙ，ｈ ｎ ｈ ｎＰ ｌｔｃ ｎｃ， ｈ ｎ ｈ ｎ５１０ ５， ｈｎ ；
ｎ３ １ ０ Ｃ ｉａ ． ｃ ｏ ｌｏ ｐｉ ｈ ｍｉｔ ｎ ｉｔｃ ｎ ｌｇ Ｓ ｅ ｚ ｅ ｏｙｅｈ ｉ Ｓ ｅ ｚ ｅ ８ ５ Ｃ ｉａ
ｅ ￣
３ Ｄ ｐｒ ｅｔ ｆ ｎｉ ｎ ｎａ Ｓｉ ｃ ｎ ｎｉｅｒ ｇＦ ｄｎＵ ｉ ｒｔ，ｈ ｎｈｉ ０ ３ ， ｈｎ ）
． ｅａｔ ｎ ｏ Ｅ ｖ ｏｍｅｔｌ ｃｅ ｅａｄＥ ｇ ｅ ｎ ，ｕ ａ ｎｖ ｓｙＳ ａｇａ ２ ０ ３ Ｃ ｉａ
ｍ ｒ ｎ ｎ ｉ ｅｉ ４
Ａｂ ｔａ ｔ Ｃｏ ｌｔｎｐ ｐｉｅ ｒ ｒｐ ｒｄｂ ｏ ｒｄｆ ｒｎ ｉｄ ｆｐｏｅ ｓ ｓａ ｄｔｅｒｒｓ ｅ ｔ ｅｒｏ－ ｈｂｔ ｇａ －
ｓｒ ｃ ： ｎ ｇｕｅ ｅ ｔ ｓｗｅｅｐｅ ａｅ ｙｆｕ ｉｅｅ ｔｋｎ ｓｏ ｒｔａ ｅ ｈ ｉ ｅｐ ｃｉ ｏｔｉ ｉｉｎ ｃ
ｒ ｄ ｆ ｎ ｖ ｎ ｉ
ｔｉｅ ｏ ｍ ｏ ｓａ ｙｌ ｇ Ｋ ｌｎ ａｂｅｉ ｌ ａ． ｉｅｉ）ｗ ｒ ｅａ ａｅ ｅ ｉ ｉ ｉａｓｙｗ ｅ ｅ ｅ
ｉ ｔ ｓ ｎｓ ｏｔ ｃ ｅｋｌｎ ａ（ ｙｌｇ ｒ ｔ ｉ Ｖ １ｏ ｐｓ ｅｅ ｖｌ ｔｄｉ Ｐ ｔ ｓ ｂｏｓ ｈｎｔ ｙｗ ｒ
ｖｉ ｈ ｌ ｉ ｉ ｖｏ ａ ｒ ｅ ｌ ｕ ｎ ｒｄ ｈ ａ ｈ ｅ
０ ５， ． ２ ０ ａ ｄ ５ ０ ｍｇ・ｍＬ～ ｉ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔ ｎ Ｒ ｓ ｌ ｈ ｗ ｔａ ｅ ｌ ｄ ｍｏ ｓｒｔ ｄ ｒ ｏ － ｈｂ ｔ ｇ ａ ｔ ｉ ， ｉｈ
． １ ０， ． ｎ ． ｎ ｃ ｎ ｅ ｔａｉ ． ｅ ｕｔ ｓ ｏ ｈ ｔｔ ｙ ａｌ ｅ ｎ ｔａｅ ｏ ｔｉ ｉ ｉ ｎ ｃ ｉ ｔ ｗｈｃ
ｏ ｓ ｈ ｎ ｉ ｖｙ
ｉ ｒａｅ ｉ ｅ ｎ ｅｔ ｔ ｎ Ｈ ｒｉ ｄｌ ｃ ｖｉｓ ｆ ｅｔ ｅ ｐｅａｅ ｙ ｃ ａｅａｄＰｐ ｉ ｗ ｒ ｇｉｃｎ ｙ ｉ —
ｎ ｅｓｄｗｈ ｔ ｉ ｃ ｃｎ ａｉ ． ｅｂｃ ａ ａｔ ｉｅ ｐｉ ｓ ｒ ｒ ｄｂ ａ ｓ ｎ ａａ ｅ ｓ ｎｆ ａｔ ｇ
ｃ ｔ ｈ ｒｏ ｒ ｏ ｉ ｉｔ ｏｐ ｄ ｐ ｌ
ａｌ ｎ ｅ ｉ ｉ ｌ ｈｈ
ｅ ｔａ ｏｅｐｅａｅ ｙｆｖｕｚｍ ｎ ｅ ｔ ｓ．ｈ ｅｔ ｅ ａ ｅ ｉ ｃ ｖｙｗｔ ｏ ｃ ｌ ｅ ｔＰ ｐｉｅ ｓ ａ
ｒ ｈ ｔ ｓ ｒｐ ｄｂ ａｏ ｒ ｅａｄｎｕｒ ｅＴ ｅ ｐｉ ｓ ｒ ｄｉ ｂｏ ｔｉ ｉ ｍ ｌ ｕａ ｗ ｉ ． ｅｔ ｓ ｍ ｌ
ｎ ｈ ｒ ｌ ｙ ａ ｐ ｄ ｖ ｉ ｎ ａ ｉｔ ｈ ｅ ｒ ｇ ｈ ｄ ｌ
ｉ ｍ ｌ ｕａ ｅｇｔ ５０ ０Ｕ ｘｉｉ ｄｈｇｅ ｅ ｉｄｌ ｃ ｖｙｔａ ｏｅｌ ｇ ｏ ｃｌ ｅ ｔ
ｎ ｏ ｃｌｒ ｉ （＜ ０ ）ｅｈ ｔ ｉ ｒ ｒ ｃ ａ ａｔ ｉ ｎｔ ｓ ｒｅｉ ｍ ｌ ｕａ ｗ ｉ ．
ｅ ｗｈ ｂ ｅ ｈ ｈ ｂ ｉ ｉｔ ｈ ｈ ａ ｎ ｅ ｒ ｈ
ｇ
Ｋｅ ｒ ｓ ｒ ｅｓ ；ｃｒ ｌｔ ｅｔ ｅ ｏｔ ｎ ｉｔ ｇａｔｉ ；ｍ ｌ ｕａ ｅｇｔ
ｙｗｏｄ ：ｐｏ ａｅ ｏ ｇ ｅ ｐ ｐｉ ；ｒｏ；ｉｈｂ ｉ ｃｖｔ ｏｅ ｌ ｗ ｉ
ｔ ｎ ｕｎ ｄ ｉｎ ｉｙ ｃｒ ｈ
化学除草剂因其作用迅速、
效果显著、
省工省时 种子萌发及幼苗生长影响研究较 多 Ｊ ０世 纪
。２
等优点而被广泛应用于农 田和草坪杂草的防治 ，
但 ９
Ｏ年 代 以 来 ， 国 Ｉ ａ州 立 大 学 Ｃ ＲＳ ＩＮ
美 ｏｗ Ｈ Ｉ ＡＳ
Ｔ
是由于使用不当以及雾滴漂移 、
淋溶 、
药液挥发 、
选 等 对玉米蛋白粉及其水解肽的除草活性作 了长
择性不理想及降解产物 的危害等原因，
化学 除草剂 期 而全 面的研究 ， 现 玉 米 蛋 白粉 能 抑 制植 物 种 子
发
不仅严重影响作物及草坪本身的生长发育 ，
还可能 萌发时根系的形成 ，
而对已发育成熟的植物根系则
造成环境质量下降、
人类健康受损 以及地下水遭受 没有影响，
并由此开发 出玉米蛋白粉萌前除草剂用
污染 ，
同时带来耐药杂草种群增加、
抗除草剂杂草出 于防治草坪杂草及草莓田间杂草。但 由于玉米蛋 白
现等问题… 。随着人 们环保和健康 意识 的增强 以 粉为固体粉末 ，
不溶于水 ，
因而它不象液体除草剂那
及对化学除草剂使用后果 的深入 了解，
杂草无公害 样能被喷施和易于渗入土壤而发挥功效。进一步研
防治逐步受到重视 ， 中开发 天然无毒副作 用的植
其 究玉米蛋白粉水解肽对植物种子生根抑制作用的结
物源除草剂被认为是无公害防治杂草的一条有效途 果表明，
玉米蛋 白粉水解肽 比玉米蛋 白粉具有更高
径 。
的除草活性 。
。。但他们制备 玉米蛋 白粉水解肽所
早期研究表明 ，
某些植物组 织提取物及植物残
体在土壤 中的分解产物能抑制植 物种子发芽 ，
基 金项 目：
广东省科技 发展项 目（３ Ｊ０ ２
０ Ｋ６ ６ ）
其中玉米组织提取物及凋落在土壤 中的残体对植物 收 稿 Ｅ期 ：０ ６ ３ １
ｔ ２０ —０ －２
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・
３
４・ 生 态 与 农 村 环 境 学 报 第２２卷
用的水解酶仅 限于碱性 蛋白酶 ，
且制备 出的水解肽 子水冲洗 ３ ，
次 放在双层滤纸上置于直径为 ６ｅ
ｍ的
是分子量不同的混合肽 。一些研究表 明，
肽活性除 培养皿中。先加入 １ｍ
Ｌ去离子 水 ， 盖培 养 ５ ｄ
加
与其氨基酸的组成及结构有关外 ，
还与相对分子质 后，
分别加入 １ｍ
Ｌ不 同浓度 （ ． 、． 、．
０ ５ １０ ２ ０和 ５ ０
．
量 有关 ¨卜 。为此 ，
笔者 比较 ４种蛋 白酶 水解 玉 米 ｍｇ・ ）
ｍＬ ４种蛋 白酶酶解 的玉 米 蛋 白粉 水 解 肽 后
蛋白粉所制备 的水解肽对植物种 子 的生根抑 制作 用 Ｐｒ ｌ 封 口胶封 口培养 ，
ａｆ
ａｍ
ｉ 以去 离子水 为对 照。
用，
采用超滤法制备相对分子质量不 同的水解肽并 各处理和对照各选用 ２ ０粒种子 ，
均重复 ３次。培养
比较其除草活性 ，
为筛选可制备高除草活性肽的酶 条件 ：
每天光照 １ ｈ 温度 ２
６ ，
５℃ ， 光］
［ 照度 ｌ ０
０
５
系及了解除草活性肽的性质并进一步对其进行分离 ｋ，
培养时间共 １ 。培养结束后用数显游标卡尺
２ｄ
纯化提供必要的理论基础。
测量各幼苗根系中最长根长度作为统计指标 。
１ 材料与方 法
表１
４种蛋 白酶的最适 水解温 度和 ｐＨ值
Ｔａ ｌ
ｂｅ１ Ｏｐ ｉ ｌ ｈ ｄ ｏ ｙ ｉ ｏ ｄ ｔｏ ｓ ｆ ｆ ｕ ｉ ｅ ｅ ｔ
ｔｍａ ｙ ｒ ｌ ｓｓ ｃ ｎ ｉ ｎ ｏ ｏ ｒ ｄ ｆ ｒ ｎ
ｉ
１ １ 原 料 的预处 理
．
ｋｎ ｓｏ ｒ ｔａ ｅ
ｉ ｄ ｆｐ ｏ ｅ ｓ ｓ
玉米蛋 白粉 为山东鲁州食品有 限责任公 司生
产 。由于玉米蛋 白原料为较大 的褐色片状颗粒 ，
为
便于酶解反应时酶与底物 能够充分接触 ，
需要将原
料进行预处理：
将原料玉米蛋 白粉经粉碎机粉碎后
过孔径为 ０４ｍ １０目） ，
． ｍ（０ 筛 收集筛下淡黄色粉末
作为酶解底物。采 用凯 氏定氮法 ｌ 测得其蛋 白质
ｌ
质量分数为 ０ ５ 。
．１ １ ４ 超 滤 分析
．
１２ 玉 米蛋 白粉 水解 肽 的制备
． 以碱性蛋 白酶制备的玉米蛋 白水解肽为样品进
称取 ４份 ３ 玉米蛋 白粉 分别加入 ４个 ５０
０ｇ ０ 行超滤 以制备相对 分子质量 不 同的水 解肽 。使用
ｍ 三 角瓶 中， 加 入 ２０ｍ
Ｌ 各 ７ Ｌ去离 子 水 配成 １０
０ Ｍ ｌｐｒ Ｌｂｃｌ Ｔ ＦＳｓ ｍ超滤仪进行超滤 ，
ｉｉ ｅ ａｓａ Ｆ ｙ ｅ
ｌｏ ｅ ｔ 超滤
ｇ・ 玉米 蛋 白粉 悬 浮 液 后 置 于恒 温 振 荡 器 中震
Ｌ 膜相对分子质量为 ５００ｕ
０ 。在超滤过程 中保持进
荡，
速率为 １０ｒ ｍ ｎ 以玉米蛋 白粉悬浮液为底
２ ・ ｉ～， 口压力 为 １ ．９万 Ｐ （０ｐｉ ， 口压力 为 ６ ８
３７ ａ２ ｓ 出
） ．９万
物，
分别按酶 与底物 比为 １ Ｌ・ ～、５ Ｌ・ ～、
５ ｇ １ ｇ Ｐ （Ｏｐｉ ，
ａ １ ｓ 当透过 液体积达到原样 品体积 的 ６ ％
） ０
１
５ｍｇ・ 和 １ ｇ・ 加入 碱 性 蛋 白酶 、
ｇ ５ｍ ｇ 中性 蛋 时停止超滤 ，
分别 收集透过液 （相对分子质量小于
白酶 、
木瓜蛋 白酶和风味蛋白酶 ，
按照厂家推荐 的最 ５ ０ 肽）
０ｕ 和保 留液 （
０ 相对分子质量 大于 ５００ｕ
０
适条件确定各种蛋 白酶水解 温度和 ｐＨ值 （ １ ，
表 ） 肽 ）使用 Ｌｂｒ ａ ００
， ａｏ ｔ ４０ 旋转蒸发仪对其进行浓缩 ，
ｏ
不同蛋白酶的水解时间均设 置为６ｈ
。反应过程 中 旋 转 速度 ９ ｍｉ～， 馏 温 度 ５
０ｒ・ ｎ 蒸 ５℃ 。浓 缩 的透
用ｐＨ计监测 反应体 系 ｐ
Ｈ值 的变化 ，用少许 １０
０ 过液和保留液置于 一 ０℃冰箱中冷冻 ２ｈ
８ 后进行冷
ｍ Ｌ‘
Ｌ・ 一氨水调节反应体系的 ｐＨ值 ，
使之稳定在各 冻干燥 ，冻干温度为 一 ４℃ 。当腔体压力保持不变
５
种酶所需的最适 ｐＨ水平。反应结束 后 １０℃煮沸
０ 达 ２ｈ 即达冻干终点 ，
时 分别 收集保 留液和透过液
１ ｉ 灭酶活及赶走残存的氨气 ，
０ａｎ
ｒ 冷却后 于 ４５０
０ 的冻干粉 ，
并按 １３
． 的方法进行除草活性检测 。
ｒ ｍｎ
・ｉ 离心 ２ ｉ，
０ｍｎ 取上清液经 ２层滤纸抽滤 以 １ ５ 数据统 计 分析
．
除去上清液表面漂浮 的杂质， 过滤后 的上清液置于 抑制率 （ ）
％ 计算方法如下 ：
抑制率 ＝［ 对照组
（
旋转蒸发仪 中浓缩 ，
经冷冻干燥 ，
收集所得的冻干粉 根长 一处理组 根长 ）对 照组根 长 ］ ０％ 。统计
／ ×１０
即为玉米蛋 白粉的不同水解肽样品。
分析借助 Ｓ Ｓ １５ｆ ｉ ｏ ｓ
ＰＳ１． ｒ ｎ ｗ 统计软件包完成。
ｏｗ ｄ
１３ 杂草种子萌发过程 中根系生长抑制活性检测
． 所有定量指标均用平均值 ± 准差 （ ｓ 表示 ，
标 ｘ± ） 参
以 杂草光 磷水 蜈蚣 （ ｙｌｇ ｒ ｉｌ ａ．ｅ １
Ｋ ｌｎａｂｅ ｔｉ ｖｔ１ｏ
ｉ ｖｏ ａ ｉ． 数统计分析方法为独立样本 ｔ检验 ， 著性水平设
显
ｅ ｓ种子作为根系生长抑制活性 的检测材料，
ｐ）
ｉ 这主 为 Ｏ＝０ ０ 。采用 Ｏ ｅＷａ Ｎ Ｖ
ｔ ．５ ｎ— ｙＡ Ｏ Ａ法 进 行 多 组 间
要是 由于该杂草发芽率高 ，
生长势整齐 。先用 ７０
５ 差 异分析 。
ｍ Ｌ
Ｌ・ 酒精浸泡光磷水蜈蚣种子 １ ｉ，
ｎ 再用去离
ｍ
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第 ３期 杨 剑等 ：４种 玉米水解肽 的除草活性及 与相对分子质量 的关 系 ・ ５・
３
力是压差，在溶液一侧加压， 使溶剂透过膜而得到分
２ 结 果与分析 离 。碱性蛋 白酶解液超滤后透过液和保留液中水解
２ １ ４种蛋 白酶水解玉米蛋 白粉制备除草活性肽
． 肽 的除草活 性见 图 １
。
的活 性 比较
酶解 ６ｈ ４种蛋 白酶水解玉米制备的水解肽
时 ｌ０
０
对杂草种子萌发根系生长的抑制影响见表 ２
。 ８
０
邃 ６
０
瓣
表２
４种蛋 白酶水解玉米制备 的水解肽对光磷水 蜈蚣的抑
姜 ０
４
制影响
２
０
Ｔａ ｌ Ｉ ｈ ｂ ｔｏ ａ ｆｅ ｔｏ ｙ ｌ ｇ ｒ ｖｔ ｌ ａ ． ｅｏ ｅ
ｂ ｅ２ ｎ ｉ ｉ ｎ ｌｅ ｃ ｎ Ｋ ｌ ｎ ａ ｂ ｅ ｉ ｉ ｖ ｒ ／ ／／ －
ｉ ｉ ｏａ
ｐ ｏ ｏ ｒ ｄ ｆｅ ｅ ｔ ｋ ｎ ｓ ｏ ｅ ｔｄ ｓ ｐ ｅ ａ ｅ ｕ ｆ ｈ －
ｆｆ ｕ ｉ ｒ ｎ ｉ ｄ ｆ ｐ ｐ ｉ ｅ ｒ ｐ ｒ ｄ ｏ ｔ ｏ ｙ ０ ０
５ １０
． ２０
． ５０
．
．
ｄ ｏ ｙ ｉ ｏ ｎ ｇ ｕ ｅ ｙ ｔ ｅ ｅ ｚ ｍｅ
ｒ ｌ ｓｓ ｏ ｃ ｒ ｌ ｔｎ ｂ ｈ ｎ ｙ ｓ
ｆ 浓 度 ／ ｇｍＬ 。
（ ． ‘１
ａ
ｒ
图 ｌ 经 ５００ｎ超滤膜超滤后透过液与保 留液 中
０
水解肽对 光磷 水蜈蚣的抑制影响
０５
． ６ ． ５±３ ２ ５ ． １±５ １ ４ ７ ７． ６ ４ ． ６±７ ８ ’
２７ ．２ ７ ９ ． ４ ４． ８± ４ １ ５ ．７
Ｆ ｇ １ Ｉ ｂ ｈ ｔｏ ａ ｆｅ ｔｏ ｌ ｎ ａ ｂ ｅ ｉ ｌ ａ ．
ｉ ． ｎ ｉ ｉ ｎ ｌｅ ｃ ｎ Ｋｙ ｌ ｇ ｒ ｖｔ ｉ ｖ ｒ
ｉ ｌ ｏａ
１０
． ６ ． ０±２ ２ ６ ． ５±１ ７ ６ ． ２± ９
８５ ．２ ５ ３ ． ２ ０ ２ ５． ２’ ５ ． １±７ ６
２５ ． ０’
２０
． ７ ． ｌ±３ ２ ７ ． ２±５ ２ ７１ ５
８７ ．９ ４ ５ ．６ ． ０±６ ４
． ６’ ６ ． ±５ ６ ’
１７
５ ．ｌ
／ｏ ／ ｏ ｅｔ ｅ ｉ ｅｆｔｒ ｇｌ ｕ ｒｆｏ ５０ ０ｎ
ｅ ￣ ｓ ｆ ｐｉｓ ｎｔ ｌ ｉ ｑ ｏ ｍ ０
／ ｐ ｄ ｈ ｉ ｅｎ ｉ ｒ
５０
． ８ ．０±１９ ４．０±２ ３ ８ ．６±１ ８
６８ ．２８ ７ ．７ ３ ７ ．４‘ ７ ．０±７ ７
２７ ．８ ｈ ｐｅ ｆ ｔ ａ ｉｎ ａ ｄ ｒ ｓｄ ａ ｏ ｕ ｏ ｙ ５ ０ ０ ｎ Ｐ ｌ ｃ ｎ
ｙ ｒ ｌｒ ｔ ｎ ｅ ｉ ｕ ｌｓ ｌ ｔ ｎ ｂ ０ ｅｌ
ｉ ｏ ｉ ｉ
ｏ
表示 Ｐ＜ ．５
００ ， 表示 Ｐ＜ ． ｌ 与碱性蛋 白酶 比较 。
００ ，
由图 １可 知 ， 解 肽 经 过 ５００Ｕ超 滤 膜 超 滤
水 ０
由表 ２可知 ，
碱性蛋 白酶水解玉米制备的水解 后，
透过液和保留液对光磷水蜈蚣均有抑制作用，
且
肽对光磷水蜈蚣的抑制率高于其他 ３种蛋 白酶水解 透过液即分子量为 ５００Ｕ以下的肽液与保 留液相
０
肽。Ｄ ｎ ｅ和 Ｔｍ ａｅ
ｕｎｔ ａ ｈｎ 法分析表明，与碱性蛋 白酶 比具有更高的抑制率。浓度为 Ｏ ５ １０ ２ ０和 ５ Ｏ
． 、． 、． ．
水解玉米水解肽的抑制活性 比较 ，
木瓜蛋 白酶水解 ｍ ｍ 水解肽透过液 的抑制率分别达４ ．０ 、
ｇ・ Ｌ ５７ ％
玉米水 解肽 无显 著 差 异 （Ｐ＞０ ０ ） 风 味蛋 白酶 水
．５ ， ５ ．９ 、 ．６
７ ７％ ７ ７％和 １０ ；
５ ０ ％ 而在 同样浓度下保留液
解玉米 水解 肽具 有 显 著 差 异 （ ＜ ．５） 而 中性 蛋
Ｐ ００ ， 的抑 制 率 分 别 为 ４ ． ７ 、 ０ ７ ％ 、９ ４ ％ 和
２ ９％ ５ ． ４ ５ ． ４
白酶水 解 玉米水解 肽则 表 现 出极显 著差 异 （
Ｐ＜ ６ ．８
４ ２ ％。独立样本 ￡ 检验分析结果 （ ４ 表明，
表 ） 透
ＯＯ ） Ｎ Ｖ
．１ 。Ａ Ｏ Ａ方差分析 （ ３ 表明 ，
表 ） 选用不同蛋 过液与保 留液除在 Ｏ ５ｍ ｍ 浓度下无显著差
． ｇ・ Ｌ
白酶 水解 玉米制 备 的除草 活性 肽 对杂草 的抑 制具有 异（ ＝ ．６ ， ００ ） 其余各浓度条件下均具有
￡ ０ ６４Ｐ＞ ．５ ，
极显著差异（ ００ ）
Ｐ＜ ．１ 。 极显著差异（ ０ ０ ） 由此 可见 ，
Ｐ＜ ． １ 。 相对分子质量
在 ５００Ｕ以下的小分子肽具有更强的除草活性。
０
表 ３ ４种蛋 白酶水解玉米 制备的水解 肽除草活 性的 Ａ
ＮＯ－
ＶＡ方差分析 表 ４ 独立样本 ｔ 验结果
检
Ｔａ ｌ ＡＮＯＶＡ ｔ ｏ ｉ ｅ ｅ ｔｋ ｎ ｓ ｏ ｐ ｐ ｉ ｅ
ｂｅ３ ｆ
ｏ ｈｅｆ ｕｒ ｄ ｆ ｒ ｎ ｉ ｄ ｆ ｅｔ ｓ
ｄ Ｔａ ｌ Ｉ ｄ ｐ ｎ ｅ ｔｓ ｍ ｐ ｅ ｓ
ｂｅ４ ｎ ｅ ｅ ｄ ｎ ａ ｌ ｔ ｔ
ｓ ｅ
超滤后透过液和保留液中水解肽的除草活性 ３ 讨论
比较
超 滤法是 应用 孔径 为 １０～ ． ｍ（ 更 大 ）
． ２０ａ 或 的 酶解 ６ｈ ， 种蛋白酶制备的玉米蛋 白粉水解
时 ４
超滤膜来过滤含有 大分子或微细粒子的溶液 ，
使大 肽均显示 出较高的除草活性。与碱性蛋 白酶相 比，
分子或微细粒子从溶液中分离的过程 。超滤的推动 木 瓜蛋 白酶水 解 玉米蛋 白粉水 解肽 对光磷 水蜈 蚣 的
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３
６・ 生 态 与 农 村 一环 境 学 报 第 ２ 卷
２
・
抑制活性无显著差异 （ ０ ０ ） 风 味蛋 白酶水解
Ｐ＞ ．５ ， ｌ ８—１ ７
８ ９ ．
［］
４ Ｐ ＲＩ
ＡＴ ＣＫ
Ｚ Ａ． Ｐｈ ｔｔｘｃ ｕ ｓａ ｃ ｓＡｓｏ ｉｔｄ Ｗ ｉ１ｔｅ Ｄｅ
ｙｏｏ ｉ Ｓ ｂ ｔｎ ｅ ｓｃａｅ ｔ ｈ ．
ｌ
玉米蛋白粉水解肽具有显著差异 （ ００ ） 而中
Ｐ＜ ．５ ，
ｃｍ ｏｉ ｎｉ Ｓ ｉ ｏ Ｐ ｔ ｅ ｄ ｅ ［ ］ ｏ ｃ ｎ ｅ １７ ，
ｏ ｐ ｓ ｏ ｎｏ ｌ ｆ ｌ ｓ ｕ ｓ Ｊ ．Ｓ ｉＳ ｉ ｃ ， ９ １
ｉ
ｔ ａ Ｒ ｉ
ｎ ｌ ｅ
性蛋 白酶 水 解 玉 米蛋 白粉 水解 肽呈 极 显 著 差异 １ １： ３—１
１ １ ８．
（ ００ ）
Ｐ＜ ．１ 。因此 ，
选择玉米蛋 白粉作 为底物制备 ［］
５ ＧＵＥＮＺＩＷ
Ｄ，ＭＣＣＡＵＡ ，ＮＯＲＳ ＡＤＴ Ａ．Ｐ ｅｅ ｃ ｄ
ＴＭ Ｔ Ｆ ｒｓ ｎ ｅａ
ｎ
除草活性肽时 ， 可以优先考虑使用碱性蛋 白酶和木 Ｐ ｒｉｔｎ ｅ ｏ ｈ ｔｔｘｃ Ｓ ｂ ｔｎ ｅ ｉ Ｗｈ ａ ，Ｏａ ， Ｃ ｎ ， ａ ｄ
ｅｓｓｅ ｃ ｆＰ ｙｏｏ ｉ ｕ ｓａ ｃｓ ｎ ｅｔ ｔ ｏ ｒ ｎ
瓜蛋 白酶进行水解 。在生物活性肽 的研究 中，
以降 Ｓｒ ｕ ｅ ｄ ｅ ［ ］ Ａ ｒｎｍ ｕ ａ，９ ７５ ： ３ １５
ｏ ｈ ｍ Ｒ ｓ ｕ ｓＪ ． ｇ ｏ ｙ ｏ ｒ １６ ， １ — ６ ．
ｇ ｉ ｏ Ｊ ｎ ｌ ９ ６
［］
６ ＣＨＯＵ ，Ｐ ＲＩ
ＣＨ ＡＴ ＣＫ Ｚ Ａ．Ｉ ｅ ｔ ｃ ｔ ｎ ａ ｄＰ ｙｏｏ ｉ ｔ ｉ
ｄ ｎｉ ａｉ ｈ ｔｔｘｅＡｃｉ ｔ
ｉ
ｆ ｏ ｎ ｖｙ
血压肽的研究最为广泛而深入 。降血压肽的活性与
ｏ ｏ ｏ ｎ ｓ Ｐｒ ｄ ｃ ｄ Ｄｕ ｎ ｃ ｍｐ ｓｔ ｎ ｏ ｒ ｄ Ｒｙ
ｆ Ｃ ｍｐ ｕ ｄ ｏ ｕ ｅ ｒ ｇ Ｄｅ ｏ ｏ ｉｉ ｆ Ｃｏ ａ ｅ
ｉ ｏ ｎ ｎ
其结构密切相关 ，
具有高降血压活性 的降血压肽都
Ｒ ｓ ｕｓ ｉ Ｓ ｉ Ｊ ． Ｊ ｒａ ｏ Ｃ ｅ ｉ ｃｌ ， ９ ６
ｅｉ ｅ ｎ ｏ ｌ［ ］ ｏｎ ｌ ｆ ｈｍ ｃ Ｅ ｏ ｇ １７ 。
ｄ ｕ ｌ
ａ ｏｙ
有类似的氨基酸组成与结构 ，
且其 活性与相对分子 ２： ６ —３ ７．
３９ ８
质量有关 ， ＫＭ 等¨
如 Ｉ 利用超 滤膜反应器 收集 了 ［ ］ ＪＭＥＮＥ ＣＨＵＬ
７ Ｉ Ｚ ＪＪ，Ｓ ＴＺ Ｋ，ＡＮＡＹＡ Ａ
Ｌ，ｅ ｉ
ｔｏ．Ａｌ ｌｐ ｈｉ ｏ
ｌ ｏ ａ ｃＰ —
ｅ ｔ
不同相对分子质量范围的肽 ，
并测定各组分 的降血 ｔ ｔ ｏ ｏ ｅ ［ ］ ｏ ｒ ｆＣ ｅ ｉ ｃｌ ， ９ ３
ｅ ｉ ｏ Ｃ ｒ Ｐ ｌ ｎ Ｊ ．Ｊｕ ａ ｏ ｈ ｍ ｃ Ｅ ｏ ｇ １８ 。
ｎａ ｆ ｎ
ｌ ｌ ｎｌ ｌ
ａ ｏｙ
９：０１
１ １—１ ２
０ ５．
压活性 ，
发现相对分子质量小于 １ ０
０Ｕ的组分降血
５
［］
８ ＣＨＲＩＴＩ
Ｓ ＡＮＳ Ｎ
Ｅ． Ｔ ｅ Ｕｓ ｆＣｏ
ｈ ｅ ｏ ｒ Ｇｈｔｎ Ｍｅ ｇ ａ Ｎａｕａ
ｎ ｅ ａ ａ ｔｒｌ
ｌ
压活性最强。然而除草活性肽的活性与其氨基酸的
Ｐｅｍ ｒ ｎｅＷｅ ｏｔ ｌ ｎＴ ｒ Ｊ ．Ｉｔ ｎｔ ｎ ｕ ｇ ｓ
ｒ ｅ ｅｃ ｅ Ｃ ｎ ｏ ｉ ｕ ［ ］ ｎ ｒ ｉ ａ Ｔ ｒ ｒ ｓ
ｅ ｇ ｄ ｒ ｆ ｅ ａｏｌ ｆ ａ
组成、结构及相 对分 子质量关 系研究还很 少。ＬＵ
Ｉ Ｓ ｃｅｙＲｅ ｅ ｒｈＪ ｕｎ ，９ ３， ２ ４—２ ０．
ｏ ｉｔ ｓａｃ ｏ ｒａ １ ９ ７： ８
ｌ ９
等 从玉米蛋 白粉水解肽 中分离并鉴定 了 ５ 具
个 ［］
９ ＤＩ Ｌ
Ｌ ＥＹ Ａ ，Ｎ０ＮＮＥＣＫＥ Ｇ Ｒ 。ＣＨＲＩＴＩ
Ｃ Ｓ ＡＮＳＮ
Ｅ．Ｃｏ － ｓ ｄ
ｎ
ｒ Ｂａ ｅ
有除草活性的 ２肽和 １ ５肽 ，
个 他们还推测，
玉米蛋 Ｅｘｒｃｓｔ ｎ ａ ｅ Ｗ ｅ ｄ ｄ Ｐ ｏ ｉｅ Ｎｉｏ ｅ ｉ Ｍａｔｄ Ｒｏ
ｔａ ｔ ｏ Ｍａ ｇ ｅ ｓ ａ ｒｖｄ ｔ ｇ ｎ ｎ
ｎ ｒ ｔｅ － ｗ
白粉水解肽 中还包 含有更多具有 除草活性 的水解 Ｓ ａ ｂｒ ｕｔ ｅ Ｊ ． ｏ Ｓ ｉ ｃ ，０ ２ ３ （ ） １ ５ — ０ ６
ｔ ｗ ｅ ｙＣ ｌ ｒ［ ］ Ｈ ｒ ｃ ｎｅ２０ ，７ ７ ： ３ １５ ．
ｒ ｒ ｕ ｔ ｅ ０
［Ｏ Ｉ Ｄ Ｌ Ｃ
１ ］ ＬＵ ＨＲＩ１ ＡＮＳＮ
ｓ１ Ｅ，ＧＡＲＢＵＩｒ
， Ｔ．Ｈｅｂｉｉａ ｔ ｉ
１Ｊ ｒ ｃｄ Ａｃ ｖｔ
ｌ ｉ ｙ
肽，但尚未发现除草活性肽的生物活性与特定氨基
ｏ ｄ ｏｙ ｅ ｏ ｕｔｎ
ｆａＨｙ ｒｌｚ Ｃ ｒ Ｇｌ ｅ Ｍｅｌｏ ｒｅ Ｇｒｓ ｐ ｃｅ ｄ ｒ
ｄ ｎ ａ ｎ Ｔｈｅ ａｓ Ｓ ｅｉｓＵｎ ｅ
酸组成及相对分子质量的关系。由于一般玉米蛋 白 Ｃ ｎ ｏ ｅ ｎ ｉ ｎ ｅｔ Ｊ ． ｏｒａ ｏ Ｐ ｎ Ｇ ｗｈＲ ｇ ｌ ｉ ，
ｏ ｔ ｌ ｄ ｖ ｍ ｎ ［ ］ Ｊｕ ｌ ｆ ｌ ｔ ｒ ｔ ｅｕ ｔ ｎ
ｒｌ Ｅ ｒ ｏ ｓ ｎ ａ ｏ ａｏ
粉水解肽是不 同肽段的混合物 ，
了解玉米水解 肽的 １ ９ ，３ ４ ：２ —２６．
９４１ （）２ １ ２
相对分子质量与除草活性 的关系 ，
对进一步制定 分 Ｓ ＴＯ
ＡＩ Ｙ，Ｗ ＡＮＥＺＡＫＩＫ，ＫＡＷ ＡＴ Ａ ， ｔｏ ．Ｓｒ ｃｕｅａ ｄ Ａｃ
Ｏ ｅ ｉ ｔｕ ｔｒ －
ｎ
ｔ ｉ ｆＡｎ ｉｔｎ ｉ ｎ ｅｔ ｇＥｎ ｙ ｎ ｉｉ ｒ ｅ ｔ ｅ ｒｍ
ｉ ｔ ｏ ｇｏｅ ｓｎ Ｃｏ ｖ ｒｉ ｚｍｅ Ｉｈｂｔ ｙ Ｐ ｐｉ ｓ Ｆｏ
ｖｙ ｎ ｏ ｄ
离肽单体的技术路线具有指导意义 。本研究初步证
Ｓｋ ｄ Ｓｋ ｅｓ Ｊ ．Ｂｏ ｉ ｃ ，Ｂｏ ｅｎｌ ，ａｄ Ｂ －
ａｅ ａ ｅ Ｌｅ ［ ］ ｉ ｃ ｎｅ ｉ ｅ ｏ ｇ ｎ ｉ
ｎ
ａ ｓｅ ｔｈ ｏ ｙ ｏ
实，
相对分子质量小于 ５ ０ 的玉米水解肽具有更
０Ｕ
０
ｃｅ ｉｒ ，９ ４ ５ （Ｏ） １６
ｈ ｍｓ ｙ １９ ，８ １ ：７ ７—１７ ．
ｔ ７１
高的除草活性 ，
因此在玉米水解肽 的分离纯化时可 ［ ２ 国清．
１ ］黄 玉米降血 压肽分 离纯化 的研究 ［ ］ 广州 ： 南理 工
Ｄ． 华
先通过超滤法进行初步筛选 ，
然后进行下一步分离 大学 ，０ ４
２０ ．
（如凝胶层 析及高效 液相色谱 ） 以提高 分离纯化
， ［ ３
１ ］ 张英 ．食品理化与微生 物检测实 验 ［ ．
Ｍ］ 北京 ： 国轻工 出版
中
效率 。
社 ，０ ５：０—８ ．
２０ ８ ６
［ ４ Ｍ
１ ］ ＫＩ Ｓ Ｋ，ＢＹＵＮ Ｇ，Ｐ
Ｈ ＡＲＫ Ｐ ｔａ． Ａｎ ｉｔｎ ｉ ｎ ｅ－
Ｊ，ｅ １ ｇｏｅ ｓｎ ＩＣｏ ｖ ｒ
参考文献 ：
ｔｎ ｚｍｅＩｈｉ ｔｒ ｅ ｔ ｅ ｕ ｆ ｄＦ ｍ ｏ ｉｅＳ ｉ ｌｔｎ
ｉｇＥｎ ｙ ｎ ｂｉ ｙ Ｐ ｐｉ ｓＰ ｒｉ ｒ Ｂ ｖｎ ｋｎＧ ａｉ
ｏ ｄ ｉ ｅ ｏ ｅ
Ｈ ｄ ｌ ａ ［ ］ ｏｒ ｆＡｈｕ ｕ ｎ ｏｄ Ｃ ｅ ｉ ｙ
ｙｒ ｙ ｔ Ｊ ．Ｊｕ ａ ｏ Ｓｃｌｒ ａｄＦｏ ｈｍｓ ，
ｏ ｓｅ ｎｌ ｔａｌ ｔ
ｒ
江佳富 ，
王俊 ， ， 杂 草生物防治研究 回顾与展望 （
蔡平 等． 综述 ）
２ ｏ ，９ ６）２ ９
ｏ １ ４ （ ：９ ２—２ ９ ．
９７
［ ］ 安徽农业大学学报 ， ０ ， （ ） ６ — ５
Ｊ・ ２ ３３ １ ． ６・
０ ０ １ ｆ ５
１
１
ＬＩ Ｄ
Ｕ Ｌ．ＣＨＲＩＴＩ
ｓ ＡＮＳＮ
Ｅ．Ｂｉａ ｔ ｉ ｆａＰｅ ｔｐｅ ｔ ｅＩｏａ
ｏ ｃｉ ｔ ｏ ｎａ ｐｉ ｓｌ—
ｖｙ ｄ
［ ］ Ｌ Ａ ，Ｓ
２ ＡＸ Ｒ ＨＥＰＨＥＲＤ Ｓ，ＥＤＷＡＲＤＳＪＶ
Ｈ Ｔ．Ａ ｈｏ ｉ ｎ
Ｃ ｌｍｓｓＩ．
ｔ ｒ ｏ ｌ ｅ Ｈ ｄ ｌ ａ ｎ ｏ ｕ ｒ ｎ ［ ］ Ｊｕ－
ｅ Ｆ ｍ Ｃ ｒ Ｇｕ ｎ ｙｒ ｙ ｔ ｏ ｌ ｍｐ ｅ ｅＬ Ｊ ． ｏｒ
ｄ ｏ ｎ ｔ ｏ ｓｅ Ｌ ｉ ｅｎ
ｄｃ ｇ ｏｉ ｆ ｌｒａ ａａ ａＰ ｔ ｔｌ ｅ ｉｄ ［ ］
ｕ ｉ ｘ ｒ ｔ ｎｒ ｓ ｏ ｎ ａ Ｈ ｒ ｃ ｅ Ｊ ．Ｗｅｄ
ｎ Ｔ ｎ ｏＡ ｅ ｉ ｅ ｉ ｂ ｉ ｅ
ｈ ｆ ｌ ｔ ｒｗｈＲ ｇｌｔ ｎ １９ １ （ ） １ ７
ｌ Ｐｎ Ｇ
ａ ｏ ａ ｏ ｔ ｅｕａｏ ，９ ６，５ １ ：３—１ ．
ｉ
Ｔ ｃ ｎ ｌｇ １ ８ ２：４ —５ ４．
ｅ ｈ ｏｏ ｙ，９ ８， ５ ０ ４－
［ ］ ＮＥ Ｓ Ｎ Ｋ Ｆ Ｃ Ｄ ＹＴＦ ＷＯ Ｄ Ｂ Ｔ ｅ ｎ ｕｎｅ ｆｈ
３ ＩＬ Ｅ ， Ｕ Ｄ ， Ｏ ＳＷ ． ｈ ｆ ｅｃ ｔｅ
Ｉｌ ｏ
Ｅ ｔ ｃ ｆ Ｓ ｍｅ
ｘｒ ｔｏ ｏ Ｃｒｐ ａ ｄ ｏｌ ｓｄｕ ｓ ｎ
ａ ｏ ｓ ｎ Ｓ ｉ Ｒｅｉ ｅ ｏ Ｇｅｍｉａｉｎ ｎ
ｒ ｎ ｔ ａ ｄ
ｏ 作者 简介 ：
杨剑 （９５ ） 男 ， 北 罗 田人 ， 士生 ，
１６一 ， 湖 博 主要 研
Ｇ ｗｈ Ｊ ． Ｃ ｎｄａ Ｊｕ ａ ｏ Ｐａｔ Ｓ ｉ ｃ ， ９ ０ ４ ：
ｏ
ｒ ｔ ［ ］ ａ ａｉ ｏｒｌ ｆ ｌ ｃ ｎｅ １６ ， ０
ｎ ｎ ｎ ｅ 究方 向为杂草无公害控制及生物技术 。
zycnzj.com/http://www.zycnzj.com/