1. 北 京 大 学 学 报 （ 医 学 版 ）
Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ Ｅ ＩＧＵ ＩＥ ＳＴ （ Ｅ Ｌ ＨＳ ＩＮ Ｅ ） ｏ ４ Ｎ ． Ｄ ｃ ２０
Ｏ Ｒ Ａ ＦＰ ＫＮ ＮＶ Ｒ ＩＹ Ｈ Ａ Ｔ ＣＥ Ｃ Ｓ Ｖ ｌ １ ｏ６ ｅ． ０９
． · ６９
９·
·技术方法·
粪肠球菌在根管内定植模式的体外研究
郭惠杰１，岳 林２△
（．
１ 北京大学人民医院口腔科，北京 １０４ ；．北京大学口腔医学院·口腔医院牙体牙髓科）
００４２
［摘 要］目的：建立体外粪肠球菌感染根管模型，观察根管内粪肠球菌的感染状态及其分布特征。方法：选择因
正畸减数拔除的健康前磨牙 １
０例，随机分为两组，将其中 ５例高压灭菌后分别浸泡于含有 １ ５ｍ
． Ｌ无菌脑心浸液
（ ｒ ｎｈａ ｉ ｕｉ ， Ｈ ）
ｂａ ｅｒ ｎ ｓ ｎＢ Ｉ培养基和 ０１ｍ
ｉ ｔｆ ｏ ． Ｌ麦氏比浊度为 ５的粪肠球菌菌液的 Ｅ ｐｎｏ 管中，于 Ｃ ２ 孵育箱中培
ｐｅｄｒｆ Ｏ
养 ２ 建成体外粪肠球菌根管感染模型，
１ｄ 其余 ５例则作为对照组。将所有样本沿牙长轴近远中向劈为两半，一半
作组织学 Ｂｏ ｎ Ｂｅｎ
ｒ ＆ ｒ 染色观察，
ｗ ｎ 另一半置扫描电镜下观察粪肠球菌在根管内的感染状态。结果：组织学结果显
示，在所有研究组样本中，粪肠球菌均不同程度地侵入牙本质小管中，测微尺测量深度可达 ３０～ ０ ｍ
３ １００μ 。所有
对照组样本的根管壁表面干净，牙本质小管排列有序，无细菌染色颗粒。扫描电镜结果显示，在所有研究组样本的
根尖 １３段，
／ 粪肠球菌与无定形基质形成典型的生物膜结构，而在根管的冠 １３和中 １３段，
／ ／ 粪肠球菌则成对或短
链状排列在根管壁表面，呈现浮游状态。对照组的根管壁表面洁净，牙本质小管和管间牙本质结构清晰可见，未见
细菌侵入。结论：粪肠球菌可单独定植于根管内，形成生物膜并侵入牙本质小管深部。此模型可用于体外评价各
种机械预备和化学消毒药物对根管内感染的清除效果，从而为临床选择治疗操作提供参考。
［关键词］肠球菌， 牙髓腔；
粪； 根尖周炎；牙模型
［中图分类号］Ｒ ８ ．５
７１０ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１７  ７ （ ０９ ０  ９ 
６１１ Ｘ ２０ ） ６０ ９０
６ ６ ３
ｄ ｉ ０３６ ／ ｉ ｎ１７  ７ ．０９０ ．１
ｏ １ ．９９ ｊ ｓ ．６１１ Ｘ ２０ ．６０７
： ．ｓ ６
Ｐ ｔ ｒｓ ｆ ｎｅｏｏｃｓ ａｃｌ ｉ ｎｅｔ ｏｔ ａ ａ ：Ａ ｎｖｒ ｔｄ
ａｔ ｎ ｏ Ｅ ｔ ｃｃｕ ｆｅａ ｓｎｉｆ ｅ ｏ ｃｎ ｌ ｎｉ ｉｏｓ ｙ
ｅ ｒ ｉ ｃ ｄｒ ｓ ｔ ｕ
Ｕ ｕ ｊ１ Ｕ ｉ
Ｇ ＯＨ ｉｉ ，Ｙ ＥＬｎ△
ｅ ２
（ ． ｅａ ｍ ｎ ｏ Ｓ ｍ ｔｏｙ ｅｉ Ｕ ｉ ｒｔ Ｐｏｌ ｓ ｏｐ ａ ｅｉ １０４ ，Ｃ ｉ ； ．Ｄ ｐｒ ｅｔ ｆ ｐｒ ｉ
１ Ｄ ｐｒ ｅｔ ｆ ｔ ａ ｌ ，Ｐｋ ｇ ｎ ｅ ｉ ｅｐ ’ Ｈ ｓｉｌ ｉｎ ００４ ｈ ａ ２ ｅａ ｍ ｎ ｏ Ｏ ｅ ｔｅ
ｔ ｏ ｏｇ ｎ ｖ ｓｙ ｅ ｔ，Ｂ ｊ ｇ ｎ ｔ ａｖ
Ｄ ｎ ｓｙａｄＥ ｄｄｎ ｃ，Ｐｋ ｇＵ ｉ ｒｔ ｃｏｌ ｎ ｏｐ ａ ｏ Ｓ ｍ ｔｏｙ
ｅｔｔ ｎ ｎｏｏｔｓ ｅｉ ｎ ｅ ｉ ｈｏ ａｄＨ ｓｉｌ ｆ ｔ ａ ｌ ）
ｉｒ ｉ ｎ ｖ ｓｙＳ ｔ ｏ ｏｇ
Ａ Ｓ Ｒ Ｃ Ｏ ｊ ｔ ｅＴ ｓ ｂ ｓ ｎｉ ｉｏｒ ｔ ａａ ｍ ｄｌｎ ｃ ｄｂ ｎ ｒ ｏ ｕ ｆ ｃｌ ａｄｔ
ＢＴ Ａ Ｔ ｂｅ ｉ ： ｏｅｔ ｌｈａ ｎｖｒ ｏ ｃｎｌ ｏｅ ｉ ｅｔ ｙＥ ｔｏ ｃ ｓａ ａ ｓ ｎ ｏ
ｃｖ ａｉ ｔ ｏ ｆ ｅ ｅｃ ｃ ｅ ｉ
ｏｓｒ ｈ ｏ ｈｌ ｙｄ ｔｂｔｎａｄｒ ａｖ ｏｉｏ ｆ ｎ ｒ ｏｃｓａｃｌ ｉ ｎ ｃ ｄｒ ｔ ａａ ．
ｂｅ ｅｔ
ｖ ｅｍ ｒ ｏ ｇ，ｉｒ ｕ ｏ ｎ ｅ ｔｅｐｓｉ
ｐ ｏ ｓｉ ｉ ｌｉ ｔｎｏ Ｅ ｔｏ ｃ ｆ ａ ｓｎｉ ｅｔ ｏ ｃｎｌ
ｅｃ ｕ ｅ ｉ ｆ ｅ ｏ ｓ
Ｍｅ ｏ ｓ ｅ ｕ ａ ｅｌ ｙ ｒ ｏ ｒｅｔ ｃ ｄｆ ｏ ｈｄｎ ｃ ｅｓｎ ｗ ｒ ｃｌｃ ｄ ｏｏ ｉ ｓ ｒ
ｔ ｄ：Ｔｎｈｍ ｎｈａｈ ｐｅ ｌ ｓ ｘ ａｔ ｏ ｒ ｏｏｔ ｒ ｏｓ ｅ ｏｅｔ ．Ｆｌｗｎ ｔ ｉ
ｈ ｔ ｍ ａ ｒ ｅ ｒ ｔ ｉ ａ ｅ ｌ ｅ ｌ ｇ ｅ
ｌａｏ， ｔａｏ５ｓｅｉｅｓ ｅ ａｅｔａｙｒ ｓ ｒ ｄｔｓｐｒ ｅ ｐｅｄｒｔ ｅ ｃｎ ｉ ｎ １５ｍ
ｉ ｔｎ ａｏ ｌｆ ｐｃ ｎ ｗ ｒ ｓｐ ｃｌ ｔ ｎｆ ｒ ｏ ｅａ ｔＥ ｐｎｏ ｕ ｓ ｏｔｎ ｇ ． Ｌ
ｚｉ ｔ ｍ ｅ ｉ ｌ ａ ｅｅ ａ ｆｂ ａｉ
ｂａ ｅｒｉ ｕｉ ｒ ｈ（ Ｈ ）ｉ ｃｌｅ ｉ ． ＬＥ ｔｏｏｃｓａｃｌ ｓｓｅｓ ｎｔ ｔ ａ ｅｎ
ｒ ｎｈａ ｎ ｓ ｎｂｏ Ｂ Ｉ ｎ ｕ ｔ ｔ １ｍ ｎ ｒ ｃ ｆ ａ ｓ ｕｐｎｉ ｈ ｈｄｂｅ
ｉ ｔ ｆ ｏ ｔ ｏ ａ ｄｗ ｈ０ ｅｃ ｕ ｅ ｉ ｏ ａ
ａｊ ｔ ｏＭ ｆ ｌ ｄ５ ｎ ｅ ｎｕａ ｄａ３
ｄ ｓ ｄｔ ｃ ｒ ｎ ，ａｄｗ ｒ ｃｂｔ ｔ ７℃ ｆ ２ ａｓ ｈ ｔ ｒ ｐｃ ｅｓ ｅ ｓ ｏ
ｕｅ ａａ ｅｉ ｅ ｏ １ｄｙ．Ｔ ｅｏ ｅ ５ｓｅｉ ｎ ｗ ｒ ｃｎ
ｒ ｈ ｍ ｅａ
ｔ ｌ ｈ ｏｔｏ ａ ｓｅｉｅｓ ｅ ｈｎｓｌ ｉ ｏｔｏｈｌ ｓ ｌ ｇｔ ｅｉ ｉａ ａｉ ｎ ａ ｗ ｓ
ｒ ｓ ｅｒ ｓ ｆ ｌ ｐｃ ｎ ｗ ｒ ｅ ｐ ｔｎ ｗ ａ ｅ ａ ｎ ｈ ｓ ｄ ｔ ｘ ．Ｏ ｅｈｌ ａ
ｏ ．Ｔ ｏ ｌ ｍ ｅｔ ｉ ｔ ｖ ｏ ｅｍ ｏ ｓ ｌ ｓ ｆ
ｐｏｅｓｄｗｔ ｉ ｔ ｉ ｏｃｐ
ｒ ｓ
ｃ ｅ ｉ ｇ ｍｃ ｓｏｉ
ｈｌｈ ｒ ｃ（Ｂｏ ｎ＆Ｂｅｎｓ ｉ）ｔ ｈｃ ｈ ａｔ ｉ ｎｄｎ ｎｌｕｕ ｓ ｎ
ｒｗ ｒｎ ｔｎ ｏｃｅｋｔ
ａ ｅｂｃ ｒ
ｅ ａｉ ｅｔ ａ ｔ ｌ ，ａｄ
ｉ ｂｅ
ｔ ｔ ｒ ａ ｏｓｒ ｄｗｔ Ｅ ｔ ｎｅｔａ ｈ ａｔ ｉ ｓ ｔ ｉ ｎ ｃ ｄｒ ｔ ａａ ．Ｒ ｓｌ：Ｅ 
ｈ ｈ ｗ ｓ ｂｅ ｅ ｉ
ｅｏ ｅ ｖ ｈＳ Ｍ ｏｉ ｓｇｔ ｅｂｃ ｒ ｌｔｕ ｎｉ ｅｔ ｏ ｃｎｌ ｅｕｔ ｎ
ｖ ｉ ｅｔ ｅａ ａ ｓ ｆ ｅ ｏ ｓ ｓ
ｔｏｏｃｓａｃｌ ｃｕ ｅｅ ａ ｎ ｈ ｄｎ ｎｌｕｕ ｓ ｂｕ ３０－ ０ μ ．Ａｄｎｅ ａｔ ｉ ａ
ｅ ｃｃ ｆ ａ ｓ ｏｌ ｎｔ ｔ ｔ ｅ ｅｔ ａ ｔ ｌ ａｏｔ ３ １００ ｍ
ｒ ｕ ｅ ｉ ｄｐ ｒ ｅｉ ｏｔ ｉ ｂｅ ｅｓ ｂｃ ｒ ｌ ｇ
ｅａ
ｇ ｇｔｎｃｍ ｏｅ ｆ ｎ ｒ ｏｃｓａｃｌ ａｄａ ｏ ｈｕ ｍ ｔｘｗ ｓ ｂｅ ｅ ｎｔ ｐ ａ ｔ ｒ ｆｈ
ｒ ａｏ ｏ ｐｓｄｏ Ｅ ｔｏ ｃ ｆ ａ ｓ ｎ ｍ ｒ ｏｓ ａ ｉ ａ ｏｓｒ ｄｉ ｈ ｉ ｌｈ ｄｏ ｔ
ｅ ｉ ｅｃ ｕ ｅ ｉ ｐ ｒ ｖ ｅａ ｃ ｉ ｅ
ｒ ｔ ａａ ，ｗ ｅ ａ Ｅ ｔｏｏｃｓａｃｌ ｗ ｒ ｅｎｆ ｅｆａｎ ｒ ｌ ｋ ｎ ｎｔ ｒ ｎａｄｍｄｌ
ｏ ｃｎｌ ｈｒ ｓ ｎ ｒ ｃ ｆ ａ ｓ ｅ ｅ ｒ ｏｔ ｇｏ ｐ ｎｔ ｉ
ｏ ｓ ｅ ｅ ｃ ｕ ｅ ｉ ｅｓ ｅ ｌ ｉ ａ ｏ ｃｉ ｈ ｏ ｎ ｉ ｅ
ｅｃ ｗ ｄ
ｔ ｒ ｆｈ ｏｔ ａａ ．Ｎ ｉ ｏｒ ｎ ｍ ｗ ｒ ｏｎ ｎｔ ｏｔ ａａ ｏ ｔ ｏｔ ｌ ｏ ｃ ｓ ｎ
ｈ ｄｏ ｔ ｏ ｃｎｌ
ｉ ｅｒ ｓ ｏｍｃ ｏ ａｉ ｓ ｅ ｕｄｉ ｈ ｏ ｃｎｌ ｆｈ ｎ ｏ ．Ｃ ｎｌ ｉ ：
ｒ ｇ ｓ ｅｆ ｅｒ ｓ ｅｃ ｒ ｓ ｕｏ
Ｅ ｔｏｏｃｓａｃｌ ｃｕ ｏ ｂｃ ｒ ｌ ｉｉ ｏ ｈ ｏｔ ａａ ｗ ｌ ａｄｐｎｔ ｔ ｎ ｈ ｅｔ ａ
ｎ ｒ ｃ ｆ ａ ｓ ｏｌ ｒ ａｔ ｉ ｂ ｆｍ ｎｔ ｏ ｃｎｌ ａｓ ｎ ｅｅ ａ ｔ ｅｄｎ ｎｌ
ｅｃ ｕ ｅ ｉ ｄｆ ｍ ｅ ａ ｏｌ ｅｒ ｌ ｒ ｅｉ ｏｔ ｉ
ｔ ｕ ｓ ｈ ｎｖｒ ｍ ｄｌ ｅｉ ｅ ａ ｓ ｐ ，ａｄｈｄｇｏ ｒ ｔａｉｔ ｔ ｍ ｋ ａ ｕｔ ｒ ｏ ｐｒ
ｕ ｌ ．Ｔ ｅｉ ｉｏ ｏｅ ｄｓ ｎｄｗ ｓ ｉ ｌ ｎ ａ ｏｄｐａ ｉ ｂ ｉ ｏ ａｅ ｆ ｈ ｃｍ ａ 
ｂｅ ｔ ｇ ｍ ｅ ｃｃ ｌｙ ｒｅ ａ
ｔｅｅａ ａｏ ｆ ａ ｏｓ ｎ ｍｃ ｂ ｌ ｅ ｏｓｎｔ ｅｕｔｎｏ ｉ ｒ ａａ ｂｃ ｒ ．
ｉ ｖｌ ｔｎｏ ｖｒ ｕ ａｔ ｉ ｏｉ ｍ ｔ ｄ ｉ ｈ ｄｃｏ ｆｎ ａ ｎｌ ａｔ ｉ
ｖ ｕｉ ｉ ｉ ｒ ａ ｈ ｅｒ ｉ ｔｃ ｅａ
Ｋ ＹＷＯ Ｄ Ｅ ｔｏ ｃ ｓａｃｌ；Ｄ ｎ ｌ ｕ ａｉ；Ｐｒ ｐ ａ ｐｒ ｄｎ ｔ；Ｄ ｎ ｌ ｏｅ
Ｅ Ｒ Ｓ ｎ ｒ ｏ ｕ ｆ ａ ｓ ｅｔ ｐｌ ｖｙ ｅ ａｉ ｌ ｅ ｏｏｔ ｓ ｅｔ ｍ ｄｌ
ｅｃ ｃ ｅ ｉ ａ ｐｃ ｔ ｉ ｃ ｉ ｉ ｉ ａ ｓ
粪肠球菌（ ｎ ｒ ｏｃｓ ａｃｌ）
Ｅ ｔｏ ｃ ｆ ａ ｓ 是一种革兰氏
ｅｃ ｕ ｅ ｉ 染模型，以评价根管预备的效果，但体外模型中粪肠
阳性兼性厌氧菌，呈圆形或椭圆形，是口腔、肠道和 球菌在根管内的感染状况尚未有报道，该模型是否
阴道内常见的一种共生微生物。许多研究表明粪肠 能模拟或反映临床感染根管的情况尚不明确。本研
球菌是根管治疗后根尖周炎持续不愈患牙根管中最 究目的是观察体外感染模型中粪肠球菌的分布特征
常见的优势菌，被认为是导致根管治疗失败的一个 和感染状态，以了解其在根管中的定植模式，进而评
重要原因。近年来，许多研究用该细菌建立体外感 估该模型的价值。
△Ｃ ｒ ｓｏｄ ｇ ｕ ｏ ｓ  ａ，ｋｌ ｙｅ ｊｕ ｅｕ ｃ
ｏ ｅｐｎｉ ａｔ ｒ ｅｍ ｉ ｑ ｎｕ＠ｂ ．ｄ．ｎ
ｒ ｎ ｈ’ ｌ ｉ ｍ

2. 北 京 大 学 学 报 （ 医 学 版 ）
· ７０
０· Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ Ｅ ＩＧＵ ＩＥ ＳＴ （ Ｅ Ｌ ＨＳ ＩＮ Ｅ ） ｏ ４ Ｎ ． Ｄ ｃ ２０
Ｏ Ｒ Ａ ＦＰ ＫＮ ＮＶ Ｒ ＩＹ Ｈ Ａ Ｔ ＣＥ Ｃ Ｓ Ｖ ｌ １ ｏ６ ｅ． ０９
．
为５的粪肠球菌菌液，放入孵育箱中进行培养，隔日
１ 资料与方法
更换 １ｍＬ新鲜无菌 Ｂ Ｉ 共培养 ２ 。
Ｈ 液， １ｄ
１１
． 研究对象 １４
． 标本的制备和观察
选择 ２０
０８年 １
０月至 ２０
０９年 ２月在北京大学 将所有离体牙标本用锐利凿子沿牙长轴近远中
人民医院口腔科因正畸减数拔除的健康单根前磨牙 向劈为两半，一半用甲醛溶液固定 １周，作组织学研
１０例，患者年龄为 １４～２５岁。纳入 标 准： 冠 完
牙 究； 一 半 固 定 于 ３ （ 积 分 数 ）戊 二 醛 溶 液
另 ％ 体
整，
根尖孔已发育完成且无牙周疾病。随机分为两 （４℃） ７～ ０ｄ 作扫描电镜观察。
中 １ ，
组，
５例用于建立体外粪肠球菌感染根管模型， ５
另 １４１
．． 组织学切片的制备和观察 将标本以 １％
０
例作为阴性对照组。 （质量分数） Ｄ Ａ完全脱矿、
ＥＴ 酒精梯度脱水、石蜡包
１２
． 离体牙处理 埋后沿牙长轴进行连续组织切片，厚度为 ４μ 。切
ｍ
将所有标本浸泡在 ５ ２ ％（
．５ 体积分数）次氯酸 片经 Ｂｏｎ Ｂｅｎ
ｒ ＆ ｒ 染色后置光学显微镜下从低倍镜
ｗ ｎ
钠溶液中 １ ｉ，
０ｍｎ 然后截去牙冠，拔髓针拔除牙髓， 到高倍镜对切片中全根管进行观察并用测微尺测量
１＃
５ 锉疏通根管后用 １ ％（
５ 质量分数）Ｅ Ｔ
Ｄ Ａ５ｍＬ 细菌侵入牙本质小管的深度，
记录观察结果并照像。
作用 ３ｍｎ 再用 ５ ２ ％（
ｉ， ．５ 体积分数）次氯酸钠溶液 １４ ２ 扫描电镜标本的制备和观察 将 标 本 经
．．
和生理盐水交替超声荡洗 ５ｍｎ
ｉ。随机选取其中的 ５ ４℃，． ｏ／
０１ｍ ｌＬ的 Ｐ Ｓ溶液漂洗、 ％（
Ｂ １ 质量分数）
例作 为 阴 性 对 照 备 用， ５例 标 本 高 压 灭 菌
另 锇酸固定、丙酮梯度脱水、临界干燥、离子溅射后置
（２
１１℃，５Ｍ ａ１ ｉ） 分别直立放置于盛有
１ Ｐ，５ｍｎ 后， 扫描电镜（日本日立 Ｓ２５ Ｎ 电压 ２ Ｖ 下观察。
 ０，
２ ０ｋ ）
１５ｍ
． Ｌ无 菌 脑 心 浸 液 （ ｒ ｎｈａ ｉ ｕｉ ，Ｂ Ｉ
ｂａ ｅｒ ｎ ｓ ｎ Ｈ ，
ｉ ｔ ｆ ｏ 重点观察根管壁表面、管壁纵剖面以及牙本质小管，
Ｏ ｏ Ｍ ２ ） Ｅ ｐｎｏ 管中，７℃孵箱中培养
ｘｉｄＣ ２５ 的 ｐｅｄｒｆ ３ 寻找存在细菌感染的区域，高倍镜下对选定区域的
４ 。４
８ｈ ８ｈ后，培养基保持透明，证明灭菌效果可 超微结构作进一步观察，记录观察结果并照像。
靠，进行下一步实验；若培养基出现浑浊，说明灭菌
２ 结果
效果不可靠，重新进行高压灭菌。
１３
． 粪肠球菌感染根管模型的建立 ２１
． 组织学观察结果
将保存于 － ０℃冰箱中的粪肠球菌（
７ 粪肠球菌 在 ５例粪肠球菌感染根管样本的牙本质小管内
标准株 Ａ Ｃ ９１，
Ｔ Ｃ２２２中国医学细菌保藏管理中心）解 均有蓝色深染的细菌颗粒，表明粪肠球菌不同程度
冻复苏后，划线接种于 Ｂ Ｉ
Ｈ 血琼脂培养基上。１％
０ 地侵入牙本质小管中。其中根管冠 １３段感染牙本
／
（体积分数） Ｏ 孵育箱中，７℃培养 ４ 后，
Ｃ２ ３ ８ｈ 挑取单 质小管数量较多，细菌侵入牙本质较深，测微尺测量
个菌落，
用无菌棉棒涂布于另一个 Ｂ Ｉ
Ｈ 血琼脂培养基 达 １００μ ；
０ ｍ 而根中 １３和根尖 １３段感染牙本质
／ ／
上制备菌膜。３
７℃培养 ２ 后，
４ｈ 收集菌膜，
置于无菌 小管数目少，细菌感染深度浅， ３０μ （ １２ 。
达 ３ ｍ 图 ，）
ＢＩ
Ｈ 培养液中，调整菌液浓度，制成麦氏比浊度为 ５ ５例阴性对照组样本的根管全长视野干净，根
９
的粪肠球菌菌液（相当于 １５× ０ Ｃ Ｕ ｍ ）
． １ Ｆ ／ Ｌ 。在盛 管壁表面无附着物，牙本质小管排列有序，无着色颗
有５例无菌牙根的 Ｂ Ｉ
Ｈ 液中加入 １０μ
０ Ｌ麦氏比浊度 粒（ ３ 。
图 ）
Ｌｇｔ ｉ ｏｃｐ ２ ２５ Ｂｏ ｎ＆Ｂｅｎｓａ ．
ｉ ｍｃ ｓｏｙ ０× ．， ｒ
ｈ ｒ ｗ ｒｎ ｔｉ
ｒｎ
图１ 组织学切片沿牙长轴横断面，可见根管冠 １３段蓝色深染的侵入牙本质小管深部的粪肠球菌细菌颗粒，
／ 深度达 １００μ
０ ｍ
图２ 组织学切片沿牙长轴横断面，可见根管中 １３和根尖 １３段蓝色深染的粪肠球菌侵入牙本质小管中，
／ ／ 深度为 ３０μ
３ ｍ
图３ 组织学切片可见对照组样本视野干净，牙本质小管排列有序，未见细菌着色颗粒
Ｆｇ ｒ １ ｉｏ ｇ ａｙ ｎｔ ｒ ｎｔ ｒ ｆｈ ｏｔ ａａ ｂ ｅ ｔｎｄｂｃ ｒ ｌ ｅｓ ｒ ｃ ａ ｙ ｉｉ ｕ ｈｄｉ ｈ ｄｎ ｎｌｕｕ ｓ
ｉ ｅ Ｈｓ ｌ ｉ ｌ，ｉ ｈ ｏ ｈ ｄｏ ｔ ｏ ｃｎｌ ｌ ａ ｅ ａｔ ｉ ｃｌ ａ ｌ ｒ ｄ ｔ ｇｉ ｅ ｎｔ ｅｔ ａ ｔ ｌ ，
ｕ ｔｏ ｃ ｌ ｅｃ ｗ ｉ ｅｒ ， ｕ ｓｉ ｅ ａ ｌ ｅ ｅ ｌ ｓｎ ｓ ｅ ｉ ｂｅ
ａｏｔ ０ ｍ ｉ ｒ ２ ｉｏ ｇ ａｙ ｎｔ ｉ ｌ ａｄａｉ ｌｈ ｄｏ ｔ ｒ ｔ ａａ ｌ ａ ｅ ａｔ ｉ ｃｌ ａ ｃ ａ ｙ
ｂｕ １００μ Ｆｇ ｅ Ｈｓ ｌ ｉ ｌ，ｉ ｈ ｄ ｅ ｎ ｐ ａ ｔ ｒ ｆｈ ｏ ｃｎｌ ｕ ｓ ｉ ｄｂｃ ｒ ｌ ｅｓ ｒ ｌ ｒ
ｕ ｔｏ ｃ ｌ ｅｍ ｄ ｃ ｉ ｅ ｏ ，ｂ ｅ ｔｎ ｅａ ｌ ｅ ｅ ｌ
ｄ ｔ ｇｉ ｅ ｎｔ ｄｎ ｎｌｕｕ ｓａｏｔ ３ ｍ ｉ ｒ ３ ｉｏ ｇ ａｙ ｅｔ ａ ｔ ｕ ｓ ａ ｅ ｒ ｏ ｉ ｅｔｎｉ ｏｔ ｌ
ｉｉ ｕ ｈｄｉ ｈ ｅｔ ａ ｔ ｌ ，ｂｕ ３０μ Ｆｇ ｅ Ｈｓ ｌ ｉ ｌ，ｄｎ ｎｌｕ ｌ ｃｎｂ ｆ ｅ ｆｎ ｃｏ ｎｃｎ ｏ
ｓｎ ｓ ｅ ｉ ｂｅ ｕ ｔｏ ｃ ｌ ｉ ｂｅ ｅ ｆ ｉ ｒｓ

3. 郭惠杰，等 粪肠球菌在根管内定植模式的体外研究 · ７１
０·
２２
． 扫描电镜观察结果 １３和根尖 １３段 的 根 管 壁 表 面 成 对 或 短 链 状 排
／ ／
在所有研究组样本中，粪肠球菌成团、成串附着 列，呈现浮游状态（ ４～ ）
图 ６。
于根管壁，菌体外有黏性的无定形膜状物将细菌包 阴性对照组标本根管壁表面洁净，牙本质小管
裹并连成团块状结构，在根尖 １３段最为密集并侵
／ 开口、牙本质小管和管间牙本质结构清晰可见，根管
入牙本质小管中；另外，还观察到粪肠球菌在根中 壁剖面及牙本质小管未见细菌侵入（ ７ 。
图 ）
图４ 研究组样本的根尖 １３根管壁可见粪肠球菌侵入牙本质小管之中（ Ｅ × ０ ）
／ Ｓ Ｍ ６０ 图 ５ 粪肠球菌被大量无定性基质包绕
形成生物膜结构（ Ｅ × ０ ）
Ｓ Ｍ ４００ 图 ６ 粪肠球菌成对、短链状附着于根中 １３和根尖 １３段的
／ ／
根管壁表面（ Ｅ × ０ ）
Ｓ Ｍ ５００ 图 ７ 对照组的牙本质小管内未见细菌侵入（ Ｅ × ０ ）
Ｓ Ｍ ５００
Ｆｇ ｒ ４ ｎｔ ｓ ｄ ｒ ｐ，ｌ ｅ ｏｔ ｐ ａ ｔ ｒ ｆｈ ｍ ｉ ｏｔ ａａ ｓｏ ｉ ａ ａｔ ｉ ｃｌ ｙ ｏ ｐｓｄｏ Ｅ ａｃｌ ｉｖ ｕｌｅ
ｉ ｅ Ｉ ｈ ｔ ｙｇ ｕ ｃ ｓ ｔ ｈ ｉ ｌｈ ｄｏ ｔ ａ ｏ ｃｎｌｈｗｎ ｂｃ ｒ ｌ ｏ ｎ ｃｍ ｏｅ ｆ ．ｆ ａ ｓｓ ｉ ａｚｄ
ｕ ｅ ｕ ｏ ｏ ｅａ ｃ ｉ ｅ ｎｒ ｇ ｅａ ｏ ｅ ｉ ｓ ｉ
ａｄｄｎ ｎｌｕｕ ｓ ａ ｅｈａｉ ｎ ｃ ｄ Ｓ Ｍ × ０ ） ｉ ｒ ５ ．ｆ ｃｌ ｂ ｆｍｃｎｉｓ ｆ ａｔ ｉ
ｎ ｅｔ ａ ｔ ｌ ｃｎｂ ｅｖｙｉ ｅｔ （ Ｅ
ｉ ｂｅ ｌ ｆ ｅ ６０ Ｆｇ ｅ Ｅ ａ ａ ｓ ｉｉ ｏｓｔｏ ｂｃ ｒ
ｕ ｅ ｉ ｏｌ ｓ ｅａ
ａｄａ ｏ ｈｕ ｍ ｔｘ Ｓ Ｍ × ０ ） ｉ ｒ ６ ｉ ｅ ｍ ｇｉｃｔｎｓｏ ｉ Ｅ ａｃｌ ａ ｓｅ ｒ ｏｔ ｇ
ｎ ｍ ｒ ｏｓ ａ ｉ Ｅ
ｐ ｒ（ ４００ Ｆｇ ｅ Ｈｇ ｒ ａｎ ｉ ｉ ｈｗｎ ．ｆ ａ ｓ ｒ ｅｎｆ ｅｆａｎ
ｕ ｈ ｆａｏ ｇ ｅ ｉ ｅ ｅ ｌ ｉ
ｏ ｐ ｎｔ ｉ （ Ｅ ５００ Ｆｇ ｒ ７ ｏｍｃ ｏ ａｉ ｓ ｅ ｆ ｎ ｎｔ ｄｎ ｎｌｕｕ ｓ ｆｈ ｃｎ ｏ （ Ｅ × ０ ）
ｒ ｌ ｋ ｎ Ｓ Ｍ× ０ ） ｉ ｅ Ｎ ｉ ｏｒ ｎ ｍ ｗ ｒ ｏ ｄｉ ｈ ｅｔ ａ ｔ ｌ ｏ ｔ ｏｔ ｌ Ｓ Ｍ ５００
ａ ｏｃ ｕ ｒ ｇ ｓ ｅ ｕ ｅ ｉ ｂｅ ｅ ｒｓ
的根管中长期存留的主要原因，粪肠球菌在生物膜
３ 讨论
中的代谢更为复杂，加之其繁殖速度快、营养要求不
本研究建立的体外粪肠球菌感染根管模型，经 高，能耐受根尖段缺氧的环境，从而很难被彻底清
组织学 Ｂｏ ｎ＆Ｂｅｎ
ｒｗ ｒ 染色后证实粪肠球菌可单独
ｎ 除，导致根管治疗失败。
定植于 根 管 内 并 侵 入 根 管 壁 牙 本 质 小 管 的 深 部 本研究采用组织学研究与扫描电镜观察相结合
（ ３ １００μ ） 粪肠球菌在无菌 根 管 内 经 过 ３
３０～ ０ ｍ 。 的方法对体外根管内粪肠球菌的感染状况进行观
周的体外培养可形成根管内严重感染，并且其生存 察，结果表明，粪肠球菌除定植于主根管壁表面外，
［］
１
不依赖于其他微生物， Ｐｔ ｓ 在牛牙感染模型
与 ｅｒ
ｅ 还可侵入到牙本质小管的深部。在根尖 １３段形成
／
中的观察结果相似。其中根管冠 １３段感染较重，
／ 典型的生物膜样结构，根管中、上段也可见到细菌呈
根中 １３和根尖 １３段感染较轻，
／ ／ 这与根管冠 １３
／ 现浮游态，提示根尖 １３段根管清创的困难性。
／
段的牙本质小管直径较粗有关。Ｐｒ 等 ［ ］认为细
ｅｚ ２
ｅ 本研究的结果表明，无论从主根管内粪肠球菌
菌侵入牙本质小管是一种被动过程，细菌随着液体 生物膜的形成，还是从牙本质小管感染状况的角度
成分的渗入而进入牙本质小管中。细菌感染牙本质 来说，体外粪肠球菌感染根管模型都能从一定程度
小管的能力与细菌的形态、直径、表面结构以及能否 上反映出慢性根尖周炎患牙根管内的感染状态，可
形成克隆等因素相关。牙本质小管的直径平均为 利用这一体外模型客观地评价各种机械预备和化学
１～ μ ［ ］，
４ ｍ ３ 而粪肠球菌的直径为 ０ ５～ μ ，
． １ ｍ 较易 消毒药物的效果，为临床选择治疗操作提供参考。
进入牙本质小管。本研究中采用 Ｅ Ｔ
Ｄ Ａ浸泡和超声 参考文献
荡洗的方法去除了牙本质小管表面的玷污层，可增 ［１］ Ｐｔ ｓ Ｂ
ｅ ｒ Ｌ ，Ｗｅｓｌ ｋＰ ，Ｍ ｏ ｒ ．Ｐｎｔ ｔｎｏ ｂｃ ｒ ｉ
ｅ ｓ ｉ Ｒ ｏｒ ＷＲ ｅｅ ａｏ ｆ ａｔ ｉ ｎ
ｅｎ ｅ ｒｉ ｅａ
ｂｖ ｅｒ ｔ ｅｔ ｅ ｎｖｒ Ｊ．Ｉｔ ｎｏ ， ００３ （ ） ２
ｏｉ ｏ ｄｎ ｎ ｉ ｉｏ ］ ｎ Ｅ ｄｄＪ ２０ ，３ １ ： ８－
ｎ ｏ ｉ ｔ［
加粪肠球菌侵入牙本质小管的深度 ［ ］。
１
３．
６
［２］ Ｐｒ Ｆ ａ ｓ ，Ｒ ｃｄＴ ｆｃ ｏ ｄｎ ｎｔ ａ ｅｔ ｎｉ ｉｏ
ｅ ｚ ，Ｃ ｌ Ｐ ｏｈ ．Ｅｆ ｔ ｆ ｅｔ ｒ ｔ ｎ ｏ ｎｖｒ
ｅ ａ ｅ ｉ ｅｍ ｔ
通过扫描电镜的观察发现，粪肠球菌能够单独 ｒ ｔ ｕｕ ａｔ ｉ ｎａｉ Ｊ ． Ｏａ ｕｇＯａ ｅ Ｏａ
ｏ ｔ ｌ ｃ ｒ ｌｉ ｓ ｎ［ ］ ｒ
ｏ ｂ ｅｂ ｅ ａ ｖ ｏ ｌＳｒ ｒ ｌＭ ｄ ｒ ｌ
Ｐｔ ｌ １９ ， ２ ４ ： ４ ４１
ａ ｏ ９６ ８ （ ） ４６－ ５ ．
ｈ，
定植于根管壁并且在根尖 １３段形成生物膜。超微
／ ［３］ 于世凤． 口腔组织病理学［ ．５版．北京：
Ｍ］ 人民卫生出版社，
结构显示，粪肠球菌被大量的无定形基质所包绕，与 ２０ ： ３
０３ ５ ．
［４］ Ｎ ｉ Ｎ ，Ｓ ｇ ｎ ．Ｉｔ ｒ ｉ ｌ ａｔ ｉ ａｄｆ ｇ ｉ ｏｔ
ａ ｒＰ Ｒ ｊ ｒ Ｕ ｎ ａ ｄ ｕ ｒｂｃ ｒ ｌ ｎ ｕ ｉ ｎｒ 
ｅ ｒａ ｃ ａ ｅａ ｎ ｏ
临床感染根管的生物膜结构相似 ［ ］。Ｇ ｏ ｅ等 ［ ］
４
ｅｒｇ ５
ｆｌ ，ａｙ ｐ ｍ ｔ ｈｍ ｎｔ ｔ ｉ ｈｒ ｙｒ ｉａｔ ｅ ａｉ ｌ
ｉｅ ｓｍ ｔ ａｃ ｕ ａ ｅ ｈｗｔ ｅ ｐ ｓｔ ｐｒ ｐ ａ
ｌｄ ｏ ｉ ｅ ｈｔ ａ ｅ ｓ ｎ ｉ ｃ
ｌ ｉ ｓａ ｏｇｔ ｍｌｈ ａｄｅ ｃ ｏ ｉ ｏｃｐ ｏｏ ｐｓ ｄ
ｅ ｏ ： ｌ  ｒ ｉ ｔ ｎ ｌ ｔ ｎｍｃ ｓｏｉ ｌｗｕ ｔ ｙ
ｓｎ ｎ ｅ ｇ ｅｒ ｒ ｃｆｌ ｕ
观察到当粪肠球菌在有氧且营养充足的环境中生长 ［］ Ｅ ｄｄ １９ ， ６ ２ ： ８ ５８
Ｊ．Ｊ ｎｏ， ９０ １ （ ） ５０－ ８ ．
［５］ Ｇ ｏ ｅ ，Ｋｓｅ ，Ｓｎ Ｋ ．Ｔ ｅ ｏ ｏ ｅｖ ｏｍ ｎ ｌ ｈｎｅ
ｅｒ Ｓ ｉ ｎＡ ｏｇ Ｐ ｈ ｒ ｅ ｆ ｎｉ ｎ ｅｔ ｃａｇｓ
ｇ ｈ ｌ ｒ ａ
时，会形成不规则、结构巨大的生物膜，而当营养缺 ｏ ｏｏｐｃ ｓ ｉｉ ｏ ａｏ ｎｒ ｔ ａａ ｗ ｌｂ ｎ ｒ ｏ
ｎｍ ｎｓｅｉ ｂ ｆｍｆ ｍ ｔｎｏ ｏ ｃｎｌ ａ ｙＥ ｔｏ ｃ
ｅ ｏｌ ｒ ｉ ｏ ｌ ｅｃ
乏时生物膜中的钙水平增加，这种钙化基质能够更 ｃｓａｃｌ［］ Ｅ ｄｄ ２０ ， １ １ ） ８７－ ７ ．
ｕ ｆ ａ ｓＪ．Ｊ ｎｏ， ０５ ３ （ ２ ： ６ ８２
ｅ ｉ
（ ０９０ 
２０  ３
５ １收稿）
好地保护细菌。生物膜的形成是粪肠球菌在治疗后 （本文责编：赵 波）